(10)授權(quán)公告號CN110330409B(65)同一申請的已公布的文獻(xiàn)號(73)專利權(quán)人漢義生物科技(北京)有限公司地址100020北京市朝陽區(qū)呼家樓(京廣中心)1號樓26層13室(72)發(fā)明人譚昕王曙賓孫武興邢俊波馬燕珠范德凱張景(74)專利代理機(jī)構(gòu)北京領(lǐng)科知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(特殊普通合伙)11690代理人張丹A61K36/60(2006.01)A61K36/185(2006.01)A61K8/34(2006.01)A61K8/49(2006.01)A61K31/05(2006.01)A61K31/352(2006.01)A61P19/02(2006.01)A61P25/22(2006.01)A61P3/10(2006.01)A61P3/06(2006.01)A61P1/00(2006.01)A61P13/06(2006.01)審查員富佳玉一種工業(yè)大麻提取物的制備方法本發(fā)明公開了一種工業(yè)大麻提取物的制備方法，其采用加鹽和離心的方式富集大麻酚類化合物，一步即可完全去除水溶性雜質(zhì)，避免應(yīng)用常規(guī)的水沉工藝或應(yīng)用大孔樹脂去水溶性雜質(zhì)時(shí)引入的甲苯、二甲苯等溶劑殘留，極大地節(jié)省了生產(chǎn)成本和質(zhì)量控制成本，且可完全排除精神活性成分THC。上述方法中僅用到純化水和毒性業(yè)化生產(chǎn)。上述方法所制得的工業(yè)大麻提取物富率可高達(dá)99%以上。21.一種工業(yè)大麻提取物的制備方法，其包括如下步驟：(1)將工業(yè)大麻藥材粉末利用水-有機(jī)試劑混合溶劑I提取，得提取液，濃縮，得濃縮浸(2)將步驟(1)所得浸膏加入純化水，保溫?cái)嚢枞芙?，冷卻至室溫后，通過加入鹽溶解然(4)將步驟(3)所得浸膏溶解，進(jìn)行柱層析，用水-有機(jī)試劑混合溶劑Ⅱ洗脫，收集大麻酚類化合物成分的洗脫液；所述大麻酚類化合物包括次大麻二酚、大麻萜酚和大麻二酚；步驟(1)中，水-有機(jī)溶劑混合溶劑I為濃度90-99%的乙醇水溶液；步驟(2)中，所述鹽選自碳酸鈉；所述保溫溫度為55-95℃;保溫?cái)嚢钑r(shí)間為0.5-3h;所述離心為蝶式離心；步驟(4)中，所述柱層析所用填料為十八烷基硅烷鍵合硅膠；所述柱層析所用填料的粒徑為10-100μm;所述柱層析所用層析柱的徑高比為3:2-3:12;所述洗脫流速為2-5BV/h;步驟(4)中，所述水-有機(jī)溶劑混合溶劑Ⅱ中的有機(jī)溶劑為濃度為70-95%的乙醇水溶2.如權(quán)利要求1的制備方法，其特征在于，步驟(1)中，所述工業(yè)大麻藥材選自：大麻葉、大麻花、大麻根、大麻稈芯和大麻籽粕中的一種或兩種以上任意比例的組合；所述工業(yè)大麻藥材粉末為將工業(yè)大麻藥材粉碎，烘烤后所得粉末；所述烘烤溫度為100-200℃,烘烤時(shí)間為60-200min。3.如權(quán)利要求1的制備方法，其特征在于，步驟(1)中所述工業(yè)大麻藥材粉末與水-有機(jī)試劑混合溶劑I的料液比w/v為1:5-1:15;步驟(2)中所述純化水的體積用量為工業(yè)大麻藥材粉末質(zhì)量的1-3倍。4.如權(quán)利要求1的制備方法，其特征在于，步驟(3)中，將步驟(2)所得粗提物溶解所用溶劑為水-有機(jī)溶劑混合溶劑Ⅲ;其中所述有機(jī)溶劑選自：甲醇、乙醇和丙酮中的一種或兩種以上任意比例的組合；所述水-有機(jī)溶劑混合溶劑Ⅲ中有機(jī)溶劑的濃度為70%-95%;所述水-有機(jī)溶劑混合溶劑Ⅲ的體積用量為工業(yè)大麻藥材粉末質(zhì)量的1-5倍。脫色所用脫色劑的質(zhì)量為大麻藥材粉末的0.01-0.10倍；脫色的溫度為5-60℃;脫色的時(shí)間為30-60min。6.如權(quán)利要求1的制備方法，其特征在于，步驟(4)中，將步驟(3)所得浸膏溶解所用溶劑為水-有機(jī)溶劑混合溶劑IV;其中所述有機(jī)溶劑選自：甲醇、乙醇和丙酮中的一種或兩種以上任意比例的組合；所述水-有機(jī)溶劑混合溶劑IV中有機(jī)溶劑的濃度為70%-95%;所述水-有機(jī)溶劑混合溶劑IV的體積用量為工業(yè)大麻藥材粉末質(zhì)量的0.05-0.20倍。