ICS11.220

CCSB41

團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)

T/CVMAXXXXX—XXXX

布魯氏菌病CF-ELISA抗體檢測技術(shù)

（酶標(biāo)補(bǔ)體C1q多克隆抗體法）

CF-ELISAantibodydetectiontechnologyforbrucellosis(Enzymelabeled

complementC1qpolyclonalantibodymethod)

征求意見稿

XXXX-XX-XX發(fā)布XXXX-XX-XX實(shí)施

中國獸醫(yī)協(xié)會發(fā)布

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布魯氏菌病CF-ELISA抗體檢測技術(shù)（酶標(biāo)補(bǔ)體C1q多克隆抗體法）

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了用于布魯氏菌病CF-ELISA抗體檢測技術(shù)（酶標(biāo)補(bǔ)體C1q多克隆抗體法）的試劑器材、

操作方法及結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于動物血清中布魯氏菌病抗體檢測。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

GB/T1.1-2020標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則。

GB/T6682-2008分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法。

GB19489-2008實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求。

NY/T541-2016獸醫(yī)診斷樣品采集、保存與運(yùn)輸技術(shù)規(guī)范。

3術(shù)語和定義

本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。

4符號和縮略語

下列縮略語適用于本文件。

CF-ELISA：補(bǔ)體結(jié)合酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（Complementfixation-EnzymeLinkedImmunosorbent

Assay）

HRP：辣根過氧化物酶（HorseradishPeroxidase）

OD：光密度（OpticalDensity）

PBS：磷酸鹽緩沖液（Phosphate-BufferedSaline）

TMB：四甲基聯(lián)苯胺（Tetramethylbenzidine）

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5試劑與材料

除非另有規(guī)定，僅使用分析純試劑，試驗(yàn)用水符合GB/T6682-2008的要求。

5.1布魯氏菌病CF-ELISA抗體檢測（酶標(biāo)補(bǔ)體C1q多克隆抗體法）試劑盒主要組分：

5.1.1包被抗原：布魯氏菌LPS。

5.1.2補(bǔ)體：豚鼠血清或鴨等動物血清。

5.1.3酶標(biāo)抗體：HRP標(biāo)記的C1q多克隆抗體。

5.1.4陽性對照血清：布魯氏菌病陽性血清。

5.1.5陰性對照血清：布魯氏菌病陰性血清。

5.1.6抗原包被液。

5.1.7洗滌液。

5.1.8封閉液。

5.1.9樣品稀釋液。

5.1.10雙組分TMB顯色液。

5.1.11終止液。

5.2耗材

5.2.1移液器吸頭：10μL-1000μL。

5.2.22mL離心管。

6儀器設(shè)備

6.1微量移液器：10μL-1000μL（±2%）。

6.2冰箱：2℃~8℃，-20℃以下。

6.3離心機(jī)。

6.4恒溫培養(yǎng)箱。

6.5振蕩器。

6.6酶標(biāo)檢測儀。

7樣品的采集與處理

7.1總則

樣品采集、保存與運(yùn)輸按照NY/T541-2016執(zhí)行，實(shí)驗(yàn)室生物安全要求按照GB19489-2008的規(guī)定。

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7.2血液樣品采集與處理

按常規(guī)方法采集和分離血清。

樣品信息應(yīng)記錄完整，確?？勺匪菪浴?/p>

樣品采集人員應(yīng)注意采取佩戴口罩、手套，著長袖工作服等防護(hù)措施。

8操作方法

8.1稀釋：用樣品稀釋液將待檢血清、補(bǔ)體作1：100稀釋。用樣品稀釋液將酶標(biāo)補(bǔ)體C1q多克隆抗體

按標(biāo)定效價稀釋。用純化水將濃縮洗滌液稀釋至工作濃度。

8.2對照：每次試驗(yàn)設(shè)置陽性對照與陰性對照各2孔。

8.3對照孔分別加入50μL陽性血清與陰性血清，檢測孔加入50μL稀釋后樣品血清，再在每孔加入

50μL稀釋后補(bǔ)體血清。置37℃孵育30min。

8.4甩掉孔中液體，加入洗滌液200μL/孔洗滌，反復(fù)洗滌5次，拍干。每孔加入工作濃度的酶標(biāo)抗

體100μL，置37℃孵育30min。

8.5甩掉孔中液體，同上方法洗滌5次，拍干后每孔加入雙組分TMB顯色液100μL，室溫避光孵育10

分鐘（至陰性孔變色），每孔加終止液50μL終止反應(yīng)。

8.6檢測：30min內(nèi)在波長為450nm處用酶標(biāo)儀讀出各孔的OD值。

9結(jié)果判斷

9.1試驗(yàn)成立條件

陰性對照平均OD450nm值≤0.3，陽性對照平均OD450nm值≥1.0時，試驗(yàn)成立。否則,試驗(yàn)結(jié)果無效，

需重新試驗(yàn)。

9.2計算待檢血清S/N、S/P值

S/N值=樣品OD450nm值÷陰性對照平均OD450nm值

S/P值=（樣品OD450nm值-陰性對照OD450nm平均值）÷（陽性對照平均OD450nm值-陰性對

照OD450nm平均值）

9.3結(jié)果判定

陽性：S/N值≥2.1，同時S/P值≥0.3。

陰性：S/N值＜2.1，或S/P值＜0.3。

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