2025年衛(wèi)生高級職稱考試(預(yù)防疾控微生物檢驗技術(shù))歷年參考題庫附答案一、單項選擇題（共15題，每題2分，共30分）1.革蘭染色中最關(guān)鍵的步驟是（）A.結(jié)晶紫初染B.碘液媒染C.95%乙醇脫色D.沙黃復(fù)染答案：C解析：乙醇脫色是區(qū)分革蘭陽性菌（G+）與革蘭陰性菌（G）的關(guān)鍵步驟。G+菌細(xì)胞壁肽聚糖層厚，脫色后保留結(jié)晶紫碘復(fù)合物呈紫色；G菌肽聚糖層薄、脂質(zhì)含量高，脫色后復(fù)合物被洗脫，復(fù)染后呈紅色。2.分離培養(yǎng)流感病毒最常用的細(xì)胞是（）A.Vero細(xì)胞B.MDCK細(xì)胞C.HeLa細(xì)胞D.人胚腎細(xì)胞答案：B解析：MDCK（狗腎傳代細(xì)胞）對流感病毒敏感，是分離培養(yǎng)流感病毒的首選細(xì)胞系。3.結(jié)核分枝桿菌的經(jīng)典染色方法是（）A.革蘭染色B.抗酸染色C.墨汁負(fù)染D.鞭毛染色答案：B解析：結(jié)核分枝桿菌細(xì)胞壁含大量分枝菌酸，普通染色法不易著色，需用抗酸染色（齊尼染色），染后呈紅色，非抗酸菌呈藍(lán)色。4.高壓蒸汽滅菌法殺滅芽胞的標(biāo)準(zhǔn)條件是（）A.100℃，30分鐘B.121℃，1520分鐘C.132℃，35分鐘D.62℃，30分鐘答案：B解析：高壓蒸汽滅菌的標(biāo)準(zhǔn)參數(shù)為103.4kPa（1.05kg/cm2）、121℃，維持1520分鐘，可殺滅包括芽胞在內(nèi)的所有微生物。5.檢測霍亂弧菌的“O1群多價診斷血清”主要針對的抗原是（）A.鞭毛（H）抗原B.菌體（O）抗原C.莢膜（K）抗原D.菌毛抗原答案：B解析：霍亂弧菌的O抗原是群和型的分類依據(jù)，O1群包括古典生物型和埃爾托生物型，診斷血清通過檢測O抗原進(jìn)行分型。6.用于檢測細(xì)菌產(chǎn)酶能力的β內(nèi)酰胺酶試驗，常用底物是（）A.頭孢硝噻吩B.苯唑西林C.亞胺培南D.阿莫西林答案：A解析：頭孢硝噻吩是β內(nèi)酰胺酶的顯色底物，被酶水解后由黃色變?yōu)榧t色，可快速檢測β內(nèi)酰胺酶活性。7.血平板上“衛(wèi)星現(xiàn)象”提示可能為（）A.流感嗜血桿菌B.肺炎鏈球菌C.金黃色葡萄球菌D.大腸埃希菌答案：A解析：流感嗜血桿菌生長需要V因子（NAD）和X因子（血紅素），當(dāng)與金黃色葡萄球菌共同培養(yǎng)時，葡萄球菌合成V因子，使流感嗜血桿菌在其周圍形成小菌落，稱為“衛(wèi)星現(xiàn)象”。8.病毒中和試驗的原理是（）A.病毒與抗體結(jié)合后失去感染性B.病毒被抗體直接裂解C.抗體激活補體溶解病毒D.抗體促進(jìn)吞噬細(xì)胞清除病毒答案：A解析：中和試驗利用特異性抗體與病毒結(jié)合，阻斷病毒與宿主細(xì)胞受體的結(jié)合，使病毒失去感染性，通過觀察細(xì)胞病變抑制情況判斷抗體效價。9.結(jié)核菌素試驗（PPD）的原理是（）A.Ⅰ型超敏反應(yīng)B.Ⅱ型超敏反應(yīng)C.Ⅲ型超敏反應(yīng)D.Ⅳ型超敏反應(yīng)答案：D解析：PPD試驗是遲發(fā)型超敏反應(yīng)（Ⅳ型），基于致敏T細(xì)胞再次接觸結(jié)核分枝桿菌抗原后釋放淋巴因子，引起局部炎癥反應(yīng)。10.檢測食品中沙門菌時，前增菌常用培養(yǎng)基是（）A.亞硒酸鹽胱氨酸肉湯B.四硫磺酸鈉肉湯C.緩沖蛋白胨水D.營養(yǎng)肉湯答案：C解析：沙門菌前增菌使用緩沖蛋白胨水（BPW），可恢復(fù)受損細(xì)菌的活性；選擇性增菌使用亞硒酸鹽胱氨酸肉湯或四硫磺酸鈉肉湯。11.用于區(qū)分腸桿菌科細(xì)菌與非發(fā)酵菌的主要試驗是（）A.氧化酶試驗B.觸酶試驗C.吲哚試驗D.