高效液相色譜分析法

一、高效液相色譜儀的結(jié)構(gòu)與功能組成

高效液相色譜儀主要有進(jìn)樣系統(tǒng)、輸液系統(tǒng)、分別系統(tǒng)、檢測(cè)系統(tǒng)和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)，下

面將分別敘述其各自的組成與特點(diǎn)。

1.進(jìn)樣系統(tǒng)

一般采納隔膜注射進(jìn)樣器或高壓進(jìn)樣間完成進(jìn)樣操作，進(jìn)樣量是恒定的。這對(duì)提高分析樣品

的重復(fù)性是有益的。

2.輸液系統(tǒng)

該系統(tǒng)包括高壓泵、流淌相貯存器和梯度儀三部分。高壓泵的一般壓強(qiáng)為1.47~4.4X107Pa,

流速可調(diào)且穩(wěn)定，當(dāng)高壓流淌相通過層析柱時(shí)，可降低樣品在柱中的擴(kuò)散效應(yīng)，可加快其在

柱中的移動(dòng)速度，這對(duì)提高辨別率、回收樣品、保持樣品的生物活性等都是有利的。流淌相

貯存錯(cuò)和梯度儀，口「使流淌相隨固定相和樣品的性質(zhì)而變甲，包括變更洗脫液的極性、離子

強(qiáng)度、PH值，或改用競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑或變性劑等。這就可使各種物質(zhì)（即使僅有一個(gè)基團(tuán)的

差別或是同分異構(gòu)體）都能獲得有效分別。

3.分別系統(tǒng)

該系統(tǒng)包括色譜柱、連接管和恒溫器等。色譜柱一般長(zhǎng)度為10?50cm（須要兩根連用時(shí)，

可在二者之間加?連接管），內(nèi)徑為2?5mm,由“優(yōu)質(zhì)不銹鋼或厚壁玻璃管或鈦合金等材料

制成，住內(nèi)裝有直徑為5?10用】1粒度的固定相（由基質(zhì)和固定液構(gòu)成）.固定相中的基質(zhì)是

由機(jī)械強(qiáng)度高的樹脂或硅狡構(gòu)成，它們都有惰性（如硅膠表面的硅酸基因基本已除去）、多

孔性（孔徑可達(dá)1000）和比表面積大的特點(diǎn)，加之其表面經(jīng)過機(jī)械涂漬（與氣相色譜中固定

相的制備一樣），或者用化學(xué)法偶聯(lián)各種基因（如磷酸基、季胺基、羥甲基、苯基、氨基或

各種長(zhǎng)度碳鏈的烷基等）或配體的有機(jī)化合物。因此，這類固定相對(duì)結(jié)構(gòu)不同的物質(zhì)有良好

的選擇性。例如，在多孔性硅膠表面偶聯(lián)豌豆凝集素（PSA）后，就可以把成纖維細(xì)胞中的

種糖蛋白分別出來。

另外，固定相基質(zhì)粒小，柱床極易達(dá)到勻稱、致密狀態(tài)，極易降低渦流擴(kuò)散效應(yīng)?；|(zhì)粒度

小，微孔淺，樣品在微孔區(qū)內(nèi)傳質(zhì)短。這些對(duì)縮小譜帶寬度、提高辨別率是有益的。依據(jù)柱

效理論分析，基質(zhì)粒度小，塔板理論數(shù)N就越大。這也進(jìn)一步證明基質(zhì)粒度小，會(huì)提高辨

利率的道理。

再者，高效液相色譜的恒溫器可使溫度從室溫調(diào)到60C,通過改善傳質(zhì)速度，縮短分析時(shí)間，

就可增加層析柱的效率。

4.檢測(cè)系統(tǒng)

高效液相色譜常用的檢測(cè)器有紫外檢測(cè)器、示差折光檢測(cè)器和熒光檢測(cè)器三種。

（1）紫外檢測(cè)器

該檢測(cè)器適用于對(duì)紫外光（或可見光）有汲取性能樣品的檢測(cè)。其特點(diǎn)：運(yùn)用面廣（如蛋白

質(zhì)、核酸、氨基酸、核苜酸、多肽、激素等均可運(yùn)用）；靈敏度高（檢測(cè)卜限為

線性范圍寬；對(duì)溫度和流速變更不敏感；可檢測(cè)梯度溶液洗脫的樣品。

（2）示差折光檢測(cè)器

凡具有與流淌相折光率不同的樣品組分，均可運(yùn)用示差折光檢測(cè)器檢測(cè)。目前，糖類化合物

的檢測(cè)大多運(yùn)用此檢測(cè)系統(tǒng)。這一系統(tǒng)通用性強(qiáng)、操作簡(jiǎn)潔，但靈敏度低（檢測(cè)下限為

10-7g/ml）,流淌相的變更會(huì)引起折光率的變更，因此，它既不適用于痕量分析?，也不適用

于梯度洗脫樣品的檢測(cè)。

（3）熒光檢測(cè)器

凡具有熒光的物質(zhì)，在肯定條件下，其放射光的熒光強(qiáng)度與物質(zhì)的濃度成正比。因此，這一

檢測(cè)器只適用于具有熒光的有機(jī)化合物（如多環(huán)芳燒、氨基酸、胺類、維生素和某些蛋白質(zhì)

等）的測(cè)定，其靈敏度很高?（檢測(cè)下限為10-12?10-14g/ml）,痕量分析和梯度洗脫作品的檢

測(cè)均可采納。

（5）數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)

該系統(tǒng)可對(duì)測(cè)試數(shù)據(jù)進(jìn)行采集、貯存、顯示、打印和處理等操作，使樣品的分別、制備或鑒

定工作能正確開展。

二、液相色譜柱的正確安裝和運(yùn)用說明

液相色譜儀由島?壓液體泵、檢測(cè)器及液相色譜柱等三部分組成，其中液相色譜柱的正確安裝

和運(yùn)用，是液相色譜工作的關(guān)鍵；也是液相色譜工作者獲得正確牢靠的試驗(yàn)數(shù)據(jù)的必經(jīng)之路。

（-）液相色譜柱的安裝：

1、液相色譜柱的結(jié)構(gòu)：

a、空柱由柱接頭、柱管及濾片組裝而成。

柱接頭采納低死體積結(jié)構(gòu)，柱接頭是兩端螺紋組件，一端是為7/16英寸外螺紋，另一端

是3/16英寸的內(nèi)螺紋（國(guó)內(nèi)外已規(guī)范化）。7/16英寸外螺紋與1/4英寸柱管（①6.35mm）連接，

中間放置壓壞用于密封。3/16英寸的內(nèi)螺紋與1/16英寸（①1.57mm）的連接管連接，中間也放

置壓環(huán)用于柱接頭的密封，為了盡量削減柱外死體積，在安裝色譜柱時(shí)，用中1.57mm連接

管通過空心螺釘壓環(huán)后要盡量插究竟，然后再擰緊空心螺釘。壓環(huán)被空心螺釘擠壓變形后緊

箍在連接管上（連接管通過壓環(huán)后露出的管長(zhǎng)度應(yīng)嚴(yán)格限制在2.5mm長(zhǎng)或其他固定尺寸）。

在兩端柱接頭內(nèi)，柱管兩端各放置一片不銹鋼濾片（或?yàn)V網(wǎng)），用于封堵柱填料不被流淌

相沖出柱外而流失?？罩鹘M件均為316“不銹鋼材質(zhì)，能耐受一般的溶劑作用。但由于含氯

化物的溶劑對(duì)其有肯定的腐蝕性，故運(yùn)用時(shí)要留意，柱及連接管內(nèi)不能長(zhǎng)時(shí)間存留此類溶劑，

以避開腐蝕。

b、柱填料：

液相色譜柱的分別作用是在填料與流淌相之間進(jìn)行的，柱子的分類是依據(jù)填料類型而

定。

正相柱：多以硅膠為柱填料。依據(jù)外型可分為無定型和球型兩種，其顆粒直徑在3—10即1

的范圍內(nèi)。另一類正相填料是硅膠表面鍵合一CN,-NH?等官能團(tuán)即所謂的鍵合相硅膠。

反相柱：主要是以硅狡為基質(zhì)，在其表面鍵合十八烷基官能團(tuán)（ODS）的非極性填料。也

有無定型和球型方分。

常用的其他的反相填料還有鍵合金、G、C,、苯基等，其顆粒粒徑在3—10內(nèi)n之間，

2,色譜柱的安裝：

a、拆開柱包裝盒，確認(rèn)色譜柱的類型、尺寸、出廠日期以及柱內(nèi)貯存的溶劑。

b、擰下柱兩端接頭的密封堵頭放回包裝盒供備用。

c、按柱管上標(biāo)示的流淌相流向，將色譜柱的入口端通過連接管與進(jìn)樣閥出口相連接（如

條件允許，建議在柱前運(yùn)用愛護(hù)柱）；柱的出口與檢測(cè)器連接。連接管是外徑為1.57皿、內(nèi)

