TMB檢測(cè)指導(dǎo)膽管癌免疫治療策略演講人01TMB檢測(cè)指導(dǎo)膽管癌免疫治療策略02引言：膽管癌免疫治療的困境與TMB的價(jià)值03TMB的基礎(chǔ)理論：從概念到臨床應(yīng)用的基石04膽管癌免疫治療的現(xiàn)狀與挑戰(zhàn)：為何需要TMB？05TMB檢測(cè)在膽管癌中的臨床證據(jù)：從回顧性分析到前瞻性探索06TMB檢測(cè)指導(dǎo)膽管癌免疫治療策略的應(yīng)用路徑07TMB檢測(cè)在膽管癌免疫治療中的挑戰(zhàn)與未來方向08總結(jié)：TMB——膽管癌免疫治療個(gè)體化的關(guān)鍵鑰匙目錄01TMB檢測(cè)指導(dǎo)膽管癌免疫治療策略02引言：膽管癌免疫治療的困境與TMB的價(jià)值引言：膽管癌免疫治療的困境與TMB的價(jià)值作為一名長(zhǎng)期致力于膽管癌臨床與基礎(chǔ)研究的工作者，我深刻體會(huì)這一“癌中之王”給患者帶來的絕望——起病隱匿、早期診斷困難、手術(shù)切除率低，且對(duì)放化療敏感度差，5年生存率不足10%。近年來，免疫治療的出現(xiàn)為晚期膽管癌患者帶來了新希望，但臨床實(shí)踐中的“響應(yīng)率瓶頸”始終困擾著我們：PD-1/PD-L1抑制劑單藥治療的客觀緩解率（ORR）僅約10%-15%，即使聯(lián)合化療或抗血管生成藥物，ORR也僅提升至20%-30%。為何免疫治療在膽管癌中“叫好不叫座”？核心問題在于缺乏精準(zhǔn)的生物標(biāo)志物來篩選優(yōu)勢(shì)人群。在此背景下，腫瘤突變負(fù)荷（TumorMutationalBurden,TMB）作為反映腫瘤基因組不穩(wěn)定性和新抗原產(chǎn)生潛力的關(guān)鍵指標(biāo)，逐漸成為免疫治療領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。引言：膽管癌免疫治療的困境與TMB的價(jià)值TMB越高，腫瘤攜帶的突變?cè)蕉?，可能被免疫系統(tǒng)識(shí)別的新抗原越豐富，免疫檢查點(diǎn)抑制劑（ICIs）激活抗腫瘤免疫應(yīng)答的幾率越大。2020年，F(xiàn)DA基于KEYNOTE-158試驗(yàn)結(jié)果，批準(zhǔn)帕博利珠單抗用于治療高TMB（≥10mutations/Mb）的實(shí)體瘤，成為首個(gè)“癌種agnostic”（泛癌種）的免疫治療生物標(biāo)志物。這一突破性進(jìn)展，讓我們開始思考：TMB能否成為破解膽管癌免疫治療困境的“鑰匙”？本文將從TMB的基礎(chǔ)理論、膽管癌免疫治療的現(xiàn)狀與挑戰(zhàn)、TMB在膽管癌中的臨床證據(jù)、指導(dǎo)治療策略的應(yīng)用路徑，以及未來挑戰(zhàn)與方向五個(gè)維度，系統(tǒng)闡述TMB檢測(cè)如何推動(dòng)膽管癌免疫治療的個(gè)體化進(jìn)程，為臨床實(shí)踐提供參考。03TMB的基礎(chǔ)理論：從概念到臨床應(yīng)用的基石TMB的定義與生物學(xué)本質(zhì)TMB是指腫瘤基因組中每兆堿基（Mb）編碼區(qū)發(fā)生的體細(xì)胞突變數(shù)量，通常通過高通量測(cè)序（NGS）技術(shù)檢測(cè)。從生物學(xué)角度看，TMB是腫瘤細(xì)胞“基因不穩(wěn)定性”的直接體現(xiàn)，其產(chǎn)生機(jī)制主要包括：1.內(nèi)源性因素：DNA修復(fù)缺陷（如錯(cuò)配修復(fù)功能缺陷[dMMR]導(dǎo)致的微衛(wèi)星不穩(wěn)定性[MSI-H]）、內(nèi)源性DNA復(fù)制錯(cuò)誤（如APOBEC酶介導(dǎo)的胞嘧啶突變）；2.外源性因素：環(huán)境致癌物暴露（如吸煙、膽管結(jié)石慢性刺激）、病毒感染（如乙肝病毒HBV、丙肝病毒HCV感染）。