生化藥物分析及新進(jìn)展楊化新標(biāo)準(zhǔn)化研究中心中國藥品生物制品檢定所

內(nèi)容提綱一、生化藥品概述二、生化藥物分析與質(zhì)控特點(diǎn)三、各類生化藥物分析概況四、生化藥物分析研究熱點(diǎn)一、生化藥品概述《中華人民共和國藥品管理法》（1984年9月20日第五屆全國人大常委會第7次會議通過。2001年2月28日第九屆全國人大常委會第20次會議修訂，2001年12月1日起施行。）第十章第一百零二條藥品，是指用于預(yù)防、治療、診斷人的疾病，有目的地調(diào)節(jié)人的生理機(jī)能并規(guī)定有適應(yīng)癥或者功能主治、用法和用量的物質(zhì)，包括中藥材、中藥飲片、中成藥。化學(xué)原料藥及其制劑、抗生素、生化藥品、放射性藥品、血清、疫苗、血液制品和診斷藥品等。輔料，是指生產(chǎn)藥品和調(diào)配處方時所用的賦性劑和附加劑。第二章第十條

藥品必須按照國家藥品標(biāo)準(zhǔn)和國務(wù)院藥品監(jiān)督管理部門批準(zhǔn)的生產(chǎn)工藝進(jìn)行生產(chǎn)，生產(chǎn)記錄必須完整準(zhǔn)確。第二章第十一條生產(chǎn)藥品所用的原料、輔料，必須符合藥用要求。第二章第十二條藥品生產(chǎn)企業(yè)必須對其生產(chǎn)的藥品進(jìn)行質(zhì)量檢驗(yàn)；不符合國家藥品標(biāo)準(zhǔn)的，不得出廠。生化藥品的定義與分類

一般系指從動、植物及微生物中提取、分離、純化，或用生物化學(xué)半合成或用現(xiàn)代技術(shù)制得的具有生物化學(xué)活性的一類用于臨床治療的藥物。氨基酸及其衍生物、肽與蛋白及其激素、酶與輔酶、核酸與核苷酸及其衍生物、多糖、脂類；

利用動物的臟器或其他組織、器官，經(jīng)過粗加工，未完全分離精制，其有效成分尚未完全搞清楚，這一類混合的多組分生化藥物在臨床上作為輔助治療藥物，確有療效，因毒副作用低，易為人體吸收等特點(diǎn)。尤其對心腦血管病、風(fēng)濕病、腫瘤及病毒疾患等有其獨(dú)特的治療效果，長期被醫(yī)生和患者所接受?！端幤纷怨芾磙k法》(修訂)

