(10)申請公布號CN114306192A(21)申請?zhí)?02011076296.7(71)申請人香港科技大學地址中國香港九龍清水灣(72)發(fā)明人詹華強白磐竹吳啟韻董婷霞(74)專利代理機構(gòu)北京匯知杰知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司11587代理人楊巍柴春玲A61K8/34(2006.01)(54)發(fā)明名稱大麻二酚及其與燕窩提取物的組合在皮膚補水保濕中的應用本發(fā)明涉及大麻二酚(CBD)自身以及包含大麻二酚(CBD)和燕窩提取物的組合物對皮膚細胞組織的補水保濕功效。大麻二酚(CBD)以及所述組合物通過提高皮膚細胞內(nèi)水通道的基因Aquaporin3(AQP3)和皮膚細胞外層糖蛋白的基因21.大麻二酚用于通過提高皮膚細胞內(nèi)水通道蛋白Aquaporin3(AQP3)和/或皮膚外層2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其中，所述大麻二酚的有效濃度為0.0001重量%至0.001重量%,優(yōu)選為0.0005重量%。3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的用途，其中，所述大麻二酚進一4.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項所述的用途，其中，所述燕窩提取物的有效濃度為至少0.01重量%,優(yōu)選為至少0.3重量%。7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的組合物，其中，所述大麻二酚為所述組合物的0.0001重量%至0.001重量%,優(yōu)選為所述組合物的0.0005重量%。少0.01重量%,優(yōu)選為所述組合物的至少0.3重量%。9.一種提高皮膚細胞內(nèi)水通道蛋白Aquaporin3(AQP3)和/或皮膚外層糖蛋白10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其中，所述大麻二酚的有效濃度為0.0001重量%至0.001重量%,優(yōu)選為0.0005重量%。11.根據(jù)權(quán)利要求9或10所述的方法，其中，所述燕窩提取物的有效濃度為至少0.01重量%,優(yōu)選為至少0.3重量%。14.根據(jù)權(quán)利要求12或13所述的方法，其中，將所述組合物施用于由缺水導致的有細3技術(shù)領域[0001]本發(fā)明涉及皮膚的補水保濕；更具體地，本發(fā)明涉及大麻二酚及其與燕窩提取物的組合在皮膚保水中的應用。背景技術(shù)輻射、吸煙喝酒、運動不足、食用過多的加工食品與油脂的過度攝取等等，這些因素都會造控油等是在保濕補水的基礎上完成。而缺水已成為當代女性肌膚衰老的元兇，當肌膚缺水時，細胞代謝、信息傳遞等受到影響，皮膚的生理結(jié)構(gòu)發(fā)生變化如皮膚干燥、粗糙、失去光[0003]現(xiàn)有的局部皮膚用制劑大多通過減少蒸發(fā)來增加皮膚的水合度，一般包括天然存在的皮膚脂質(zhì)、甾醇、以及人造或天然的油等。然而，與這種制劑相關(guān)的問題有保濕能力不[0004]因此，本領域迫切需要一種能夠安全且高效地對皮膚細胞進行補水保濕的解決方發(fā)明內(nèi)容[0005]如上所述，本領域亟需一種能夠安全且高效地向皮膚補充水分并保持皮膚水分、從而使皮膚達到濕潤、美白狀態(tài)的解決方案。由此，本發(fā)明提供了與皮膚干燥和缺水有關(guān)的問題的解決方案。