3一種工業(yè)大麻提取物的制備方法技術(shù)領(lǐng)域[0001]本發(fā)明涉及提取技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種富含大麻酚類化合物的工業(yè)大麻提取物的制備方法。背景技術(shù)古代主要用于制作服裝、造紙材料、繩索及油脂等。大麻中含有一種毒性成分四氫大麻酚(THC)可使人致幻成癮，易被不法分子用來提煉毒品，危害社會(huì)，曾被多個(gè)國家在相當(dāng)長時(shí)期內(nèi)禁種。[0003]由于大麻的經(jīng)濟(jì)、藥用價(jià)值極高，在20世紀(jì)80年代，有歐洲國家研究培育出低毒大麻品種并獲得推廣種植。20世紀(jì)90年代，歐盟依據(jù)大麻花葉中THC含量的高低，將大麻分為藥用型(THC>0.5%)、中間型(0.3%<THC<0.5%)和纖維性(THC<0.3%)。其中纖維性毒具毒品利用價(jià)值，可以合法進(jìn)行規(guī)模化種植與工業(yè)化開發(fā)利用。鑒于工業(yè)大麻的價(jià)值較高，我國已在多個(gè)省份逐漸解除對工業(yè)大麻的限制，并在多部門共同監(jiān)管下，種植、開發(fā)工業(yè)大[0004]工業(yè)大麻渾身是寶，其中大麻酚類化合物具有極高的藥用價(jià)值。目前，人們已從大麻植株中分離出八十余種大麻酚類化合物。大麻酚類化合物是一類萜烯酚類化合物，其中主要有大麻二酚(CBD)、次大麻二酚(CBDV)、大麻酚(CBN)、大麻萜酚(CBG)、大麻環(huán)萜酚活性，如，CBD不具有神經(jīng)毒性，其能阻礙THC對人體神經(jīng)系統(tǒng)的影響，并具有明顯的抗痙攣、抗風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、抗焦慮等藥理活性，具有巨大產(chǎn)業(yè)開糖代謝，可能成為控制2型糖尿病患者血糖的新選擇等，CBDV具有較好的抗癲癇活性，同時(shí)有研究表明CBDV可減輕惡心癥狀，有助于治療胃腸問題，并且這些大麻酚類化合物的聯(lián)合應(yīng)用效果更強(qiáng)。神活性成分。[0006]目前，對非精神活性大麻酚類化合物提取制備的研究相對較少，而且非精神活性成分與精神活性成分結(jié)構(gòu)相似，難以去除?，F(xiàn)有技術(shù)大多是提取工業(yè)大麻中大麻二酚單體，未綜合考慮其他大麻酚類化合物。專利申請CN106860492A和CN109568389A公開了大麻酚類化合物的提取制備方法，但其工藝繁瑣，所用試劑為二類試劑，有一定毒害性，會(huì)對實(shí)驗(yàn)人員及環(huán)境造成傷害。發(fā)明內(nèi)容4工業(yè)大麻提取物的制備方法。[0008]上述制備方法包括如下步驟：[0009](1)將大麻藥材粉末利用水-有機(jī)試劑混合溶劑I提取，得提取液，濃縮，得濃縮浸[0010](2)將步驟(1)所得浸膏加入純化水，保溫?cái)嚢枞芙?，冷卻至室溫后，通解然后靜置分層或通過離心分層，分離上層清液[0012](4)將步驟(3)所得浸膏溶解，進(jìn)行柱層析，用水-有機(jī)試劑混合溶劑Ⅱ洗脫，收集大麻酚類化合物成分的洗脫液。[0016]進(jìn)一步地，上述大麻為工業(yè)大麻。粕中的一種或兩種以上任意比例的組合；優(yōu)選地，該大麻藥材為大麻花和/或大麻葉；進(jìn)一步優(yōu)選地，該大麻花和/或大麻葉采用盛花期的大麻花和/或大麻葉。[0018]進(jìn)一步地，步驟(1)中，大麻藥材粉末的粒度為將大麻藥材粉碎后過1號篩所得粉末；更進(jìn)一步地，大麻藥材粉末的粒度為將大麻藥材粉碎后過3號篩所得粉末。[0019]進(jìn)一步地，步驟(1)中，大麻藥材粉末為烘烤后的大麻藥材粉末。[0020]再進(jìn)一步地，上述烘烤溫度為100-200℃。[0021]再進(jìn)一步地，上述烘烤時(shí)間為60-200min。[0022]進(jìn)一步地，步驟(1)中，水-有機(jī)溶劑混合溶劑I中的有機(jī)溶劑選自：甲醇、乙醇和丙酮中的一種或兩種以上任意比例的組合；在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，該有機(jī)溶劑為乙醇。