(12)發(fā)明專利所(特殊普通合伙)11690A61K36/185(2006.01)A61P25/08(2006.01)inhibitshumanbrainandlivermonooxidase.《Gen.Pharmac.》.1984,第15卷(第2期),第171-174頁.本發(fā)明公開了一種大麻酚類提取物的制備麻酚類化合物的總含量達到80%以上，特別是21.一種大麻酚類提取物的制備方法，包括如下步驟：(1)大麻的提取部位粉碎，烘烤，得到藥材粉末；(2)將步驟(1)所得藥材粉末用溶劑提取，得到提取液，將所述提取液濃縮，得到稠膏；(3)將步驟(2)所得稠膏用溶劑萃取，取上層液，步驟(4)所得沉淀物用溶劑溶解，所得溶液進行柱層析，洗脫；(6)將步驟(5)所得洗脫液濃所述步驟(1)中的提取部位為大麻花和/或大麻葉；所述大麻花和/或大麻葉采用盛花期的大麻花和/或大麻葉；步驟(1)中所述大麻為工業(yè)大麻；步驟(1)中所述的烘烤條件為：烘烤溫度為100-150℃,烘烤的時間為20-80min;所述的粉碎為將大麻提取部位粉碎至10-80目；步驟(2)中所述提取溶劑為乙醇；步驟(2)中所述的溶劑用量為5-15倍藥材量，所述提取次數(shù)為1-5次，每次提取時間為步驟(3)中所述的萃取溶劑為正己烷；步驟(4)中所述的堿性pH為10.0-12.0;步驟(4)中的所述的酸性pH為4.0-5.0;步驟(5)中所述的洗脫方式為采用洗脫溶劑對層析柱進行梯度洗脫；所述洗脫步驟包括：先用洗脫溶劑1洗脫除雜，然后用洗脫溶劑2洗脫獲得目標產物部所述的洗脫溶劑1選自：體積比為1:1的丙酮-石油醚混合液、體積比為1:9的二氯甲烷-正己烷混合液和體積比為1:30乙酸乙酯-庚烷混合液中的一種；所述的洗脫溶劑2選自：體積比為7:3的丙酮-石油醚混合液、體積比為2:8的二氯甲烷-正己烷混合液和體積比為1:25乙酸乙酯-庚烷混合液中的一種；步驟(5)中所述柱層析所用的層析柱填料為硅膠填料；所述CBD含量為55-60%,CBDV含量為10-13%,CBG含量為4-5%,THCV含量為4-5%。2.如權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟(2)中的溶劑用量為5-15倍藥材量，所述提取次數(shù)為1-5次，每次提取時間為1-3h,所述的提取方法選自：冷浸法、超聲提取法、回流提取法和浸漉法中的一種或兩種以上的組合。3.如權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟(3)中的萃取溶劑用量為1-6倍藥材4.如權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟(2)和/或(3)中所述的濃縮溫度為5.如權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟(4)中所述的調節(jié)pH至堿性包括加入強堿調節(jié)pH的步驟。6.如權利要求5所述的制備方法，其特征在于，所述強堿選自：氫氧化鈣、氫氧3氧化鉀和氫氧化鈉中的一種或兩種以上的組合；步驟(4)中所述的調節(jié)pH至酸性包括加入弱酸調節(jié)pH的步驟。7.如權利要求6所述的制備方法，其特征在于，所述弱酸選自：乙酸、亞硫酸和磷酸中的一種或兩種以上的組合。8.如權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟(4)中所述的堿性pH為pH11.0;步驟9.如權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟(5)中所述的溶劑選自：乙酸乙酯、正丁醇、正己烷、石油醚和二氯甲烷中的一種或兩種以上的組合；步驟(5)中所述的溶劑用量為0.5-2倍藥材量。10.如權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述的洗脫溶劑1的用量為2-8倍柱體積；所述的洗脫溶劑2的用量為2-8倍柱體積。11.