2025年學(xué)校實(shí)驗(yàn)室顯微鏡使用安全試題及答案一、單項(xiàng)選擇題（每題2分，共40分。每題只有一個(gè)正確答案，請(qǐng)將正確選項(xiàng)字母填在括號(hào)內(nèi)）1.首次使用顯微鏡前，必須首先完成的操作是（）A.調(diào)節(jié)粗準(zhǔn)焦螺旋使鏡筒降到最低B.用擦鏡紙蘸無(wú)水乙醇擦拭物鏡與目鏡C.確認(rèn)電源電壓與燈泡額定電壓一致并接地D.將高倍物鏡旋入光路答案：C2.關(guān)于“先低倍后高倍”的觀察順序，下列說(shuō)法錯(cuò)誤的是（）A.低倍鏡視野大，易找到目標(biāo)B.高倍鏡工作距離短，易與載玻片碰撞C.低倍鏡下可直接滴加香柏油D.高倍鏡下微調(diào)細(xì)準(zhǔn)焦螺旋即可聚焦答案：C3.使用油鏡后，清除香柏油的正確步驟是（）A.鏡頭紙干擦→二甲苯潤(rùn)洗→鏡頭紙干擦B.脫脂棉蘸水→鏡頭紙干擦→電吹風(fēng)吹干C.擦鏡紙蘸95%乙醇→擦鏡紙干擦D.擦鏡紙蘸乙醚→擦鏡紙干擦→無(wú)水乙醇二次擦拭答案：A4.顯微鏡燈泡突然熄滅，最先應(yīng)檢查的項(xiàng)目是（）A.保險(xiǎn)絲B.光源開(kāi)關(guān)C.電源插頭與插座接觸D.亮度旋鈕是否歸零答案：C5.下列哪種行為最可能導(dǎo)致目鏡內(nèi)部真菌污染（）A.觀察完畢立刻蓋上防塵罩B.在濕度70%以上的環(huán)境中長(zhǎng)期存放C.使用一次性手套更換切片D.用紫外燈照射鏡體30分鐘答案：B6.當(dāng)高倍鏡下視野出現(xiàn)“月牙形”暗影時(shí)，最可能的原因是（）A.聚光器頂透鏡未旋入光路B.目鏡筒未插到底C.物鏡螺紋未旋緊D.視場(chǎng)光闌收縮過(guò)度答案：A7.關(guān)于汞燈熒光光源，下列操作正確的是（）A.點(diǎn)燃不足15分鐘即關(guān)閉以節(jié)能B.更換汞燈時(shí)用金屬鑷夾取燈泡C.關(guān)閉后立刻搬動(dòng)燈箱D.點(diǎn)燃前確認(rèn)燈箱排風(fēng)扇已啟動(dòng)答案：D8.搬運(yùn)臺(tái)式顯微鏡時(shí)，正確握持部位是（）A.鏡臂與鏡座同時(shí)固定B.單手握鏡臂，另一手托底座前端C.單手拎鏡臂，鏡體自然下垂D.雙手抱鏡筒答案：B9.若發(fā)生香柏油滴入聚光器前透鏡，應(yīng)立即（）A.用擦鏡紙干擦B.用二甲苯潤(rùn)洗后干擦C.用無(wú)水乙醇沖洗D.送廠家拆解清洗答案：B10.學(xué)生觀察自己口腔上皮細(xì)胞后，載玻片與蓋玻片應(yīng)放入（）A.普通生活垃圾袋B.5%84消毒液浸泡桶C.銳器盒D.75%乙醇回收缸答案：B11.使用CCD攝像頭時(shí)，防止芯片灼傷的正確做法是（）A.曝光前關(guān)閉護(hù)眼濾片B.長(zhǎng)時(shí)間曝光時(shí)移出視場(chǎng)光闌C.強(qiáng)光下使用ND濾光片D.增益調(diào)至最大答案：C12.鏡檢結(jié)核痰涂片時(shí)，必須佩戴的防護(hù)裝備是（）A.醫(yī)用外科口罩B.N95及以上等級(jí)口罩C.一次性無(wú)紡布帽D.護(hù)膝答案：B13.關(guān)于相差觀察，下列說(shuō)法正確的是（）A.相差物鏡可與普通聚光器配套B.綠色濾光片可提高相差效果C.相差觀察無(wú)需調(diào)節(jié)孔徑光闌D.相差環(huán)板可用擦鏡紙蘸水清洗答案：B14.