(2025年)藥物分析學題及答案一、單項選擇題（每題2分，共20分）1.采用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（HPLC-MS/MS）法測定人血漿中某新型抗抑郁藥濃度時，為消除基質(zhì)效應干擾，最合理的內(nèi)標選擇是A.結構相似的同系物B.氘代同位素標記的目標藥物C.內(nèi)源性生物標志物D.空白血漿中添加的高濃度目標藥物答案：B2.某手性藥物制劑的質(zhì)量標準中，對映體雜質(zhì)限度為0.5%，需優(yōu)先選擇的分析方法是A.高效液相色譜法（HPLC）手性固定相法B.氣相色譜法（GC）衍生化法C.毛細管電泳法（CE）手性添加劑法D.紫外-可見分光光度法（UV-Vis）答案：A3.2025年版《中國藥典》新增的中藥質(zhì)量控制指標中，不屬于“整體質(zhì)量特征”評價范疇的是A.多指標成分定量結果的相關性分析B.指紋圖譜與特征圖譜的相似度評分C.重金屬及有害元素的限量檢查D.基于HPLC-Q-TOF-MS的化學輪廓分析答案：C4.生物制品中宿主細胞蛋白（HCP）殘留量檢測時，若ELISA法檢測結果為85ng/mg，而LC-MS/MS法檢測結果為120ng/mg，最可能的原因是A.ELISA抗體對部分HCP亞型無交叉反應B.LC-MS/MS法前處理過程中HCP降解C.兩種方法的定量限（LOQ）差異D.生物制品中存在干擾ELISA的糖基化修飾答案：A5.關于藥物強制降解試驗的設計，不符合2025年ICHQ1A(R2)要求的是A.酸降解條件：0.1mol/LHCl，60℃，48小時B.氧化降解條件：3%H2O2，室溫，24小時C.光降解條件：總照度120萬勒克斯小時，近紫外能量200瓦小時/平方米D.高溫降解條件：80℃，7天（固體制劑）答案：A（注：2025年更新后，酸/堿降解推薦條件為0.5-2mol/L，60℃48小時或室溫7天）二、多項選擇題（每題3分，共15分）1.分析方法驗證中，“專屬性”需驗證的內(nèi)容包括A.主成分與降解產(chǎn)物的分離度B.內(nèi)源性物質(zhì)對生物樣品測定的干擾C.不同批號試劑對結果的影響D.手性藥物中對映體的分離能力答案：ABD2.中藥注射劑質(zhì)量控制中，需重點關注的安全性相關指標有A.蛋白質(zhì)與鞣質(zhì)的限量B.樹脂與草酸鹽的檢查C.指紋圖譜的共有峰比例D.細菌內(nèi)毒素與異常毒性答案：ABD3.生物類似藥與原研藥的質(zhì)量可比性研究中，需對比的關鍵質(zhì)量屬性（CQAs）包括A.糖型分布（如巖藻糖基化程度）B.電荷異質(zhì)性（如去酰胺化水平）C.生產(chǎn)用細胞系的來源D.聚集體與片段化產(chǎn)物含量答案：ABD4.體內(nèi)藥物分析中，關于“基質(zhì)效應”的評估方法，正確的有A.選擇6批不同來源的空白生物基質(zhì)B.比較低、中、高濃度樣品在基質(zhì)中的響應與純?nèi)軇┲械捻憫戎礐.基質(zhì)效應因子（ME）應在85%-115%范圍內(nèi)D.內(nèi)標歸一化后基質(zhì)效應可忽略時，無需額外校正答案：ABC5.2025年版《中國藥典》通則中，關于“有關物質(zhì)”檢查的技術更新包括A.鼓勵采用高分辨質(zhì)譜（HRMS）進行雜質(zhì)結構確證B.允許使用“限度檢查法”替代“定量測定法”的情況需經(jīng)充分驗證C.生物制品中工藝相關雜質(zhì)（如DNA殘留）的檢測方法新增qPCR法D.化學藥有關物質(zhì)的報告閾值統(tǒng)一調(diào)整為0.05%（主成分含量≥1%時）答案：ABC三、簡答題（每題8分，共40分）1.簡述超高效液相色譜（UHPLC）與傳統(tǒng)HPLC在藥物分析中的主要差異及應用優(yōu)勢。