徑為0.1-0.3nmi的不銹鋼管。連接管的兩端均有空心螺釘及密封用壓環(huán)。在接管時(shí)肯定要設(shè)

法降低柱外死體積。連接管通過空心螺釘、壓環(huán)后盡量用力插究竟，然后順時(shí)針擰緊空心螺

釘，直到擰不動(dòng)為止，再用扳手接著順時(shí)針擰1/4T/2圈，切記不要用力過大。如色譜柱通

過流淌相加壓后有漏液現(xiàn)象，請(qǐng)用扳手接著順時(shí)針擰1/4圈，直至不漏液為止。

（-）液相色譜柱的運(yùn)用：

色譜柱在運(yùn)用前，最好進(jìn)行柱的性能測(cè)試，并將結(jié)果保存起來，作為今后評(píng)價(jià)柱性能變

更的參考。但要留意：柱性能可能由于所運(yùn)用的樣品、流淌相、柱溫等條件的差異而有所不

同；另外，在做柱性能測(cè)試時(shí)是依據(jù)色譜柱出廠報(bào)告中的條件進(jìn)行（出廠測(cè)試所運(yùn)用的條件

是最佳條件），只有這樣，測(cè)得的結(jié)果才有可比性。

1、樣品的前處理：

a、最好運(yùn)用流淌相溶解樣品。

b、運(yùn)用予處理柱除去樣品中的強(qiáng)極性或與柱填料產(chǎn)生不行逆吸附的雜質(zhì)。

c、運(yùn)用0.45阿1的過濾膜過濾除去微粒雜質(zhì)。

2、流淌相的配制：

液相色譜是樣品組分在柱填料與流淌相之間質(zhì)量交換而達(dá)到分別的目的，因此要求流淌

相具備以下的特點(diǎn)：

a、流淌相對(duì)樣品具有肯定的溶解實(shí)力，保證樣品組分不會(huì)沉淀在柱中（或長(zhǎng)時(shí)間保留在

柱中）。

b、流淌相具有肯定惰性，與樣品不產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)（特殊狀況除外）。

c、流淌相的黏度要盡量小，以便在運(yùn)用較長(zhǎng)的分析柱時(shí)能得到好的分別效果；同時(shí)降

低柱壓降，延長(zhǎng)液體泵的運(yùn)用壽命（可運(yùn)用提高溫度的方法降低流淌相的黏度）。

d、流淌相的物化性質(zhì)要與運(yùn)用的檢測(cè)器相適應(yīng)。如運(yùn)用UV檢測(cè)器，最好運(yùn)用對(duì)紫外汲

取較低的溶劑配制。

。、流淌相沸點(diǎn)不要太低，否則簡(jiǎn)潔產(chǎn)牛氣泡,導(dǎo)致試驗(yàn)無法進(jìn)行c

f、在流淌相配制好后，肯定要進(jìn)行脫氣。除去溶解在流淌相中的微量氣體既有利于檢

測(cè)，還可以防止流淌相中的微量氧與樣品發(fā)生作用。

3、流淌相流速的選攔：

因柱效是柱中流淌相線性流速的函數(shù)，運(yùn)用不同的流速可得到不同的柱效。對(duì)于一根特

定的色譜柱，要追求最佳柱效，最好運(yùn)用最佳流速。對(duì)內(nèi)徑為4.6mm的色譜柱，流速一?般選

擇lml/min,對(duì)于內(nèi)徑為4.0mm柱,流速0.8ml/min為住“

當(dāng)選用最佳流速時(shí)，分析時(shí)間可能延長(zhǎng)。可采納變更流淌相的洗滌強(qiáng)度的方法以縮短分

析時(shí)間（如運(yùn)用反相柱時(shí)，可適當(dāng)增加甲醇或乙懵的含量）。

三、高效液相色譜儀操作步驟：

1.過濾流淌相，依據(jù)須要選擇不同的濾膜.

2.對(duì)抽濾后的流淌相進(jìn)行超聲脫氣10-20分鐘。

3.打開hplc工作站（包括il算機(jī)軟件和色譜儀），連接好流泄相管道，連接檢測(cè)系統(tǒng)。

4.進(jìn)入hplc限制界面主菜單，點(diǎn)擊manual,進(jìn)入手動(dòng)菜單。

5.有一段時(shí)間沒用，或者換了新的流淌相，須要先沖洗泵和進(jìn)樣閥。沖洗泵，干脆在泵的

出水口，用針頭抽取。沖洗進(jìn)樣閥，須要在manual菜單下，先點(diǎn)擊purge,再點(diǎn)擊slan,沖

洗時(shí)速度不要超過10ml/min。

6.調(diào)整流量，初次運(yùn)用新的流淌相，可以先試一下壓力，流速越大，壓力越大，一般不要

超過20（）0。點(diǎn)擊injure,選用合適的流速，點(diǎn)擊on,走基線，視察基線的狀況。

7.設(shè)計(jì)走樣方法。點(diǎn)擊file,選取se-lectusersandmethods,可以選取現(xiàn)有的各種走樣方法。

若需建立一個(gè)新的方法，點(diǎn)擊newmethod。選取須要的配件，包括進(jìn)樣閥，泵，檢測(cè)器等，

依據(jù)須要而不同。選完后，點(diǎn)擊protocol。?個(gè)完整的走樣方法須要包括：a.進(jìn)樣前的穩(wěn)流,

一般2-5分鐘；b.基線歸零；c.進(jìn)樣閥的loading-inject轉(zhuǎn)換；d.走樣時(shí)間，隨不同的樣品而不

同。

8.進(jìn)樣和進(jìn)樣后操作。選定走樣方法，點(diǎn)擊Siam。進(jìn)樣，全部的樣品均需過濾。方法走完

后，點(diǎn)擊postrun,可記錄數(shù)據(jù)和做標(biāo)記等。全部樣品走完后，再用上面的方法走一段基線,

洗掉剩余物。

9.關(guān)機(jī)時(shí)，先關(guān)計(jì)算機(jī)，再關(guān)液相色譜。

10.填寫登記本，由負(fù)責(zé)人簽字。

II.留意事項(xiàng)：

I）流淌相均需色譜純度,水用20m的夫離子水.脫氣后的流淌相要當(dāng)心振動(dòng)盡量不引起氣

泡。

2）柱子是特別脆弱的，第一次做的方法，先不要讓液體過柱子。

3）全部過柱子的液體均需嚴(yán)格的過濾。

4）壓力不能太大，最好不要超過2000psi。

四、毛細(xì)管電泳儀的運(yùn)用

（-）打算工作

I.毛細(xì)管的制備：

①剪略長(zhǎng)尸須要長(zhǎng)度的毛細(xì)管（運(yùn)用專用的裁剪紗布），斷端利用鎰子當(dāng)心移除。

②燒窗：從毛細(xì)管進(jìn)液端起先到試驗(yàn)者須要長(zhǎng)度的位置燒窗，窗口盡量小，過程中可

用防護(hù)工具對(duì)窗口兩端的毛細(xì)管進(jìn)行防護(hù)，燒好的窗需用粘有酒精的棉花擦拭。

注：檢測(cè)的有效長(zhǎng)度為從毛細(xì)管進(jìn)液端到檢測(cè)窗之間的距離，這個(gè)距離一般依據(jù)試驗(yàn)者

的須耍自口駕馭。

③取出卡槽：打開安放卡槽區(qū)域的門，旋轉(zhuǎn)固定卡槽的杠桿90度，按卡槽中心的釋放

按鈕，握住卡槽的兩端向上抽出卡槽。

④安裝毛細(xì)管：將進(jìn)液端的毛細(xì)管當(dāng)心的從k槽的出口插入，進(jìn)入時(shí)可輕輕旋轉(zhuǎn)。當(dāng)

