流式細(xì)胞術(shù)在成熟B細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤診斷和微小殘留病檢測中的應(yīng)用中國專家共識（2025年版）解讀精準(zhǔn)診斷與監(jiān)測的權(quán)威指南目錄第一章第二章第三章共識概述與背景介紹流式細(xì)胞術(shù)在診斷中的明確作用流式細(xì)胞術(shù)在診斷中的輔助作用目錄第四章第五章第六章MRD檢測中的核心應(yīng)用與其他檢測方法的互補關(guān)系共識總結(jié)與臨床應(yīng)用建議共識概述與背景介紹1.共識發(fā)布機構(gòu)與版本信息本共識由中國抗癌協(xié)會血液腫瘤專業(yè)委員會組織國內(nèi)多領(lǐng)域?qū)＜夜餐贫?，確保內(nèi)容的專業(yè)性和臨床適用性。權(quán)威機構(gòu)牽頭基于第5版WHO分類和國際共識分類（ICC）的更新，對B-NHL分型及命名變化進行整合，推動診斷標(biāo)準(zhǔn)化。版本更新背景涵蓋樣本制備、免疫表型分析、結(jié)果報告及質(zhì)量控制四方面，為臨床提供系統(tǒng)性指導(dǎo)。全面覆蓋領(lǐng)域B-NHL包含CLL/SLL、MCL、FL等多種亞型，需結(jié)合形態(tài)學(xué)、遺傳學(xué)、流式等多學(xué)科手段實現(xiàn)精準(zhǔn)分型。疾病異質(zhì)性高隨著治療進展，微小殘留病監(jiān)測成為評估療效和預(yù)后的關(guān)鍵，尤其對CLL/SLL等惰性淋巴瘤具有重要價值。MRD檢測需求增長流式細(xì)胞術(shù)與分子生物學(xué)（如PCR）在MRD檢測中互為補充，八色以上流式技術(shù)的靈敏度可達10^-4級別。技術(shù)互補性部分B-NHL（如MZL、LPL/WM）缺乏特異性表型，需流式聯(lián)合病理和遺傳學(xué)特征輔助診斷。診斷挑戰(zhàn)B-NHL診斷與MRD檢測背景流式細(xì)胞術(shù)的核心優(yōu)勢高靈敏度與多參數(shù)分析：可同時檢測多個表面標(biāo)志物（如CD19、CD5、CD23等），區(qū)分正常與異常B細(xì)胞克隆，靈敏度顯著高于傳統(tǒng)方法?？焖倥c標(biāo)準(zhǔn)化操作：從樣本處理到結(jié)果分析流程化，適合臨床常規(guī)開展，且結(jié)果客觀性強，減少人為誤差。動態(tài)監(jiān)測能力：適用于治療前后MRD追蹤，為個體化治療調(diào)整提供實時依據(jù)，尤其對CLL/SLL和HCL效果顯著。流式細(xì)胞術(shù)在診斷中的明確作用2.特征性免疫表型：通過檢測CD5+、CD19+、CD23+、CD200+、ROR1+的共表達，以及CD10-、FMC7-、CD43+的陰性表現(xiàn)，結(jié)合表面免疫球蛋白（sIg）的弱表達（dim），可明確區(qū)分CLL/SLL與其他B細(xì)胞淋巴瘤?？寺⌒源_認(rèn)：利用流式細(xì)胞術(shù)檢測B細(xì)胞輕鏈限制性表達（κ∶λ>3∶1或<0.3∶1）或>25%的B細(xì)胞sIg不表達，為克隆性增殖提供直接證據(jù)，支持CLL/SLL的診斷。鑒別診斷：與濾泡性淋巴瘤（FL）等CD10+的淋巴瘤不同，CLL/SLL的CD5/CD23共表達模式具有高度特異性，流式細(xì)胞術(shù)可快速排除其他類似疾病。