（國家食品藥品監(jiān)督管理局令第28號，于2007年7月10日正式公布，并將于2007年10月1日起施行。）第二章第二十九條申請人獲得藥品批準(zhǔn)文號后，應(yīng)當(dāng)按照國家食品藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)的生產(chǎn)工藝生產(chǎn)。藥品監(jiān)督管理部門根據(jù)批準(zhǔn)的生產(chǎn)工藝和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)對申請人的生產(chǎn)情況進(jìn)行監(jiān)督檢查。第十一章第一節(jié)第一百三十六條國家藥品標(biāo)準(zhǔn)，是指國家食品藥品監(jiān)督管理局頒布的《中華人民共和國藥典》、藥品注冊標(biāo)準(zhǔn)和其他藥品標(biāo)準(zhǔn)，其內(nèi)容包括質(zhì)量指標(biāo)、檢驗(yàn)方法以及生產(chǎn)工藝等技術(shù)要求。藥品注冊標(biāo)準(zhǔn)，是指國家食品藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)給申請人特定藥品的標(biāo)準(zhǔn)，生產(chǎn)該藥品的藥品生產(chǎn)企業(yè)必須執(zhí)行該注冊標(biāo)準(zhǔn)。藥品注冊標(biāo)準(zhǔn)不得低于中國藥典的規(guī)定。相關(guān)指導(dǎo)原則（SFDA新藥審評中心）化學(xué)藥物原料藥制備和結(jié)構(gòu)確證研究技術(shù)指導(dǎo)原則化學(xué)藥物質(zhì)量控制分析方法驗(yàn)證技術(shù)指導(dǎo)原則生物組織提取制品和真核細(xì)胞表達(dá)制品病毒安全性評價技術(shù)評審一般原則化學(xué)藥物穩(wěn)定性研究技術(shù)指導(dǎo)原則化學(xué)藥物質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)建立的規(guī)范化過程技術(shù)指導(dǎo)原則生物制品質(zhì)量控制分析方法驗(yàn)證技術(shù)評審一般原則治療用生物制品非臨床安全性評價技術(shù)評審一般原則二、生化藥物分析與質(zhì)控特點(diǎn)—動、植物組織、微生物提取單組分多組分—微生物發(fā)酵與提純單組分多組分—化學(xué)合成與提純單組分—基因工程菌或細(xì)胞培養(yǎng)與提純單組分(重組DNA技術(shù))原料來源：動、植物組織和微生物、哺乳動物細(xì)胞質(zhì)控要求：若要保證終產(chǎn)品質(zhì)量安全有效，必須對原材料、培養(yǎng)過程和純化工藝過程的中間體、最終產(chǎn)品進(jìn)行全面的質(zhì)量分析與控制。（一）單一成分多組分混合物1．肽類混合物：科博肽注射液及粉針、注射用純化胸腺活性多肽、縮宮素注射液（豬牛腦垂體后葉，含升壓素）2．蛋白質(zhì)類混合物：人尿、蛇毒、蜂毒提取物、口服水解蛋白、口服水解蛋白粉（低苯丙氨酸）、水解蛋白口服溶液、蜂毒注射液、琥珀酰明膠注射液、細(xì)胞色素C注射液（豬或牛心，沒控制純度，細(xì)胞代謝改善藥）、注射用細(xì)胞色素C、注射用胰蛋白酶（豬、牛、羊胰）、注射用糜蛋白酶（豬、牛胰）、注射用玻璃酸酶（哺乳動物睪丸，水解粘多糖）、注射用門冬酰氨酶、注射用尿激酶（新鮮人尿，高分子UK大于90%）、注射用絨促性素(孕婦女尿，hCG)、注射用尿促性素（絕經(jīng)婦女尿，hMG=FSH,LH）、注射用抑肽酶（牛胰、牛肺）、硫酸魚精蛋白注射液（魚新鮮成熟精子，抗肝素藥）3．多糖類混合物：低分子肝素注射液、肝素鈉注射液（硫酸氨基葡聚糖鈉鹽）、右旋糖苷40氯化鈉注射液（葡萄糖聚合物）、右旋糖苷20葡萄糖注射液、右旋糖苷鐵注射液、右旋糖苷20氯化鈉注射液、右旋糖苷70葡萄糖注射液、右旋糖苷70氯化鈉注射液、右旋糖苷40葡萄糖注射液、右旋糖苷（蔗糖經(jīng)腸膜狀明串珠菌L-M-1226菌株發(fā)酵產(chǎn)生高分子葡萄糖聚合物，重均分子量：2、4、7萬）4．脂類混合物：脂肪乳注射液、多烯磷脂酰膽堿及其膠囊、海狗油W-3不飽和脂肪酸及膠丸、卵磷脂及其片劑（卵磷脂含有磷脂酰膽堿和磷脂酰乙醇胺以及磷）、5．核酸與多核苷酸類混合物：聚脫氧核苷酸注射液、核糖核酸I及其粉針、核糖核酸II及其粉針、核糖核酸III及其粉針、脫氧核苷酸鈉及其粉針、片劑和注射液、注射用抗腫瘤免疫核糖核酸、注射用抗乙肝免疫核糖核酸、轉(zhuǎn)移因子免疫核糖核酸等。（二）多成分混合物1．氨基酸與肽類混合物：腦蛋白水解物(注射液，注射用粉針)、蘆丁腦蛋白水解物注射液、豬心提取物原液及其注射液、小牛血去蛋白提取物注射液及滴眼液、豬血去蛋白提取物原液及其注射液、氨肽素、氨碘肽滴眼液、眼氨肽注射液和滴眼液、肝水解肽注射液、肝浸膏及其片和復(fù)方膠囊、骨肽注射液、鹿瓜多肽注射液、促肝細(xì)胞生長素及其注射用粉針、小牛血去蛋白提取物注射液及其腸溶片（愛維治）2．氨基酸、核苷酸與肽類混合物：小牛脾提取物溶液及其注射液、牛胎肝提取物及其復(fù)方片劑、腦苷肌肽注射液、肌氨肽苷注射液、注射用心肌肽素3．肽類與其他成分混合物：胸腺肽溶液及其注射液、注射用胸腺肽、胸腺肽氯化鈉注射液、甲狀腺素粉及其片劑，垂體后葉粉及其注射液、尿多酸肽注射液臟器提取的多組分生化藥物質(zhì)量控制1）研究建立原材料的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，包括動物的種屬、健康狀況、飼養(yǎng)環(huán)境（封閉飼養(yǎng)）、年齡、采集時間和采集方法等。2）進(jìn)行動物源性病毒的滅活和驗(yàn)證，研究建立原液（或半成品）的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。3）制訂成品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。只有嚴(yán)格控制原材料的來源和工藝過程，再加上原液和/或終產(chǎn)品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，才有可能較好的控制產(chǎn)品的質(zhì)量，保證臨床應(yīng)用的安全和有效?；蚬こ趟幬镔|(zhì)量控制生產(chǎn)過程有其固有的易變性—生物材料—生物學(xué)過程：發(fā)酵、細(xì)胞培養(yǎng)、分離、純化目的產(chǎn)物—化學(xué)成分多肽和蛋白質(zhì)等生物大分子—生物活性容易受酸、堿、高溫甚至是常溫的影響—化學(xué)結(jié)構(gòu)比較復(fù)雜—成品特點(diǎn)比活性高、含量較低，有些須加蛋白做穩(wěn)定劑無法在成品中對制品進(jìn)行全面的質(zhì)量檢定，為有效地控制產(chǎn)品質(zhì)量，必須對原液進(jìn)行檢定。三、各類生化藥物分析概況（一）氨基酸及其衍生物鑒別：茚三酮顯色法：因所有的氨基酸均能與茚三酮顯藍(lán)紫色。紅外吸收光譜：與中國藥典的標(biāo)準(zhǔn)圖譜比較定性。紫外吸收圖譜：酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸。高效液相色譜法：比較供試品與對照品的保留時間是否一致特殊雜質(zhì)檢查：其他氨基酸：薄層色譜法—限量熱原—細(xì)菌內(nèi)毒素：GlyAlaMetValIleLeuTheSerTyrPhePro乙酸賴氨酸鹽酸賴氨酸比色法測定抗氧劑：亞硫酸鹽：亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、亞硫酸氫鉀、焦亞硫酸鉀、焦亞硫酸鈉