[0023]進(jìn)一步地，步驟(1)中，水-有機(jī)溶劑混合溶劑I中有機(jī)溶劑的濃度為70%-99%(具體如70%、80%、85%、90%、95%、99%)。[0024]在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，步驟(1)中所用混合溶劑為濃度90-99%的乙醇水溶[0025]進(jìn)一步地，步驟(1)中，大麻藥材粉末與水-有機(jī)試劑混合溶劑I的料液比為1:5-中的一種或兩種以上的組合；在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，該提取方法為冷浸法。[0030]在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式中，步驟(1)包括：將大麻藥材進(jìn)行粉碎，烘烤，加入水-有機(jī)試劑混合溶劑，攪拌提取，得提取液，將該提取液離心過濾，得濾液，將該濾液進(jìn)行濃[0031]進(jìn)一步地，步驟(2)中，純化水的用量為大麻藥材粉末當(dāng)量1-3倍。5[0037]進(jìn)一步地，步驟(3)中，將步驟(2)所得粗提物溶解所用溶劑為水-有機(jī)溶劑混合溶劑Ⅲ,其中有機(jī)溶劑選自：甲醇、乙醇和丙酮中的一種或兩種以上任意比例的組合；在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，該有機(jī)溶劑為乙醇。[0038]再進(jìn)一步地，上述水-有機(jī)溶劑混合溶劑Ⅲ中有機(jī)溶劑的濃度為70%-95%(具體[0039]在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，將步驟(2)所得粗提物溶解所用溶劑為95%乙醇水溶[0040]進(jìn)一步地，步驟(3)中，上述溶劑的用量為大麻藥材粉末當(dāng)量的1-5倍(具體如1、2、3、4、5倍)。滑石粉和紙漿中一種或兩種以上的組合。[0042]進(jìn)一步地，步驟(3)中，脫色所用脫色劑的質(zhì)量為大麻藥材粉末的0.01-0.10倍℃);在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，脫色溫度為室溫。[0045]進(jìn)一步地，步驟(4)中，將步驟(3)所得浸膏溶解所用溶劑為水-有機(jī)溶劑混合溶劑IV,其中有機(jī)溶劑選自：甲醇、乙醇和丙酮中的一種或兩種以上任意比例的組合；在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，該有機(jī)溶劑為乙醇。[0046]再進(jìn)一步地，上述水-有機(jī)溶劑混合溶劑IV中有機(jī)溶劑的濃度為70%-95%(具體[0047]在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，將步驟(3)所得粗提物溶解所用溶劑為95%乙醇水溶[0048]進(jìn)一步地，步驟(4)中，上述溶劑的用量為大麻藥材粉末當(dāng)量的0.05-0.20倍(具體[0049]進(jìn)一步地，步驟(4)中，柱層析所用填料選自：鍵合硅膠(如十八烷基硅烷鍵合硅膠、辛基硅烷鍵合硅膠)、聚合填料、硅膠中的一種或兩種以上的組合例中，該填料為十八烷基硅烷鍵合硅膠。6[0050]進(jìn)一步地，步驟(4)中，柱層析所用填料的粒徑為10-100μm(具體如10、20、30、40、[0051]進(jìn)一步地，步驟(4)中，柱層析所用層析柱的徑高比為3:2-3:12。[0052]進(jìn)一步地，步驟(4)中，水-有機(jī)溶劑混合溶劑Ⅱ中的有機(jī)溶劑選自：甲醇、乙醇和丙酮中的一種或兩種以上任意比例的組合；在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，該有機(jī)溶劑為乙醇。[0053]進(jìn)一步地，步驟(4)中，水-有機(jī)溶劑混合溶劑Ⅱ中的有機(jī)溶劑的濃度為70%-95%(具體如70%、75%、80%、85%、90%、95%)。