一種權利要求1-10任一項所述的方法制備的大麻酚類提取物。4技術領域[0001]本發(fā)明涉及化學技術領域，具體涉及一種高純大麻酚類提取物的制備方法。背景技術苗、黃麻，具有重要的農用及藥用價值。大麻中含有一種毒性成分THC(四氫大麻酚)可使人[0003]由于大麻的經濟、藥用價生長期大麻花葉中的四氫大麻酚(THC)含量小于千分之三，不具備提取毒性成分四氫大麻酚的價值或直接作為毒品吸食，可以合法進行規(guī)?；N植與工業(yè)化開發(fā)利用。[0004]目前，人們已從大麻植株中分離出了500余種物質，其中大麻酚類化合物至少有86種，大麻酚類化合物是一類萜烯酚類化合物，研究證實，工業(yè)大麻植株中含有多種大麻酚類萜酚(CBG)、大麻環(huán)萜酚(CBC)、四氫大麻酚(THC)等八十余種。這些酚類物質已被證實具有響脂質和糖代謝，可能成為控制2型糖尿病患者血糖的新選擇等，CBDV具有較好的抗癲癇活性，同時有研究表明CBDV可減輕惡心癥狀，有助于治療胃腸問題，并且這些酚類物質的聯(lián)合應用作用更強。但大麻中的THC具有致癮致幻作用，以工業(yè)大麻作為原料，得到不含THC的提取物，為藥物制劑提供高活性物質原料很有必要。[0005]以大麻酚類為主要成分的大麻多酚類提取物，因其結構相似，THC的去除難度較開了一種從工業(yè)大麻花葉中提取CBD的方法，成品中CBD純度較高，且去除了THC,但提取中沒有考慮其他大麻酚類化合物，如CBDV、THCV等，資源有一定的浪費，且提取方法步驟較為發(fā)明內容[0006]為克服現(xiàn)有技術的不足，本發(fā)明旨在提供一種高純大麻酚類提取物的制備工藝，其中所述提取物中大麻酚類化合物的總含量達到80%以上，各主要活性成分及其含量分別[0007]本發(fā)明第一方面提供高純大麻酚類提取物的制備方法。[0008]本發(fā)明第二方面提供一種上述方法制備的高純大麻酚類提取物。[0009]本發(fā)明第三方面提供一種上述大麻酚類提取物在制備藥物中的應用。[0010]具體地，本發(fā)明提供的大麻酚類提取物的制備方法包括如下步驟：5[0011](1)大麻的提取部位粉碎，烘烤，得到藥材粉末；[0012](2)將步驟(1)所得藥材粉末用溶劑提取，得到提取液，將所述提取液濃縮，得到稠[0013](3)將步驟(2)所得稠膏用溶劑萃取，取上層液，將所述上層液濃縮，得到稠膏；[0014](4)將步驟(3)所得稠膏調節(jié)pH至堿性，過濾，所得濾液調節(jié)pH至酸性，過濾，得到沉淀物；[0015](5)將步驟(4)所得沉淀物用溶劑溶解，所得溶液進行柱層析，洗脫；[0016](6)將步驟(5)所得洗脫液濃縮，得到大麻酚類提取物。[0017]優(yōu)選的，步驟(1)中所述的提取部位選自：大麻葉、大麻花、大麻根、大麻稈芯和大麻籽粕中的一種或兩種以上任意比例的組合；更優(yōu)選的，所述的提取部位為大麻花和/或大麻葉，進一步優(yōu)選地，所述大麻花和/或大麻葉采用盛花期的大麻花和/或大麻葉。[0018]優(yōu)選的，步驟(1)中所述的大麻選自工業(yè)大麻、中間型大麻或藥用大麻中的一種或兩種以上的組合；更優(yōu)選為工業(yè)大麻。[0019]優(yōu)選的，步驟(1)中所述的大麻提取部位為采摘后經過初步干燥(如曬干、烤干等干燥方式)的大麻提取部位，更優(yōu)選的，所述大麻提取部位水分含量為10-15%,灰土含量在[0020]步驟(1)中所述的烘烤有利于大麻提取部位中的一些其他成分轉化為大麻酚類化合物，如大麻酚酸可通過非酶促反應脫除羧基轉化成為大麻酚(CBN),烘烤后酚類化合物總含量可提高50%以上；優(yōu)選的，所述烘烤的溫度為100-150℃(具體如100、110、120、130、140或150℃),和/或，烘烤的時間為20-80min(具體如20、40、60或80min)。優(yōu)選的，步驟(1)中所述的粉碎為將大麻提取部位粉碎至10-80目(具體如10、20、30、40、50、60、70或80目)。[0021]優(yōu)選的，步驟(1)中所述的藥材粉末中水分含量小于6%。