水產(chǎn)微生態(tài)制劑解淀粉芽胞桿菌生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程Aquaticprobiotics---TechnicalregulationforproductionofBacillus2019-02-15實(shí)施2019-02-15實(shí)施天津市市場監(jiān)督管理委員會(huì)發(fā)布I本標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)GB/T1.1—2009《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)構(gòu)和編寫》的要求起草。本標(biāo)準(zhǔn)由天津市農(nóng)業(yè)科學(xué)院提出并歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：天津市農(nóng)業(yè)生物技術(shù)研究中心。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：謝鳳行、張峰峰、周可、趙瓊、趙玉潔、孫海波、高寶山。1水產(chǎn)微生態(tài)制劑解淀粉芽胞桿菌生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB3095環(huán)境空氣質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)GB3838地表水環(huán)境質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)屬于芽胞桿菌科，芽胞桿菌屬，桿狀，有鞭毛，革蘭氏陽性菌，芽胞橢圓形，中4.1.1廠區(qū)空氣質(zhì)量符合大氣環(huán)境質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)GB3095中Ⅱ類要求。4.1.2發(fā)酵用水符合地表水環(huán)境質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)GB3838中Ⅲ類水質(zhì)要求，冷卻水及其他用水符合該標(biāo)準(zhǔn)中4.1.3生產(chǎn)車間配備消毒滅菌設(shè)施，菌種儲(chǔ)藏室和無菌25.2.1用于發(fā)酵的菌種應(yīng)有菌種鑒定報(bào)5.2.2在發(fā)酵前應(yīng)先檢測菌種的純5.2.3菌種在上罐生產(chǎn)之前需檢測種子罐中菌體的純度和濃度，不能有雜菌污染，濃度達(dá)到每毫升億5.3.1原菌種和一級(jí)菌種的培養(yǎng)基應(yīng)保證菌種生長的延滯期短5.4.1液體發(fā)酵，發(fā)酵罐的裝液量50%～70%,液體培養(yǎng)基、發(fā)酵設(shè)備、管道、補(bǔ)料罐等采用高壓蒸汽滅菌，滅菌條件為121℃~125℃,0.1MPa～0.15MPa,滅菌20min～30min。5.4.2固體物料含水率50%～60%,121℃~130℃,滅菌1.0h～2.0h。5.4.3滅菌后無菌操作取滅菌后的培養(yǎng)基，制片，染色，鏡檢，無微生物說明滅菌徹底，若有，需重復(fù)5.3的工作。搖瓶種子到發(fā)酵罐種子接種量為1%～5%,種子罐到發(fā)酵罐接種量為5%～7%。接種保證無菌操作，調(diào)5.6.1芽胞桿菌的發(fā)酵溫度為25℃~37℃。5.6.2液體發(fā)酵在發(fā)酵過程中通入無菌空氣，通氣量為10m3/ht～20m3/h-t,攪拌轉(zhuǎn)數(shù)80r/min~5.6.3芽胞率達(dá)到80%以上終止發(fā)酵。5.6.5發(fā)酵過程加入天然油脂類或有機(jī)硅類消泡劑，可采用蠕動(dòng)泵添加，36.2.1取液體菌劑約250mL(固體菌劑約250g)于無色玻璃杯中，采用目測、鼻嗅的方法進(jìn)行檢驗(yàn)。6.2.2液體菌劑為淡黃色或棕黃色，存放過程中可能出現(xiàn)沉淀，具清淡的腥味；固體菌劑棕色有效活菌測定直接用2～3個(gè)梯度稀釋液(10?、10??、10?)在含淀粉的培養(yǎng)基(參見附錄B)上涂平板，每個(gè)梯度涂3個(gè)平板，芽胞數(shù)則將2～3個(gè)梯度稀釋液80℃處理10min后在含淀粉的培養(yǎng)基(參見附選取菌落數(shù)在30～300個(gè)之間的平板計(jì)數(shù)，典型的解淀粉芽胞桿菌菌落表面粗規(guī)則，呈淺米黃色，消耗培養(yǎng)基中的淀粉在菌落周圍產(chǎn)生透明圈。芽胞數(shù)除以菌數(shù)6.4雜菌率的測定(好氧或兼性厭氧雜菌)從用來測定有效活菌數(shù)且已經(jīng)過10倍系列稀釋的樣品中，選取10?、10?、10?73個(gè)稀釋度進(jìn)行雜菌7.1應(yīng)貯存在通風(fēng)、干燥、清潔的倉庫，倉庫內(nèi)無有害氣體、易燃易爆物品7.2長途運(yùn)輸時(shí)，防止日曬、雨淋，避免長期受壓和機(jī)械損傷。產(chǎn)品不應(yīng)和易燃、易爆、易腐蝕的物品同車(或其他運(yùn)輸工具)裝運(yùn)。45(資料性附錄)含淀粉培