葡萄糖發(fā)酵試驗答案：D解析：腸桿菌科細(xì)菌多為發(fā)酵型（分解葡萄糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣），非發(fā)酵菌（如銅綠假單胞菌）多為氧化型或不分解葡萄糖，葡萄糖發(fā)酵試驗是關(guān)鍵鑒別點。12.新型冠狀病毒（SARSCoV2）的主要檢測靶標(biāo)基因是（）A.E基因、N基因B.HA基因、NA基因C.OmpA基因D.16SrRNA基因答案：A解析：SARSCoV2核酸檢測通常選擇保守的E（包膜蛋白）基因和N（核衣殼蛋白）基因作為靶標(biāo)，部分試劑同時檢測ORF1ab基因。13.實驗室生物安全二級（BSL2）的核心要求是（）A.全排式生物安全柜B.壓差控制（50Pa）C.人員需穿正壓防護(hù)服D.禁止非工作人員進(jìn)入答案：D解析：BSL2實驗室要求禁止非授權(quán)人員進(jìn)入，操作可能產(chǎn)生氣溶膠時使用生物安全柜，配備高壓滅菌器等；全排式安全柜和壓差控制是BSL3的要求。14.鑒定金黃色葡萄球菌的關(guān)鍵試驗是（）A.凝固酶試驗B.觸酶試驗C.氧化酶試驗D.乳糖發(fā)酵試驗答案：A解析：凝固酶試驗是鑒別致病性葡萄球菌（金黃色葡萄球菌）與非致病性葡萄球菌（表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌）的關(guān)鍵，致病性菌株多為凝固酶陽性。15.檢測支原體時，培養(yǎng)基中需添加的關(guān)鍵成分是（）A.膽固醇B.葡萄糖C.血液D.青霉素答案：A解析：支原體無細(xì)胞壁，細(xì)胞膜含固醇類物質(zhì)，培養(yǎng)基需添加膽固醇或血清以提供固醇，促進(jìn)其生長。二、多項選擇題（共10題，每題3分，共30分，多選、錯選、漏選均不得分）1.關(guān)于PCR技術(shù)的質(zhì)量控制，正確的有（）A.需設(shè)置陽性對照、陰性對照、空白對照B.引物設(shè)計需避免發(fā)夾結(jié)構(gòu)和二聚體C.擴增產(chǎn)物電泳時需使用DNA分子量標(biāo)準(zhǔn)D.實驗區(qū)域需嚴(yán)格分區(qū)（試劑準(zhǔn)備區(qū)、標(biāo)本處理區(qū)、擴增區(qū)、產(chǎn)物分析區(qū)）答案：ABCD解析：PCR質(zhì)量控制包括對照設(shè)置、引物設(shè)計（避免二級結(jié)構(gòu)）、產(chǎn)物驗證（分子量標(biāo)準(zhǔn)）及區(qū)域分區(qū)（防止交叉污染）。2.可引起食物中毒的細(xì)菌包括（）A.金黃色葡萄球菌B.沙門菌C.副溶血性弧菌D.蠟樣芽胞桿菌答案：ABCD解析：金黃色葡萄球菌（腸毒素）、沙門菌（內(nèi)毒素）、副溶血性弧菌（耐熱腸毒素）、蠟樣芽胞桿菌（腹瀉毒素/嘔吐毒素）均可引起食物中毒。3.關(guān)于結(jié)核分枝桿菌的特性，正確的有（）A.耐干燥，在痰液中可存活68個月B.對乙醇敏感，75%乙醇5分鐘可殺滅C.對紫外線敏感，直接日光照射27小時可殺滅D.營養(yǎng)要求高，需含蛋黃、甘油、馬鈴薯的羅氏培養(yǎng)基答案：ABCD解析：結(jié)核分枝桿菌耐干燥、耐酸堿，但對乙醇、紫外線敏感；羅氏培養(yǎng)基含蛋黃（提供脂質(zhì)）、甘油（碳源）、馬鈴薯（營養(yǎng)）等，是其常用培養(yǎng)基。4.實驗室檢測HIV的常用方法包括（）A.抗體檢測（ELISA）B.抗原檢測（p24抗原）C.核酸檢測（HIVRNA）D.病毒分離培養(yǎng)答案：ABC解析：HIV檢測以抗體檢測（初篩）、抗原抗體聯(lián)合檢測（縮短窗口期）、核酸檢測（早期診斷）為主；病毒分離培養(yǎng)因技術(shù)復(fù)雜、耗時，僅用于科研。5.關(guān)于細(xì)菌L型，正確的描述是（）A.細(xì)胞壁缺陷型B.可回復(fù)為原菌C.在高滲培養(yǎng)基中生長D.