[0006]本申請的發(fā)明人意外地發(fā)現(xiàn)，大麻二酚(CBD)能夠提高皮膚細胞內(nèi)水通道蛋白Aquaporin3(AQP3)和皮膚外層糖蛋白Filaggrin-2(FLG2)的基因表達，從而實現(xiàn)對皮膚細胞的補水保濕。當進一步將大麻二酚(CBD)和燕窩提取物組合使用時，兩者能夠協(xié)同地提高本發(fā)明。[0007]在第一方面，本發(fā)明提供了大麻二酚用于通過提高皮膚細胞內(nèi)水通道蛋白Aquaporin3(AQP3)和/或皮膚外層糖蛋白Filaggrin-2(FLG2)的基因表達來實現(xiàn)皮膚細胞補水保濕的用途。[0008]在第二方面，本發(fā)明提供了一種用于皮膚細胞補水保濕的組合物，其包含大麻二酚和燕窩提取物。[0009]在第三方面，本發(fā)明提供了一種提高皮膚細胞內(nèi)水通道蛋白Aquaporin3(AQP3)和/或皮膚外層糖蛋白Filaggrin-2(FLG2)的基因表達的方法，包括向所述皮膚細胞施用大4麻二酚和/或燕窩提取物。[0010]在第四方面，本發(fā)明提供了一種處理皮膚的方法，其包括對有需要的皮膚局部施用第二方面所述的方法。[0011]本發(fā)明的有益之處在于：在本發(fā)明中，通過將大麻二酚、或大麻二酚與燕窩提取物的組合用于處理干燥和缺水的皮膚，可以單獨地或協(xié)同增效地提高AQP3和FLG2編碼基因的表達，從而解決與皮膚干燥和缺水有關(guān)的問題，進而實現(xiàn)了皮膚的補水保濕效果；此外，在本發(fā)明中，大麻二酚、或大麻二酚與燕窩提取物的組合還能夠通過提高皮膚的水合度而使附圖說明[0012]本發(fā)明附圖與本發(fā)明的實施方案一起提供了對本發(fā)明的進一步解釋，并且構(gòu)成說明書的一部分。顯而易見地，下面描述中的示例性的附圖僅僅涉及本發(fā)明的一些實施方案，而并不構(gòu)成對本發(fā)明的限制。對于本領域普通技術(shù)人員來講，在不付出創(chuàng)造性勞動的前提下，還可以根據(jù)這些附圖獲得其他的實施方案。[0013]圖1示出了不同濃度的大麻二酚(CBD)以及3mg/mL的燕窩提取物對角質(zhì)細胞HaCaT細胞的細胞毒性分析圖。[0014]圖2示出了不同濃度的CBD與3mg/mL的燕窩提取物的組合對HaCaT細胞的細胞毒性[0015]圖3示出了不同濃度的CBD和3mg/mL的燕窩提取物單獨地處理HaCaT細胞后的FLG2基因表達的RT-PCR結(jié)果圖。[0016]圖4示出了不同濃度的CBD和3mg/mL的燕窩提取物單獨地處理HaCaT細胞后的AQP3基因表達的RT-PCR結(jié)果圖。[0017]圖5示出了不同濃度的CBD和3mg/mL的燕窩提取物的組合處理HaCaT細胞后的FLG2基因表達的RT-PCR結(jié)果圖。[0018]圖6示出了不同濃度的CBD和3mg/mL的燕窩提取物的組合處理HaCaT細胞后的AQP3基因表達的RT-PCR結(jié)果圖。[0019]圖7示出了12名志愿者使用包含CBD和燕窩提取物的霜劑進行人體皮膚敏感性測試的結(jié)果圖，其中藍線部分為霜劑的涂抹區(qū)域。具體實施方式[0020]下面將結(jié)合實施例和附圖對本發(fā)明進行詳細的描述。需理解，以下描述僅以示例方式來對本發(fā)明進行說明，而無意于對本發(fā)明的范圍進行限制，本發(fā)明的保護范圍以隨附權(quán)利要求為準。并且，本領域技術(shù)人員理解，在不背離本發(fā)明的精神和主旨的情況下，可以對本發(fā)明的技術(shù)方案進行修改。若并未特別指明，實施例中所用的技術(shù)手段為本領域技術(shù)人員所熟知的常規(guī)手段。