答案：UHPLC與傳統(tǒng)HPLC的核心差異在于填料粒徑（通常<2μmvs3-5μm）、系統(tǒng)壓力（100-150MPavs40-60MPa）和流速（0.1-1.0mL/minvs1.0-2.0mL/min）。應用優(yōu)勢包括：①分離效率提升，理論塔板數(shù)增加30%-50%，適用于復雜樣品（如中藥多成分、生物制品降解產(chǎn)物）的快速分離；②分析時間縮短50%-80%，滿足高通量檢測需求（如生物等效性研究中的血藥濃度監(jiān)測）；③溶劑消耗減少，符合綠色分析化學要求；④與高分辨質(zhì)譜聯(lián)用，可提高雜質(zhì)鑒定的靈敏度和準確性。2.說明生物樣品（如血漿）中藥物定量分析時，為何需進行“提取回收率”驗證？如何設計驗證試驗？答案：提取回收率驗證的目的是評估樣品前處理過程中目標藥物從生物基質(zhì)中被提取的效率，確保測定結果能準確反映實際濃度。驗證試驗設計：①選擇低、中、高3個濃度（LLOQ、中間濃度、80%-100%線性范圍上限）；②每個濃度制備6份提取后加標的樣品（模擬實際樣品處理）和6份提取前加標的樣品（模擬理論值）；③計算回收率=（提取后樣品峰面積/提取前樣品峰面積）×100%；④要求回收率應在80%-120%（LLOQ附近可放寬至70%-130%），且RSD≤15%（LLOQ≤20%）。3.中藥質(zhì)量控制中，“多指標成分定量”與“指紋圖譜”結合的意義是什么？舉例說明如何實現(xiàn)兩者的關聯(lián)分析。答案：意義：多指標成分定量（如測定黃芩苷、漢黃芩素等）可控制關鍵藥效成分的含量，確保有效性；指紋圖譜（如HPLC指紋圖譜）可反映中藥整體化學輪廓，控制質(zhì)量均一性，兩者結合可從“點”（單一成分）到“面”（整體特征）全面評價質(zhì)量。關聯(lián)分析示例：以復方丹參滴丸為例，首先通過定量分析控制丹參素、原兒茶醛、丹酚酸B等7種水溶性成分和丹參酮ⅡA、隱丹參酮等3種脂溶性成分的含量；同時建立HPLC指紋圖譜，確定20個共有峰，計算相似度（≥0.90）；進一步通過主成分分析（PCA）或偏最小二乘判別分析（PLS-DA），將定量成分的含量變化與指紋圖譜的特征峰強度關聯(lián)，識別影響質(zhì)量波動的關鍵成分（如丹酚酸B含量降低可能伴隨指紋圖譜中某共有峰面積減少）。4.簡述生物制品（如單克隆抗體）中“聚集體”的檢測方法及控制策略。答案：檢測方法：①尺寸排阻色譜（SEC-HPLC）：最常用，通過分子量差異分離單體、二聚體及更高聚集體，靈敏度可達0.1%；②多角度激光散射（MALS）聯(lián)用SEC，可測定聚集體的絕對分子量；③動態(tài)光散射（DLS）：用于溶液中聚集體的粒徑分布分析；④差示掃描量熱法（DSC）：間接反映蛋白質(zhì)構象穩(wěn)定性與聚集傾向。控制策略：①優(yōu)化生產(chǎn)工藝（如降低剪切力、調(diào)整pH/離子強度）減少聚集；②在制劑中添加穩(wěn)定劑（如蔗糖、聚山梨酯80）抑制聚集；③設定質(zhì)量標準（如聚集體≤1.0%），通過強制降解試驗（如高溫、光照）驗證穩(wěn)定性；④對于治療用生物制品，需評估聚集體的免疫原性風險（如通過動物模型檢測抗藥物抗體）。5.2025年版《中國藥典》對“基因毒性雜質(zhì)（GTIs）”的控制提出了哪些新要求？舉例說明檢測方法的選擇。答案：新要求：①明確GTIs的分類（1類：已知或懷疑致癌；2類：結構警示但無致癌數(shù)據(jù)），1類雜質(zhì)需設定可接受攝入量（AI），2類雜質(zhì)需進行風險評估；②新增“基于閾值的毒理學關注（TTC）”原則，對無具體AI的GTIs，日允許攝入量（ADI）默認0.15μg/天；③要求在藥物研發(fā)階段（臨床前）即開展GTIs的潛在來源分析（如起始原料、試劑、副反應），并在申報資料中提供控制策略。