顯微鏡出廠編號(hào)被磨損時(shí)，實(shí)驗(yàn)室管理員應(yīng)（）A.自行刻寫(xiě)相同編號(hào)B.用記號(hào)筆寫(xiě)在底座C.拍照存檔并報(bào)告資產(chǎn)處D.忽略答案：C15.若鏡頭表面出現(xiàn)“彩虹”狀油膜，最可能使用了（）A.純二甲苯B.含潤(rùn)滑脂的劣質(zhì)擦鏡紙C.無(wú)水乙醇D.乙醚與無(wú)水乙醇混合液答案：B16.關(guān)于熒光激發(fā)塊，下列操作錯(cuò)誤的是（）A.徒手更換激發(fā)塊B.標(biāo)記激發(fā)塊對(duì)應(yīng)染料C.每月檢查激發(fā)塊固定螺絲D.關(guān)閉汞燈后等待30分鐘再搬動(dòng)答案：A17.使用100×油鏡時(shí)，視野模糊且亮度忽高忽低，最先排查（）A.香柏油內(nèi)有氣泡B.目鏡筒長(zhǎng)度不標(biāo)準(zhǔn)C.粗準(zhǔn)焦螺旋松動(dòng)D.電壓不穩(wěn)答案：A18.實(shí)驗(yàn)室實(shí)行“雙人確認(rèn)”制度，下列哪項(xiàng)必須雙人簽字（）A.每日濕度記錄B.汞燈使用累計(jì)小時(shí)數(shù)C.高致病性微生物鏡檢結(jié)束后的消毒確認(rèn)D.擦鏡紙領(lǐng)用數(shù)量答案：C19.顯微鏡鏡筒自然下滑，排除鏡筒固定螺絲松動(dòng)后，應(yīng)檢查（）A.粗準(zhǔn)焦螺旋阻尼油脂干涸B.載物臺(tái)水平C.聚光器高度D.目鏡倍率答案：A20.關(guān)于COVID19病毒假陽(yáng)性污染，下列措施無(wú)效的是（）A.鏡檢前紫外照射切片30分鐘B.使用獨(dú)立通風(fēng)櫥內(nèi)顯微鏡C.鏡檢后用含氯消毒劑擦拭載物臺(tái)D.在普通實(shí)驗(yàn)臺(tái)上重復(fù)利用切片答案：D二、判斷題（每題1分，共15分。正確打“√”，錯(cuò)誤打“×”）21.可以用脫脂棉代替擦鏡紙清潔物鏡前透鏡。（）答案：×22.顯微鏡燈泡壽命與開(kāi)關(guān)次數(shù)無(wú)關(guān)，只與累計(jì)點(diǎn)亮?xí)r間有關(guān)。（）答案：×23.使用高倍鏡時(shí)，必須將聚光器頂透鏡旋出光路以提高亮度。（）答案：×24.香柏油折射率與玻璃接近，故可填充空氣間隙提高分辨率。（）答案：√25.熒光汞燈關(guān)閉后，再次啟動(dòng)需等待至少15分鐘。（）答案：√26.相差環(huán)板對(duì)中一旦調(diào)好，可永久使用，無(wú)需再檢查。（）答案：×27.實(shí)驗(yàn)室濕度控制在45%–55%可有效抑制真菌侵蝕鏡片。（）答案：√28.可以用75%乙醇代替二甲苯清除香柏油，但需延長(zhǎng)浸泡時(shí)間。（）答案：×29.顯微鏡接地線脫落仍可使用，只要電源插頭兩極完好。（）答案：×30.鏡檢完畢，必須將高倍物鏡旋離光路以防壓碎切片。（）答案：√31.使用CCD時(shí)，增益越高，噪點(diǎn)越少。（）答案：×32.鏡檢炭疽桿菌涂片，應(yīng)在生物安全三級(jí)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)進(jìn)行。（）答案：√33.顯微鏡搬運(yùn)后無(wú)需重新校準(zhǔn)柯勒照明。（）答案：×34.可以用真空泵油代替香柏油進(jìn)行油鏡觀察。