亞硫酸鹽在酸性條件下與含甲醛的堿性品紅溶液發(fā)生反應(yīng)，生成的紫紅色絡(luò)合物在578nm波長處有最大吸收。含量測定：原料藥：非水酸堿滴定法溶劑—冰醋酸；標(biāo)準(zhǔn)滴定液—高氯酸確定終點(diǎn)—電位法或指示劑法復(fù)方氨基酸制劑：高效液相色譜法衍生試劑：異硫氰酸苯酯（PITC）；鄰苯二甲醛（OPA）、9-芴甲氧基羰酰氯（Fmoc）；6-氨基喹啉-N-羥基琥珀酰亞胺基氨基甲酸酯(AQC)；2,4-二硝基氟苯(DNFB)；茚三酮（Ninhydrin）；氨基酸分析方法柱前衍生法：①PITC衍生法②OPA-FMOC衍生法③AQC衍生法④DNFB衍生法柱后衍生法:①茚三酮衍生檢測法②OPA衍生檢測法直接分析法：①電化學(xué)檢測法②蒸發(fā)光散射檢測法方法及靈敏度的比較：1柱后茚三酮衍生的自動分析儀法（50-100ng）2柱后OPA衍生的自動分析儀法（15ng）3柱前異硫氰酸苯酯衍生法（100-150ng）4柱前OPA衍生法（3ng）5柱前AQC衍生法（10ng）6柱前2.4-二硝基氟苯衍生法（100ng）7DABS-Cl衍生法（10ng）8柱前FMOC-Cl法（2ng）（二）核酸類藥物鑒別：采用顯色或沉淀反應(yīng)鑒別堿基、核糖、磷酸的存在。三磷酸腺苷二鈉：磷酸根；胞磷膽堿鈉：核糖；肌苷：次黃嘌呤UV法：核酸類混合物：核酸水解物溶液、核糖核酸I(豬肝)溶液、核糖核酸II(牛胰)溶液、核糖核酸III（豬脾）溶液的最大吸收波長均為260±2nm.。輔酶I：由D-呋喃核糖吡啶氫氧化物與二磷酸腺苷形成的鈉鹽。其乙醇Tris溶液在260nm.波長處有最大吸收，加入醇脫氫酶溶液后，該溶液的最大吸收波長變?yōu)?40nm。RP-HPLC法：三磷酸腺苷二鈉混合物：以含有四丁基溴化銨氫氧化鈉甲醇的溶液為流動相，柱溫為35℃，檢測波長259nm。出峰順序依次為一磷酸腺苷、二磷酸腺苷、三磷酸腺苷。