革蘭染色多為陰性答案：ABCD解析：細(xì)菌L型因細(xì)胞壁缺失，需高滲環(huán)境維持形態(tài)；革蘭染色常呈陰性；去除誘導(dǎo)因素后可回復(fù)為原菌。6.用于檢測病毒感染的血清學(xué)試驗包括（）A.中和試驗B.血凝抑制試驗C.補體結(jié)合試驗D.肥達(dá)試驗答案：ABC解析：肥達(dá)試驗用于檢測傷寒/副傷寒沙門菌抗體，屬于細(xì)菌血清學(xué)試驗；中和、血凝抑制、補體結(jié)合試驗均為病毒血清學(xué)檢測方法。7.實驗室生物安全防護(hù)的“一級屏障”包括（）A.生物安全柜B.個人防護(hù)裝備（PPE）C.實驗室建筑結(jié)構(gòu)D.高壓滅菌器答案：AB解析：一級屏障是保護(hù)操作者和實驗室環(huán)境的措施（生物安全柜、PPE）；二級屏障是實驗室建筑和設(shè)施（如壓差、通風(fēng)系統(tǒng)）。8.大腸埃希菌的毒力因子包括（）A.腸毒素（ST/LT）B.志賀樣毒素（SLT）C.黏附素（如CFA）D.莢膜答案：ABC解析：腸產(chǎn)毒型大腸埃希菌（ETEC）產(chǎn)生ST/LT腸毒素；腸出血型（EHEC）產(chǎn)生SLT；腸致病型（EPEC）通過黏附素定植；大腸埃希菌一般無莢膜（部分菌株有微莢膜）。9.關(guān)于真菌的培養(yǎng)特性，正確的有（）A.多數(shù)真菌為需氧生長B.淺部真菌培養(yǎng)基需添加放線菌酮抑制細(xì)菌C.深部真菌常用沙保弱培養(yǎng)基（SDA）D.培養(yǎng)溫度多為2528℃（絲狀真菌）或3537℃（酵母型真菌）答案：ABD解析：沙保弱培養(yǎng)基（SDA）是真菌通用培養(yǎng)基，深部真菌（如隱球菌）也可在此培養(yǎng)；放線菌酮抑制腐生真菌，用于分離淺部致病真菌；絲狀真菌（如皮膚癬菌）2528℃培養(yǎng)，酵母型（如白假絲酵母菌）3537℃培養(yǎng)。10.關(guān)于消毒與滅菌的區(qū)別，正確的有（）A.消毒僅殺滅病原微生物，滅菌殺滅所有微生物B.消毒不能殺滅芽胞，滅菌可殺滅芽胞C.化學(xué)消毒劑均可達(dá)到滅菌效果D.紫外線屬于消毒方法，不能完全滅菌答案：ABD解析：滅菌要求殺滅所有微生物（包括芽胞），消毒僅殺滅病原微生物（不一定殺滅芽胞）；多數(shù)化學(xué)消毒劑為消毒水平，僅高效消毒劑（如戊二醛）可達(dá)到滅菌；紫外線穿透力弱，屬于消毒方法。三、填空題（共10題，每空1分，共10分）1.細(xì)菌的基本結(jié)構(gòu)包括細(xì)胞壁、細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)和__________。答案：核質(zhì)（擬核）2.病毒的測量單位是__________，需用電子顯微鏡觀察。答案：納米（nm）3.檢測梅毒螺旋體的特異性試驗是__________（舉1例）。答案：梅毒螺旋體顆粒凝集試驗（TPPA）/熒光密螺旋體抗體吸收試驗（FTAABS）4.血培養(yǎng)的最佳采集時間是__________（發(fā)熱初期/高熱期/退熱期）。答案：發(fā)熱初期（或寒戰(zhàn)期）5.支原體與細(xì)菌的主要區(qū)別是__________。答案：無細(xì)胞壁6.流感病毒分型的依據(jù)是__________抗原（HA/NA/核蛋白）。答案：核蛋白（NP）和基質(zhì)蛋白（M）7.志賀菌的主要致病物質(zhì)是__________，可引起膿血便。答案：內(nèi)毒素（或志賀毒素）8.實驗室常用__________試驗檢測細(xì)菌的動力（舉1例）。答案：半固體穿刺培養(yǎng)/懸滴法9.新型隱球菌的經(jīng)典染色方法是__________。答案：墨汁負(fù)染10.消毒牛奶的常用方法是__________，條件為62℃30分鐘或71.7℃15秒。答案：巴氏消毒法四、簡答題（共5題，第12題各6分，第35題各8分，共32分）1.（封閉型）簡述ELISA雙抗體夾心法的基本原理及主要步驟。