[0021]如上所述，本發(fā)明人意外地發(fā)現(xiàn)，大麻二酚和燕窩提取物，無論是單獨地使用還是組合地使用，都能夠提高皮膚內(nèi)水通道蛋白Aquaporin3(AQP3)和皮膚外層糖蛋白Filaggrin-2(FLG2)的基因表達，這兩個基因均對控制皮膚細胞內(nèi)外的水平衡有著極其重要的作用，但是在單獨使用時效果不如組合使用時明顯。因此，大麻二酚和/或燕窩提取物5可以用于解決由皮膚干燥、缺水帶來的各種皮膚癥狀，如暗沉、粗糙、細紋、失去光澤和彈膚角質(zhì)層細胞均無增殖作用，對皮膚無明顯的刺激效果，因此可以作為局部皮膚用制劑外用在皮膚上，達到增強細胞間保水能力和提高皮膚組織的水分，恢復皮膚光澤的目的。[0022]AQP3是人類皮膚中表達最多的一種水通道蛋白(又被稱為水孔蛋白)亞型，其位于細胞膜上，是能夠跨膜運輸水、甘油和尿素等小分子物質(zhì)的轉(zhuǎn)運蛋白，其通過在細胞膜上組發(fā)現(xiàn)，AQP3能夠參與皮膚水合、皮膚屏障功能以及創(chuàng)傷愈合，維持皮膚的正常形態(tài)和功能，并且與角質(zhì)形成細胞的增殖和遷移甚至早期分化、特應性皮炎、白癜風、皮膚腫瘤、銀屑病等多種皮膚病的發(fā)病機制相關(guān)。也發(fā)現(xiàn)AQP3的表達下調(diào)會引起非曝光部位皮膚的自然老[0023]FLG2蛋白是S100融合型蛋白家族成員之一，定位于表皮分化復合體中。FLG和蛋白質(zhì)主要存在于角化上皮中，特別是在皮膚中。FLG2的表達模式僅限于顆粒狀上層和角質(zhì)層，與絲聚蛋白的表達模式相似，結(jié)構(gòu)上也與絲聚蛋白緊密相關(guān)。FLG2蛋白參與上皮內(nèi)穩(wěn)態(tài)，并且該編碼蛋白是皮膚角質(zhì)化所必需的，而該基因的缺陷也與皮膚病的產(chǎn)生息息相[0024]當將大麻二酚施用于干燥、缺水的皮膚時，發(fā)現(xiàn)其能夠顯著地提高AQP3和FLG2編取物的組合施用于干燥、缺水的皮膚時，發(fā)現(xiàn)兩者能夠協(xié)同地提高AQP3和FLG2編碼基因的身及其與燕窩提取物的組合對皮膚角質(zhì)層細胞無增殖作用，對皮膚無明顯的刺激效果，因此可以作為局部皮膚用制劑外用在皮膚上，達到增強細胞間保水能力和提高皮膚組織的水[0025]因此，本發(fā)明提出了大麻二酚自身、以及大麻二酚與燕窩提取物的組合用于皮膚細胞的補水保濕的技術(shù)構(gòu)思，該技術(shù)構(gòu)思是基于大麻二酚和燕窩提取物均能夠提高皮膚細胞內(nèi)水通道蛋白Aquaporin3(AQP3)和皮膚外層糖蛋白Filaggrin-2(FLG2)的基因表達的這一發(fā)現(xiàn)，由此能夠高效地對皮膚進行補水保濕且安全無副作用。本發(fā)明的技術(shù)構(gòu)思不同于現(xiàn)有技術(shù)的局部皮膚用補水制劑通過減少蒸發(fā)來增加皮膚的水合度進行皮膚補水的技術(shù)構(gòu)思。[0026]在第一方面，本發(fā)明提供了大麻二酚用于通過提高皮膚細胞內(nèi)水通道蛋白Aquaporin3(AQP3)和/或皮膚外層糖蛋白Filaggrin-2(FLG2)的基因表達來實現(xiàn)皮膚細胞補水保濕的用途。[0027]大麻二酚(CBD)是工業(yè)大麻(漢麻)中含量較多的主要活性成分，既沒有成癮性，也沒有神經(jīng)毒性。近年來發(fā)現(xiàn)大麻二酚為強力的抗氧化劑，并且具有阻斷乳腺癌轉(zhuǎn)移、抗癲酚能夠提高AQP3和FLG2編碼基因的表達，從而起到對皮膚細胞補水保濕的作用。