窗口到達(dá)檢測(cè)點(diǎn)時(shí)停止插入，將游離的進(jìn)液端毛細(xì)管從卡槽的入口引出，并固定好毛細(xì)管外

端的橡膠管。

注：插入毛細(xì)管時(shí)當(dāng)心操作，窗口位置的毛細(xì)管特別簡(jiǎn)潔裂開，需特別謹(jǐn)慎，過程中切

忌運(yùn)用暴力。

⑤安放卡槽：用與取出的步驟相反依次的操作安放卡槽。

2.添加樣品，緩沖液及沖洗液：

①為了削減樣品及緩沖液的揮發(fā)，在插入加液管前可在加樣管固定器的小孔內(nèi)加入少

量的ddH20o

②已添加好的加液管，在插入轉(zhuǎn)盤上的固定槽前先離心2min,加液時(shí)留意加樣槍頭緊貼

管壁，防止氣泡的產(chǎn)生。

③為了削減虹吸作用,須要保持入口處和出口處的runningbuffer量一樣,對(duì)于500ul

體積的加液管，舉薦加入500ul的劑量：對(duì)1.5ml體積的加液管，舉薦1.3向的劑量。

④舉薦加入樣品的最小劑量為50ul,檢測(cè)須要的最小劑量為15ul。

⑤在出口處的waste管中加入503的ddH20,可以防止檢測(cè)端的毛細(xì)管被沖洗液的殘

留污染.

（二）電泳儀的操作

1.插上電源，檢查電泳儀的連接狀況，檢查制冷區(qū)小槽內(nèi)水量是否足夠，打開電腦，

打開電泳儀的開關(guān)（兩扇門都須要關(guān)閉），在電腦桌面點(diǎn)開BioFocus的圖標(biāo)，進(jìn)入到BioFocus

的限制界面。

2.設(shè)置程序：

①點(diǎn)擊Reagents鍵，在已有的ReagentsDataBase中查看是否含有須要運(yùn)用的配液，

有可點(diǎn)擊該配液查看，或運(yùn)用edit鍵進(jìn)行修改；沒有則點(diǎn)擊add進(jìn)行編輯添加。添加之后留

意命名名稱的唯一性。

②點(diǎn)擊Cartridges鍵,對(duì)卡槽的相關(guān)參數(shù)進(jìn)行查看，修改。如CartridgesDataBase中

沒有和試驗(yàn)要求匹配的配置參數(shù)則點(diǎn)擊Add進(jìn)行添加。留意須要激活相應(yīng)的或者設(shè)置的卡

槽。

⑤點(diǎn)擊Configuraliuns—>Dcfinc;添加須耍的信息:cunfiguialiunID;Configuration

description;selectthecartridge—>Continuc:Regent雙擊左卜角regentdatabase中須要選擇的

regent;雙擊屏幕右邊你須要放置該regent的InletCarouselPosition—>Sample:命名，同樣的

方式從左下角的Reagents中添加到右側(cè)相應(yīng)的位置上->點(diǎn)擊empty，然后點(diǎn)擊須要?jiǎng)h除的

Regent;點(diǎn)擊clear,清除全部設(shè)置的Regenl擺放次序->OK。

注：在以上幾步中，記得同時(shí)設(shè)置好中止的清洗程序，及Shutdown程序，ddH2O清

洗5分鐘，氮?dú)獯蹈伞?/p>

④點(diǎn)擊Methods:選擇設(shè)置好的程序—Define:填寫MethodID,Description—>Inlet

Regent,選擇電泳中須要的Runningbuffer—>OutletRegent,選擇電泳中須要的Running

buffersVoltageMode填寫須要的電壓，電流，正負(fù)極，設(shè)定電泳時(shí)毛細(xì)管須要的溫度，以

及電泳時(shí)間一Add:添加在電泳前后須要灌注的洗液等，填寫灌注的時(shí)間一Injection:選擇電

壓或者氣壓的進(jìn)液方式；前者需選擇恒壓或者恒流，以及進(jìn)液時(shí)間的長(zhǎng)短；后者需選擇壓力

*時(shí)間的進(jìn)液常數(shù)iDetector:DelectorParameters:設(shè)置波長(zhǎng)，時(shí)間，通道，AU范圍；Display

parameters:設(shè)置波長(zhǎng)，AU范圍，偏移;Oplions:設(shè)置RiseTime,Turnofflampatrunend；

Designation:該設(shè)者存儲(chǔ)的位置-OK

⑤點(diǎn)擊AutoSeqs:選擇須要的程序一Define查看，編輯須要調(diào)整的程序，如States顯

示Conflict則須要對(duì)相應(yīng)的設(shè)置進(jìn)行調(diào)整，知道狀態(tài)顯示Pending—>Pending,Ready

—>0K—>Start

(三)停止,存儲(chǔ)，杳看文件

①等待全部的程序完成后(包括運(yùn)行程序及情節(jié)程序)，要停止運(yùn)行的程序，則可點(diǎn)擊

屏幕左上角的Slop鍵選擇須要中止運(yùn)行的某一步(AbcrlCurrentRunOnly),某一組(Aborl

CurrentRunGroup)或全部編輯的程序(AbortAutomationSequence)—>0K—+存儲(chǔ)在指定盤上

(Yes),自定義盤(NO)->須要取出加液管及轉(zhuǎn)盤(YES),不須要(NO)

注：在全部的對(duì)話框消逝之前，以及轉(zhuǎn)盤沒有回到初始位置之前，不能打開電泳儀的門。

(四)操作要點(diǎn)：

1.將毛細(xì)管電泳儀放置于有空調(diào)的房間，保持室溫恒定。同時(shí)，操作中限制毛細(xì)管及

儀器恒溫。

2.緩沖液加壓一段時(shí)間后，淌度和電滲流會(huì)變更，要常常更換。

3.緩沖液要用0.45mm微孔濾膜過濾后運(yùn)用。

4.對(duì)未涂漬的毛細(xì)管柱每天運(yùn)用前先用0.1mol/L氫氧化鈉溶液、水及運(yùn)行緩沖液各沖

洗lOiuin平衡后運(yùn)用。更換緩沖液時(shí)，耍用水沖洗3inin后，再用緩沖液沖洗10小山平衡后進(jìn)

樣。

5.樣品宜溶于稀釋5~1()倍的運(yùn)行緩沖液中，以獲得好的峰形。

6.為提高定量精確性，宜加入一內(nèi)標(biāo)。在保證峰形的前提下，樣品宜用高濃度，進(jìn)樣

時(shí)間應(yīng)大于5psixsec。

7.摸索試驗(yàn)條件時(shí)，可先用一短柱，用磷酸鹽、硼砂或Tris在不同的pH值條件下試驗(yàn)，

當(dāng)選定緩沖液種類時(shí)，可先變更pH值獲得最佳分別，再變更濃度以獲得較好的峰形及柱效。

為使分析高效、快速，電壓一般可用18~20kv。

8.每次作完試驗(yàn)后，用水沖洗5min,可將毛細(xì)管兩端置于水中保存，也可用氮?dú)獯蹈珊?/p>

保存。

氣相色譜分析法

一、氣相色譜的主要組成和其工作原理

氣相色譜是對(duì)氣體物質(zhì)或可以在肯定溫度下轉(zhuǎn)化為氣體的物質(zhì)進(jìn)行檢測(cè)分析。由于物質(zhì)

的物性不同，其試樣中各組份在氣相和固定液液相間的女排系數(shù)不同，當(dāng)汽化后的試樣被載

氣帶入色譜柱中運(yùn)行時(shí)，組份就在其中的兩相間進(jìn)行反復(fù)多次安排，由于固定相對(duì)各組份的

吸附或溶解實(shí)力不同，雖然載氣流速相同，各組份在色譜柱中的運(yùn)行速度就不同，經(jīng)過肯

定時(shí)間的流淌后，便彼此分別，按依次離開色譜柱進(jìn)入檢測(cè)器，產(chǎn)生的訊號(hào)經(jīng)放大后，在記

錄器卜描繪出各絹份的色譜峰C

主要組成：氣相色譜種類許多，性能也各有差別。主要包括兩個(gè)系統(tǒng)。即氣路系統(tǒng)和電

路系統(tǒng)。氣路系統(tǒng)主要有玉力表、凈化器、穩(wěn)壓閥、穩(wěn)流閥、轉(zhuǎn)子流量計(jì)、六通進(jìn)樣閥、進(jìn)