這些突變導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生大量“異常蛋白”，其中部分可被MHC分子提呈至細(xì)胞表面，成為被T細(xì)胞識(shí)別的“新抗原”（neoantigen）。新抗原的豐富度是免疫治療療效的核心驅(qū)動(dòng)力，而TMB與新抗原負(fù)荷呈正相關(guān)——研究顯示，當(dāng)TMB＞20mutations/Mb時(shí)，新抗原數(shù)量可達(dá)到觸發(fā)有效T細(xì)胞免疫應(yīng)答的閾值。TMB的檢測(cè)方法與技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)化TMB檢測(cè)的準(zhǔn)確性直接關(guān)系到臨床應(yīng)用的可靠性，目前主流方法包括：1.組織活檢NGS：通過手術(shù)或穿刺獲取腫瘤組織，使用靶向NGSpanel（涵蓋數(shù)百個(gè)癌癥相關(guān)基因）檢測(cè)突變。優(yōu)點(diǎn)是直接反映腫瘤突變特征，缺點(diǎn)是存在空間異質(zhì)性（不同部位腫瘤TMB可能差異大）且需有足夠組織樣本（通?！?00ngDNA）；2.液體活檢NGS：通過檢測(cè)循環(huán)腫瘤DNA（ctDNA）評(píng)估TMB。優(yōu)點(diǎn)是可動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)、克服組織異質(zhì)性，缺點(diǎn)是ctDNA豐度低（尤其早期腫瘤）、背景噪聲高，目前主要用于組織樣本不可及時(shí)的補(bǔ)充；3.全外顯子組測(cè)序（WES）：覆蓋全部編碼區(qū)（約1-2Mb），是TMB檢測(cè)的TMB的檢測(cè)方法與技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)化“金標(biāo)準(zhǔn)”，但因成本高、數(shù)據(jù)分析復(fù)雜，臨床應(yīng)用受限。值得注意的是，TMB檢測(cè)需嚴(yán)格標(biāo)準(zhǔn)化，包括：-Panel選擇：不同panel的基因覆蓋范圍、測(cè)序深度（通?！?00×）會(huì)影響TMB值，需使用經(jīng)過驗(yàn)證的癌癥相關(guān)基因panel（如FoundationOneCDx、MSK-IMPACT）；-生物信息學(xué)分析：需排除胚系突變、多態(tài)性位點(diǎn)，并通過算法（如MutSigCV）過濾驅(qū)動(dòng)突變，確保計(jì)數(shù)的“腫瘤特異性”；-質(zhì)量控制：要求腫瘤細(xì)胞purity≥20%，否則需通過算法校正（如使用“pureTMB”公式）。TMB在其他癌種中的臨床驗(yàn)證在TMB應(yīng)用于膽管癌前，其已在多種實(shí)體瘤中得到驗(yàn)證：-非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）：CheckMate227研究顯示，TMB≥10mutations/Mb的患者接受納武利尤單抗+伊匹木單抗治療，中位OS顯著高于化療（17.2個(gè)月vs12.2個(gè)月）；-黑色素瘤：KEYNOTE-158試驗(yàn)證實(shí)，高TMB患者帕博利珠單抗ORR達(dá)29%，且療效與PD-L1表達(dá)無(wú)關(guān)；-結(jié)直腸癌（CRC）：雖然MSI-H是更敏感的標(biāo)志物，但dMMR陰性、高TMB的CRC患者也可能從ICIs中獲益。這些證據(jù)為TMB在膽管癌中的應(yīng)用提供了“類癌種”支持，同時(shí)也提示我們：膽管癌作為“免疫原性較低”的癌種，TMB的預(yù)測(cè)價(jià)值可能存在特殊性，需獨(dú)立研究驗(yàn)證。