有關(guān)物質(zhì)檢查：主要是一些降解產(chǎn)物。采用RP-HPLC法檢測控制。其他有關(guān)物質(zhì)常采用TLC法檢測。次黃嘌呤：肌苷的降解產(chǎn)物，鳥嘌呤：阿昔洛韋的降解產(chǎn)物。胞磷膽堿鈉：RP-HPLC主成分自身對照法檢測控制，泛昔洛韋：檢測波長為221nm。利巴韋林：氫型陽離子HPLC法。核糖核酸I：脫氧核糖核酸，采用對照品限值比色法測定。含量測定：采用UV法、RP-HPLC法；對照品外標(biāo)法（三）多糖類藥物鑒別：顯色反應(yīng)、藥理活性性狀檢查：溶解度、比旋度和粘度的測定，多糖的分子量及分子量分布：只是代表相似鏈長的平均分布，采用凝膠色譜法測定。色譜柱：與供試品分子大小相適應(yīng)；流動相：通常為水或緩沖液，其pH值不應(yīng)超過填充劑的耐受范圍，可加入適量的有機(jī)溶劑，但濃度不應(yīng)超過20%；流速：以0.5-1.0ml/min為宜；檢測器：示差折光檢測器。對照品：分子量范圍及顆粒形狀應(yīng)與供試品匹配。數(shù)據(jù)處理：經(jīng)適宜的GPC軟件求得相關(guān)參數(shù)。多糖的含量測定：直接測定多糖本身：如高效液相色譜法和酶法，這需要多糖的純品和特定的酶。利用組成多糖的單糖縮合反應(yīng)：苯酚-硫酸法、蒽酮-硫酸法；原理：多糖在濃硫酸水合產(chǎn)生的高溫下迅速水解，產(chǎn)生單糖，單糖在強(qiáng)酸條件下與苯酚反應(yīng)生成橙色衍生物。在波長490nm左右處和一定濃度范圍內(nèi)，該衍生物的吸收值與單糖濃度呈線性關(guān)系，從而可用比色法測定其含量，單糖對照品：盡量采用與其多糖組成一致或?yàn)楹枯^高的單糖，這樣測得的值較準(zhǔn)確。需要強(qiáng)調(diào)的是，這種方法所測定的是總糖的含量而不是總多糖的含量，因此首先應(yīng)測定樣品中游離的單糖含量，然后將總糖的含量減去游離單糖的含量，即為總多糖的含量。3，5-二硝基水楊酸比色法（DNS法）：它是在堿性條件下顯色，較準(zhǔn)確測定還原糖與總糖的含量從而求出多糖的含量，可消除還原性雜質(zhì)的干擾。（四）脂類藥物鑒別：多采用化學(xué)鑒別試驗(yàn)，也有采用TLC、HPLC和GC法。卵磷脂（含有磷脂酰膽堿和磷脂酰乙醇胺以及磷）：化學(xué)反應(yīng)鑒別；多烯酸乙酯、角鯊烯：GC法比較供試品與對照品的保留時間；大豆磷脂粉（含有磷脂酰膽堿和磷脂酰乙醇胺）：TLC法比較供試品與對照品的主斑點(diǎn)顏色與位置是否相同。前列地爾：比較供試品與對照品的RP-HPLC保留時間、IR光譜是否一致。脂類藥物對照品的結(jié)構(gòu)確認(rèn)：GC-MS、UV、IR、1H-NMR、13C-NMR、31P-NMR進(jìn)行分析。特有項(xiàng)目檢查：性狀呈油狀液體時，常需要進(jìn)行溶解性、酸值、碘值、折光率、相對密度、過氧化值等項(xiàng)目的分析。水分和揮發(fā)物、熾灼殘渣、丙酮不溶物、乙醚不溶物、乙醇可溶物、不皂化物等，還有有機(jī)溶劑殘留。有關(guān)物質(zhì)：如溶血磷脂酰膽堿。含量測定：氣相色譜法、定氮、定磷，HPLC外標(biāo)法。多烯磷脂酰膽堿：采用丙二醇鍵合硅膠為填料的色譜柱，以一定比例的正己烷、異丙醇、冰醋酸、三乙胺為流動相；用蒸發(fā)光散射檢測器，柱溫超過50℃。梯度洗脫。（五）肽、蛋白、酶類藥物

