液相色譜常見故障及解決方案液相色譜（HPLC）是分析檢測領(lǐng)域的核心技術(shù)，但儀器運行中易因流動相、色譜柱、流路或檢測器等環(huán)節(jié)的異常，導(dǎo)致壓力波動、基線漂移、峰形畸變等故障。本文結(jié)合一線實操經(jīng)驗，梳理典型故障的誘因與解決方案，助力實驗室人員高效排障。一、壓力異常類故障（一）系統(tǒng)壓力過高表現(xiàn)：泵壓遠超方法設(shè)定值，或觸發(fā)壓力上限報警。誘因：流動相污染：未過濾的緩沖鹽、微生物滋生或鹽類析出（如有機相比例突變導(dǎo)致鹽結(jié)晶），堵塞流路。色譜柱堵塞：樣品基質(zhì)復(fù)雜（如蛋白、油脂）未預(yù)處理，或柱頭污染、填料塌陷。流路堵塞：在線過濾器（吸濾頭、柱前篩板）、管路彎折或接頭密封圈碎屑堆積。泵部件磨損：單向閥密封不嚴、柱塞桿磨損，導(dǎo)致泵腔壓力異常升高。解決方案：流動相：重新過濾（0.22μm濾膜），含緩沖鹽的流動相現(xiàn)配現(xiàn)用；鹽析出時，用5%~10%甲醇水溶液低流速沖洗流路。色譜柱：嘗試反向沖洗（低流速，10%甲醇水，限允許反沖的色譜柱）；柱頭污染可卸下篩板超聲清洗（可拆卸型號），嚴重時更換色譜柱。流路維護：超聲清洗吸濾頭（5%硝酸或甲醇中），更換柱前在線過濾器；檢查管路彎折，接頭適度擰緊（避免損壞螺紋）。泵部件：拆下單向閥超聲清洗（甲醇/水交替），磨損嚴重時更換柱塞桿、密封圈。（二）系統(tǒng)壓力過低/波動表現(xiàn)：壓力遠低于正常范圍，或壓力曲線周期性波動。誘因：漏液：泵頭、管路接頭、進樣閥、色譜柱兩端等密封處漏液，導(dǎo)致壓力無法建立。流動相不足：溶劑瓶液面過低，吸濾頭進氣形成氣泡。泵故障：泵腔密封不良（密封圈老化）、單向閥失效，無法有效輸送流動相。解決方案：漏液排查：逐一檢查泵頭、管路接頭、進樣閥轉(zhuǎn)子密封、色譜柱接頭，更換老化密封圈或PEEK接頭。流動相補充：添加流動相至合適液面，超聲脫氣；若吸入空氣，從泵出口單向閥抽液排氣，或高流速（如5mL/min）排空氣泡。泵維護：更換泵頭密封圈，檢查單向閥卡滯情況，必要時更換單向閥。二、基線異常類故障（一）基線漂移（單向持續(xù)偏移）表現(xiàn)：基線沿單一方向（如持續(xù)上升/下降）漂移，影響峰積分。誘因：流動相不穩(wěn)定：含易揮發(fā)組分（如甲酸、氨水），或梯度洗脫時有機相比例波動；流動相被污染（雜質(zhì)、微生物代謝物）。溫度波動：柱溫箱/環(huán)境溫度不穩(wěn)定，導(dǎo)致色譜柱保留行為及檢測器響應(yīng)波動。檢測器問題：氘燈能量下降（超2000h）、檢測池污染（樣品殘留/結(jié)晶）、流通池漏液。解決方案：流動相優(yōu)化：更換新鮮流動相，梯度洗脫時確保有機相/水相混合均勻；含揮發(fā)性緩沖鹽的流動相現(xiàn)配現(xiàn)用。溫度控制：校準柱溫箱實際溫度，實驗室加裝空調(diào)減少環(huán)境波動。檢測器維護：更換氘燈，用10%硝酸+水+甲醇混合液沖洗檢測池，嚴重時拆洗；檢查流通池密封圈。（二）基線噪聲大（高頻波動）表現(xiàn)：基線呈不規(guī)則高頻波動，信噪比降低。誘因：流動相含氣泡：脫氣不充分，氣泡進入檢測池產(chǎn)生光散射。檢測器污染：檢測池內(nèi)壁殘留樣品或顆粒物。電源干擾：檢測器接地不良，或附近大功率設(shè)備（如離心機）產(chǎn)生電磁干擾。