蒺藜的性狀與其質(zhì)量關(guān)系研究[摘要]目的：確定蒺藜飲片的性狀與主要成分間關(guān)系分析。方法：采用比色法，測(cè)定樣品皂苷和黃酮成分，采用感觀評(píng)定法，評(píng)定蒺藜性狀的分?jǐn)?shù)，采用相關(guān)度公式計(jì)算性狀與成分的相關(guān)度。結(jié)果：所制定的比色法能夠測(cè)定蒺藜皂苷和黃酮成分的含量，結(jié)合感觀評(píng)定結(jié)果，性狀與成分具有一定的相關(guān)性。果實(shí)發(fā)黃綠色和苦、辛味濃的蒺藜總皂苷含量的相對(duì)較高；莖表面深綠色和葉多破碎皺縮的蒺藜總黃酮含量相對(duì)要高；同時(shí)具有(莖)表面深綠色，葉多破碎皺縮和(果實(shí))背部黃綠色這三個(gè)性狀的蒺藜總體質(zhì)量相對(duì)較好。結(jié)論：所建立的比色法皂苷和黃酮含量測(cè)定方法可行，性狀與成分具有一定的相關(guān)性。該研究給蒺藜性狀描述進(jìn)行客觀量化，并與蒺藜主要成分進(jìn)行關(guān)聯(lián)，進(jìn)而從性狀外觀上初步判斷蒺藜質(zhì)量提供了客觀實(shí)驗(yàn)依據(jù)。[關(guān)鍵詞]蒺藜；皂苷；黃酮；蒺藜苷元；蘆??；性狀；感觀評(píng)定；相關(guān)性計(jì)算StudyontherelationshipbetweenthecharactersandqualityofTribulusterrestris[Abstract]Objective:TodeterminetherelationshipbetweenthepropertiesandthemaincomponentsofTribulusterrestris.Method:Thesaponinsandflavonoidsinsamplesweredeterminedbycolorimetry，andthepropertiesofTribulusterrestriswereevaluatedbysensoryevaluation.Thecorrelationbetweenthepropertiesandcomponentswascalculatedbycorrelationformula.Result:ThecontentofsaponinsandflavonoidsinTribulusterrestriscanbedeterminedbythecolorimetricmethod.Theresultsofsensoryevaluationshowthatthereisacertaincorrelationbetweenthepropertiesandthecomponents.ThecontentsoftotalsaponinsofTribulusterrestriswithyellowgreenfruit,bitterandpungenttastearerelativelyhigh;thecontentsoftotalflavonoidsofTribulusterrestriswithdarkgreenstemandbrokenandshrunkleavesarerelativelyhigh;thetotalqualityofTribulusterrestriswiththreecharactersofdarkgreenstem,brokenandshrunkleavesandyellowgreenback(fruit)isrelativelygood.Conclusions:Themethodforthedeterminationofsaponinsandflavonoidsisfeasible.ThisstudyobjectivelyquantifiesthedescriptionsofTribulusterrestrischaractersandcorrelatesthemwiththemaincomponentsofTribulusterrestris，ThisstudyprovidesanobjectiveexperimentalbasisforthedescriptionofthecharacteristicsofTribulusterrestrisandthecorrelationwiththemaincomponentsofTribulusterrestris.[Keywords]Tribulusterrestris；saponins;flavonoids;Tribulusterrestrisaglycone;rutin；characters；sensoryevaluation；correlationcalculation性狀描述是對(duì)中藥品種進(jìn)行真?zhèn)舞b別的一個(gè)過(guò)程，但性狀鑒別只能解決中藥是與不是的問(wèn)題，而不能解決質(zhì)量好壞的問(wèn)題。