巴氏染色法是脫落細(xì)胞染色中最好的染色方法。蘇木素染液，細(xì)胞核內(nèi)的染色質(zhì)

主要是去氧核糖核酸（DNA）,DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)中，兩條鏈上的磷酸基向外，帶

負(fù)電荷，呈酸性，很簡單與帶正電荷的蘇木素精堿性染料以離子或氫鍵結(jié)合而被

染色。蘇木精在堿性溶液中呈藍(lán)色，所以細(xì)胞核被染成藍(lán)色。分化：蘇木素染

色之后，用水洗去未結(jié)合在細(xì)胞上的染液，但是在細(xì)胞核中結(jié)合過多的染料和細(xì)

胞漿中吸附的染料必需用分化液現(xiàn)鹽酸酒精脫去，才能保證細(xì)胞核和細(xì)胞奘染

色的分明，把這個過程稱為染色的分化作用。因酸能破壞蘇木素的釀型結(jié)構(gòu)，使

色素與組織解離，分化不行過度。藍(lán)化：分化之后蘇木素在酸性條件下處于紅色

離子狀態(tài)，在堿性條件下處于藍(lán)色離子狀態(tài)，而呈藍(lán)色，所以分化之后用水洗去

酸而中止分化，再用弱堿性水使蘇木精染上的細(xì)胞核變呈藍(lán)色，稱藍(lán)化作用，一

般多用自來水浸洗即可變藍(lán)，也可用溫水（50度溫水最佳）變藍(lán)。EA50染液的

酸堿度對于巴氏染色的勝利起著關(guān)鍵作用，EA50染液由伊纖、亮綠、等染料配

成。伊紅、亮綠、橘黃等屬于酸性染料，在溶解媒中其發(fā)色團(tuán)是負(fù)離子部分，發(fā)

色團(tuán)可與蛋白質(zhì)中帶正電的氨基結(jié)合，從而是胞漿顯藍(lán)色、綠色、橘黃色或紇色,

但蛋白質(zhì)所帶正負(fù)電荷的多少是隨溶液的PH值而變更的，在偏堿環(huán)境中，蛋白

質(zhì)的竣基游離增多（帶負(fù)電），在偏酸環(huán)境中蛋白質(zhì)氨基游離增多（帶正電），

磷鋸酸在染色過程中，不但作為媒染劑可增加染料的著色力，同時磷鈣酸與碳酸

鋰還是一對弱酸弱堿，事熨上是一對緩沖劑，可中和分化與藍(lán)化時可能留下狗少

量酸或堿，保證染色達(dá)到志向效果，其適用于上皮細(xì)胞與間皮組織的標(biāo)本，是陰

道脫落細(xì)胞檢查中最常用的染色方法，該染色法不但具有顯示細(xì)胞核結(jié)構(gòu)清楚、

分色明顯、透亮度好、胞漿受色艷麗等特點(diǎn)。

巴氏染色法將胞核染為深藍(lán)色；鱗狀上皮底層、中層與表層角化前

細(xì)胞胞質(zhì)染綠色，表層不全角化細(xì)胞胞質(zhì)染粉紅色，完全角化細(xì)胞胞質(zhì)呈

桔黃色；細(xì)菌：灰色；滴蟲：淡藍(lán)灰色；黏液：淡藍(lán)色或粉紅色；中性粒

細(xì)胞和淋巴細(xì)胞、吞噬細(xì)胞胞質(zhì)均為藍(lán)色；紅細(xì)胞染粉紅色；高分化鱗癌

細(xì)胞可染成粉紅色或桔黃色；腺癌胞質(zhì)呈灰藍(lán)色。

巴氏染色的操作方法與留意事項

染色有4個步驟：1、固定；2、核染色；3、胞漿染色；4、透亮。

主要達(dá)到以下要求：1、核的結(jié)構(gòu)清楚；2、透亮度高；3、分色

恰當(dāng)。

一、固定

固定的目的細(xì)胞制片的快速固定是制片過程中關(guān)鍵的一步，否則

會影響細(xì)胞學(xué)診斷的精確性。對于不同的標(biāo)本須要不同的固定方法。

最為常用的固定方法是95%酒精作為固定液的濕固定法。酒精作為一

種脫水劑能夠防止細(xì)胞內(nèi)的酶捋蛋白質(zhì)分解而自容，并凝固細(xì)胞內(nèi)的

物質(zhì)如蛋白質(zhì)、脂肪和糖類等，使其保持與組織生活相仿的成分，從

而使細(xì)胞各部分，尤其核染色質(zhì)易于著色。對于巴氏染色來說，酒精

固定最為重要的。假如酒精濃度不足引起的固定不佳，可造成細(xì)胞的

人為變更，并可導(dǎo)致假陽性或假陰性的診斷。

1、固定方法濕固定法：作為用95%酒精固定液固定的細(xì)胞學(xué)標(biāo)

本肯定運(yùn)用濕固定法。制片制備完后，趁標(biāo)本簇新而又潮濕時，馬上

放入盛有95%酒精的固定缸內(nèi)。制片在固定液內(nèi)至少保持

15-30mino固定時間通常不超過1周。這種制片染色后，顏色艷麗,

結(jié)構(gòu)清楚。假如細(xì)胞制片須要送至另一試驗室或郵寄他處染色時，可

以固定15min后，把制片取出后馬上密封的容器中或者運(yùn)用甘油防

止制片干燥。因為無論固定前或固定后的制片，假如發(fā)生干燥后都會

影響染色的效果。

2、固定留意事項固定液的過濾：為了防止細(xì)胞污染，凡是運(yùn)用

過的固定液，必需過濾后才能再運(yùn)用。運(yùn)用過長的固定液，必需用酒

精相對密度計測定，酒精濃度低于9。%時應(yīng)當(dāng)與時更換新液。濕固定

的重要性：標(biāo)本再簇新時與時固定時保證染色效果的重要因素。如蘇

木素對細(xì)胞核的染色，巴氏染色中胞漿的特別著色作用，均可因標(biāo)本

干燥后固定而大受影響。制片標(biāo)本的郵寄：標(biāo)本再固定15min后取

出，馬上加甘油數(shù)滴于制片上，裝入密封的小盒中。試驗室在收到標(biāo)