泵脈沖：泵流速不穩(wěn)定（單向閥磨損、泵頭有氣泡），導(dǎo)致流動相流速波動。解決方案：氣泡排除：流動相超聲脫氣（≥15min），開啟在線脫氣；泵腔進氣時，從泵出口抽液排氣或高流速排空。檢測池清洗：用10%硝酸水溶液低流速沖洗，必要時拆洗（保護光學(xué)窗口）。電源優(yōu)化：檢查檢測器接地，遠離大功率設(shè)備，或加裝電源濾波器。泵維護：參考“壓力波動”部分，更換單向閥、密封圈。三、峰形異常類故障（一）峰拖尾表現(xiàn)：色譜峰前沿陡峭、后沿拖長，理論塔板數(shù)降低。誘因：色譜柱問題：柱頭污染、固定相硅羥基未封端（堿性樣品易拖尾）、柱效下降。流動相不匹配：pH與樣品pKa不匹配（酸性樣品用中性流動相易吸附）、緩沖鹽濃度不足。進樣問題：進樣體積過大（超柱容量）、進樣溶劑與流動相不互溶（如純甲醇進樣到水相流動相）。解決方案：色譜柱處理：反向沖洗柱頭（低流速，10%甲醇水），或用封端柱分析堿性樣品；柱效嚴重下降時更換色譜柱。流動相調(diào)整：調(diào)節(jié)pH（酸性樣品用pH=2~3流動相），提高緩沖鹽濃度（如5mM增至20mM）。進樣優(yōu)化：減小進樣體積（≤柱容量的10%），進樣溶劑與流動相比例匹配。（二）峰分叉/雙峰表現(xiàn)：單個色譜峰分裂為多個峰，分離度異常升高（非目標峰）。誘因：色譜柱污染/塌陷：柱頭填料塌陷形成“死體積”，或柱內(nèi)強保留雜質(zhì)隨樣品洗脫。進樣閥問題：轉(zhuǎn)子密封磨損，樣品殘留于閥腔，下次進樣時混合洗脫。樣品問題：樣品未完全溶解（懸浮顆粒導(dǎo)致二次進樣）、含同分異構(gòu)體（需確認是否為目標峰）。解決方案：色譜柱維護：反向沖洗色譜柱，若柱頭塌陷，嘗試更換篩板或柱頭填料（僅限制備柱）；嚴重時更換色譜柱。進樣閥維護：更換轉(zhuǎn)子密封圈，進樣后用強溶劑（純甲醇）沖洗進樣閥。樣品處理：確保樣品完全溶解（超聲、過濾），若為同分異構(gòu)體，優(yōu)化分離條件（如調(diào)整流動相比例、柱溫）。（三）峰展寬表現(xiàn)：色譜峰半高寬增大，分離度降低。誘因：柱效下降：色譜柱使用過久，填料粒徑增大、孔隙堵塞，傳質(zhì)阻力增加。流速過低：泵流速低于方法要求，樣品在柱內(nèi)停留時間過長，擴散加劇。死體積過大：管路連接過長（如柱后管路≥50cm）、接頭內(nèi)徑不匹配，導(dǎo)致樣品擴散。解決方案：色譜柱更換：柱效無法恢復(fù)時（理論塔板數(shù)降至初始值70%以下），更換新柱。流速調(diào)整：按方法要求設(shè)置泵流速，確保流速穩(wěn)定（檢查壓力曲線）。流路優(yōu)化：縮短柱后管路（≤30cm），使用內(nèi)徑匹配的PEEK接頭。四、保留時間異常類故障（一）保留時間延長表現(xiàn)：目標峰保留時間明顯延長，分析效率降低。誘因：流動相比例變化：梯度洗脫時有機相比例偏低（如甲醇瓶溶劑不足）、手動混合流動相比例誤差。流速降低：泵流速設(shè)置錯誤、泵部件磨損導(dǎo)致實際流速偏低。色譜柱/柱溫問題：柱內(nèi)污染保留能力增強，或柱溫箱故障導(dǎo)致實際溫度偏低。解決方案：流動相核查：重新配制流動相，梯度洗脫時標記溶劑液面；手動混合時精確量取。流速校準：用量筒+秒表校準泵流速，必要時更換泵密封圈、單向閥。色譜柱/柱溫維護：沖洗色譜柱，校準柱溫箱實際溫度，必要時更換傳感器。