樣器、色譜柱、檢測(cè)器等；電子系統(tǒng)包括各用電部件的穩(wěn)壓電源、溫控裝置、放大線路、自

動(dòng)進(jìn)樣和收集裝置、數(shù)據(jù)處理機(jī)和記錄儀等電子器件。

依據(jù)功能單元分有：

(1)載氣系統(tǒng)。包括氣源、氣體凈化、氣體流速限制和測(cè)量。

(2)進(jìn)樣系統(tǒng)。包括進(jìn)樣器、汽化室一一將液體樣品瞬間汽化為蒸氣。

(3)色譜柱和柱溫。包括恒溫限制裝置一一將多組分樣品分別為單個(gè)。

(4)檢測(cè)系統(tǒng)。包括檢測(cè)器，控溫裝置。

(5)記錄系統(tǒng)。包括放大器、記錄儀、有的儀器還有數(shù)據(jù)處理裝置，為便于精確快速檢測(cè)，

GC-MS和GC-FTIR也是常用的聯(lián)合檢測(cè)組成。

二、氣相色譜柱的安裝

色譜柱的正確安裝才能保證發(fā)揮其最佳的性能和延長(zhǎng)運(yùn)用壽命。

正確的安裝請(qǐng)參考以下步驟：步驟1.檢查氣體過濾器、載氣、進(jìn)樣墊和襯管等檢查氣體過

濾器和進(jìn)樣墊，保證協(xié)助氣和檢測(cè)器的用氣暢通有效。假如以前做過較臟樣品或活性較高的

化合物，須要將進(jìn)樣口的襯管清洗或更換。步驟2.將螺母和密封墊裝在色譜柱上，并將色

譜柱兩端要當(dāng)心切平步驟3.將色譜柱連接于進(jìn)樣口上色譜柱在進(jìn)樣口中插入深度依據(jù)所

運(yùn)用的GC儀器不同而定。正確合適的插入能最大可能地保證試驗(yàn)結(jié)果的重現(xiàn)性。通常來說，

色譜柱的入口應(yīng)保持在進(jìn)樣口的中下部，當(dāng)進(jìn)樣針穿過隔墊完全插入進(jìn)樣口后假如針尖與色

譜柱入口相差-2cm,這就是較為志向的狀態(tài)。（詳細(xì)的插入程度和方法參見所運(yùn)用GC的隨

機(jī)手冊(cè)）避開用力彎曲擠壓毛細(xì)管柱，并當(dāng)心不要讓標(biāo)記牌等有銳利邊緣的物品與毛維柱接

觸摩擦，以防柱身斷裂受損。將色譜柱正確插入進(jìn)樣口后，用手把連接螺母擰上，擰緊后（用

手?jǐn)Q不動(dòng)了）用扳手再多擰"47/2圈，保證安裝的密封程度。因?yàn)椴痪o密的安裝，不僅會(huì)

引起裝置的泄漏，而且有可能對(duì)色譜柱造成永久損壞。步驟4.接通載氣當(dāng)色譜柱與進(jìn)樣口

接好后，通載氣，調(diào)整柱前壓以得到合適的載氣流速。柱前壓設(shè)置為Psi15m25m30m

50m100m0.20mm10-1523-3018-3040-6080-1200.25mm8-1213-2215-2528-4555-90

0.32mm5-108-1510-2016-3032-600.53mm1-22-32-44-86-14（以上僅為建議的起

始設(shè)置，詳細(xì)數(shù)值要依據(jù)實(shí)際的載氣流速。）將色譜柱的出口端插入裝有己烷的樣品瓶中，

正常狀況下，我們可以望見瓶中穩(wěn)定持續(xù)的氣泡。假如沒有氣泡，就要重新檢查一下載氣裝

置和流量限制器等是否正確設(shè)置,并檢杳一下整個(gè)氣路有無泄漏“等全部問題解決后,將色

譜柱出口從瓶中取出，保證柱端口無溶劑殘留，再進(jìn)行下一步的安裝。步驟5.將色譜柱連

接于檢測(cè)器上其安裝和所需留意的事項(xiàng)與色譜柱與進(jìn)樣口連接大致相同。假如在應(yīng)用中系統(tǒng)

所運(yùn)用的是ECD或NPI）等，則在老化色譜柱時(shí)，應(yīng)當(dāng)將柱子與檢測(cè)器斷開，這樣檢測(cè)相可能

會(huì)更快達(dá)到穩(wěn)定。步驟6.確定載氣流量，再對(duì)色譜柱的安裝進(jìn)行檢查留意：假如不通入載

氣就對(duì)色譜柱進(jìn)行加熱，會(huì)快速且永久性的損壞色譜柱。步驟7.色譜柱的老化色譜柱安裝

和系統(tǒng)檢漏工作完成后，就可以對(duì)色譜柱進(jìn)行老化了。對(duì)色譜柱升至一恒定溫度，通常為

其溫度上限。特殊狀況下，可加熱至高于最高運(yùn)用溫度10-20℃左右，但是肯定不能超過色

譜柱的溫度上限，那樣極易損壞色譜柱。當(dāng)?shù)竭_(dá)老化溫度后，記錄并視察基線。初始階段基

線應(yīng)持續(xù)上升，在到達(dá)老化溫度后5To分鐘起先下降，并且會(huì)持續(xù)30-9（）分鐘。當(dāng)?shù)竭_(dá)一個(gè)

固定的值后就會(huì)穩(wěn)定下來，假如在2-3小時(shí)后基線仍無法穩(wěn)定或在15-20分鐘后仍無明顯的下

降趨勢(shì)，則有可能系統(tǒng)裝置有泄漏或者污染。遇到這樣的狀況，應(yīng)馬上將柱溫降到40C以下，

盡快的檢直系統(tǒng)并解決相關(guān)的問題。假如還是接著的老化，不僅對(duì)色譜柱有損壞而且始終得

不到正常穩(wěn)定的基線。一?般來說，涂有極性固定相和較厚涂層的色譜柱老化時(shí)間長(zhǎng)，而弱

極性固定相和較薄涂層的色譜柱所需時(shí)間較短。而PLOT色譜柱的老化方法有各不相同.PLOT

柱的老化步驟:HLZPora系列250℃,8小時(shí)以上Molesieve（分子篩）300℃12小時(shí)

Alumina（氧化鋁）2（）0℃8小時(shí)以上由于水在氧化鋁和分子篩PLOT柱中的不行逆吸附，使得

這兩種色譜柱簡(jiǎn)潔發(fā)生保留行為漂移。當(dāng)柱子分別過含有高水分樣品后，須要將色譜柱重

新老化，以除去固定相中吸附的水分。步驟8.設(shè)置確認(rèn)載氣流速對(duì)于毛細(xì)管色譜柱，我氣

的種類首選高純度氮?dú)饣驓錃狻］d氣的純度最好大于99.995斬而其中的含氧量越少越好。

假如您運(yùn)用的是毛細(xì)管色譜柱，則依照載氣的平均線速度(cm/sec)，而不是利用載氣流量

(ml/min)來對(duì)載氣做出評(píng)價(jià)。因?yàn)橹У挠?jì)算采納的是載氣的平均線速度。舉薦平均線速

度值：氮?dú)猓?0T2cm/sec氫氣：20-25cm/sec載氣雜質(zhì)過濾器在載氣的管線中加入氣體過

濾裝置.不僅可以延長(zhǎng)色譜柱壽命，而且很大程度的降低了背景噪音。建議最好安裝一個(gè)高容

量脫氧管和一個(gè)載氣凈化器。運(yùn)用ECD系統(tǒng)時(shí)，最好能在其協(xié)助氣路中也安裝一個(gè)脫氧管。

步驟9.柱流失檢測(cè)在色譜柱老化過程結(jié)束后，利用程序升溫作一次空白試驗(yàn)(不進(jìn)樣)。一

般是以lOC/min從50℃升至最高運(yùn)用溫度，達(dá)到最高運(yùn)用溫度后保持lOmin。這樣我們就會(huì)