[0022]優(yōu)選的，步驟(2)中所述的溶劑為乙醇，更優(yōu)選的，所述乙醇為濃度為60-95%(v/V,具體如60%、70%、80%、90%或95%)的乙醇。[0023]優(yōu)選的，步驟(2)中所述的溶劑用量為5-15倍藥材量(具體如5、8、10、12或15倍藥材量)。[0024]優(yōu)選的，步驟(2)中所述提取次數(shù)為1-5次(具體如1、2、3、4或5次),每次提取時間為1-3h。[0025]優(yōu)選的，步驟(2)中所述的提取方法選自：冷浸法、超聲提取法、回流提取法和浸漉法中的一種或兩種以上的組合；更優(yōu)選的，步驟(2)中所述的提取方法為冷浸法。[0026]優(yōu)選的，所述的冷浸法提取條件如下：以5-15倍藥材量60-95%乙醇冷浸提取1-5[0027]步驟(3)的萃取是去除雜質的關鍵步驟，可將雜質去除70%以上。[0028]優(yōu)選的，步驟(3)中所述的萃取溶劑選自：乙酸乙酯、正丁醇、正己烷、石油醚和二氯甲烷中的一種或兩種以上的組合；更優(yōu)選的，步驟(3)中所述的萃取溶劑為正己烷。[0029]優(yōu)選的，步驟(3)中所述的萃取溶劑用量為1-6倍藥材量(具體如1、2、3、4、5或6倍藥材量)。[0030]優(yōu)選的，步驟(3)中所述的萃取次數(shù)為1-3次(具體如1、2或3次)。[0031]優(yōu)選的，步驟(2)和/或(3)中所述的濃縮溫度為50-70℃,更優(yōu)選為65℃。6[0032]優(yōu)選的，步驟(2)和/或(3)中所述的稠膏相對密度為1.05-1.35(50℃下測量)(具[0033]步驟(4)中所述的調節(jié)pH可進一步純化步驟(3)所得稠膏中的酚類化合物，如調至堿性可使酚類化合物成鹽，過濾后，調節(jié)濾液pH至酸性可將上述鹽轉化為相應的酚類化合物。[0034]優(yōu)選的，步驟(4)中所述的調節(jié)pH至堿性包括加入強堿調節(jié)pH的步驟；更優(yōu)選的，所述強堿選自：氫氧化鈣、氫氧化鋇、氫氧化鉀和氫氧化鈉中的一種或兩種以上的組合，在本發(fā)明的一個實施例中，所述強堿為氫氧化鈉。[0035]優(yōu)選的，步驟(4)中的所述的堿性pH為pH10.0-12.0,更優(yōu)選為pH11.0。[0036]優(yōu)選的，步驟(4)中所述的調節(jié)pH至酸性包括加入弱酸調節(jié)pH的步驟；更優(yōu)選的，所述弱酸選自：乙酸、亞硫酸和磷酸中的一種或兩種以上的組合，在本發(fā)明的一個實施例[0037]優(yōu)選的，步驟(4)中的所述的酸性pH為pH4.0-5.0,更優(yōu)選為pH4.6。[0039]優(yōu)選的，步驟(5)中所述的溶劑選自：乙酸乙酯、正丁醇、正烷中的一種或兩種以上的組合。[0040]優(yōu)選的，步驟(5)中所述的溶劑用量為0.5-2倍(具體如0.5、1、1.5或2倍藥材量)藥材量。[0041]優(yōu)選的，步驟(5)中所述柱層析所用的層析柱填料為硅膠填料，更優(yōu)選的，所述的[0042]優(yōu)選的，步驟(5)中所述的洗脫方式為采用洗脫溶劑對層析柱進行梯度洗脫；更優(yōu)選的，所述洗脫步驟包括：先用洗脫溶劑1洗脫除雜，然后用洗脫溶劑2洗脫獲得目標產物部分(即層析柱中吸附的大麻酚類化合物)。[0043]優(yōu)選的，所述洗脫溶劑選自：丙酮-石油醚混合液、二氯甲烷-正己烷混合液、乙酸乙酯-庚烷混合液和二氯甲烷-石油醚混合液。[0044]優(yōu)選的，所述的洗脫溶劑1選自：體積比為1:1的丙酮-石油醚混合液、體積比為1:9的二氯甲烷-正己烷混合液和體積比為1:30乙酸乙酯-庚烷混合液中的一種。優(yōu)選為4-6倍柱體積。[0046]優(yōu)選的，所述的洗脫溶劑2選自：體積比為7:3的丙酮-石油醚混合液、體積比為2:8的二氯甲烷-正己烷混合液和體積比為1:25乙酸乙酯-庚烷混合液中的一種。優(yōu)選為5-7倍柱體積。