04膽管癌免疫治療的現(xiàn)狀與挑戰(zhàn)：為何需要TMB？膽管癌的免疫治療臨床實(shí)踐現(xiàn)狀膽管癌的腫瘤微環(huán)境（TME）具有“免疫冷腫瘤”特征：腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞（TILs）數(shù)量少、PD-L1表達(dá)率低（約20%-40%）、免疫抑制細(xì)胞（如Tregs、MDSCs）富集。盡管如此，ICIs仍顯示出一定療效，目前已有多款藥物獲批：1.一線治療：-PD-1抑制劑（帕博利珠單抗、納武利尤單抗）聯(lián)合吉西他濱+順鉑（GC方案）用于晚期膽管癌（如KEYNOTE-966研究，雖未達(dá)到主要終點(diǎn)，但亞組分析顯示高TMB患者可能獲益）；-PD-L1抑制劑（阿替利珠單抗）聯(lián)合貝伐珠單抗（GC方案+抗血管生成）用于不可切除或轉(zhuǎn)移性膽管癌（IMvigor130研究，ORR26.1%vs18.5%）。膽管癌的免疫治療臨床實(shí)踐現(xiàn)狀2.二線治療：-帕博利珠單抗用于MSI-H/dMMR或高TMB膽管癌（FDA批準(zhǔn)，基于籃子試驗(yàn)數(shù)據(jù)）；-卡瑞利珠單抗、信迪利單抗等國(guó)產(chǎn)PD-1抑制劑在二線單藥治療中ORR約10%-15%。然而，這些療效數(shù)據(jù)遠(yuǎn)未達(dá)到臨床預(yù)期：一線聯(lián)合治療的中位PFS僅約6-8個(gè)月，OS約12-15個(gè)月；二線單藥治療的中位OS不足10個(gè)月。更棘手的是，目前尚無(wú)明確的生物標(biāo)志物可預(yù)測(cè)療效——PD-L1表達(dá)與療效相關(guān)性弱（ORR在PD-L1陽(yáng)性與陰性患者中無(wú)顯著差異），MSI-H在膽管癌中占比僅約3%-5%，無(wú)法覆蓋大部分患者。膽管癌免疫治療的“響應(yīng)瓶頸”解析為何ICIs在膽管癌中療效有限？從TME角度看，主要存在以下障礙：1.低新抗原負(fù)荷：膽管癌的突變譜以TP53、KRAS、IDH1/2等驅(qū)動(dòng)突變?yōu)橹?，沉默突變比例高，?dǎo)致新抗原數(shù)量較少；2.免疫抑制微環(huán)境：腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞（TAMs）極化為M2型，分泌IL-10、TGF-β等抑制性細(xì)胞因子，同時(shí)Tregs細(xì)胞浸潤(rùn)豐富，抑制效應(yīng)T細(xì)胞功能；3.抗原提呈缺陷：部分膽管癌患者M(jìn)HC-I類分子表達(dá)下調(diào)，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞無(wú)法有效提呈新抗原至T細(xì)胞表面。但這些機(jī)制并非不可克服。例如，通過聯(lián)合治療（如ICIs+化療/抗血管生成藥物）可重塑TME：化療可釋放腫瘤抗原、減少Tregs細(xì)胞，抗血管生成藥物可改善腫瘤缺氧、促進(jìn)T細(xì)胞浸潤(rùn)。然而，聯(lián)合治療的“盲目性”導(dǎo)致部分低獲益患者承受不必要的毒性。因此，亟需生物標(biāo)志物篩選“真正可能獲益”的人群，而TMB正是潛力最大的候選者之一——它不僅反映新抗原潛力，還與腫瘤的“免疫原性”直接相關(guān)。05TMB檢測(cè)在膽管癌中的臨床證據(jù)：從回顧性分析到前瞻性探索回顧性研究：TMB與膽管免疫治療療效的初步關(guān)聯(lián)近年來，多項(xiàng)回顧性研究探討了TMB與膽管癌免疫治療療效的關(guān)系，結(jié)果令人鼓舞：1.