的到一張流失圖。這些數(shù)值可能對(duì)今后作對(duì)比試驗(yàn)和試驗(yàn)問題的解決有幫助。在空白試驗(yàn)的

色譜圖中，不應(yīng)當(dāng)有色譜峰出現(xiàn)。假如出現(xiàn)了色譜峰，通?？赡苁菑倪M(jìn)樣口帶來的污染物。

假如在正常的運(yùn)用狀態(tài)下，色譜柱的性能起先下降，基線的信號(hào)值會(huì)增高。另外，假如在很

低的溫度下，基線信號(hào)值明顯的大干初始值,則有可能是色譜樣和GC系統(tǒng)有污染.其他：

色譜柱的保存用進(jìn)樣墊將色譜柱的兩端封住，并放回原包裝。在安裝時(shí)要將色譜柱的兩端截

去一部分，保證沒有進(jìn)樣墊的碎屑?xì)埩粲谥?。留意：?dāng)空氣中氫氣的含量在4T0%時(shí)，就

有爆炸的危急。所以肯定要保證明驗(yàn)室有良好的通風(fēng)系統(tǒng)。

三、氣相色譜儀操作規(guī)程

1、色譜室應(yīng)選在無腐蝕氣體源的環(huán)境中，室內(nèi)溫度+5?35℃范圍內(nèi)，環(huán)境濕度085%相對(duì)濕

度，室內(nèi)應(yīng)保持空氣流通。

2、儀器室電源不應(yīng)與大功率耗電最設(shè)備共用一條線路，接地和接零嚴(yán)格分開，三相進(jìn)戶單

相三線制供電。

3、色譜氣源必需采納高純氣體，嚴(yán)禁采納任何塑料管道輸氣，進(jìn)入儀器前要加具變色分子

篩的凈化系統(tǒng)，對(duì)載氣還應(yīng)串接脫氧管，不同種可燃?xì)怏w不能放置同一氣源室內(nèi)。

4、任何采納鋼瓶供氣之氣源，運(yùn)用之最低氣壓不得＜1MP、必需剛好更換，換瓶時(shí)逆時(shí)針方

向松開減壓器支頭螺絲，順時(shí)針關(guān)閉瓶頭閥，拆下鋼瓶減壓器，換上同種滿瓶氣開啟瓶頭閥，

順時(shí)針旋進(jìn)支頭螺絲至所需壓力。必需特殊提示，在每次打開鋼瓶瓶頭閥時(shí)，首先必需檢查

支頭螺絲是否松開(逆時(shí)針旋轉(zhuǎn)為松開)。只有在確認(rèn)支頭螺絲是松開的狀態(tài)下方能打開瓶

頭閥，否則鋼瓶減壓器在打開瓶頭閥時(shí)，高壓打在低壓調(diào)整器上，一次即可把減壓器擊壞。

凡遇以上狀況作責(zé)任事故處理。

5、運(yùn)用TCD檢測(cè)器時(shí)，應(yīng)先開載氣，并確認(rèn)整個(gè)系統(tǒng)無泄漏狀況下再把汽化室，柱室，檢

測(cè)室溫度升至所需值，然后開啟橋路電流，關(guān)機(jī)時(shí)則先關(guān)橋路電流，再降溫至60-C,最終

關(guān)閉載氣。當(dāng)運(yùn)用氫做載氣時(shí)，應(yīng)用管道把放空氣接至室外。

6、運(yùn)用FID檢測(cè)器時(shí)，開啟載氣，把檢測(cè)器溫度升至所需值，點(diǎn)火、然后把汽化室，柱箱

溫度升到位，關(guān)機(jī)時(shí)先關(guān)閉氫氣、空氣熄火，然后降溫至60C,停載氣。

7、更換填充柱時(shí)，對(duì)填充柱干脆插入汽化室的儀器，應(yīng)考慮留5CM試樣汽化空間。當(dāng)采

納玻璃填充柱時(shí)，只能運(yùn)用He.N.Ar做載氣。填充柱運(yùn)用前必需在低于固定液最高運(yùn)用溫度

20?30C,載氣流速5ml/min的條件下。老化8—16小時(shí)在基線無噪聲時(shí)方可作樣品分析

8、更換毛細(xì)管色譜柱時(shí)，當(dāng)毛細(xì)管穿過石墨墊時(shí)頭應(yīng)向下，穿過以后用毛細(xì)管割刀切去2?

3cm,應(yīng)嚴(yán)格按儀器說明書規(guī)定插入汽化室，檢測(cè)室之距離。用手旋上毛細(xì)管固定螺帽呈水

平狀至緊，用小扳手順時(shí)針旋轉(zhuǎn)1/4圈，檢查不漏氣即可，千萬不要扳的過緊。

9、分析樣品瓶和進(jìn)樣注射器只能放置在250x160x35mm有蓋的搪瓷盤中，嚴(yán)禁放在儀器頂

部或試驗(yàn)臺(tái)上。

四、氣相色譜常識(shí)

（一）氣相色譜法有哪些特點(diǎn)？

氣相色譜是色譜中的一種，就是用氣體做為流淌相的色譜法，在分別分析方面，具有如下一

些特點(diǎn)：

1、靈敏度：可檢出10"克的物質(zhì)，可作超純氣體、高分子單體的痕跡量雜質(zhì)分析和空氣中

微量毒物的分析。

2、高選擇性：可有效地分別性質(zhì)極為相近的各種同分異構(gòu)體和各種同位素°

3、高效能：可把組分困難的樣品分別成單組分。

4、速度快：一般分析、只需幾分鐘即可完成，有利于指導(dǎo)和限制生產(chǎn)。

5、應(yīng)用范圍廣：即可分析低含量的氣、液體，亦可分析高含量的氣、液體，可不受組分含

量的限制。

6、所需試樣量少：一般氣體樣用幾亳升，液體樣用幾微升或幾十微升。

7、設(shè)備和操作比較簡(jiǎn)潔儀器價(jià)格便宜。

（二）氣相色譜的分別原理為何？

氣相色譜是一種物理的分別方法。利用被測(cè)物質(zhì)各組分在不同兩相間安排系數(shù)（溶解度）的

微小差異，當(dāng)兩相作相對(duì)運(yùn)動(dòng)時(shí)，這些物質(zhì)在兩相間進(jìn)行反復(fù)多次的安排，使原來只有微小

的性質(zhì)差異產(chǎn)生很大的效果，而使不同組分得到分別。

（三）何謂氣相色譜？它分幾類？

凡是以氣相作為流淌相的色譜技術(shù)，通稱為氣相色譜。一般可按以下幾方面分類:

1、按固定相聚集態(tài)分類：（1）氣固色譜：固定相是固體吸附劑，（2）氣液色譜：固定相

是涂在擔(dān)體表面的液體。

2、按過程物理化學(xué)原理分類：（1）吸附色譜：利用固體吸附表面對(duì)不同組分物理吸附性能

的差異達(dá)到分別的色譜。（2）安排色譜：利用不同的組分在兩相中有不同的安排系數(shù)以達(dá)到

分別的色譜。（3）其它：利用離子交換原理的離子交換色譜：利用膠體的電動(dòng)效應(yīng)建立的電

色譜?；利用溫度變更發(fā)展而來的熱色譜等等。

3、按固定相類型分類：11）柱色譜：固定相裝于色譜柱內(nèi)，填充柱、空心柱、毛細(xì)管柱

均屬此類。（2）紙色譜：以濾紙為載體，（3）薄膜色譜：固定相為粉末壓成的薄漠。

4、按動(dòng)力學(xué)過程原理分類：可分為沖洗法，取代法及迎頭法三種。

（四）氣相色譜法簡(jiǎn)潔分析裝置流程是什么？

氣相色譜法簡(jiǎn)潔分析裝置流程基本由四個(gè)部份組成：1、氣源部分，2、進(jìn)樣裝置，3、

色譜樸，4、鑒定器和記錄器.