CLL/SLL的診斷應(yīng)用特異性標(biāo)志物組合：通過檢測CD11c、CD25、CD103和CD123的高表達，結(jié)合CD19+、CD20+的B細(xì)胞表型，流式細(xì)胞術(shù)可高效識別毛細(xì)胞白血?。℉CL），尤其在與脾邊緣區(qū)淋巴瘤（SMZL）等鑒別時具有關(guān)鍵作用。高靈敏度檢測：即使在低腫瘤負(fù)荷情況下，流式細(xì)胞術(shù)仍能檢出HCL特征性表型，輔助早期診斷和微小病灶監(jiān)測。治療反應(yīng)評估：治療后通過流式動態(tài)監(jiān)測CD103+等標(biāo)志物的表達變化，可評估殘留病灶清除效果。HCL的診斷價值白血病形式淋巴瘤的診斷要點對于以白血病形式表現(xiàn)的淋巴瘤（如CLL/SLL），流式細(xì)胞術(shù)需結(jié)合外周血涂片中小淋巴細(xì)胞形態(tài)（核致密、染色質(zhì)聚集、涂抹細(xì)胞）及骨髓活檢結(jié)果綜合判斷。表型與形態(tài)學(xué)結(jié)合當(dāng)外周血單克隆B淋巴細(xì)胞<5×10?/L時，需通過流式區(qū)分CLL樣MBL（單克隆B淋巴細(xì)胞增多癥）與非CLL樣淋巴瘤（如套細(xì)胞淋巴瘤），后者需進一步影像學(xué)或病理確認(rèn)。排除非霍奇金淋巴瘤對于惰性淋巴瘤（如SLL），流式細(xì)胞術(shù)可定期監(jiān)測克隆性B細(xì)胞比例變化，預(yù)警疾病進展或轉(zhuǎn)化（如Richter轉(zhuǎn)化）。動態(tài)監(jiān)測意義流式細(xì)胞術(shù)在診斷中的輔助作用3.免疫表型特征邊緣區(qū)淋巴瘤（MZL）流式檢測通常顯示CD5陰性、CD23陰性、CD79b強陽性，這種特征性表型有助于與CLL/SLL等CD5陽性淋巴瘤鑒別。通過檢測κ或λ輕鏈的單克隆性表達（κ:λ>3:1或λ:κ>2:1），結(jié)合CD19+CD20+CD5-表型，可支持MZL的診斷。流式結(jié)果需與病理組織學(xué)（如邊緣區(qū)形態(tài)學(xué)特征）和遺傳學(xué)檢測（如t(11;18)）結(jié)合，提高診斷準(zhǔn)確性，尤其對脾MZL和結(jié)外MZL亞型鑒別至關(guān)重要。輕鏈限制性分析組織學(xué)關(guān)聯(lián)性MZL的輔助診斷典型表型組合濾泡淋巴瘤（FL）流式表現(xiàn)為CD10+、BCL2+（通過胞內(nèi)染色）、CD19+CD20+CD5-，且常伴CD23弱表達，這些標(biāo)志物可輔助區(qū)分FL與反應(yīng)性濾泡增生。單克隆輕鏈表達（尤其與CD10共表達）是FL的重要證據(jù)，但需注意部分FL可能因抗原脫落導(dǎo)致輕鏈檢測陰性。流式檢測的CD10和BCL2表達強度可能與FL組織學(xué)分級相關(guān)，高級別FL可能顯示CD10表達減弱或丟失。多色流式（≥8色）可通過追蹤CD19+CD10+CD20+BCL2+異常群體，在治療后監(jiān)測MRD，靈敏度達10^-4級別。輕鏈限制性驗證分級相關(guān)性微小殘留病監(jiān)測FL的輔助價值MCL和LPL/WM的診斷補充套細(xì)胞淋巴瘤（MCL）鑒別：流式檢測CD5+CD23-CCND1+（胞內(nèi)）聯(lián)合FISH檢測t(11;14)是診斷金標(biāo)準(zhǔn)，CD20強表達和FMC7陽性可區(qū)別于CLL。