[0054]在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，上述水-有機(jī)溶劑混合溶劑Ⅱ?yàn)闈舛葹?0-95%的乙醇水溶液。[0056]進(jìn)一步地，步驟(5)中，濃縮為減壓濃縮。[0057]本發(fā)明還提供上述方法所制備的工業(yè)大麻提取物，其富含大麻酚類化合物CBDV、以上。[0058]本發(fā)明還提供上述工業(yè)大麻提取物及其制備方法在制備藥物、醫(yī)療美容產(chǎn)品和化妝品中的應(yīng)用。[0059]本發(fā)明還提供一種包含本發(fā)明上述工業(yè)大麻提取物的藥物、醫(yī)療美容產(chǎn)品和化妝[0060]本發(fā)明采用加鹽和離心的方式富集大麻酚類化合物，一步即可完全去除水溶性雜質(zhì)，避免應(yīng)用常規(guī)的水沉工藝或應(yīng)用大孔樹脂去水溶性雜質(zhì)時(shí)引入的甲苯、二甲苯等溶劑殘留，極大地節(jié)省了生產(chǎn)成本和質(zhì)量控制成本，且可完全排除精神活性成分THC,工藝中僅用到純化水和毒性很低的三類有機(jī)試劑，試劑環(huán)保，工藝操作簡單，儀器設(shè)備易得，可以降低成本，減少污染，利于工業(yè)化生產(chǎn)。本發(fā)明制備的工業(yè)大麻提取物富含大麻酚類化合物特別是上述大麻酚類化合物的總含量可高達(dá)80%以上，轉(zhuǎn)移率可高達(dá)99%以上。附圖說明[0061]圖1所示為空白對照(95%乙醇)的液相色譜圖。[0062]圖2所示為大麻酚類化合物(CBDV、CBG、CBD、THCV、THC)對照品的液相色譜圖。[0063]圖3所示為實(shí)施例1上樣液中大麻酚類化合物(CBDV、CBG、CBD、THCV、THC)的液相色譜圖。[0064]圖4所示為實(shí)施例1得到的大麻提取物中大麻酚類化合物(CBDV、CBG、CBD、THCV、THC)的液相色譜圖。[0065]圖5所示為實(shí)施例2上樣液中大麻酚類化合物(CBDV、CBG、CBD、THCV、THC)的液相色譜圖。[0066]圖6所示為實(shí)施例2得到的大麻提取物中大麻酚類化合物(CBDV、CBG、CBD、THCV、THC)的液相色譜圖。7具體實(shí)施方式[0067]除非另有定義，本發(fā)明中所使用的所有科學(xué)和技術(shù)術(shù)語具有與本發(fā)明涉及技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員通常理解的相同的含義。[0068]本發(fā)明中所述的“大麻提取物”是指從大麻提取部位(如大麻花和/或葉)的原料中提取得到的產(chǎn)品，其可為液體或固體形式，其中包含至少一種大麻酚類化合物，優(yōu)選地，包[0070]本發(fā)明中所述的“x倍藥材當(dāng)量”等描述，是指采用的溶劑如純化水、乙醇溶液等的體積是藥材質(zhì)量的x倍，具體地，如“1倍藥材當(dāng)量”,如藥材質(zhì)量為1g,所用溶劑的用量為[0071]為使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案和優(yōu)點(diǎn)更加清楚，下面將結(jié)合本發(fā)明實(shí)施例對本發(fā)明的技術(shù)方案做進(jìn)一步完整地描述。所描述的實(shí)施例僅是本發(fā)明一部分實(shí)施例，不構(gòu)成對本發(fā)明保護(hù)范圍的限定，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有作出創(chuàng)造性勞動(dòng)前提下所獲得的所有其他實(shí)施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。[0072]下面實(shí)施例和對比例中樣品檢測分析采用高效液相色譜法，具體方法如下：[0073]色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以0.1%甲酸水溶液為流動(dòng)相A,以0.1%甲酸乙腈為流動(dòng)相B,按表1的洗脫程序洗脫；檢測波長為220nm。