雖然通過(guò)長(zhǎng)期的經(jīng)驗(yàn)積累，根據(jù)經(jīng)驗(yàn)可初步判斷中藥質(zhì)量好壞，但這種經(jīng)驗(yàn)是一個(gè)非量化值，不客觀，也沒(méi)有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)基礎(chǔ)，更沒(méi)有和藥典相關(guān)成分含量高低的關(guān)聯(lián)。本研究力求將蒺藜的性狀描述和其成分含量關(guān)聯(lián)起來(lái)，從而從中藥的性狀來(lái)判斷所含有效成分的高低，初步判斷其質(zhì)量的優(yōu)劣。本研究收集了18批蒺藜樣品，根據(jù)藥典蒺藜項(xiàng)下的性狀，建立了蒺藜的性狀描述，對(duì)樣品性狀描述分組并利用感官評(píng)分法對(duì)其性狀描述進(jìn)行量化評(píng)分，同時(shí)利用比色法對(duì)蒺藜的黃酮和皂苷成分進(jìn)行含量測(cè)定，利用相似性公式進(jìn)行計(jì)算，找出相似性，從而揭示蒺藜性狀外觀與主要成分的聯(lián)系。本研究試圖從性狀外觀上找到與蒺藜質(zhì)量的聯(lián)系和關(guān)系，進(jìn)而從性狀外觀上初步判斷蒺藜質(zhì)量的好壞，為蒺藜經(jīng)驗(yàn)鑒定和中藥炮制品質(zhì)量提供一定的理論基礎(chǔ)，也為其他中藥材的此類(lèi)研究提供了一定的思路[1-3]。1儀器與材料UV5200分光光度計(jì)(日立日本)；HC-2062離心機(jī)(中科安徽)；QS64超聲提取器(奧特賽恩斯天津)；UVSL2.1工作站(日立日本)；SF-130B粉碎機(jī)(上海冠聯(lián))；微波爐(格蘭仕P70F23P-G5)。18個(gè)蒺藜購(gòu)于全國(guó)多個(gè)地區(qū)，經(jīng)遼寧中醫(yī)藥大學(xué)王榮祥教授鑒定符合藥典要求；蒺藜苷元對(duì)照品(25R-Spirostan-4-ene-3,12-dione，實(shí)驗(yàn)室自制，純度≥98%)、蘆丁對(duì)照品(大連美侖，批號(hào)20180403，純度99.5%)；鹽酸等試劑均為分析純(國(guó)藥集團(tuán)公司)。2方法與結(jié)果2.1對(duì)照品溶液的制備取蒺藜苷元，加甲醇制成0.021mg·mL-1溶液，取蘆丁加稀乙醇制成0.015mg·mL-1溶液。2.2供試品溶液的制備2.2.1取蒺藜樣品細(xì)粉0.5g，精密稱(chēng)定，置圓底瓶中，精密加甲醇50ml，稱(chēng)定重量，加熱回流2h，放冷，再稱(chēng)重，甲醇補(bǔ)失重，搖勻，濾過(guò)，精吸續(xù)濾液10ml，回收至干，殘?jiān)诱〈硷柡偷乃?0ml，用水飽和正丁醇提取5次，每次10ml，合并正丁醇液，用氨試液洗2次，每次5ml，正丁醇液蒸干，殘?jiān)?0%甲醇移至并定容至50ml量瓶中，搖勻即得[4]。2.2.2取蒺藜樣品細(xì)粉0.4g，精密稱(chēng)定，加石油醚25mL索氏提取器提取4h，石油醚棄去，藥渣干燥，加甲醇25ml回流4h，甲醇液蒸至干，用稀乙醇定容至25mL容量瓶中，搖勻，即得[2.3測(cè)定方法2.3.1精密量取蒺藜苷元3ml或2.2.1項(xiàng)下供試品各2-4ml置具塞試管中，揮干溶劑，精密加高氯酸5ml，搖勻，置60℃水浴保溫15min，取出后立即冰水浴冷卻至室溫，以同法為空白，在285nm波長(zhǎng)處測(cè)定。2.3.2分別取蘆丁3ml和2.2.2項(xiàng)下供試品2-4mL于25mL的容量瓶中加1mL的5%亞硝酸鈉搖勻5min，加1mL的10%硝酸鋁，搖勻靜置5min，加10mL的0.1%氫氧化鈉溶液，用水至容量瓶刻度，靜置15min，同法作為空白，在波長(zhǎng)510nm下測(cè)定[6]。2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的繪制精密量取蒺藜苷元對(duì)照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL，分別置具塞試管中，按2.3.1項(xiàng)下方法測(cè)定。