6[0029]在一個具體實施方案中，所述大麻二酚的有效濃度為0.0001重量%至0.001重[0030]在一個優(yōu)選的實施方案中，所述大麻二酚的有效濃度為0.0005重量%。[0031]在又一個具體實施方案中，所述大麻二酚進一步與燕窩提取物組合用于皮膚細胞補水保濕。[0032]燕窩是公認的滋潤皮膚的天然營養(yǎng)食品，有潤肺燥、滋腎陰、補虛損的功效，并且具有超強的抗氧化能力，能夠美白肌膚，淡化色斑。本發(fā)明中使用的燕窩提取物可以是商購[0033]在一個具體實施方案中，本發(fā)明的燕窩提取物可以通過如下方式制備得到的：將燕窩在水里燉煮1-3小時，優(yōu)選燉煮2小時，然后對燉煮后的產(chǎn)物進行冷凍干燥。[0034]在一個任選的實施方案中，在將燕窩在水里燉煮之前，可以對燕窩進行粉碎和/或[0035]在又一個具體實施方案中，所述燕窩提取物的有效濃度為至少0.01重量%。[0036]在一個優(yōu)選的實施方案中，所述燕窩提取物的有效濃度為至少0.3重量%。[0037]在又一個具體實施方案中，所述大麻二酚與燕窩提取物的組合通過提高皮膚的水合度、增加皮膚濕潤度、和/或調(diào)理并滋潤皮膚來進行皮膚細胞補水保濕。[0038]在第二方面，本發(fā)明提供了一種用于皮膚細胞補水保濕的組合物，其包含大麻二酚和燕窩提取物。所述組合物通過協(xié)同地提高皮膚細胞內(nèi)水通道蛋白Aquaporin3(AQP3)和/或皮膚外層糖蛋白Filaggrin-2(FLG2)的基因表達來進行皮膚補水保濕。所述組合物能夠協(xié)同增效地提高AQP3和FLG2編碼基因的轉(zhuǎn)錄水平，從而實現(xiàn)皮膚細胞內(nèi)外的水平衡，進而顯著地提高皮膚的水合度、增加皮膚濕潤度、和/或調(diào)理并滋潤皮膚，進而實現(xiàn)使皮膚達[0039]在一個具體實施方案中，所述大麻二酚為所述組合物的0.0001重量%至0.001重[0040]在一個優(yōu)選實施方案中，所述大麻二酚為所述組合物的0.0005重量%。[0041]可以理解，只要本發(fā)明的組合物中包含燕窩提取物即可。在一個實施方案中，所述燕窩提取物為所述組合物的至少0.01重量%。[0042]在一個優(yōu)選的實施方案中，所述燕窩提取物為所述組合物的至少0.3重量%。[0043]在一個實施方案中，所述組合物可以僅含有大麻二酚、燕窩提取物和水。在這種情況下，所述大麻二酚可以為所述組合物的0.0001重量%至0.001重量%,優(yōu)選為所述組合物的0.0005重量%;所述燕窩提取物可以為所述組合物的至少0.01重量%,優(yōu)選為所述組合物的至少0.3重量%;余量為水。[0044]在一個優(yōu)選的實施方案中，所述大麻二酚可以為所述組合物的0.0005重量%;所述燕窩提取物可以為所述組合物的至少0.3重量%;余量為水。[0045]當然，本領域技術(shù)人員可以理解，除了大麻二酚、燕窩提取物和水以外，本發(fā)明的組合物還可以包含其他成分，根據(jù)需要例如劑型(液體、膏劑、霜7[0046]在第三方面，本發(fā)明提供了一種提高皮膚細胞內(nèi)水通道蛋白Aquaporin3(AQP3)和/或皮膚外層糖蛋白Filaggrin-2(FLG2)的基因表達的方法，包括向所述皮膚細胞施用大麻二酚和/或燕窩提取物。[0047]可以理解，在本文中，表述“大麻二酚和/或燕窩提取物物、以及大麻二酚和燕窩提取物三種情況。表述“皮膚細胞內(nèi)水通道蛋白Aquaporin3(AQP3)和/或皮膚外層糖蛋白Filaggrin-2(FLG2)”具有類似的含義。[0048]在一個具體的實施方案中，所述大麻二酚的有效濃度為0.0001重量%至0.001重[0049]在一個優(yōu)選的實施方案中，所述大麻二酚的有效濃度為0.0005重量%。