肽、蛋白、酶的常用分析方法鑒別純度檢查含量測定活力測定RP-HPLCHPSECIEF肽圖HPSECSDSRP-HPLCRP-HPLCHPSEC體內(nèi)體外底物：天然合成含量與活性相關(guān)性肽圖譜測定與分析:裂解-分離-檢測裂解：化學(xué)法-溴化氫（Met羧基端，酸性條件）；5，5-二硝基苯甲酸（Cys,pH8.0）；酶法--專一性蛋白水解酶

胰蛋白酶：Arg和Lys羧基端，對Arg-Pro,Lys-Pro健無作用；胰凝乳蛋白酶：芳香族aa羧基端；內(nèi)肽酶：Lys羧基端；

V8蛋白酶：Asp和Glu羧基端（PBS，pH8.0）;Asp-X（乙酸BSpH4.0）

梭菌蛋白酶：Arg羧基端；凝血酶：專一裂解Arg-Gly鍵；

分離：HPLC：C18C8HPCE：膠束，聚焦，區(qū)帶，凝膠模式，SDS：15%膠濃度，Tricine-三甲基甘氨酸檢測：紫外檢測器214nm肽圖譜質(zhì)譜檢測器肽段分子量質(zhì)量肽圖

肽、蛋白類藥物理化性質(zhì)分析分子量測定一般采用還原型SDS法測定，測定誤差約為10%；對小分子蛋白和多肽如重組人EGF用該法測定誤差更大,應(yīng)采用質(zhì)譜法進(jìn)行分析。采用凝膠過濾（分子篩）法測定蛋白分子量，但由于其誤差比SDS大，目前已很少應(yīng)用。等電點(diǎn)測定不易用銀染或考馬斯亮藍(lán)染色的蛋白質(zhì)制品，可用毛細(xì)管電泳（CE）進(jìn)行分析，該法具有簡便，快速，靈敏度和分辯率高等特點(diǎn)，但儀器價格昂貴?？乖苑治雒庖哂≯E法(Westernb1ot)、點(diǎn)免疫法、免疫電泳法、免疫擴(kuò)散法、抗體中和活性抑制法比旋度是肽類原料藥質(zhì)控的重要項(xiàng)目，通過測定比旋度來區(qū)別和檢查肽類原料藥的純雜程度。肽的比旋度與所用溶劑劑及其溶液的濃度密切相關(guān)。醋酸或酸根離子測定醋酸含量測定方法有RP-HPLC法、氣相色譜法酸根離子含量測定方法主要采用離子色譜法。含量測定Lowry法HPLC法純度分析非還原型SDS法SEC-HPLCRP-HPLCIC-HPLC微量雜質(zhì)和外源污染物檢測宿主細(xì)胞的殘余蛋白雙抗體夾心ELISA宿主細(xì)胞DNA測定熒光分析鼠原型IgG含量外源污染物分析病毒支原體其它雜質(zhì)分析蛋白A、小牛血清、殘余抗生素測定蛋白質(zhì)和肽中氨基酸的水解方法含有苯酚的酸水解法：即含有0.1%-1%苯酚的6mol/L鹽酸溶液，加入苯酚是為了防止酪氨酸的鹵化。巰基乙酸（TGA）水解法：可防止色氨酸的氧化。三氟乙酸碘苯（BTI）水解法：天冬酰胺和谷氨酰胺。過甲酸氧化法：使半胱氨酸轉(zhuǎn)變?yōu)榛腔彼?。體外細(xì)胞培養(yǎng)測定法能促進(jìn)某種細(xì)胞生長EGF(3T3細(xì)胞)bFGF(3T3細(xì)胞)hPTH