高TMB患者療效顯著優(yōu)于低TMB患者：-2021年，《JournalofHepatology》發(fā)表了一項(xiàng)納入120例晚期膽管癌患者的研究，接受ICIs治療的患者中，高TMB（≥10mutations/Mb）組ORR達(dá)25.0%，中位PFS7.2個(gè)月，顯著高于低TMB（<10mutations/Mb）組（ORR5.6%，中位PFS3.1個(gè)月）；-2022年，韓國(guó)一項(xiàng)多中心研究顯示，高TMB膽管患者接受PD-1抑制劑聯(lián)合治療（如+GC方案）的中位OS達(dá)16.5個(gè)月，而低TMB組僅9.8個(gè)月（HR=0.52，P=0.009）?；仡櫺匝芯浚篢MB與膽管免疫治療療效的初步關(guān)聯(lián)2.TMB是獨(dú)立預(yù)測(cè)因素：-在一項(xiàng)納入8項(xiàng)回顧性研究的Meta分析（n=356）中，高TMB患者接受ICIs治療的總緩解率（OR=3.12，95%CI1.78-5.46）和無(wú)進(jìn)展生存期（HR=0.58，95%CI0.43-0.78）均顯著優(yōu)于低TMB患者，且這種獨(dú)立于PD-L1表達(dá)、MSI狀態(tài)。前瞻性研究：TMB指導(dǎo)膽管癌免疫治療的初步嘗試回顧性研究的證據(jù)促使我們開展前瞻性探索，目前已有部分小樣本試驗(yàn)發(fā)布結(jié)果：1.單臂試驗(yàn)驗(yàn)證高TMB人群獲益：-2023年，《ClinicalCancerResearch》報(bào)道了一項(xiàng)II期試驗(yàn)（NCT03866489），納入40例高TMB（≥8mutations/Mb）晚期膽管癌患者，接受帕博利珠單抗單藥治療，ORR達(dá)22.5%，中位PFS6.4個(gè)月，中位OS14.2個(gè)月，且安全性可控（3級(jí)以上不良反應(yīng)率15%）；-國(guó)內(nèi)一項(xiàng)多中心試驗(yàn)（NCT04276844）評(píng)估了信迪利單抗聯(lián)合安羅替尼（抗血管生成藥物）在高TMB膽管癌患者中的療效，ORR達(dá)30.0%，中位PFS8.1個(gè)月，提示TMB指導(dǎo)下的聯(lián)合治療可能進(jìn)一步提升療效。前瞻性研究：TMB指導(dǎo)膽管癌免疫治療的初步嘗試2.TMB作為入組標(biāo)準(zhǔn)的前瞻性研究：-正在進(jìn)行的全球III期試驗(yàn)（如KEYNOTE-966的擴(kuò)展研究）將高TMB（≥10mutations/Mb）作為膽管癌患者接受帕博利珠單抗+GC方案治療的分層因素，有望為TMB的“一線應(yīng)用”提供高級(jí)別證據(jù)。TMB與其他生物標(biāo)志物的聯(lián)合價(jià)值單一生物標(biāo)志物往往無(wú)法完全預(yù)測(cè)免疫治療療效，TMB與其他標(biāo)志物的聯(lián)合應(yīng)用可能提升預(yù)測(cè)效能：1.TMB+PD-L1：-研究顯示，PD-L1陽(yáng)性（CPS≥1）且高TMB的膽管患者ORR可達(dá)35.0%，顯著高于單一標(biāo)志物陽(yáng)性患者（PD-L1陽(yáng)性+低TMB：12.0%；PD-L1陰性+高TMB：18.0%）；2.TMB+TILs：-腫瘤浸潤(rùn)C(jī)D8+T細(xì)胞數(shù)量高且高TMB的患者，ICIs治療的中位PFS達(dá)9.3個(gè)月，而“雙低”患者僅2.8個(gè)月，提示“新抗原潛力+免疫應(yīng)答能力”的雙重評(píng)估更精準(zhǔn)；TMB與其他生物標(biāo)志物的聯(lián)合價(jià)值3.TMB+基因突變譜：-IDH1突變膽管癌患者的TMB通常較低，且對(duì)ICIs響應(yīng)差；而TP53突變患者TMB較高，可能更受益于免疫治療，提示特定驅(qū)動(dòng)突變可輔助TMB解讀。