[0050]在一個具體的實施方案中，所述燕窩提取物的有效濃度為至少0.01重量%。[0051]在一個優(yōu)選的實施方案中，所述燕窩提取物的有效濃度為至少0.3重量%。[0052]在第四方面，本發(fā)明提供了一種處理皮膚的方法，其包括對有需要的皮膚局部施用本發(fā)明第二方面所述的組合物。[0054]在一個具體的實施方案中，將所述組合物施用于需要補水保濕的皮膚。[0055]在一個進一步具體的實施方案中，將所述組合物施用于由缺水導致的有細紋、暗沉、膚色不均、干燥、脫皮、松弛和/或無彈性的皮膚，由此解決由皮問題。[0056]以下實施例將使本領域技術(shù)人員進一步了解本發(fā)明的技術(shù)方案和益處，但并不旨在限制本發(fā)明。[0057]實施例[0058]實施例1:燕窩提取物和大麻二酚(CBD)配制[0059]本發(fā)明的活性成分按照以下方式進行配制：[0060]燕窩提取物儲液：稱量3g燕窩(購于香港宏利行),加入300mL水，加熱燉煮2小時后，進行冷凍干燥得到燕窩提取物。在3g燕窩提取物中加入100mL水重新溶解，制備濃度為[0061]大麻二酚(CBD,購于云南漢素生物科技有限公司)儲液：稱取10mg大麻二酚，加入少量DMSO,攪拌直至大麻二酚完全溶解，然后補水至100mL,從而制備獲得濃度為100μg/mL的大麻二酚儲液。[0062]實施例2:細胞毒性分析[0063]為評估本發(fā)明的組合物在角質(zhì)細胞中是否具有細胞毒性，以及是否會刺激皮膚細牛血清)、1%青霉素/鏈霉素的DMEM培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)。然后，用0.25%胰蛋白酶溶液消化培養(yǎng)皿底部經(jīng)培養(yǎng)的貼壁細胞，制成細胞懸浮液，并對其計數(shù)。接著制成細胞濃度為1×10?個/mL的懸浮液并接種在96孔板上，放入CO?培養(yǎng)箱(5%CO?、37℃)中培養(yǎng)24小時。然后分別加入適量的大麻二酚儲液、燕窩提取物儲液，以獲得所需濃度的大麻二酚、燕窩提取物、以及大麻二酚與燕窩提取物的組合。繼續(xù)培養(yǎng)24小時后，吸去96孔板中的培養(yǎng)基，加入0.5mg/8測量570nm處的吸光度，進而分析細胞的生存活力。結(jié)果如圖1和圖2所示。麻二酚、以及燕窩提取物(3mg/mL)單獨處理HaCaT細胞的細胞存活率。相比對照的結(jié)果可大麻二酚濃度為10μg/mL時，HaCaT細胞的存活率與對照相當，但是當組合物中大麻二酚濃麻二酚與燕窩提取物(3mg/mL)的組合處理的HaCaT細胞的細胞存活率。同樣地，相比對照的毒性。當大麻二酚為10μg/mL時，細胞存活率與對照相比相當，但是當組合物中大麻二酚濃[0066]圖1和圖2的試驗結(jié)果表明，當本發(fā)明的組合中大麻二酚的濃度不超過10μg/ml時，不會誘發(fā)皮膚細胞產(chǎn)生不利影響，其安全性是可靠的。[0067]另外，本發(fā)明還發(fā)現(xiàn)，無論是大麻二酚和燕窩提取物單獨地使用還是組合地使用，與對照相比，均未見對HaCaT細胞增生有作用(p>0.05,參見圖1和圖2)。[0068]實施例3:大麻二酚和/或燕窩提取物對與皮膚補水保濕相關(guān)的基因表達的影響[0069]為了進一步確認大麻二酚和/或燕窩提取物對皮膚的補水保濕功效，使用RT-PCR測量了皮膚細胞的AQP3和FLG2編碼基因的轉(zhuǎn)錄水平。[0070]首先，將HaCaT細胞制成細胞濃度為5×10?個/mL的懸浮液并接種在6孔板上。放入CO?