（）答案：×35.目鏡測(cè)微尺需與物鏡測(cè)微尺配套校準(zhǔn)后才能測(cè)量細(xì)胞大小。（）答案：√三、填空題（每空1分，共20分）36.柯勒照明四要素：________、________、________、________。答案：光源聚焦在聚光器孔徑光闌平面；聚光器孔徑光闌成像在物鏡后焦面；視場(chǎng)光闌成像在標(biāo)本面；燈絲成像在聚光器前焦面37.國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，實(shí)驗(yàn)室通用顯微鏡接地電阻應(yīng)小于________Ω。答案：0.538.熒光汞燈首次點(diǎn)亮需連續(xù)穩(wěn)定________分鐘以上才能進(jìn)行定量拍攝。答案：1539.清除香柏油的溶劑順序?yàn)椋篲_______→________→________。答案：二甲苯；無(wú)水乙醇；擦鏡紙干擦40.使用100×油鏡時(shí)，工作距離約為_(kāi)_______mm。答案：0.13–0.1741.相差觀察時(shí)，綠色濾光片波長(zhǎng)為_(kāi)_______nm左右。答案：54642.顯微鏡出廠校準(zhǔn)的目鏡筒長(zhǎng)度為_(kāi)_______mm。答案：16043.當(dāng)視場(chǎng)亮度不均，應(yīng)調(diào)節(jié)________光闌而非________光闌。答案：視場(chǎng)；孔徑44.鏡檢高致病性微生物后，載物臺(tái)需用含有效氯________mg/L的消毒液擦拭。答案：100045.熒光激發(fā)塊上的“BP450–490”表示________帶通濾光片，中心波長(zhǎng)為_(kāi)_______nm。答案：激發(fā)；470四、簡(jiǎn)答題（每題8分，共40分）46.簡(jiǎn)述“先低倍后高倍”觀察順序的三條安全理由。答案：（1）低倍鏡視野大，可快速定位目標(biāo)，減少高倍鏡空掃時(shí)間，降低鏡頭與切片碰撞風(fēng)險(xiǎn)；（2）低倍鏡工作距離長(zhǎng)，誤操作不易壓碎蓋玻片與切片；（3）低倍鏡下可預(yù)先確認(rèn)切片有無(wú)氣泡、裂痕或異物，避免高倍鏡下因亮度突變導(dǎo)致眼睛瞬間不適或誤調(diào)粗準(zhǔn)焦螺旋造成損壞。47.顯微鏡燈泡突然爆裂，學(xué)生應(yīng)如何應(yīng)急處置？答案：①立即關(guān)閉電源總閘，防止汞蒸汽電離；②佩戴一次性手套與N95口罩，用硬紙板收集大塊玻璃，避免直接手觸；③用硫磺粉或硫代硫酸鈉覆蓋汞珠，靜置30分鐘；④用注射器吸取汞珠裝入含水的密封瓶；⑤開(kāi)窗通風(fēng)，開(kāi)啟汞蒸汽吸附器；⑥填寫(xiě)《危險(xiǎn)化學(xué)品泄漏記錄表》，報(bào)告實(shí)驗(yàn)室安全員與資產(chǎn)處；⑦48小時(shí)內(nèi)由具備資質(zhì)的公司回收殘留汞。48.描述相差環(huán)板對(duì)中的完整步驟。答案：（1）將相差物鏡旋入光路，綠色濾光片就位；（2）放置相差對(duì)中目鏡或取出目鏡直接看物鏡后焦面；（3）開(kāi)啟光源，調(diào)焦至看清相差環(huán)板亮環(huán)；（4）用聚光器中心調(diào)節(jié)螺絲移動(dòng)聚光器，使亮環(huán)與物鏡暗環(huán)完全重合；（5）調(diào)節(jié)聚光器高度，使兩環(huán)寬度一致；（6）反復(fù)微調(diào)至環(huán)像無(wú)斷裂、無(wú)偏移；（7）鎖緊聚光器定位螺絲，記錄調(diào)節(jié)參數(shù)；（8）更換不同倍數(shù)相差物鏡時(shí)重復(fù)上述步驟。