（五）氣相色譜法的一些常用術(shù)語(yǔ)及基本概念說明？

1、相、固定相和流淌相：一個(gè)體系中的某一勻稱部分稱為相；在色譜分別過程中，固定不

動(dòng)的一相稱為固定相；通過或沿著固定相移動(dòng)的流體稱為流淌相。

2、色譜峰：物質(zhì)通過色譜柱進(jìn)到鑒定器后，記錄器上出現(xiàn)的一個(gè)個(gè)曲線稱為色譜。

3、基線：在色譜操作條件下，沒有被測(cè)組分通過鑒定器時(shí)，記錄器所記錄的檢測(cè)器噪聲隨

時(shí)間變更圖線稱為基線.

4、峰高與半峰寬：由色譜峰的濃度極大點(diǎn)向時(shí)間座標(biāo)引垂線與基線相交點(diǎn)間的高度稱為峰

高，一般以h表示。色譜峰高一半處的寬為半峰寬，一股以xl/2表示。

5、峰面積：流出曲線（色譜峰）與基線構(gòu)成之面積稱峰面積，用A表示。

6、死時(shí)間、保留時(shí)間及校正保留時(shí)間：從進(jìn)樣到惰性氣體峰出現(xiàn)極大值的時(shí)間稱為死時(shí)間，

以td表示。從進(jìn)樣到出現(xiàn)色譜峰最高值所需的時(shí)間稱保留時(shí)間，以tr表示。保留時(shí)間與死

時(shí)間之差稱校正保留時(shí)間，以Vd表示。

7、死體積，保留體積與校正保留體積：死時(shí)間與載氣平均流速的乘枳稱為死體積，以Vd

表示，載氣平均流速以Fc表示，Vd=tdxFc0保留時(shí)間與載氣平均流速的乘積稱保留體積,

以Vr表示，Vr=trxFco

8、保留值與相對(duì)保留值：保留值是表示試樣中各組分在色譜柱中的停留時(shí)間的數(shù)值，通常

用時(shí)間或用將組分帶精彩譜柱所需載氣的體積來表示。以一種物質(zhì)作為標(biāo)準(zhǔn)，而求出其他物

質(zhì)的保留值對(duì)此標(biāo)準(zhǔn)物的比值，稱為相對(duì)保留值。

9、器噪音：基線的不穩(wěn)定程度稱噪音。10、基流：氫焰色譜，在沒有進(jìn)樣時(shí)，儀器本身存

在的基始電流（底電流），簡(jiǎn)稱基流。

（六）?■般選擇載氣的依據(jù)是什么？氣相色譜常用的載氣有哪些？

作為氣相色譜載氣的氣體，要求要化學(xué)穩(wěn)定性好；純度高；價(jià)格便宜并易取得；能適合于所

用的檢測(cè)器。常用的載氣有氫氣、氮?dú)?、氯氣、氨氣、二氧化碳?xì)獾鹊取?/p>

（七）載氣為什么要凈化？應(yīng)如何凈化？

所謂凈化，就是除去載氣中的一些有機(jī)物、微量氧，水分等雜質(zhì)，以提高載氣的純度。不純

凈的氣體作載氣，可導(dǎo)致柱失效，樣品變更，氫焰色譜可導(dǎo)致基流噪音增大，熱導(dǎo)色譜可導(dǎo)

致鑒定器線性變劣等，所以載氣必需經(jīng)過凈化。一般均采納化學(xué)處理的方法除氧，如用活性

銅除氧；采納分子篩、活性碳等吸附劑除有機(jī)雜質(zhì)；采納矽膠，分子篩等吸附劑除水分。

（A）試樣的進(jìn)樣方法有哪些？

色譜分別要求在最短的時(shí)間內(nèi)，以“案子”形式打進(jìn)肯定量的試樣，進(jìn)樣方法可分為：

1、氣體試樣：大致進(jìn)樣方法有四種：（1）注射器進(jìn)樣，（2）量管進(jìn)樣，（3）定體積進(jìn)樣,

（4）氣體自動(dòng)進(jìn)樣。一般常用注射器進(jìn)樣及氣體自動(dòng)進(jìn)樣。注射器進(jìn)樣的優(yōu)點(diǎn)是運(yùn)用敏捷,

方法簡(jiǎn)便，但進(jìn)樣量重復(fù)性較差。氣體自動(dòng)進(jìn)樣是用定量閥進(jìn)樣，重復(fù)性好，且可自動(dòng)操作。

2、液體試樣：一般用微量注射器進(jìn)樣，方法簡(jiǎn)便，進(jìn)樣快速。也可采納定量自動(dòng)進(jìn)樣，此

法進(jìn)行重復(fù)性良好。

3、固體試樣：通常用溶劑將試樣溶解，然后采納和液體進(jìn)樣同樣方法進(jìn)樣。也有用固體進(jìn)