答案：原理：用已知抗體包被固相載體，加入待測樣本（含抗原），抗原與固相抗體結(jié)合；洗去未結(jié)合物質(zhì)后，加入酶標(biāo)記的特異性抗體（二抗），形成“固相抗體抗原酶標(biāo)抗體”復(fù)合物；加入底物，酶催化底物顯色，顏色深淺與待測抗原量成正比。步驟：①包被（抗體固定于固相）；②封閉（阻斷非特異性結(jié)合）；③加待測樣本（抗原結(jié)合）；④加酶標(biāo)二抗；⑤加底物顯色；⑥終止反應(yīng)并測吸光度值。2.（封閉型）簡述結(jié)核分枝桿菌的致病物質(zhì)及所致疾病。答案：致病物質(zhì)：①脂質(zhì)（索狀因子、蠟質(zhì)D、分枝菌酸）：抑制吞噬細(xì)胞活化，引起慢性肉芽腫；②蛋白質(zhì)（結(jié)核菌素）：與脂質(zhì)結(jié)合引發(fā)遲發(fā)型超敏反應(yīng)；③多糖：參與免疫應(yīng)答。所致疾病：①肺結(jié)核（原發(fā)感染、繼發(fā)感染）；②肺外結(jié)核（淋巴結(jié)結(jié)核、結(jié)核性腦膜炎、骨結(jié)核等）。3.（開放型）某實驗室檢測疑似登革熱患者血清，IgM抗體陰性、IgG抗體陽性，可能的解釋有哪些？需補充哪些檢測？答案：可能解釋：①患者處于感染后期（IgG持續(xù)時間長，IgM已轉(zhuǎn)陰）；②既往感染過登革病毒（IgG為回憶性應(yīng)答）；③本次感染為二次感染（IgG快速升高，IgM可能被抑制）；④檢測試劑敏感性不足（假陰性）。需補充檢測：①登革病毒核酸（RTPCR）檢測急性期血清，確認(rèn)是否存在病毒血癥；②間隔1014天采集恢復(fù)期血清，檢測IgG抗體滴度（4倍以上升高支持近期感染）；③抗原檢測（NS1抗原），用于早期診斷（感染后17天陽性）。4.（開放型）簡述實驗室處理疑似霍亂樣本的生物安全要求及檢測流程。答案：生物安全要求：①樣本運輸需符合UN3373標(biāo)準(zhǔn)（B類感染性物質(zhì)），使用三層包裝；②實驗室需在BSL2及以上級別操作，處理可能產(chǎn)生氣溶膠的步驟（如接種、勻漿）需在生物安全柜中進(jìn)行；③人員穿戴防護(hù)服、手套、護(hù)目鏡，操作后徹底消毒（75%乙醇或含氯消毒劑）。檢測流程：①樣本處理（糞便/肛拭子接種TCBS瓊脂、堿性蛋白胨水增菌）；②形態(tài)學(xué)檢查（革蘭染色為G弧菌，懸滴法觀察“魚群樣”動力）；③生化鑒定（氧化酶陽性，發(fā)酵蔗糖產(chǎn)酸，霍亂紅反應(yīng)陽性）；④血清學(xué)試驗（O1/O139群診斷血清凝集試驗）；⑤毒力基因檢測（ctxA基因PCR）。5.（開放型）分析實驗室進(jìn)行細(xì)菌藥敏試驗時，結(jié)果出現(xiàn)“中介（I）”的可能原因及處理原則。答案：可能原因：①細(xì)菌接種量不準(zhǔn)確（過多或過少）；②培養(yǎng)基質(zhì)量問題（pH、瓊脂厚度不符合CLSI標(biāo)準(zhǔn)）；③藥物紙片失效（保存不當(dāng)導(dǎo)致效價降低）；④細(xì)菌本身存在異質(zhì)性耐藥（部分亞群耐藥）；⑤檢測方法局限性（如Etest與紙片擴散法結(jié)果差異）。處理原則：①復(fù)核試驗條件（接種量、培養(yǎng)基、紙片有效期）；②重復(fù)試驗確認(rèn)結(jié)果；③若為臨床關(guān)鍵菌株（如耐甲氧西林金黃色葡萄球菌），建議使用微量肉湯稀釋法（金標(biāo)準(zhǔn)）重新檢測；④結(jié)合臨床情況（感染部位、藥物濃度）判斷是否調(diào)整治療方案（中介結(jié)果提示需提高藥物劑量或選擇其他藥物）。五、應(yīng)用題（共1題，18分）案例：某社區(qū)暴發(fā)急性胃腸炎，10例患者出現(xiàn)腹痛、腹瀉（水樣便）、嘔吐，無發(fā)熱。采集患者糞便樣本，鏡檢未見白細(xì)胞，革蘭染色見G短小桿菌。實驗室檢測結(jié)果：TCBS瓊脂