49.說(shuō)明熒光觀察時(shí)如何防止CCD芯片灼傷。答案：（1）強(qiáng)光下使用中性密度（ND）濾光片，將光強(qiáng)衰減至10%以下；（2）縮短曝光時(shí)間，提高增益而非延長(zhǎng)積分時(shí)間；（3）使用軟件ROI模式，僅對(duì)目標(biāo)區(qū)域曝光；（4）長(zhǎng)時(shí)間預(yù)覽時(shí)開(kāi)啟“自動(dòng)關(guān)閉快門”功能；（5）關(guān)閉汞燈前先關(guān)閉攝像頭快門，避免余熱聚焦；（6）定期用標(biāo)準(zhǔn)灰度板校準(zhǔn)，發(fā)現(xiàn)飽和像素立即降低激發(fā)光強(qiáng)度；（7）安裝紅外截止濾光片，防止熱輻射累積。50.實(shí)驗(yàn)室新購(gòu)一臺(tái)倒置熒光顯微鏡，開(kāi)箱驗(yàn)收應(yīng)檢查哪些安全相關(guān)項(xiàng)目？答案：（1）檢查外包裝有無(wú)“易碎”“向上”標(biāo)識(shí)破損；（2）核對(duì)裝箱單與序列號(hào)，確認(rèn)汞燈、激發(fā)塊、CCD為原廠封裝；（3）檢查電源線三腳插頭接地腳無(wú)斷裂，額定電壓220V±10%；（4）確認(rèn)汞燈燈箱防爆膜完好，無(wú)汞泄漏痕跡；（5）檢查主機(jī)、燈箱、CCD外接地端子，用萬(wàn)用表測(cè)接地電阻＜0.5Ω；（6）通電前用兆歐表測(cè)絕緣電阻＞2MΩ；（7）空載點(diǎn)亮汞燈，確認(rèn)排風(fēng)扇無(wú)異常噪音，風(fēng)速＞0.5m/s；（8）檢查隨機(jī)提供的防汞泄漏應(yīng)急包是否齊全；（9）記錄驗(yàn)收照片與視頻，存檔三年。五、綜合案例分析（共25分）51.案例：某高校細(xì)胞培養(yǎng)室，研究生A在倒置熒光顯微鏡下觀察GFP轉(zhuǎn)染的HEK293細(xì)胞，使用汞燈激發(fā)，40×物鏡，ND25%濾光片，曝光時(shí)間500ms。觀察結(jié)束后，A未關(guān)閉汞燈即離開(kāi)，2小時(shí)后返回發(fā)現(xiàn)顯微鏡載物臺(tái)溫度高達(dá)45℃，CCD熱噪點(diǎn)嚴(yán)重，培養(yǎng)皿內(nèi)細(xì)胞出現(xiàn)明顯凋亡。請(qǐng)回答：（1）指出A的三項(xiàng)違規(guī)操作；（6分）（2）說(shuō)明高溫對(duì)熒光通道與細(xì)胞的可能損害機(jī)制；（6分）（3）給出實(shí)驗(yàn)室應(yīng)采取的糾正與預(yù)防措施。（13分）答案：（1）①未在離開(kāi)前關(guān)閉汞燈；②未使用自動(dòng)快門或定時(shí)關(guān)閉功能；③未設(shè)置溫度報(bào)警與斷電保護(hù)。（2）高溫使汞燈石英管內(nèi)壁汞齊再蒸發(fā)，導(dǎo)致激發(fā)光強(qiáng)度漂移；CCD芯片暗電流呈指數(shù)上升，熱噪點(diǎn)永久增加；培養(yǎng)皿局部高溫激活細(xì)胞熱休克反應(yīng)，GFP折疊受損，熒光量子產(chǎn)率下降