非洲豬瘟（ASF）是由非洲豬瘟病毒引起的急性烈性傳染病，對(duì)生豬產(chǎn)業(yè)危害巨大?？焖佟?zhǔn)確的現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)是疫情早發(fā)現(xiàn)、早處置的核心環(huán)節(jié)。本文結(jié)合行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)與實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)，梳理非洲豬瘟病毒抗原快速檢測(cè)（以膠體金免疫層析法為例）的標(biāo)準(zhǔn)化操作流程，為基層防疫、養(yǎng)殖場(chǎng)自檢等場(chǎng)景提供實(shí)用指引。一、檢測(cè)前準(zhǔn)備（一）試劑與器材準(zhǔn)備1.檢測(cè)試劑盒：選用經(jīng)農(nóng)業(yè)農(nóng)村部批準(zhǔn)的非洲豬瘟病毒抗原快速檢測(cè)試劑盒（膠體金法或免疫層析法），確認(rèn)試劑盒在有效期內(nèi)、內(nèi)包裝無破損霉變。試劑盒通常包含檢測(cè)卡、樣本稀釋液（或保存液）、滴管等組件，部分需額外配套采樣工具。2.采樣工具：組織樣本：滅菌手術(shù)刀、鑷子、含保存液的采樣管（容量5-10mL，保存液多為磷酸鹽緩沖液或?qū)Ｓ貌《颈４嬉海?。拭子樣本：無菌鼻咽拭子、肛拭子（獨(dú)立包裝）、含保存液的采樣管。3.防護(hù)與消毒用品：一次性醫(yī)用橡膠手套、防護(hù)服、N95口罩、護(hù)目鏡；75%醫(yī)用酒精、含氯消毒劑（如500mg/L次氯酸鈉溶液）、醫(yī)用紗布。4.輔助器材：生物安全柜（或潔凈操作臺(tái)）、計(jì)時(shí)器、記號(hào)筆、樣本登記本。（二）環(huán)境與人員準(zhǔn)備1.環(huán)境要求：選擇通風(fēng)良好、光線充足的室內(nèi)區(qū)域，溫度20-25℃、濕度40%-60%。若處理樣本（如研磨組織），需在生物安全柜內(nèi)操作，提前用75%酒精擦拭柜內(nèi)表面，開啟紫外燈照射30分鐘（操作前關(guān)閉）。2.人員要求：檢測(cè)人員需熟悉非洲豬瘟防控知識(shí)，穿戴好防護(hù)裝備，操作前用肥皂或手消液清潔雙手，避免化妝品、食物殘?jiān)廴緲颖尽６?、樣本采集（一）組織樣本采集（適用于瀕死/死亡豬只）1.樣本選擇：優(yōu)先采集脾臟、頜下淋巴結(jié)、扁桃體等組織（病毒載量高）；豬只死亡后24小時(shí)內(nèi)采樣，超過48小時(shí)建議改用拭子或全血樣本。2.操作步驟：碘伏消毒采樣部位皮膚，滅菌手術(shù)刀切開皮膚，無菌鑷子夾取約2g組織塊（如脾臟邊緣或淋巴結(jié)完整組織）。迅速將組織塊放入含5mL保存液的采樣管中，旋緊管蓋，用研磨棒充分研磨（或振蕩10-15次），靜置10分鐘待病毒釋放。（二）拭子樣本采集（適用于活體豬只）1.鼻咽拭子：將無菌拭子深入豬只鼻腔3-5cm（約拭子桿1/3長度），旋轉(zhuǎn)3-5圈后取出，立即插入含保存液的采樣管中，折斷拭子桿（保留浸入保存液部分），旋緊管蓋，振蕩5-10次。2.肛拭子：將拭子深入肛門2-3cm，旋轉(zhuǎn)3-5圈后取出，后續(xù)操作同鼻咽拭子。