理[0074]表1洗脫程序[0075]Time/minA(0.1%甲酸水溶液)B(0.1%甲酸乙腈) [0076]對照品溶液的制備：精密稱取CBD對照品，加甲醇制成0.15mg/mL的對照品溶液，即[0077]供試品溶液的制備：取樣品溶液1.1mL,加甲醇定容至25mL,用微孔濾膜(0.45μm)[0078]測定法：分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μL,注入液相色譜儀，測定，[0079]圖1所示為空白對照(95%乙醇)液相色譜圖，圖2所示為大麻酚類化合物(CBDV、對照品的液相色譜圖，其中，各大麻酚類化合物的保留時(shí)間分別為：CBDV:5.680min;CBG:9.055min;CBD:9.590min;THCV:10.363mi8[0080]實(shí)施例1[0081](1)將工業(yè)大麻花葉藥材進(jìn)行粉碎，過1號篩，100℃烘烤200min,取一定量烘烤后的大麻花葉藥材，按料液比1:8(w/v)加入95%乙醇，室溫?cái)嚢杼崛纱危看?小時(shí)，過濾，合并提取液，離心過濾，離心過濾液減壓濃縮(65℃,-0.08～-0.09Mpa)至浸膏，加入藥材當(dāng)量3倍的純化水，在75℃下保溫?cái)嚢?0分鐘，置分液罐中冷卻至室溫，加入碳酸鈉攪拌溶[0082](2)將所得大麻粗提物用藥材當(dāng)量3倍量的95%乙醇攪拌溶解，加入藥材當(dāng)量的0.05倍活性炭，室溫?cái)嚢?0分鐘，然后過濾，濾液混勻后濃縮至浸膏的95%乙醇進(jìn)行溶解，得上樣液，通過高效液相色譜法對其進(jìn)行分析，色譜圖如圖3所示。上樣進(jìn)行柱層析，層析填料為十八烷基硅烷鍵合硅膠，粒徑為30μm,用75%乙醇為流動(dòng)相，流速為4BV/h進(jìn)行洗脫，收集第1到第2.5倍柱體積餾分，減壓濃縮至稠膏，即得富含大麻酚類化合物的提取物，通過高效液相色譜法對其進(jìn)行分析，色譜圖如圖4合物總含量為80.6%,其中CBDV含量為10.99%、CBG含量為1.42%、CBD含量為66.38%、THCV含量為1.81%,THC未檢出。[0083]實(shí)施例2[0084](1)將工業(yè)大麻花葉藥材進(jìn)行粉碎，過3號篩，200℃烘烤60min,取一定量烘烤后的大麻花葉藥材，按料液比1:10(w/v)加入90%乙醇，室溫?cái)嚢杼崛纱?，每?小時(shí)，過濾，合并提取液，離心過濾，離心過濾液減壓濃縮(65℃,-0.08～-0.09Mpa)至浸膏，加入藥材當(dāng)量2倍量純化水，在70℃下保溫旋轉(zhuǎn)30分鐘，將轉(zhuǎn)溶溶液進(jìn)行蝶式離心分層，轉(zhuǎn)速為5000[0085](2)將所得大麻粗提物用藥材當(dāng)量3倍量的95%乙醇攪拌溶解，加入藥材當(dāng)量的0.05倍硅藻土，室溫?cái)嚢?0分鐘，然后過濾，濾液混勻后濃縮至浸膏，加入藥材當(dāng)量的0.08倍的95%乙醇進(jìn)行溶解，得上樣液，通過高效液相色譜法對其進(jìn)行分析，色譜圖如圖5所示。上樣進(jìn)行柱層析，層析填料為十八烷基硅烷鍵合硅膠，粒徑為75μm,用70%乙醇為流動(dòng)相，流速為3BV/h進(jìn)行等度洗脫，收集第0.5到第2倍柱體積餾分，減壓濃縮至稠膏，即得富含大麻酚類化合物的提取物，通過高效液相色譜法對其進(jìn)行分析，色譜圖酚類化合物總含量為76.8%,其中CBDV含量為10.47%、CBG含量為1.28%、CBD含量為63.34%、THCV含量為1.71%,THC未檢出。[0086]對比例1[0087]參照實(shí)施例1步驟(1)中的提取、濃縮步驟和參數(shù)，由相同重量的大麻花葉進(jìn)行提取、濃縮，將浸膏加入藥材當(dāng)量6倍量的純化水，攪拌混懸，于12℃以下靜置分層8小時(shí)，收[0088]對比例2[0089]參照實(shí)施例2步驟(1)中的提取、濃縮步驟和參數(shù)，由相同重量的大麻花葉進(jìn)行提取、濃縮，將浸膏加入藥材當(dāng)量4倍量的純化水，混懸，經(jīng)大孔去水溶性雜質(zhì)，再用90%乙醇洗脫，濃縮后，即得大麻粗提[0090]分別檢測實(shí)施例1-2和對比例1-2所制備的粗提物中大麻酚類化合物的總含量和[0091]表2不同粗分離方法效果對比