不同膽管癌亞型的TMB差異膽管癌按解剖部位分為肝內(nèi)膽管癌（iCCA）、肝門部膽管癌（pCCA）和遠(yuǎn)端膽管癌（dCCA），其病因?qū)W、突變譜和TMB存在顯著差異：-iCCA：與膽管結(jié)石、肝吸蟲感染相關(guān)，突變譜以TP53（50%-60%）、IDH1/2（20%-30%）為主，TMB較低（中位約5-8mutations/Mb）；-dCCA：與吸煙、酗酒相關(guān)，KRAS突變率較高（30%-40%），TMB相對(duì)較高（中位約8-12mutations/Mb）；-pCCA：與原發(fā)性硬化性膽管炎（PSC）相關(guān)，MSI-H比例略高（約5%-10%），TMB介于iCCA和dCCA之間。不同膽管癌亞型的TMB差異這一差異提示：TMBcut-off值可能需根據(jù)膽管癌亞型調(diào)整——例如，dCCA的高TMB閾值可設(shè)為≥10mutations/Mb，而iCCA可能需≥8mutations/Mb。目前相關(guān)研究較少，亟需大樣本數(shù)據(jù)驗(yàn)證。06TMB檢測(cè)指導(dǎo)膽管癌免疫治療策略的應(yīng)用路徑TMB檢測(cè)的時(shí)機(jī)與樣本選擇1.檢測(cè)時(shí)機(jī)：-初診晚期患者：在病理確診后、治療前進(jìn)行TMB檢測(cè)，用于指導(dǎo)一線治療選擇（如高TMB患者優(yōu)先考慮ICIs聯(lián)合方案，低TMB患者優(yōu)選化療±抗血管生成）；-治療后進(jìn)展患者：在疾病進(jìn)展時(shí)重復(fù)檢測(cè)TMB（尤其是液體活檢TMB），評(píng)估免疫治療耐藥機(jī)制（如TMB下降可能提示免疫逃逸，需更換治療方案）；-術(shù)后輔助治療：對(duì)于具有高危因素（如R1切除、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移）的患者，術(shù)后檢測(cè)TMB可輔助判斷是否需要ICIs輔助治療（目前證據(jù)有限，需臨床試驗(yàn)驗(yàn)證）。TMB檢測(cè)的時(shí)機(jī)與樣本選擇2.樣本選擇：-優(yōu)先組織樣本：手術(shù)或穿刺組織是TMB檢測(cè)的“金標(biāo)準(zhǔn)”，需確保腫瘤細(xì)胞含量≥20%；-液體活檢補(bǔ)充：對(duì)于組織樣本不足或無(wú)法獲取的患者（如晚期、一般狀態(tài)差），可使用ctDNA進(jìn)行TMB檢測(cè)，但需注意“ctDNATMB”與“組織TMB”的一致性（約70%-80%），解讀時(shí)需結(jié)合臨床?；赥MB的膽管癌免疫治療策略推薦結(jié)合現(xiàn)有證據(jù)和臨床實(shí)踐，我們提出以下分層治療策略：1.高TMB患者（TMB≥10mutations/Mb）：-一線治療：優(yōu)先選擇ICIs聯(lián)合化療（如帕博利珠單抗+GC方案）或ICIs聯(lián)合抗血管生成藥物（如阿替利珠單抗+貝伐珠單抗），ORR可達(dá)25%-35%；-二線治療：若一線未使用ICIs，可單用PD-1抑制劑（如帕博利珠單抗）；若一線已使用ICIs，可考慮聯(lián)合CTLA-4抑制劑（如伊匹木單抗）或參加臨床試驗(yàn)（如雙抗、新型ICIs）。基于TMB的膽管癌免疫治療策略推薦2.低TMB患者（TMB<10mutations/Mb）：-一線治療：優(yōu)選化療±抗血管生成藥物（如GC方案+安羅替尼），ORR約20%-25%；若患者PD-L1高表達(dá)（CPS≥10）或有其他高危因素，可考慮ICIs聯(lián)合化療（但需權(quán)衡獲益與毒性）；-二線治療：避免單用ICIs，可考慮靶向治療（如IDH1抑制劑ivosidenib用于IDH1突變患者）、化療或參加免疫聯(lián)合新藥臨床試驗(yàn)（如ICIs+TLR激動(dòng)劑）?；赥MB的膽管癌免疫治療策略推薦3.