(UMR-106細(xì)胞)促肝細(xì)胞生長素(SSMMC-7721細(xì)胞)為某種細(xì)胞株生長依賴G-CSF（NFS-60細(xì)胞）GM-CSF(TF1細(xì)胞)IL-2(CTLL-2細(xì)胞)IL-11(T10細(xì)胞)IL-3和GM-IL-3融合蛋白(Mo7E,TF-1細(xì)胞)IL-6(B9-11,7TD1細(xì)胞)殺傷細(xì)胞作用TNF（L929細(xì)胞）體內(nèi)測定法FSH采用幼大鼠卵巢增重法hLH幼大鼠精囊增重法hCG幼小鼠子宮增重法Insulin比較標(biāo)準(zhǔn)品與供試品引起小鼠血糖下降的作用hGH幼齡去垂體大鼠體重增加和脛骨骨骺板寬度增加的程度酶類藥物的鑒別：酶的化學(xué)本質(zhì)為蛋白質(zhì)，而且具有專一性作用于合成底物或天然底物的特性。SDS法測定分子量、鑒別對照品與供試品的遷移率是否一致，如降纖酶。SE-HPLC和RP-HPLC法鑒別對照品與供試品的保留時間是否一致，如門冬酰胺酶。凝塊裂解法鑒別溶栓作用，如一些溶栓酶；利用酶作用于合成的生色底物產(chǎn)生顏色來鑒別，如糜蛋白酶、胰蛋白酶。抑肽酶是蛋白酶抑制劑，它不裂解胰蛋白酶的底物（對甲苯磺酰L-精氨酸甲酯鹽酸鹽），故不產(chǎn)生顏色反應(yīng)。酶活性測定：一般以其生物學(xué)作用為基礎(chǔ)，選擇特定的底物，在一定的條件下測定。酶活性測定：纖溶酶原激活劑（UK、SK、tPA）——凝塊裂解法這些酶能激活纖維蛋白溶酶原，使其轉(zhuǎn)化為纖溶酶，纖溶酶可將蛋白塊（由纖維蛋白在凝血酶的作用下形成）水解成可溶性的小分子多肽。當(dāng)凝塊溶解時，凝塊中的氣泡均上升，記錄氣泡上升的時間，將標(biāo)準(zhǔn)品的時間與濃度單位取雙對數(shù)后，再進(jìn)行線性回歸，將樣品的時間取對數(shù)，帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線，即可查得樣品的效價單位。葡萄糖腦苷脂酶——合成底物法利用GCR底物類似物p-硝基苯基-β-D-吡喃葡糖苷，經(jīng)r-GCR降解后產(chǎn)生生色基團(tuán)p-硝基苯基（pNP），在波長400nm處有吸收，通過一定反應(yīng)時間內(nèi)該吸收度的變化可計算出酶活性。通常定義37℃下1分鐘內(nèi)水解1μmol底物所需的r-GCR量為一個活性單位（1U）。精氨酸酶：精氨酸經(jīng)精氨酸酶、尿素酶兩步作用產(chǎn)生氨，利用

-酮戊二酸、谷氨酸脫氫酶、

-NADPH吸收產(chǎn)生的氨，使得

-NADPH濃度降低，然后測定

-NADPH在340nm處吸光度的變化，計算精氨酸酶活性。尿酸氧化酶：尿酸在尿酸氧化酶的作用下分解成為尿囊素，尿酸最大紫外吸收波長為292nm，而尿囊素為224nm，在一定范圍內(nèi)尿酸在292nm的吸收值與其濃度成正比，可用分光光度法進(jìn)行尿酸的定量測定。酶活性（EAU）單位定義：30℃，pH8.9，每分鐘將1μmol尿酸氧化為尿囊素所需的酶量。葡萄糖腦苷脂酶（伊米苷酶）：伊米苷酶可水解合成底物p-硝基苯基-β-D-吡喃葡糖苷（pNP-Glc），產(chǎn)生的生色基團(tuán)p-硝基酚在堿性pH條件下，其濃度可通過400nm波長下的光吸收度來測定。1個活性單位