另精密吸取蘆丁對(duì)照品1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL，置于25mL的容量瓶中，按2.3.2項(xiàng)下方法測(cè)量吸收度，以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，得回歸方程、線(xiàn)性范圍和相關(guān)系數(shù)見(jiàn)表1、表2、圖1。蒺藜苷元和蘆丁的質(zhì)量和吸收度Table1qualityandabsorptionofTribulusterrestrisaglyconeandrutin1.02.03.04.05.0蒺藜苷元質(zhì)量(mg)0.0210.0410.0620.0830.104吸收度(A)0.1720.3380.4980.6860.853蘆丁濃度(mg)0.0150.0300.0450.0600.075吸收度(A)0.1760.3640.5580.7040.880蒺藜苷元和蘆丁的回歸方程、線(xiàn)性范圍和相關(guān)系數(shù)Table2regressionequation,linearrangeandcorrelationcoefficientofTribulusterrestrisandrutin成分回歸方程線(xiàn)性范圍(mg)r蒺藜苷元y=8.209x-0.00360.021-0.1040.9997蘆丁y=11.653x-0.0120.015-0.0750.9989圖1蒺藜苷元和蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)Fig.1StandardcurveofTribulusterrestrisaglyconeandrutin2.5精密度試驗(yàn)精密吸取蒺藜苷元、蘆丁對(duì)照品，按2.3項(xiàng)下方法測(cè)量吸收度，連續(xù)測(cè)定吸光度6次，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.83、0.92%，表明儀器的精度良好。表3精密度試驗(yàn)結(jié)果Table3precisiontestresults123456RSD%蒺藜苷元吸光度0.4760.4700.4740.4670.4660.4720.4710.83蘆丁吸光度0.5620.5650.5640.5560.5680.5550.5620.922.6重復(fù)性試驗(yàn)取1號(hào)樣品6份，按2.2項(xiàng)下方法制備樣品，按2.3項(xiàng)下方法測(cè)量吸收度，結(jié)果2種對(duì)照品的含量RSD(n=6)分別為1.17%，0.72%，說(shuō)明本方法重復(fù)性良好。表4重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果(mg/g)Table4repeatabilitytestresults(mg/g)123456RSD%蒺藜苷元28.7728.3428.8728.5129.0328.1628.611.17蘆丁14.6614.6914.8514.5314.7414.7214.700.722.7穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一供試品溶液，按2.2項(xiàng)下方法制備，在0，10，20，30，40，60min時(shí)間點(diǎn)測(cè)定吸光度，RSD(n=6)分別為1.06%，1.07%，表明對(duì)照品在60min內(nèi)測(cè)定結(jié)果穩(wěn)定可靠。表5穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果Table5stabilitytestresults時(shí)間(h)01020304060RSD%蒺藜苷元吸收度A0.4790.4670.4770.4710.4760.4680.4731.06蘆丁吸收度A0.5610.5660.5670.5520.5660.5580.5621.072.8加樣回收試驗(yàn)精密稱(chēng)取已知含量的樣品0.25g(測(cè)定蘆丁含量取0.2g)，加入蒺藜苷元7.60mg(測(cè)定蘆丁2.77mg)，按2.2項(xiàng)下方法制備，按2.3項(xiàng)下方法測(cè)定吸光度，計(jì)算含量及回收率，結(jié)果見(jiàn)表表6加樣回收試驗(yàn)結(jié)果Table6testresultsofsampleaddingandrecovery取樣量(g)樣品含量(mg)對(duì)照品加入量(mg)實(shí)測(cè)總量(mg)回收率%%RSD%