[0048]優(yōu)選的，步驟(5)所述的梯度洗脫在洗脫除雜和洗脫獲得目標產物部分后還包括用洗脫溶劑3洗脫THC的步驟；更優(yōu)選的，所得洗脫液銷毀，如采用濃酸(如濃鹽酸、濃硝酸等)銷毀。[0049]優(yōu)選的，所述洗脫溶劑3選自：體積比為8:2的丙酮-石油醚混合液、體積比為4:6的丙酮-石油醚混合液和體積比為1:10的乙酸乙酯-庚烷混合液中的一種。7優(yōu)選為4-6倍柱體積。[0051]優(yōu)選的，步驟(6)中所述的濃縮為減壓濃縮；更優(yōu)選的，減壓濃縮的溫度為55-70[0052]具體地，本發(fā)明提供的大麻酚類提取物中，大麻酚類化合物總含量大于80%。[0053]優(yōu)選的，所述大麻酚類提取物中THC含量在1‰以下。取物中CBD含量為55-60%,CBDV含量為10-13%,CBG含量為4-5%,THCV含量為4-5%。[0055]具體地，本發(fā)明提供的上述大麻酚類提取物在制備藥物中的應用中，所述藥物為治療癲癇的藥物。[0056]本發(fā)明所述的大麻酚類提取物還可作為進一步分離純化獲得各個大麻酚類化合物單品的原料。[0057]本發(fā)明提供的大麻酚類提取物的制備方法，所用的原料、試劑和儀器價廉易得，成本較低，采用的操作和方法簡單易進行；并可得到高質量大麻多酚類提取物，其保留了較多物的總含量達到80%以上，精神毒性成分THC含量在1%以下，使產品安全性得到了保障；且各制備批次穩(wěn)定性較高，產品中組分含量和活性均較為穩(wěn)定，易于實現(xiàn)工業(yè)化。附圖說明[0058]圖1所示為本發(fā)明實施例1制備的提取物檢測HPLC色譜圖。[0059]圖2所示為本發(fā)明實施例2制備的提取物檢測HPLC色譜圖。[0060]圖3所示為本發(fā)明實施例3制備的提取物檢測HPLC色譜圖。具體實施方式[0061]除非另有定義，本文使用的所有的技術和科學術語具有與本發(fā)明涉及領域的技術人員通常理解的相同的含義，如在本發(fā)明中出現(xiàn)的以下縮寫及其對應的物質為：次大麻二酚大麻二酚大麻萜酚THC四氫大麻酚[0063]本發(fā)明中所述的“大麻酚類提取物”是指從大麻提取部位(如大麻花和/或葉)的原料中提取得到的產品，其可為液體或固體形式，其中包含至少一種大麻酚類化合物，優(yōu)選8特別地，在本發(fā)明的實施例所制備的提取物產品中，未檢測到THC。[0064]除非特別說明，本發(fā)明中所述的“含量”一般為質量含量，如在提取物中CBDV的含量為10%-13%,是指：在提取物中，CBDV的質量占提取物總質量的10%-13%。[0065]本發(fā)明中所述的“x倍生藥量”、“x倍藥材量”等描述，是指采用的溶劑如正己烷、石油醚等的體積是藥材質量的x倍，具體地，如“1倍藥材量”,如藥材質量為1g,所用溶劑的用量為1ml。[0066]下面將結合本發(fā)明實施例，對本發(fā)明的技術方案進行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實施例僅是本發(fā)明一部分實施例，而不是全部的實施例?；诒景l(fā)明中的實施例，本領域普通技術人員在沒有作出創(chuàng)造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例，都屬于本發(fā)明保護的范圍。[0067]本發(fā)明的實施例中所用大麻提取部位原料為：花葉原料為7-9月的成熟大麻花葉，陰干，為THC含量在0.3%以下的工業(yè)大麻。除非特別說明，其他試劑為商購產品。