檢測方法示例：某抗高血壓藥合成中可能引入N-亞硝基二甲胺（NDMA，1類GTI），可采用氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（GC-MS/MS）法檢測，色譜柱選擇弱極性毛細管柱（如DB-5MS），電離方式為EI源，監(jiān)測離子對m/z74→43（定量）和m/z74→58（定性），方法定量限需≤0.3ppm（假設最大日劑量50mg）。四、案例分析題（共25分）案例1（12分）：某企業(yè)申報的仿制藥“鹽酸氨溴索緩釋片”在審評中發(fā)現(xiàn)，加速穩(wěn)定性試驗（40℃/75%RH，6個月）中有關物質(zhì)總量從0.8%升至2.5%（限度為2.0%），且新增一個未知雜質(zhì)（含量0.6%）。請分析可能原因并提出解決方案。答案：可能原因：①工藝波動：緩釋骨架材料（如羥丙甲纖維素）的分子量或取代度變化，導致藥物與輔料的相互作用改變，加速降解；②降解途徑：氨溴索分子中的叔胺結構在高溫高濕下可能發(fā)生氧化或水解，提供N-氧化物或脫甲基產(chǎn)物；③包裝材料：鋁塑泡罩的水蒸氣透過率不符合要求，導致水分滲入加速降解；④檢測方法：原有關物質(zhì)檢查方法（如HPLC流動相pH）對新雜質(zhì)的分離度不足，未在初始檢測中檢出。解決方案：①工藝優(yōu)化：通過強制降解試驗（酸/堿/氧化/高溫）確證主要降解產(chǎn)物結構（如使用LC-MS/MS解析未知雜質(zhì)為氨溴索N-氧化物），調(diào)整緩釋骨架材料的比例或型號（如更換為低取代羥丙基纖維素），降低藥物-輔料相互作用；②包裝驗證：更換為水蒸氣透過率更低的冷成型鋁塑包裝（如PVDC復合鋁），重新進行加速試驗驗證；③方法學再驗證：優(yōu)化HPLC條件（如提高流動相pH至3.5，使用C18色譜柱），確保新雜質(zhì)與主峰及其他雜質(zhì)的分離度≥1.5，增加二極管陣列檢測器（DAD）進行光譜純度檢查；④雜質(zhì)定性：通過制備色譜分離未知雜質(zhì)，結合1H-NMR和HRMS確證結構，若為基因毒性雜質(zhì)（如含亞硝基），需重新評估限度并制定控制策略（如調(diào)整合成路線避免該雜質(zhì)提供）。案例2（13分）：某公司開發(fā)的重組人促紅細胞提供素（rhEPO）生物類似藥，在上市后監(jiān)測中發(fā)現(xiàn)3批產(chǎn)品的宿主細胞蛋白（HCP）殘留量異常升高（均值從50ng/mg升至200ng/mg），且ELISA法檢測的HCP抗體覆蓋率下降（從95%降至70%）。請設計調(diào)查方案并提出改進措施。答案：調(diào)查方案：①生產(chǎn)工藝追溯：檢查細胞培養(yǎng)階段（如無血清培養(yǎng)基成分、補料策略）、純化工藝（如親和層析柱的使用次數(shù)、洗脫條件）是否發(fā)生變更（如更換培養(yǎng)基供應商）；②HCP檢測方法驗證：確認ELISA試劑盒的效期、標準品溯源性（是否使用與生產(chǎn)細胞系同源的HCP標準品），采用LC-MS/MS法對HCP進行定性分析（鑒定異常升高的HCP種類，如熱休克蛋白HSP70）；③交叉污染排查：檢測生產(chǎn)設備（如層析柱、過濾器）的清潔驗證記錄，排除上一批次產(chǎn)品殘留的可能性；④細胞庫穩(wěn)定性：檢查主細胞庫（MCB）和工作細胞庫（WCB）的傳代次數(shù)，是否因細胞老化導致蛋白表達譜改變（如HCP分泌增加）。改進措施：①工藝優(yōu)化：針對LC-MS/MS鑒定的主要HCP（如HSP70），在純化工藝中增加離子交換層析步驟（如Q-Sepharose），利用電荷差異提高去除效率；②培養(yǎng)基調(diào)整：更換為不含HSP誘導成分（如高濃度葡萄糖）的培養(yǎng)基，或添加HSP抑制劑（如Geldanamycin類似物）降低HCP表達；③HCP檢測方法更