ICS65.020.99CCSB0535DB35/T2021—2021巨菌草固氮菌肥料生產技術規(guī)范TechnicalcodeforproductionofPennisetumgiganteumz.x.Linnitrogenfixingbacterialfertilizer2022-02-23實施福建省市場監(jiān)督管理局發(fā)布IDB35/T2021—2021本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請注意本文件的某些內容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構不承擔識別專利的責任。本文件由福建農林大學提出。本文件由福建省農業(yè)農村廳歸口。本文件起草單位：國家菌草工程技術研究中心、福建省標準化研究院、龍巖學院、儋州牧春綠色生態(tài)農業(yè)開發(fā)有限公司、陜西鄜州神鹿生態(tài)產業(yè)有限公司。本文件主要起草人：林占熺、林孟朝、魯國東、梁靜、林冬梅、陳光華、林標聲、程曉明、李晶、林興生、林輝、葉文雨、羅海凌、余世葵、張雙雙、張麗麗、羅宗志、王可楠、林才偉。DB35/T2021—20211巨菌草固氮菌肥料生產技術規(guī)范本文件規(guī)定了巨菌草固氮菌肥料的生產車間、菌種、原輔料、生產流程和生產技術要點。本文件適用于巨菌草固氮菌肥料的生產。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內容通過文中的規(guī)范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB3838—2002地表水環(huán)境質量標準GB/T35885紅糖HG/T2843化肥產品化學分析常用標準滴定溶液、標準溶液、試劑溶液和指示劑溶液NY411固氮菌肥料NY/T1113微生物肥料術語3術語和定義NY411、NY/T1113界定的以及下列術語和定義適用于本文件。3.1隸屬于禾本科、狼尾草屬，具有適應性廣、抗逆性強、產量高、粗蛋白和糖分含量高的優(yōu)良菌草品種。3.2巨菌草固氮菌肥料JUNCAOnitrogenfixingbacterialfertilizer將從巨菌草中分離出來的固氮菌制備成菌液，與菌草、菌草菌糟等物質混合發(fā)酵而成的固氮菌肥料。4生產車間4.1發(fā)酵車間與吸附等后處理車間距離適當，相對隔離，有密閉且可以滅菌的傳輸通道。4.2粉碎車間與菌種車間、發(fā)酵車間相對隔離。4.3發(fā)酵菌種的儲藏間、無菌操作間與生產車間相對隔離。4.4發(fā)酵生產關鍵性車間采用雙路供電或備用一套發(fā)電機。5菌種2DB35/T2021—20216原輔料采用拔節(jié)期到生長一年內的巨菌草，收集其莖、葉；經低溫烘干和粉碎后，過80～100目篩，儲存、待用。6.2菌草菌糟收集無雜菌、無霉變的巨菌草栽培食藥用菌菌糟，經低溫烘干和粉碎后，過80～100目篩，收集、儲存、待用。6.3水固氮菌擴培、發(fā)酵用水應符合GB3838—2002中Ⅲ類水質要求，冷卻水及其他用水應符合GB3838—2002中Ⅳ類水質要求。6.4紅糖應符合GB/T35885的規(guī)定。6.5標準滴定溶液、試劑溶液和指示劑溶液應符合HG/T2843的規(guī)定。7生產流程巨菌草固氮菌肥料的通用生產環(huán)節(jié)包括：菌株活化、搖瓶培養(yǎng)、種子罐發(fā)酵培養(yǎng)、擴大生產、菌液制備、營養(yǎng)液制備、物料粉碎、混合、裝袋發(fā)酵等，詳見圖1。DB35/T2021—20213圖1巨菌草固氮菌肥料生產流程8生產技術要點8.1菌株活化從菌種保存庫中，取出菌株，分別接種到相應的固體平板培養(yǎng)基上，并置于37℃恒溫條件下培養(yǎng)48h～72h。菌株活化所需培養(yǎng)基成分按照附錄A中A.1的規(guī)定。8.2搖瓶培養(yǎng)取500mL～1000mL液體培養(yǎng)基裝入搖瓶中，接入活化后的菌株，置于37℃恒溫條件下振蕩培養(yǎng)48h～72h后獲得的菌液即為種子。搖瓶培養(yǎng)所需培養(yǎng)基成分按照附錄A中A.2的規(guī)定。8.3種子罐發(fā)酵培養(yǎng)將搖瓶培養(yǎng)菌液接種入裝有液體培養(yǎng)基的種子罐中，置于37℃恒溫條件下培養(yǎng)36h～72h。種子罐發(fā)酵培養(yǎng)基成分按照附錄A中A.3的規(guī)定。DB35/T2021—202148.4擴大生產將種子罐中的菌種按5%比例接種至菌液發(fā)酵罐中，置于37℃恒溫條件下攪拌培養(yǎng)48h～96h，進行擴大生產。8.5菌液制備將擴大生產后的變棲克雷伯氏菌、玉米聯(lián)合固氮菌按1:1比例配制成菌液。菌液中固氮菌有效活菌數(shù)為(2.6～4.6)×108CFU/mL。8.6營養(yǎng)液制備取紅糖30kg～50kg、過磷酸鈣10kg～20kg、硫酸鎂0.5kg～1.5kg，加水定容至1000kg，制成營養(yǎng)液，待用。8.7混合先將巨菌草、菌草菌糟等混合均勻，再將菌液、營養(yǎng)液等加入培養(yǎng)基中攪拌均勻，混合的均勻度變異系數(shù)（CV）應不大于7%。各種成分配比要求見表1。表1物料各種成分配比（按每1000kg計）LL%8.8裝袋發(fā)酵8.8.1應選擇單向透氣、帶呼吸閥的聚乙烯（PE）塑料袋作為菌肥發(fā)酵袋，要求見表2。表2發(fā)酵袋要求DB35/T2021—20215表2發(fā)酵袋要求（續(xù)）8.8.2采用堆積發(fā)酵，發(fā)酵袋高度不超過5層，溫度控制在25℃~32℃之間，時間5d～10d。待發(fā)酵袋中物料顏色變深褐色，有一定的酸香味，無異臭味，即為成品。DB35/T2021—20216不同階段菌種培養(yǎng)基配比A.1活化培養(yǎng)基菌株活化培養(yǎng)基成分見表A.1。表A.1菌株活化培養(yǎng)基成分O