[0068]實施例1[0069]實驗步驟如下：[0070](1)將工業(yè)大麻花葉原料粉碎為60目粗粉，在150℃下，烘烤80min,水分為2.2%;[0071](2)將步驟(1)得到的藥材采用冷浸法提取，以15倍95%乙醇室溫浸泡3h,提取5次，合并得提取液；[0072](3)將步驟(2)得到的提取液65℃濃縮至稠膏(相對密度1.08,50℃下測得);[0073](4)將步驟(3)得到的稠膏加藥材量6倍正己烷萃取3次，攪拌1h,待分層后取上層，合并上層液，65℃濃縮至稠膏(相對密度1.08,50℃下測得);[0074](5)向步驟(4)得到的稠膏加入氫氧化鈉調節(jié)pH至11,充分攪拌1h,過濾，濾液再加入乙酸調節(jié)pH至4.6,過濾，得不溶沉淀物；[0075](6)將步驟(5)得到的不溶沉淀物用1倍生藥量的石油醚溶解，過硅膠柱層析，丙酮：石油醚(體積比：1:1,以下洗脫液中組分的比例均分別為二者的體積比)洗脫5倍柱體積，為雜質部分，回收溶劑；丙酮：石油醚(7:3)洗脫6倍柱體積，收集第二部分洗脫液，濃縮后即為活性成分提取物；丙酮：石油醚(8:2)洗脫5倍柱體積為四氫大麻酚為主的部分，經濃縮后加濃鹽酸銷毀；[0076](7)將步驟(6)得到的第二部分洗脫液，減壓濃縮，55-70℃,-0.10MPa,直至濃膏，即得大麻酚類提取物，分析檢測該提取物中CBDV、CBD、CBG、THCV和THC等成分的含量。[0077]樣品檢測分析方法如下：[0078]色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈為流動相A,以水為流動相B,按A(%):B(%)=80:20進行等度洗脫；檢測波長為210nm。理論板數(shù)按CBD峰計算應不低于2500。[0079]對照品溶液的制備：精密稱取CBD對照品，加甲醇制成每1ml各含0.1mg的對照品溶液，即得；精密稱取CBDV對照品，加甲醇制成每1ml各含0.05mg的對照品溶液，即得；精密稱取THCV對照品，加甲醇制成每1ml各含0.01mg的對照品溶液，即得；精密稱取CBG對照品，加甲醇制成每1ml各含0.01mg的對照品溶液，即得；精密稱取四氫大麻酚對照品，加甲醇制成每1ml各含0.01mg的對照品溶液，即得。[0080]供試品溶液的制備：取成品5mg,加甲醇定容至50ml,用微孔濾膜(0.45μm)濾過，取9[0081]測定法：分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μ1,注入液相色譜儀，測定，即得。[0082]提取物的檢測色譜圖如圖1所示，其中，保留時間和對應的物質如下：4.728為CBDV,7.466為CBG,7.921為CBD,8.772為TH[0083]結果：本實施例制備得到的提取物中，大麻酚類物質總含量為84%,各主要活性成分及其含量分別為：CBDV,11%;CBD,58%;CBG,4.3%;THCV,4.1%;THC未檢測到。[0085]實驗步驟如下：[0086](1)將工業(yè)大麻花葉原料粉碎為60目粗粉，在100℃下，烘烤20min,水分為5.1%;[0087](2)將步驟(1)得到的藥材采用冷浸法提取，以5倍60%乙醇室溫浸泡1h,提取1次；[0088](3)將步驟(2)得到的提取液65℃濃縮至稠膏(相對密度1.08,50℃下測得);[0089](4)將步驟(3)得到的稠膏加藥材量1倍正己烷萃取1次，攪拌1h,待分層后取上層，65℃濃縮至稠膏(相對密度1.08,50℃下測得);[0090](5)向步驟(4)得到的稠膏加入氫氧化鈉調節(jié)pH至11,充分攪拌1h,過濾，濾液再加入乙酸調節(jié)pH至4.6,過濾，得不溶沉淀物；[0091](6)將步驟(5)得到的不溶沉淀物用1倍生藥量的二氯甲烷溶解，過硅膠柱層析，二氯甲烷：正己烷(1:9)洗脫5倍柱體積，為雜質部分，回收溶劑；二氯甲烷：正己烷(2:8)洗脫6倍柱體積，收集第二部分洗脫液，濃縮后即為活性成分提取物；丙酮：石油醚(4:6)洗脫5倍柱體積為四氫大麻酚為主的部分，經濃縮后加濃鹽酸銷毀；[0092](7)將步驟(6)得到的第二部分洗脫液，減壓濃縮，55-70℃,-0.10MPa,直至濃膏，即得大麻酚類提取物，分析檢測該提取物中CBDV、CBD、CBG、THCV和THC等成分的含量，分析檢測方法參照實施例1。[0093]提取物的檢測色譜圖如圖2所示，其中，保留時間和對應的物質如下：4.726為CBDV,7.455為CBG,7.907為CBD[0094]結果：本實施例制備得到的提取物中，大麻酚類物質總含量為84%,各主要活性成分及其含量分別為：CBDV,1