*注意*：每只豬使用獨(dú)立拭子，避免交叉污染；豬只極度應(yīng)激時(shí)，可暫緩采樣或改用其他樣本類型。三、檢測(cè)操作流程（一）樣本處理組織勻漿樣本：靜置后，用滴管吸取上層清亮液體（避免底部組織殘?jiān)鳛榇龣z樣本。拭子樣本：振蕩后，直接吸取采樣管內(nèi)液體（無需離心或過濾）。（二）加樣與孵育1.檢測(cè)卡準(zhǔn)備：取出檢測(cè)卡，平放在水平臺(tái)面上，確認(rèn)檢測(cè)卡無受潮、破損，觀察質(zhì)控線（C線）和檢測(cè)線（T線）區(qū)域是否干凈。2.加樣操作：用一次性滴管吸取待檢樣本，在檢測(cè)卡的加樣孔（標(biāo)注“S”或“Sample”）中滴加3-4滴（約80-100μL，以試劑盒說明書為準(zhǔn)），同時(shí)啟動(dòng)計(jì)時(shí)器。3.孵育過程：將檢測(cè)卡置于室溫（20-30℃）環(huán)境下，避免陽光直射或風(fēng)扇直吹，靜置15-20分鐘（不同試劑盒孵育時(shí)間可能為10-25分鐘，需嚴(yán)格遵循說明書）。四、結(jié)果判讀與處置（一）結(jié)果判定陰性：僅質(zhì)控線（C線）出現(xiàn)一條清晰的紫紅色條帶，檢測(cè)線（T線）無條帶，表明樣本中未檢出非洲豬瘟病毒抗原。陽性：質(zhì)控線（C線）和檢測(cè)線（T線）均出現(xiàn)紫紅色條帶（T線顏色可深可淺，只要清晰可見），提示樣本中存在病毒抗原。無效：質(zhì)控線（C線）無條帶，無論檢測(cè)線是否顯色，均判定檢測(cè)無效，需重新采樣并更換檢測(cè)卡復(fù)檢。（二）后續(xù)處置1.陽性樣本：立即向當(dāng)?shù)剞r(nóng)業(yè)農(nóng)村部門報(bào)告，同步封存樣本及檢測(cè)卡，待官方機(jī)構(gòu)復(fù)核；對(duì)采樣工具、檢測(cè)卡等按醫(yī)療廢物處理（高壓滅菌或焚燒），污染區(qū)域用1000mg/L含氯消毒劑消毒30分鐘。2.陰性樣本：若為活體豬只檢測(cè)，采樣工具、檢測(cè)卡裝入醫(yī)療廢物袋規(guī)范處置；若為死亡豬只組織樣本，剩余組織需無害化處理（焚燒或深埋）。五、注意事項(xiàng)（一）試劑管理試劑盒需2-8℃冷藏保存，避免冷凍（冷凍會(huì)破壞膠體金結(jié)構(gòu)）或高溫（>30℃易導(dǎo)致試劑失活）。使用前需將試劑盒平衡至室溫（放置15-30分鐘），避免溫度差異影響檢測(cè)靈敏度。（二）操作細(xì)節(jié)全程佩戴手套，避免手指接觸檢測(cè)卡加樣孔或樣本滴頭，防止污染。加樣時(shí)滴管需垂直懸空，避免觸碰檢測(cè)卡，滴加體積需準(zhǔn)確（過多易導(dǎo)致液體溢出，過少可能檢測(cè)失敗）。不同樣本的檢測(cè)卡不可混用，一份樣本對(duì)應(yīng)一張檢測(cè)卡，避免交叉污染。（三）生物安全所有接觸過樣本的器材（采樣管、拭子、檢測(cè)卡等）均視為感染性廢物，需經(jīng)高壓滅菌（121℃，30分鐘）或焚燒處理，嚴(yán)禁隨意丟棄。若樣本泄漏，立即用含氯消毒劑（1000mg/L）覆蓋污染區(qū)域，作用30分鐘后清理，同時(shí)更換污染的防護(hù)裝備。（四）結(jié)果驗(yàn)證若檢測(cè)結(jié)果存疑（如T線顯色極淺、背景色干擾明顯），可重新采集樣本，換用不同品牌試劑盒復(fù)檢；必要時(shí)送縣級(jí)以上動(dòng)物