樣器進(jìn)樣的。

（九）簡(jiǎn)述在氣相色譜分析中柱長(zhǎng)、柱內(nèi)徑、柱溫、載氣流速、固定相、進(jìn)樣等操作條

件對(duì)分別的影響？

操作條件對(duì)于色譜分別有很大影響。

1、柱長(zhǎng)，柱內(nèi)徑：一般講，柱管增長(zhǎng)，可改善分別實(shí)力，短則組分偏出的快些；柱內(nèi)徑小

分別效果好，柱內(nèi)徑大處理量大，但柱內(nèi)徑過大，將導(dǎo)致?lián)w不能勻稱地分布在色譜柱中。

分析用柱管一般內(nèi)徑為3—6亳米，柱長(zhǎng)為1—4米。

2、柱溫：是一個(gè)重要的操作變數(shù)，干脆影響分別效能和分析速度。選擇柱溫的依據(jù)是混合

物的沸點(diǎn)范圍，固定液的配比和鑒定器的靈敏度。提高柱溫可縮短分析時(shí)間；降低柱溫可使

色譜柱選擇性增大，有利于組分的分別和色譜柱穩(wěn)定性提高，柱壽命延長(zhǎng)。一般采納等于或

高于數(shù)十度于樣品的平均沸點(diǎn)的柱溫為較合適，對(duì)易揮發(fā)樣用低柱溫，不易揮發(fā)的樣品采納

茴柱溫。

3、載氣流速：載氣流速是確定色譜分別的重要緣由之一。一般講流速高色譜峰狹，反之則

寬些，但流速過高或過低對(duì)分別都有不利的影響。流速要求要平穩(wěn)，常用的流速范圍每分鐘

在10-100亳升之間。

4、固定相：固定相是由固體吸附劑或涂有固定液的擔(dān)體構(gòu)成。（1）固體吸附劑或擔(dān)體粗

細(xì)：一般采納40—6（）目、60—80目、80—100目。當(dāng)用同等長(zhǎng)度的柱子，顆粒細(xì)的分別效

率就要比粗的好些。（2）固定液含量：固定液含量對(duì)分別效率的影響很大，它與擔(dān)體的重

量比一般用15%—25%。比例過大有損于分別，比例過小會(huì)使色譜峰拖尾。

5、進(jìn)樣：一般講進(jìn)樣快，進(jìn)樣量小，進(jìn)樣溫度高其分別效果好。對(duì)進(jìn)液體樣，速度要快,

汽化溫度要高于樣品中高沸點(diǎn)組分的沸點(diǎn)值，一次汽化，保證色譜峰形不致展寬、使柱效高。

當(dāng)進(jìn)樣量在肯定限度時(shí)，色譜峰的半峰寬是不變的。若進(jìn)樣量過多就會(huì)造成色譜柱超載。一

般講柱長(zhǎng)增加四倍，樣品的許可量增加一倍。對(duì)于常規(guī)分析，液體進(jìn)樣展為1-20微升；氣

體進(jìn)樣量為0.1—5亳升。

（十）色譜柱管材料應(yīng)依據(jù)什么原則選擇？常用的柱管是由什么材質(zhì)制成的？

對(duì)色譜柱管材質(zhì)，應(yīng)按如下要求選擇：

1、應(yīng)與固定相、試樣、載氣不起化學(xué)反應(yīng)。

2、要易于加工成型。

3、管內(nèi)壁應(yīng)光滑，橫截面應(yīng)勻稱呈圓形。一般色譜柱管形態(tài)呈U型或螺旋形，大多由銅、

不銹鋼，玻璃等材質(zhì)制成，

（十一）新的色譜柱管（銅或不銹鋼管）應(yīng)怎樣處理后方能運(yùn)用？

新柱管應(yīng)先用稀酸或稀堿（1:1鹽酸或氫氧化鈉）洗滌，以除去油污等臟垢，而后用自來

水沖洗，繼而用蒸儲(chǔ)水沖洗至中性，再用干凈的空氣吹洗并烘干后，即可運(yùn)用了。

（十二）什么叫擔(dān)體？對(duì)擔(dān)體有哪些要求？

擔(dān)體是一種多孔性化學(xué)惰性固體，在氣相色譜中用來支撐固定液。對(duì)擔(dān)體有如下幾點(diǎn)要求：

1、表面積較大，般應(yīng)在0.5—2米/克之間：

2、具有化學(xué)惰性和熱穩(wěn)定性；

3、有肯定的機(jī)械強(qiáng)度，使涂漬和填充過程不引起粉碎；

4、有適當(dāng)?shù)目紫督Y(jié)構(gòu)，利于兩相間快速傳質(zhì)；

5、能制成勻稱的球狀顆粒，利于氣相滲透和填充勻稱性好；

6、有很好的浸潤(rùn)性，便于固定液的勻稱分布。完全滿足上述要求的擔(dān)體是困難的，人們?cè)?/p>

實(shí)踐中只能找由性能比較優(yōu)良的擔(dān)體o

（十三）擔(dān)體分幾類？其特點(diǎn)如何？

通常分為硅藻土和非硅藻土兩大類，每一類又有種種小類。

1、硅藻土類型：（1）白色的：表面積小，疏松，質(zhì)脆，吸附性能小，經(jīng)適當(dāng)處理，可分

析強(qiáng)極性組分；（2）紅色的：有較大的表面積和較好的機(jī)械強(qiáng)度，但吸附性較大。

2、非硅藻土類型：（1）氟擔(dān)體：表面惰性好，可用來分析高極性和腐蝕性物質(zhì)，但裝柱

不易，柱效率低些。（2）玻璃微球：表面積小，用它做擔(dān)體柱溫可以大大降低，而分別完

全且快速。但涂漬困難，柱效低。（3）多孔性高聚物小球：機(jī)械強(qiáng)度高，熱穩(wěn)定性好，吸

附性低，耐腐蝕，分別效率高，是一種性能優(yōu)良的新型色譜固定相。（4）炭分子篩：中性,

表面積大，強(qiáng)度高，祛壽命長(zhǎng)，在微量分析上有無比的優(yōu)越性。（5）活性炭：可以單獨(dú)做

為固定相。（6）沙：主要用于分別金屬。

（十四）一般常用的擔(dān)體有哪幾種？各屬哪類？

101擔(dān)體：為白色硅藻土相體：102擔(dān)體：為白色硅藻土擔(dān)體：celite545：為白色硅藻土相

體；201擔(dān)體：為紅色硅藻土擔(dān)體；6201擔(dān)體：為紅色硅藻土擔(dān)體；C-22保溫磚：為紅色

硅藻上擔(dān)體；chromosorb：為紅色硅藻土擔(dān)體。

（十五）運(yùn)用擔(dān)體為何要進(jìn)行處理？一般處理的方法有哪些？

常用的擔(dān)體表面并非惰性，它具有不同程度的催化作用和吸附性（特殊是固定液含量低時(shí)和

分別極性物質(zhì)時(shí)）造成峰拖尾和柱效下降，保留值變更等影響，因而須要預(yù)處理?，F(xiàn)招一般

處理方法簡(jiǎn)述如卜.：

1、酸洗法：用濃鹽酸加熱處理?yè)?dān)體20—30分鐘，然后用自來水沖洗至中性，再用甲醇漂

洗，烘干備用。此法主要除去擔(dān)體表面的鐵等無機(jī)物雜質(zhì)。

2、堿洗法：用10%的氫氧化鈉或5%的氫氧化鉀一甲酥溶液浸泡或【可流擔(dān)體，然后用水沖

洗至中性，再用甲醉漂洗，烘干備用。堿洗的目的是除去表面的三氧化二鋁等酸性作用點(diǎn)，

但往往在表面上殘留微量的游離堿，它能分解或吸附一些非堿性物質(zhì)，運(yùn)用時(shí)要留意。

3、硅烷化：用硅烷化試劑和擔(dān)體表面的硅醉、硅醛基團(tuán)起反應(yīng)，除去表面的氫鍵結(jié)合實(shí)力，

可以改進(jìn)擔(dān)體的性能。常用的硅烷化試劑有二甲基二氯硅烷和六甲基二硅胺。

4、釉化：把欲處理的擔(dān)沐在2~3%的碳酸鈉一碳酸鉀（1：1）水溶液中浸泡一天，烘干

后先在870度下燃燒3~5小時(shí)，然后升溫到980度燃燒約40分鐘。經(jīng)過這樣處理，擔(dān)體表

面形成一層玻璃化的釉質(zhì)，故稱“釉化擔(dān)體這種擔(dān)體的吸附性能小，強(qiáng)度大，當(dāng)固定液中

加入少量的去尾劑后，能分析如醉、酸等極性較強(qiáng)的物質(zhì)。但對(duì)非極性物質(zhì)柱效能則稍有下

降。此外甲呼和甲酸等物質(zhì)在釉化擔(dān)體上有肯定的不行逆化學(xué)吸附，化定量分析時(shí)應(yīng)予以留

意。

5、其他純化方法：凡是用化學(xué)反應(yīng)來除去活性作用點(diǎn)或用物理復(fù)蓋以達(dá)到純化擔(dān)體表面性

質(zhì)的方法都可以運(yùn)用。

（十六）常用的擔(dān)體目數(shù)為多少？

常用的4—6毫米內(nèi)徑的色譜柱：對(duì)于較長(zhǎng)色譜柱，選用擔(dān)體目數(shù)一般為40—80E；對(duì)

于較短色譜柱選用擔(dān)體目數(shù)一般為80-100目（每英寸內(nèi)的篩孔數(shù)目為目）。

（十七）常用的擔(dān)體怎樣選擇？

各種擔(dān)體，名目繁多。在常用硅藻土擔(dān)體中:紅色擔(dān)體（如6201、201）,可用于非極性或弱

極性物質(zhì)的分別。白色擔(dān)體（如101）可用于極性物質(zhì)或堿性物質(zhì)。釉化紅色擔(dān).體（如301）

可用于中等極性物質(zhì)。硅烷化白色擔(dān)體可用于強(qiáng)極性氫鍵型物質(zhì)如廢水測(cè)定。分別酸性物質(zhì)，

如酚類，要用酸洗處理的田體。分別堿性物質(zhì)，如乙醇胺，要用堿洗處理的擔(dān)體。微晶分析

要用硅烷化的相體。有些特殊的狀況下要用特殊的擔(dān)體,如氟相體分別異氨酸酯類。但是在

一般的常量分析中，對(duì)擔(dān)體可以不必過份講究，甚至如耐火碗粉粒，玻璃珠砂和海沙也可以

運(yùn)用。

（十八）何謂固體固定相？大體可分為幾類？

指干脆裝填到色譜柱中作為固定相的具有活性的多孔性固體物質(zhì)。固體固定相大體可分為三

類：第一類是吸附劑。如：分子篩、硅膠、活性炭、氧化鋁等；其次類是高分子聚合物。如

國(guó)內(nèi)的GDX型高分子多孔微球，國(guó)外Porapak系列等；三類是化學(xué)鍵合固定相。在氣相色

譜中，通常是將固定液涂敷在載體表面上。采納化學(xué)鍵合固定相分析極性或非極性物質(zhì)通常

都能夠得到對(duì)稱峰，柱效很高，固定相的熱穩(wěn)定性也有所改善。

（十九）什么是固定液？對(duì)固定液有哪些要求？

一般是一種高沸點(diǎn)的有機(jī)物的液膜，通過對(duì)不同組份的不同分子間的作用，使組份在色譜

柱中得到分別。對(duì)氣相色譜用的固定液，一般有如下幾點(diǎn)要求：1、在操作溫度下蒸氣壓低,

熱穩(wěn)定性好，與被分析物理或載氣不產(chǎn)生不行逆反應(yīng)；2、在操作溫度下呈液態(tài)，而且粘度

愈低愈好。物質(zhì)在高粘度的固定液中傳質(zhì)速度慢，柱效率因而降低。這確定固定液的最低運(yùn)