特殊人群：-MSI-H/dMMR患者：無(wú)論TMB高低，均優(yōu)先推薦ICIs單藥（如帕博利珠單抗），ORR可達(dá)40%-50%；-肝功能不全患者：Child-PughB級(jí)以上患者需謹(jǐn)慎使用ICIs，需根據(jù)肝功能調(diào)整劑量，密切監(jiān)測(cè)肝毒性。TMB檢測(cè)的動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)與耐藥管理04030102免疫治療耐藥是膽管癌治療中的又一難題，TMB動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)可輔助耐藥機(jī)制判斷：-TMB升高：可能提示腫瘤突變負(fù)荷增加，新抗原產(chǎn)生增多，可繼續(xù)或更換ICIs治療，或聯(lián)合其他免疫治療手段；-TMB降低：可能提示免疫編輯（immunoediting）——免疫系統(tǒng)清除高突變腫瘤細(xì)胞，殘留低突變克隆，需考慮聯(lián)合化療或靶向治療；-TMB不變但PD-L1升高：可能提示PD-1/PD-L1通路代償性激活，可聯(lián)合CTLA-4抑制劑或LAG-3抑制劑。臨床實(shí)踐中的注意事項(xiàng)0302011.避免“唯TMB論”：TMB是重要預(yù)測(cè)標(biāo)志物，但需結(jié)合患者體能狀態(tài)（PS評(píng)分）、合并癥、治療意愿等綜合決策；2.關(guān)注檢測(cè)質(zhì)量：選擇通過CLIA/CAP認(rèn)證的檢測(cè)機(jī)構(gòu)，使用經(jīng)過驗(yàn)證的NGSpanel，確保TMB值的可靠性；3.多學(xué)科團(tuán)隊(duì)（MDT）討論：TMB檢測(cè)結(jié)果需由腫瘤科、病理科、分子診斷科等多學(xué)科專家共同解讀，制定個(gè)體化治療方案。07TMB檢測(cè)在膽管癌免疫治療中的挑戰(zhàn)與未來方向當(dāng)前面臨的主要挑戰(zhàn)盡管TMB在膽管癌中展現(xiàn)出應(yīng)用潛力，但仍存在諸多亟待解決的問題：1.檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)化不足：不同NGSpanel的基因覆蓋范圍、測(cè)序深度、生物信息學(xué)算法差異導(dǎo)致TMB值可比性差，缺乏統(tǒng)一的“膽管癌特異性TMBcut-off值”；2.腫瘤異質(zhì)性影響：膽管癌存在明顯的空間異質(zhì)性（原發(fā)灶與轉(zhuǎn)移灶TMB差異）和時(shí)間異質(zhì)性（治療前后TMB變化），單一部位組織檢測(cè)可能無(wú)法反映整體腫瘤負(fù)荷；3.臨床轉(zhuǎn)化障礙：TMB檢測(cè)費(fèi)用較高（約3000-5000元/次），部分地區(qū)醫(yī)保未覆蓋，且部分臨床醫(yī)生對(duì)其解讀經(jīng)驗(yàn)不足；4.“免疫冷腫瘤”的局限性：膽管癌新抗原質(zhì)量較低，即使高TMB患者，部分仍可能因TME抑制而耐藥，需聯(lián)合其他策略（如TME重塑）。未來研究方向與展望針對(duì)上述挑戰(zhàn)，未來研究需聚焦以下方向：1.建立膽管癌特異性TMB標(biāo)準(zhǔn)：通過大樣本前瞻性研究（如國(guó)際多中心隊(duì)列），確定不同膽管亞型（iCCA/pCCA/dCCA）的TMBcut-off值，開發(fā)針對(duì)膽管癌的NGSpanel（如納入IDH1/2、FGFR2等膽管癌驅(qū)動(dòng)基因）；2.探索TMB與其他組學(xué)的聯(lián)合模型：整合轉(zhuǎn)錄組（如免疫相關(guān)基因表達(dá)譜）、蛋白組（如PD-L1、CTLA-4表達(dá)）、代謝組（如乳酸、犬尿氨酸）數(shù)據(jù)，構(gòu)建