本后，先浸入95%酒精中，使甘油溶去，再進(jìn)行染色。

二、核染色

1、蘇木素液浸染時間一般在3?5min,但是必需隨氣溫柔燃料

狀況而酌情變更。夏季或放置較久的蘇木素染液簡單著色，時間要縮

短；冬季或新配制的蘇木素染液和應(yīng)用已久較稀釋的蘇木素液不易著

色，時間要延長。在運(yùn)用蘇木素染色時，一般有2種方法：

1）過染法：首先有意識地進(jìn)行深染，然后通過鹽酸酸化過程使

核染色趨于合適。這種方法能夠在酸化過程中把胞漿內(nèi)黏附多余的蘇

木素染料去掉，使胞漿染色更為艷麗、清楚、多用于黏液多的標(biāo)本。

2）淡染法：在核染色過程中，嚴(yán)格駕馭染色時間，使核染色相

宜而不用鹽酸酸化，但是胞漿中少量的蘇木素會影響EA染色的質(zhì)量。

主要用于黏液少的標(biāo)本，避開在酸化和自來水沖洗的過程中使細(xì)胞成

片地脫落。在運(yùn)用蘇木素染色時，肯定要每日進(jìn)行過濾，否則蘇木素

結(jié)晶會影響染色的質(zhì)量。一般蘇木素染液可以運(yùn)用較長時間，所以每

日增加少量簇新染液即可。

2、堿化堿化亦稱返藍(lán)過程，可以運(yùn)用飽和碳酸鋰或3%氨水堿化,

目的使蘇木素與早顯色，時間約數(shù)秒。更重要的是流水沖洗，可使藍(lán)

色顯的更艷麗。堿性溶液亦須要充分漂清才不會阻礙下一步的胞漿著

色與標(biāo)本制成后的顏色保存。分化和堿化溶液至少每天更換新液。

三、胞漿染色

胞漿染色在巴氏方法中亦稱為OG—EA染色，它包括橘黃G

(OG)和EA兩部分染色。由于橘黃G是一種小分子染料，能夠很

快地作用于胞漿，一般染色時間不宜過長，通常對于宮頸、

陰道上皮中非正常角化細(xì)胞和角化型鱗癌細(xì)胞的胞漿中都可以出現(xiàn)艷

麗的橘黃色。

四、封固制片

封固制片對于避開空氣干燥的影響，制片經(jīng)長期存放不褪色是特

別重耍的。一般運(yùn)用24mmX50mm或24mmX60mm的蓋玻片,

用二甲苯調(diào)配的中性樹膠進(jìn)行封固。

五、透亮

染色的最終一步是透亮，使細(xì)胞的色度與細(xì)胞的重疊不致影響鏡

下檢查。這是在脫水與制片封固之間的一項重要步驟。最常用的透亮

溶劑使二甲苯，二甲苯的折射率在1.494,載玻片的折射率在1.515,

兩者較為匹配。假如二甲苯溶液出現(xiàn)顏色或變得渾濁，肯定要更換新

液。巴氏染色操作流程95%乙醇固定(15min)f清水沖洗多次一

蘇木素染液(3-5min)一清水沖洗三次->藍(lán)化->95%乙醇漂洗一橙

黃染液(l?10s)-95%乙醉漂洗->95%乙醉漂洗100%乙醉漂洗

-EA50(3-5m)-95%乙醉漂洗f95%乙醉漂洗->無水乙醉漂洗

f無水乙醇(2min)一二甲苯(2min)-?中性樹膠封片

染色留意事項

1、細(xì)胞核著色不佳

(1)細(xì)胞核著色過淺：

1)鹽酸分化時間過長或蘇木素染液時間過長。須要縮短分化時

間或延長堿化時間；每日加入少量簇新蘇木素染液或重新配制蘇木素

液。

2)在固定之前制片干燥。所以對巴氏染色的制片須要嚴(yán)格遵守

濕固定的原則。

3)自來水的PH值偏酸性。運(yùn)用堿性溶液。

(2)細(xì)胞核著色過深：

1)鹽酸溶液濃度不夠。適當(dāng)加入幾滴鹽酸以增加濃度。

2)制片用高于95%以上濃度的酒精固定后可以出現(xiàn)染色過深。

應(yīng)用95%酒精固定。

2、細(xì)胞漿著色不佳

(1)假如全片內(nèi)胞漿都淡染，則須要延長染色時間或更換新液。

(2)假如胞漿不分色，均為淺紅色。制片在固定前干燥或制片

被有大量球菌樣細(xì)菌影響胞漿染色。此狀況可以適當(dāng)增加染色時間能

夠部分訂正不分色狀況。

(3)胞漿染成灰色或紫色，是由于蘇木素染色時間過長或鹽酸

分化不佳。經(jīng)過褪色后重新蘇木素可以訂正。

(4)由于標(biāo)本的不同，同樣配方的EA染液可造成偏藍(lán)、偏綠和

偏紅，對不同的標(biāo)本應(yīng)當(dāng)運(yùn)用不同的EA染液。一般認(rèn)為，EA36和

EA50用于婦科標(biāo)本，而E