抗氧化酶（SOD、POD、CAT）活性測(cè)定方法超氧化物歧化酶（SOD）活性測(cè)定（氮藍(lán)四唑光化還原法）1、試劑的配制（1）0.05mol/L磷酸緩沖液(PBS，pH7.8)：A母液：0.2mol/L磷酸氫二鈉溶液:取Na2HPO4·12H2O（分子量358.14）71.7g；B母液：0.2mol/L磷酸二氫鈉溶液：取NaH2PO4·2H2O（分子量156.01）31.2g。分別用蒸餾水定容到1000ml。0.05mol/LPBS（pH7.8）的配制：分別取A母液(Na2HPO4)228.75ml，B母液(NaH2PO4)21.25ml，用蒸餾水定容至1000ml。加入10gPVP（聚乙烯吡咯烷酮）參考文獻(xiàn)：李合生主編：植物生理生化實(shí)驗(yàn)原理和技術(shù).高等教育出版社，2000：267～268。（2）130mmol/L甲硫氨酸溶液：取1.399gMet用磷酸緩沖液（pH7.8）定容至100ml。網(wǎng)上說(shuō)定容到100ML我也不懂。拜托（3）100μmol/LEDTA-Na2溶液：取0.03721gEDTA-Na2用磷酸緩沖液定容至1000ml；（4）100μM核黃素溶液：取0.0075g核黃素用蒸餾水定容至100ml，避光保存，隨用隨配，并稀釋10倍 （5）750μmol/L氮藍(lán)四唑（NBT）溶液：稱取0.06133gNBT用磷酸緩沖液定容至100ml避光保存；酶液制備：取一定部位的植物葉片（視需要定，去葉脈）0.5g于預(yù)冷的研缽中，加2ml磷酸緩沖液在冰浴下研磨成漿，加緩沖液使終體積為10ml。取5ml于10000r/min下離心10min，上清液即為SOD粗提液。提取酶液時(shí)如何保存;如果沒(méi)有測(cè)完的需要放在4℃的冰箱里。2、酶活性測(cè)定2．顯色反應(yīng)取試管（要求透明度好）5支，3支為樣品測(cè)定管，1支為對(duì)照管，另外1支作為空白，按表39-1加入各溶液?；靹蚝髮⒖瞻坠苤冒堤帲渌鞴苡?000lx日光燈下反應(yīng)20min（要求各管受光情況一致，反應(yīng)室的溫度高時(shí)時(shí)間可適當(dāng)縮短，溫度低時(shí)時(shí)間可適當(dāng)延長(zhǎng)）。表39-1各溶液加入量試劑（酶）用量(ml)終濃度（比色時(shí)）0.05mol/L磷酸緩沖液130mmol/LMet溶液750μmol/LNBT溶液100μmol/LEDTA-Na2液20μmol/L核黃素酶液蒸餾水總體積1.50.30.30.30.30.050.253.0

13mmol75μmol10μmol2.0μmol空白和對(duì)照管加緩沖液代替酶液

加核黃素時(shí)記得要快并且要避光，SOD活性測(cè)定與計(jì)算至反應(yīng)結(jié)束后，以不照光的作空白，分別測(cè)定其它各管560nm波長(zhǎng)下的消光度值，已知SOD活性單位以抑制NBT光化還原的50%為一個(gè)酶活性單位表示。按下式計(jì)算SOD活性：SOD總活性=式中SOD總活性以每克鮮重酶單位表示；比活力單位以酶單位/mg蛋白表示；A0—照光對(duì)照管的消光度值；AS—樣品管的消光度值；VT—樣液總體積（ml）；V1—測(cè)定時(shí)樣品用量（ml）；FW—樣重（g）；蛋白質(zhì)濃度單位為每克鮮重含蛋白毫克數(shù)(mg/g)。用熒光燈20w照20min可以嗎不可以,二、POD、CAT酶活性的測(cè)定粗酶液制備同SOD。過(guò)氧化物酶（POD）活性測(cè)定（愈創(chuàng)木酚法）（1）試劑配制：100mmol/L磷酸緩沖液(pH6.0)：分別取A母液(Na2HPO4)61.5ml和B母液(NaH2PO4)438.5ml混勻即為1000mlP