（二）保留時間縮短表現(xiàn)：目標峰保留時間提前，峰形可能展寬或拖尾。誘因：流動相比例變化：有機相比例偏高（混合器故障）、流動相溶劑揮發(fā)（敞口放置）。色譜柱問題：柱內(nèi)填料流失（柱頭篩板損壞）、固定相被強溶劑洗脫（如純甲醇沖洗C18柱）。流速升高：泵流速設(shè)置錯誤、泵腔氣泡導(dǎo)致流速波動（瞬時升高）。解決方案：流動相調(diào)整：更換新鮮流動相，檢查混合器；流動相密封保存。色譜柱維護：檢查柱頭篩板，必要時更換；避免用強溶劑過度沖洗反相柱。流速校準：同“保留時間延長”部分，校準泵流速，排除泵腔氣泡。五、漏液類故障（一）泵頭漏液表現(xiàn)：泵頭處液滴明顯，壓力無法穩(wěn)定。誘因：柱塞桿密封圈老化、泵頭單向閥漏液。解決方案：更換柱塞桿密封圈：按手冊拆卸泵頭，更換同型號密封圈（安裝前用異丙醇潤滑）。檢查單向閥：拆下單向閥超聲清洗，磨損嚴重時更換密封墊或單向閥。（二）管路接頭漏液表現(xiàn)：管路與接頭連接處液滴，壓力波動。誘因：接頭未擰緊、管路切割不平整、接頭老化。解決方案：重新安裝接頭：用切管器垂直切割管路末端（確保平整），插入接頭后適度擰緊（PEEK接頭“手緊+1/4圈”，不銹鋼接頭適度用力）。更換接頭：老化接頭直接更換，避免反復(fù)使用。（三）進樣閥漏液表現(xiàn)：進樣閥轉(zhuǎn)子與定子間漏液，峰面積重現(xiàn)性差。誘因：轉(zhuǎn)子密封圈老化、定子污染。解決方案：更換轉(zhuǎn)子密封圈：按手冊拆卸進樣閥，更換密封圈（清潔安裝面）。清洗定子：用棉簽蘸甲醇/水混合液清潔定子槽，必要時超聲清洗（保護陶瓷表面）。六、進樣系統(tǒng)故障（一）進樣量不準確表現(xiàn)：峰面積RSD＞2%，或與進樣量不成正比。誘因：進樣針堵塞、進樣閥泄漏、自動進樣器故障（進樣針偏移、活塞磨損）。解決方案：清洗進樣針：用細鋼絲疏通，或超聲清洗（甲醇中）；樣品過濾后再進樣。進樣閥維護：更換轉(zhuǎn)子密封圈，參考“進樣閥漏液”部分。自動進樣器校準：調(diào)整進樣針位置，更換注射器活塞；用標準品驗證進樣準確性。（二）進樣后無峰/峰面積過小表現(xiàn)：檢測器無信號，或峰面積遠低于預(yù)期。誘因：進樣閥未切換、樣品未注入、檢測器參數(shù)錯誤（波長設(shè)置、池漏液）。解決方案：檢查進樣閥狀態(tài)：進樣后確認閥切換至“Inject”（觀察壓力變化）。排查進樣環(huán)節(jié)：疏通進樣針、重新設(shè)置進樣體積、檢查進樣針位置。驗證檢測器參數(shù)：重新設(shè)置檢測波長（紫外預(yù)掃描樣品），檢查檢測池漏液。七、檢測器故障（一）紫外檢測器信號異常表現(xiàn)：無信號、信號恒為0/最大值，或峰形倒峰。誘因：氘燈熄滅（超壽命）、檢測池污染/漏液、信號極性錯誤。解決方案：更換氘燈：記錄使用時間，到期后更換；燈電源故障聯(lián)系工程師。清洗/更換檢測池：用10%硝酸+水+甲醇混合液沖洗，嚴重時拆洗或更換。調(diào)整信號極性：默認設(shè)為“正”，若需檢測倒峰（流動相吸收變化）可保留負極性。（二）熒光檢測器靈敏度下降表現(xiàn)：峰面積明顯減小，低濃度樣品無法檢出。誘因：氙燈能量下降（超1000h）、流通池污染、激發(fā)/發(fā)射波長偏移。解決方案：更換氙燈：按手冊更換，用標準品（奎寧硫酸鹽水溶液）驗證靈敏度。清