蒺藜苷元0.25107.557.6015.21100.80.24667.427.6014.9098.50.24907.497.6015.11100.299.51.380.25167.577.6015.23100.80.24797.467.6014.8697.40.25247.597.6015.1399.2蘆丁0.20272.782.775.4195.10.19812.722.775.4398.20.19962.742.775.53101.198.02.020.19732.712.775.3896.90.19952.742.775.4698.60.20102.762.775.4697.82.9蒺藜飲片性狀與主要成分的相關(guān)性分析2.9.1各產(chǎn)地樣品含量測(cè)定精密稱(chēng)取各產(chǎn)地樣品適量，按2.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按2.3項(xiàng)下方法測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表3。表3蒺藜樣品中總皂苷和總黃酮成分測(cè)定結(jié)果(mg?g-1)Table3DeterminationresultsoftotalsaponinsandflavonoidsinTribulusterrestrissamples(mg·g-1)No.產(chǎn)地購(gòu)買(mǎi)地總皂苷總黃酮No.產(chǎn)地購(gòu)買(mǎi)地總皂苷總黃酮1吉林沈陽(yáng)市北京同仁堂26.2511.4110吉林沈陽(yáng)市朝鮮族醫(yī)院13.5714.332河北百草康神藥業(yè)有限公司34.4614.9111吉林紐恩堂官方旗艦店27.2617.583河北四平市本草方源藥業(yè)有限公司39.8811.4512遼寧賀林中藥飲片有限公司19.3810.184河北撫順市北京同仁堂17.4819.4913遼寧沈陽(yáng)市中醫(yī)院17.0616.515河北河北市盛世華興醫(yī)藥連鎖店32.0711.1414遼寧遼寧省中醫(yī)院26.4119.846河北北京三和藥業(yè)有限公司34.6718.2915內(nèi)蒙古珈祁堂官方旗艦店39.6116.737河北沈陽(yáng)市南六參茸批發(fā)25.7019.2516內(nèi)蒙古大連市中醫(yī)院14.8717.828河南毫州市滬譙藥業(yè)有限公司27.6014.2417山西安徽省本草國(guó)藥飲片有限公司28.3521.179黑龍江深圳市華輝有限公司12.0913.8818甘肅大連開(kāi)發(fā)區(qū)保健大藥房14.1917.232.9.2蒺藜飲片性狀描述的確定和評(píng)分根據(jù)18批蒺藜飲片樣品，參照2015版《中國(guó)藥典》蒺藜性狀的描述，分組并評(píng)分，即“本品為不規(guī)則的段(A)，根呈黑褐色，密生須根(B)。莖干質(zhì)硬(C)，表面深綠色(D)，無(wú)毛，被長(zhǎng)柔毛或長(zhǎng)硬毛(E)。葉多破碎皺縮(F)，展開(kāi)可見(jiàn)矩圓形或斜短圓形(G)，被柔毛(H)。有時(shí)可見(jiàn)黃色小花(I)，可見(jiàn)單一或5個(gè)放射狀排列分果瓣(J)，背部黃綠色(K)，隆起，有縱棱及多數(shù)小刺，并有對(duì)稱(chēng)的長(zhǎng)刺和短刺各1對(duì)(L)，氣微，味苦、辛(M)”。將18批樣品，隨機(jī)取等量(200g)，平鋪在桌面上，將其分成A~M部分進(jìn)行評(píng)分。對(duì)于每一部分評(píng)分的標(biāo)準(zhǔn)是，如果不具有相應(yīng)性狀特點(diǎn)的則計(jì)0分，具有的則計(jì)1分，如果具有且相對(duì)較多的時(shí)則記2分，結(jié)果列于表表4蒺藜性狀評(píng)分與含量權(quán)衡值Table4Traittrade-offs，contentsimilarityofTribulusterrestrisNo.