ICSCCS65.020.30B4121Technicalspecificationsformonitoringthemainvirfliesintheenvironmentoflarge-scalepigfarmsDB21/T3880—2023本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導(dǎo)則第1部分：標準化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構(gòu)不承擔(dān)識別專利的責(zé)任。本文件由遼寧省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳提出并歸口。本文件起草單位：沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)、遼寧偉嘉農(nóng)牧生態(tài)食品有限公司。本文件主要起草人：劉金玲、張歡、魏澍、馮壽華、張敏、房乃君、吳長德、王海龍、楊作豐、趙寶凱、杜方原、魏園園、張皓淳、鄧文超、耿慶華。本文件發(fā)布實施后，任何單位和個人如有問題和意見建議，均可以通過來電和來函等方式進行反饋，我們將及時答復(fù)并認真處理，根據(jù)實際情況依法進行評估及復(fù)審。歸口管理部門通訊地址：遼寧省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳（沈陽市和平區(qū)太原北街2號聯(lián)系電話文件起草單位通訊地址：沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)（沈陽市沈河區(qū)東陵路120號），聯(lián)系電話DB21/T3880—20231規(guī)模豬場環(huán)境中蚊蠅攜帶主要病毒監(jiān)測技術(shù)規(guī)范本文件規(guī)定了對規(guī)模豬場環(huán)境中蚊蠅攜帶主要病毒進行監(jiān)測的技術(shù)要求。本文件適用于規(guī)模豬場環(huán)境中蚊蠅攜帶主要病毒的監(jiān)測，其他豬場參照使用。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T16551豬瘟診斷技術(shù)GB/T18641偽狂犬病診斷方法GB/T18648非洲豬瘟診斷技術(shù)GB19489實驗室生物安全通用要求GB/T21674豬圓環(huán)病毒聚合酶鏈反應(yīng)試驗方法GB/T22333日本乙型腦炎病毒反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)試驗方法GB/T27517鑒別豬繁殖與呼吸綜合征病毒高致病性與經(jīng)典毒株復(fù)合RT-PCR方法NY/T541獸醫(yī)診斷樣品采集、保存與運輸技術(shù)規(guī)范NY/T4137豬細小病毒病診斷技術(shù)3術(shù)語和定義本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。4縮略語下列縮略語適用于本文件。DEPC：焦碳酸二乙酯（Diethylpyrocarbonate）5樣本采集5.1采樣人員采樣人員應(yīng)符合NY/T541中的規(guī)定。5.2采樣時間蚊子樣本5月～10月采集，蒼蠅樣本每年4月～10月采集。每年應(yīng)至少監(jiān)測1次，并根據(jù)豬場周邊環(huán)境及疫情狀況調(diào)整采樣頻率。5.3采樣地點2DB21/T3880—2023根據(jù)豬場布局，在豬舍、飼料庫、糞便堆積場、污水處理井等場所設(shè)置采樣點，采樣點數(shù)量應(yīng)根據(jù)豬場規(guī)模確定。5.4采樣方法5.4.1蚊子樣本采用燈誘法采集。室外應(yīng)選擇遠離干擾光源，背風(fēng)場所作為誘蚊燈懸掛點，在離地1.5m處掛燈，日落后20min開燈，連續(xù)誘捕蚊子2h關(guān)燈。室內(nèi)安裝時不應(yīng)靠近門和能開啟的窗，應(yīng)與照明光源靠近安裝。5.4.2蒼蠅樣本采用籠誘法采集。將捕蠅籠分別放置在誘捕地點，天涼時應(yīng)放在較暖及背風(fēng)地方，炎熱天氣應(yīng)放在陰涼的地方。誘餌宜使用糖醋水、腐魚等有強烈氣味的餌料。5.5樣本選擇每個蚊子采樣點應(yīng)至少選取30只腹部飽滿蚊子放入1個滅菌自封袋，每個蒼蠅采樣點應(yīng)至少選取10只蒼蠅放入1個滅菌自封袋，標記信息備用。剩余蒼蠅、蚊子集中無害化處理。5.6樣本管理5.6.1樣本保存和運輸5.6.1.1采集的樣本應(yīng)采用保溫容器加冰袋或干冰密封，應(yīng)在8h之內(nèi)運送到實驗室。5.6.1.2樣本生物安全標識和運送流程應(yīng)按照NY/T541確定的要求執(zhí)行。5.6.1.3樣品到達實驗室后，在2℃~8℃條件下保存應(yīng)≤24h。若需長期保存，應(yīng)放置于超低溫冰箱(≤-70℃),避免反復(fù)凍融。5.6.2樣本信息記錄完整、準確填寫采樣信息登記表，并歸檔備查。6病原監(jiān)測6.1生物安全措施樣本處理及檢測操作的生物安全措施應(yīng)符合GB19489中的要求。6.2樣本前處理按每個采樣點滅菌自封袋中蚊子、蒼蠅樣本分別合樣制樣，先在生理鹽水中漂洗1次～2次，置于無菌研缽中，加入適量DEPC-H2O研磨勻漿，將勻漿液置于無菌離心管中，于4℃條件下12000r/min離心10min，取上清液備用。6.3監(jiān)測項目重點開展非洲豬瘟、豬瘟、豬繁殖與呼吸綜合征、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病毒病等病原監(jiān)測，其它病種可根據(jù)豬場疫病狀況和防控需要選擇，如豬細小病毒感染、日本腦炎等。6.4病原檢測依據(jù)標準病原檢測依據(jù)標準見表1。DB21/T3880—2023表1病原檢測依據(jù)標準6.5結(jié)果記錄與分析6.5.1樣本檢測完畢，應(yīng)完整、準確記錄檢測結(jié)果備查。6.5.2對于檢測結(jié)果陽性的，宜進一步測定毒株關(guān)鍵基