用溫度；3、能堅(jiān)固地附著在載體上，并形成勻稱和結(jié)構(gòu)穩(wěn)定的薄層；4、被分別的物質(zhì)必

需在其中有肯定的溶解度，不然就會(huì)很快地被載氣帶走而不能在兩相之間進(jìn)行安排；5、對(duì)

沸點(diǎn)相近而類型不同的物質(zhì)有分別實(shí)力，即保留一種類型化合物的實(shí)力大于另一種類型。這

種分別實(shí)力即是固定液的選擇性。

（二十）固定液的選擇原則畬哪些？

依據(jù)被分別組分和固定液分子間的相互作用關(guān)系，固定液的選擇一般依據(jù)所謂的“相像性原

則”，即固定液的性質(zhì)與被分別組分之間的某些相像性，如官能團(tuán)、化學(xué)鍵、極性、某些化

學(xué)性質(zhì)等，性質(zhì)相像時(shí)，兩種分子間的作用力就強(qiáng)，被分別組分在固定液中的溶解度就大，

安排系數(shù)大，因而保留時(shí)間就長(zhǎng)；反之溶解度小，安排系數(shù)小，因而能很快流精彩譜柱。下

面就不同狀況進(jìn)行探討：a、分別極性化合物，采納極性固定液。這時(shí)樣品各組分與固定液

分子間作用力主要是定向力和誘導(dǎo)力，各組分出峰次序按極性依次，極性小的先出峰，極性

越大，出峰越慢；b、分別非極性化合物，應(yīng)用非極性固定液，樣品各組分與固定液分子間

作用力是色散力，沒有特殊選擇性，這時(shí)各組分按沸點(diǎn)依次山峰，沸點(diǎn)低的先山峰。對(duì)于沸

點(diǎn)相近的異構(gòu)物的分別，效率很低；c、分別非極性和極性化合物的混合物時(shí)，可用極性固

定液，這時(shí)非極性組分先詡出，固定液極性越強(qiáng)，非極性組分越易流出；d、對(duì)于能形成

氫鍵的樣品。如醇、酚、胺和水的分別，一般選擇極性或氫鍵型的固定液，這時(shí)依組分和固

定液分子間形成氨犍實(shí)力大小進(jìn)行分別。”相像相容性原則”是選擇固定液的一般原則，有時(shí)

利用現(xiàn)有的固定液不能達(dá)到滿足的分別結(jié)果時(shí)，往往采納“混合固定液”，應(yīng)用兩種或兩種以

上性質(zhì)各不相同的，按適合比例混合的固定液，使分別有比較滿足的選擇性，又不致使分析

時(shí)間延長(zhǎng)。然而，在實(shí)際工作中選擇固定液往往是參考受料或文獻(xiàn)介紹的實(shí)例來選用固定液

的。

（二十一）混合固定液的處理方法有幾種？

混合固定液的處理方法有三種：1、分別涂漬于擔(dān)體后走混合；2、將固定液混合后再涂潰，

留意這時(shí)所用的固定液都應(yīng)溶解在同一個(gè)溶劑里；3、分別涂漬，分別填裝入按比例長(zhǎng)短的

色譜柱，最終再將它們串接起來。上述三種處理方法，結(jié)果基本相同，但對(duì)于特殊的分別，

有些也會(huì)有差異。

（二十二）常用的固定液涂量為多少合適？

由于固定液含量對(duì)分別效率的影響很大。所以它與擔(dān)體的重量比例，低比例為5%,一般用

15%—25%。液體比例再大，則被分析的樣品在比較厚的液膜上有擴(kuò)散現(xiàn)象，有損于分別；

液體比例太低時(shí)，則由于液膜太薄，擔(dān)體表面上殘余的吸附實(shí)力會(huì)顯示出來，使色譜峰拖尾。

由于低比例能促進(jìn)平衡的建立，可以用較高的載氣流速，所以用低的液體比例，再加上少量

樣品，能縮短分析時(shí)間。對(duì)硅藻土擔(dān)體固定液含量可大些15-30%；由于嬴擔(dān)體表面積較

小，所以最多只能10%;至于玻璃微球由于表面積特小，固定液含量便只能保持在025%

左右。

（二十二）配柱時(shí)常用的固定液溶劑有哪些？選用溶劑的原則是什么？

常用的溶劑有：甲醉、乙醉、乙醛、丙酮、正丁醉、正己烷、石油醛、苯、甲苯和氯仿等等。

選用的原則是：1、溶解性好，2、不與固定液起化學(xué)反應(yīng)，3、沸點(diǎn)低，4、毒性小。

（二十四）配柱時(shí)在擔(dān)體上涂漬固定液采納的常規(guī)方法是什么？

一般配常用的色譜柱，大都采納“常規(guī)”涂漬法，其簡(jiǎn)要操作為：取所需量的固定液，用適量

（能浸過擔(dān)體）的溶劑溶解，將擔(dān)體緩緩倒入其中，隨到隨攪，而后用紅外燈照耀（或用水

浴蒸發(fā)）以趕走溶劑，則固定液就附著于擔(dān)體上了。

（二十五）色譜柱的常用填充方法有哪些？

固定相填充的好壞，將干脆影響柱效率.通常多用泵抽填充法，即把色譜柱的一端塞上玻璃

棉，接真空泵，另一端接一漏斗，在抽吸下加入固定相，邊裝邊敲打色譜柱，至固定相不再

進(jìn)入為止。裝好后，塞上玻璃棉。裝柱要求要填充得勻稱，緊密，切忌有空隙。

紫外分光光度法

一、基本概念

1分光光度法：測(cè)定被測(cè)物質(zhì)在特定波特長(zhǎng)或肯定波長(zhǎng)范圍內(nèi)對(duì)光的汲取度，對(duì)物質(zhì)進(jìn)行定

性、定量分析的方法稱為分光光度法。

2紫外光：波長(zhǎng)在200?400nm范圍內(nèi)的光稱為紫外光。

3可見光：波長(zhǎng)在400?760nm范圍內(nèi)的光稱為可見光。

4紫外-可■見汲取光譜：物質(zhì)汲取紫外線和可見光區(qū)的電磁波而產(chǎn)生的汲取光譜稱為紫外-可

見汲取光譜。

5紫外-可見分光光度法（UV）：利用紫外-可見汲取光譜進(jìn)行定性和定量分析的方法，稱為

紫外-可見分光光度法。紫外-可見分光光度法可用于藥物的鑒別、檢查和含量測(cè)定，是藥品

檢驗(yàn)中應(yīng)用特別廣泛的一類儀器分析方法?！吨袊?guó)藥典》附錄收教有紫外分光光度法。

二、基本原理及組成

1.基本原理

（1）紫外-可見光譜的性質(zhì)：分子的價(jià)電子汲取了光的能量，由低能量的基態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)楦吣芰?/p>

的激發(fā)態(tài)的過程稱為躍遷。被測(cè)物分子的價(jià)電子汲取紫外光或可見光，從低能級(jí)躍遷到高能

級(jí)，產(chǎn)生汲取光譜。

（2）紫外-可見分光光度法的分析步驟：供試品制成溶液，放入比色皿中，置于紫外-可見

分光光度計(jì)，繪得汲取圖譜。

（3）定性依據(jù)：被測(cè)物的結(jié)構(gòu)不同，具電子躍遷方式不同，則產(chǎn)生不同的汲取光譜。依據(jù)

圖譜中的峰位（即最大汲取波長(zhǎng)入max）、谷位（即最小汲取波長(zhǎng)大min）、最大汲取波特長(zhǎng)的

汲取系數(shù)（即El%lcn認(rèn)max）、有無肩峰、特定波特長(zhǎng)的汲取度比值等，可以對(duì)被測(cè)物進(jìn)行

定性。

（4）定量依據(jù)-Lambert-Beer定律:A=-lgT=-lg（I/IO）=ECL

式中，A為供試液的汲取度；T為透光率；E為被測(cè)物的汲取系數(shù)；C