淋巴漿細(xì)胞淋巴瘤（LPL/WM）特征：流式顯示CD19+CD20+CD5-CD10-伴胞漿IgM強表達，且CD38、CD138部分陽性，提示漿細(xì)胞分化傾向。分子檢測互補性：對于MCL和LPL/WM，流式需與MYD88L265P突變檢測（LPL）或CCND1重排（MCL）聯(lián)合應(yīng)用，尤其在不典型病例中可避免誤診。MRD檢測中的核心應(yīng)用4.臨床緩解評估流式細(xì)胞術(shù)通過檢測CD5+、CD19+、CD23+等特征性免疫表型，可識別外周血或骨髓中殘留的CLL/SLL細(xì)胞，靈敏度達10^-4（1萬個細(xì)胞中檢出1個腫瘤細(xì)胞）。uMRD（不可檢測殘留病灶）狀態(tài)與患者長期無進展生存顯著相關(guān)，是停藥決策的關(guān)鍵指標(biāo)。治療響應(yīng)分層維奈克拉等靶向藥物可使66.7%患者達到uMRD，而低MRD水平（<10^-2）患者需延長治療或聯(lián)合方案。流式結(jié)果需結(jié)合IGHV突變狀態(tài)、TP53異常等分子標(biāo)志綜合評估預(yù)后。CLL/SLL的MRD監(jiān)測LPL/WM的療效評估：華氏巨球蛋白血癥（WM）的CD19+、CD20+、CD22+細(xì)胞負(fù)荷與IgM水平相關(guān)，流式動態(tài)監(jiān)測可指導(dǎo)蛋白酶體抑制劑或CD20單抗的療程調(diào)整。MCL的預(yù)后預(yù)測：套細(xì)胞淋巴瘤（MCL）治療后流式檢測到CD5+、CD20+克隆性B細(xì)胞提示早期復(fù)發(fā)風(fēng)險，尤其對BTK抑制劑治療響應(yīng)不佳者需調(diào)整策略。骨髓MRD陽性率與PET-CT代謝緩解存在互補性。FL的疾病監(jiān)控：濾泡性淋巴瘤（FL）中CD10+、BCL2+細(xì)胞檢出可早于影像學(xué)復(fù)發(fā)，但需注意組織微環(huán)境影響導(dǎo)致的假陰性。建議聯(lián)合二代測序檢測BCL2重排以提高靈敏度。其他惰性B-NHL的MRD價值檢測技術(shù)與敏感性分析推薦≥8色流式方案，如CD19/CD5/CD20/CD38/CD43/CD79b/CD200/κ/λ，結(jié)合前向/側(cè)向散射參數(shù)區(qū)分腫瘤細(xì)胞與正常B細(xì)胞，避免CD20下調(diào)導(dǎo)致的漏檢。多參數(shù)組合策略采用EuroFlow或類似標(biāo)準(zhǔn)化方案，設(shè)門策略需包含內(nèi)參細(xì)胞（如T細(xì)胞）。敏感性驗證需通過梯度稀釋實驗，確保最低檢測限≤10^-4，實驗室間比對誤差控制在±0.5log內(nèi)。標(biāo)準(zhǔn)化與質(zhì)控與其他檢測方法的互補關(guān)系5.分子生物學(xué)檢測的協(xié)同流式細(xì)胞術(shù)（靈敏度0.01%-0.1%）與PCR（靈敏度達百萬分之一）聯(lián)合可覆蓋不同層次的殘留病灶檢測需求，尤其適用于低腫瘤負(fù)荷或異質(zhì)性樣本。靈敏度互補流式基于表面抗原檢測細(xì)胞群體，而PCR/NGS可識別特定基因突變（如IgH重排、MYD88突變），兩者結(jié)合可提高克隆性鑒定的準(zhǔn)確性。