培養(yǎng)箱(5%CO?、37℃)中培養(yǎng)24小時。然后分別加入適量的大麻二酚儲液、燕窩提取物儲液，以獲得所需濃度的大麻二酚、燕窩提取物、以及大麻二酚與燕窩提取物的組合。繼續(xù)培引物序列如下：[0071]AQP3F-引物：5'-AGACAGCCCCTTCAGGATTT-3'[0072]AQP3R-引物：5'-TCCCTTGCCCTGAATATCTG-3'[0073]FLG2F-引物：5'-CTGTGGTCATTCATGGAGTGG-3'[0074]FLG2R-引物：5'-CCCTAGAAGGGCTAATGTGTGA-3'[0075]圖3示出了分別用不同濃度(1μg/mL、2.5μg/mL和5μg/mL)的大麻二酚和燕窩提取物(3mg/mL)單獨處理HaCaT細胞得到的FLG2編碼基因的表達結(jié)果。圖4示出了分別用不同濃度(1μg/mL、2.5μg/mL和5μg/mL)的大麻二酚和燕窩提取物(3mg/mLAQP3的基因表達提升了約20%至40%。特別地，當大麻二酚濃度為2.5μg/ml時，對FLG2的基取物處理HaCaT細胞，F(xiàn)LG2和AQP3編碼基因轉(zhuǎn)錄水平的提高約為10%至20%。[0076]這些結(jié)果表明：單獨用大麻二酚或者燕窩提取物對皮膚進行處理有補水保濕之功[0077]圖5示出了用不同濃度(1μg/mL、2.5μg/mL和5μg/mL)的大麻二酚與燕窩提取物(3mg/mL)的組合處理HaCaT細胞得到的FLG2編碼基因的表達結(jié)果；圖6示出了用不同濃度(19μg/mL、2.5μg/mL和5μg/mL)的大麻二酚與燕窩提取物(3mg/mL)的組合處理HaCaT細胞得到的AQP3編碼基因的表達結(jié)果。如圖5和圖6所示，用不同濃度的大麻二酚與3mg/mL的燕窩提取物的組合對HaCaT細胞進行處理，均可以顯著提高FLG2和AQP3編碼基因的轉(zhuǎn)錄水平。并升效果最好，提高率約為30%至80%。[0078]由此可知，大麻二酚與燕窩提取物的組合更顯著地提升了皮膚補水保濕相關(guān)基因的表達，因此可能是應用到皮膚化妝品的最佳選擇。[0079]實施例4:大麻二酚-燕窩霜劑的制備[0080]為了進一步測試大麻二酚與燕窩提取物的組合局部皮膚施用的安全性和補水保濕性能，發(fā)明人制備了一種含有大麻二酚及燕窩提取物的霜劑，其原料按重量份計包括如[0081]A相：去離子水66.6%、卡波姆(U20)0.2%、EDTA-2Na0.1%、羥苯甲脂0.15%、甘油3%、尿囊素0.2%、黃原膠0.1%、1,3-丁二醇3%;[0082]B相：賽比克乳化劑3%、三乙醇胺2%、16/18醇1%、鯊肝醇0.5%、角鯊烷0.5%、棕櫚酸乙基乙酯5%、辛酸/癸酸甘油三酯4%、異壬酸異壬酯5%、聚二甲基硅氧烷2%、生育酚乙酸酯0.5%、羥苯基酯0.1%;[0084]D相：香精2%、馬齒莧1%、苯氧乙醇0.5%;[0085]活性成分：大麻二酚0.0005%、燕窩提取物0.3%。[0086]所述霜劑的制備步驟包括：[0087]1)將U20灑在去離子水的水面上，待完全潤濕后，加入A相中的其他成分，于85℃左[0088]2)將B相中的所有成分混合加熱至80℃,保持20min,然后加入A相中，攪拌兩分鐘以進行均質(zhì)化；[0089]3)繼續(xù)在80℃下攪拌A相和B相的混合物持續(xù)10min,然后降溫至65℃左右，進行真[0090]4)在60℃左右加入C相；[0091]5)在45℃左右加入D相；[0092]6)最后加入大麻二酚和燕窩提取物，攪拌均勻后，降至室溫即可。[0093]實施例5:皮膚敏感性測試[0094]選取12名志愿者(6男6女，且小臂皮膚健康),在恒溫(24±1℃)、恒