產(chǎn)地ABCDEFGHIJKLM總皂苷總黃酮1吉林12111111111110.660.542遼寧11110211012120.860.703大慶12101111012121.000.544河北11120211110100.440.925河南11111111111120.800.536遼寧12120211011110.870.867吉林11121211010110.640.918河北11111111111120.690.679河北11110111111100.300.6610安國(guó)12111111010100.340.6811河北12120211012110.680.8312吉林12100011110110.490.4813山西12110111010100.430.7814千山12120211011110.660.9415千山12120211112110.990.7916丹東11120211111100.370.8417云南11120211011110.711.0018東北12110111010100.360.81表5蒺藜性狀與含量的相似度Table5Traittrade-offs，contentsimilarityofTribulusterrestrisABCDEFGHIJKLM皂苷總皂苷*10%*5%20%31%**-14%*73%*82%總黃酮*17%*86%49%80%**41%*-11%*26%-9%總成分*-2%*55%-12%75%**-37%*56%*48%2.9.3樣品總皂苷與總黃酮含量差異權(quán)衡方法為了避免樣品所含總皂苷、總黃酮的量差異較大而引起的比較結(jié)果的誤差(即含量大的成分影響較大，而含量小的影響較小的狀況)，將樣品的每一個(gè)總皂苷或總黃酮的含量均除以18個(gè)樣品當(dāng)中相應(yīng)的總皂苷或總黃酮含量最大的數(shù)值，得權(quán)衡值，見(jiàn)公式(1)，結(jié)果見(jiàn)表4，利用公式(2)[7]，將18個(gè)蒺藜飲片性狀的A-M評(píng)分值和總皂苷與總黃酮含量的權(quán)衡值進(jìn)行比較，相似度計(jì)算結(jié)果見(jiàn)表5。總皂苷(總黃酮)權(quán)衡值=(1)式中n表示某一生物堿含量，指同一生物堿含量最高值。相似度(2)式中x表示性狀評(píng)分值或生物堿權(quán)衡值，y表示總堿權(quán)衡數(shù)值。3結(jié)論與討論從實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，本品為不規(guī)則的段(A)，莖干質(zhì)硬(C)，展開(kāi)可見(jiàn)矩圓形或斜短圓形(G)，被柔毛(H)。有時(shí)可見(jiàn)黃色小花(I)，可見(jiàn)單一或5個(gè)放射狀排列分果瓣(J)，隆起，有縱棱及多數(shù)小刺，并有對(duì)稱(chēng)的長(zhǎng)刺和短刺各1對(duì)(L)等性狀描述在18個(gè)產(chǎn)地蒺藜樣品當(dāng)中均有，沒(méi)有變化的趨勢(shì)，因此不能夠進(jìn)行相似性計(jì)算。與總皂苷含量變化相比，背部黃綠色(K)為73%，氣微，味苦、辛(M)為82%相似度很高，說(shuō)明果實(shí)發(fā)黃綠色和苦、辛味濃的蒺藜總皂苷含量的相對(duì)較高。而B(niǎo)、D、E、F和I等這些性狀與總皂苷相似度非常低，說(shuō)明這些性狀與總皂苷含量沒(méi)有關(guān)系。與總黃酮含量變化相比，表面深綠色(D)86%，葉多破碎皺縮(F)80%，相似度極高，達(dá)到80%以上，說(shuō)明莖表面深綠色(D)和葉多破碎皺縮(F)的蒺藜總黃酮含量相對(duì)要高，B、E、I、K和M等這些性狀與總黃酮相對(duì)較低，說(shuō)明這些性狀與總黃酮含量關(guān)系不大。總成分是總皂苷和總黃酮的權(quán)衡值加和，代表蒺藜的總的有效成分。與之相關(guān)較大的是莖表面深綠色(D)55%，葉多破碎皺縮(F)75%和(果實(shí))背部黃綠色(K)56%，說(shuō)明具有這三個(gè)性狀的蒺藜藥材質(zhì)量相對(duì)較好。本實(shí)驗(yàn)含量測(cè)定方法采用的是比色法，目前含測(cè)常見(jiàn)方法高效液相色譜法，只能夠以一個(gè)或者是幾個(gè)成分去評(píng)價(jià)藥材的質(zhì)量，相對(duì)比較片面，而比色法卻能夠從某類(lèi)成分總體的含量去評(píng)價(jià)藥材的質(zhì)量，因而更具有客觀的代表價(jià)值，而且本研究針對(duì)蒺藜藥材含有皂苷和黃酮，這兩類(lèi)成分是蒺藜的主要活性成分，采用比色法測(cè)定方法對(duì)皂苷和黃酮進(jìn)行測(cè)定，實(shí)驗(yàn)結(jié)果具有一定的代表意義和參考價(jià)值。本實(shí)驗(yàn)方法學(xué)考察結(jié)果表明比色法簡(jiǎn)便易行，適合皂苷和黃酮的含量測(cè)定。本研究對(duì)蒺藜18個(gè)產(chǎn)地性狀描述每一項(xiàng)分別打分，每個(gè)描述和總皂