靶向性互補流式快速篩查異常細(xì)胞群，分子檢測驗證克隆穩(wěn)定性，共同指導(dǎo)治療調(diào)整（如CLL中TP53突變監(jiān)測）。動態(tài)監(jiān)測協(xié)同要點三形態(tài)學(xué)關(guān)聯(lián)流式檢測的CD5+/CD23+表型需結(jié)合淋巴結(jié)活檢中細(xì)胞形態(tài)（如CLL/SLL的增殖中心）確認(rèn)診斷。要點一要點二遺傳標(biāo)志物整合例如MCL需通過流式（CD5+/CD20+）聯(lián)合CCND1易位檢測，F(xiàn)L需結(jié)合CD10+表型與BCL2重排分析。疑難病例解析對不典型表型（如CD5-的MCL），需綜合流式、病理及分子結(jié)果排除其他亞型（如MZL）。要點三病理學(xué)與遺傳學(xué)整合多參數(shù)分析能力同時檢測≥8種標(biāo)志物（如CD19/CD20/CD5/CD10/CD38/CD43/CD81/CD200），可精準(zhǔn)區(qū)分相似亞型（如HCLvsHCL-v）。減少樣本消耗，尤其適用于骨髓穿刺等微量樣本場景，提高診斷效率。要點一要點二稀有細(xì)胞檢測優(yōu)化通過增加標(biāo)志物組合（如CD19/CD5/CD20/CD45/CD79b/CD22）提升MRD檢測靈敏度至0.001%，優(yōu)于傳統(tǒng)四色方案。結(jié)合異常抗原表達模式（如CD20弱表達、CD79b缺失）增強對治療耐藥克隆的識別能力。八色以上流式技術(shù)的優(yōu)勢共識總結(jié)與臨床應(yīng)用建議6.診斷與MRD核心共識要點明確診斷標(biāo)準(zhǔn)：流式細(xì)胞術(shù)（FCM）對具有特征性免疫表型的淋巴瘤（如CLL/SLL、HCL）可提供確診依據(jù)，需結(jié)合CD5、CD19、CD23等標(biāo)志物及輕鏈限制性表達（κ:λ>3:1或<0.3:1）進行克隆性判定。輔助診斷價值：對于免疫表型非特異的B-NHL（如MZL、FL、MCL），F(xiàn)CM需聯(lián)合遺傳學(xué)（如CCND1重排）或病理形態(tài)學(xué)結(jié)果，作為多學(xué)科診斷的重要補充。MRD檢測規(guī)范：在CLL/SLL中推薦以10^-4為cut-off值，采用八色以上多參數(shù)FCM，與PCR技術(shù)互補；其他惰性B-NHL（如MCL）的MRD監(jiān)測需結(jié)合臨床需求優(yōu)化方案。CLL/SLL病例流程①外周血樣本優(yōu)先檢測CD5+CD19+CD23+CD200+典型表型；②骨髓樣本需評估克隆性B細(xì)胞比例及浸潤模式；③MRD檢測需避開利妥昔單抗干擾期（CD20表達缺失）。組織樣本處理要點淋巴結(jié)或脾臟標(biāo)本需機械解離后優(yōu)先檢測表面抗原，固定組織可補做胞內(nèi)抗原（如CyclinD1）。MRD動態(tài)監(jiān)測時機治療結(jié)束后4周內(nèi)采集骨髓標(biāo)本，避免血液稀釋；復(fù)發(fā)患者需對比初診免疫表型以防克隆演變干擾。疑難病例整合策略對不典型表型（如CD23-或FMC7+）病例，需加做CD43、ROR1等標(biāo)志物，并行FISH檢測（如del17p）及IGHV突變分析。實際病例應(yīng)用指南未來發(fā)展與推廣路徑建立全國性FCM操作