(2025年)臨床基因擴(kuò)增檢驗技術(shù)人員PCR上崗證培訓(xùn)考試試題及答案一、單項選擇題（每題2分，共40分）1.關(guān)于PCR實驗室分區(qū)的基本要求，以下錯誤的是A.試劑準(zhǔn)備區(qū)與標(biāo)本處理區(qū)應(yīng)物理隔離B.擴(kuò)增區(qū)與產(chǎn)物分析區(qū)可共用空調(diào)系統(tǒng)C.各區(qū)緩沖間應(yīng)設(shè)置連鎖門D.標(biāo)本處理區(qū)應(yīng)配備生物安全柜答案：B2.實時熒光定量PCR中，Ct值的定義是A.熒光信號達(dá)到設(shè)定閾值時的循環(huán)數(shù)B.擴(kuò)增曲線指數(shù)期的起始循環(huán)數(shù)C.熒光信號首次超過基線的循環(huán)數(shù)D.平臺期熒光信號強(qiáng)度的平均值答案：A3.引物設(shè)計時，避免3'端互補(bǔ)的主要目的是A.減少引物二聚體形成B.提高退火溫度C.增加擴(kuò)增特異性D.降低擴(kuò)增效率答案：A4.以下哪種物質(zhì)對Taq酶活性抑制作用最強(qiáng)？A.血紅蛋白B.肝素C.EDTAD.甘油答案：B5.實驗室進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)量控制時，弱陽性對照的Ct值應(yīng)比臨界值A(chǔ).低1-2個循環(huán)B.高1-2個循環(huán)C.低3-4個循環(huán)D.高3-4個循環(huán)答案：A6.核酸提取過程中，加入異硫氰酸胍的主要作用是A.裂解細(xì)胞并滅活核酸酶B.沉淀DNAC.中和溶液pH值D.增強(qiáng)磁珠吸附能力答案：A7.擴(kuò)增產(chǎn)物出現(xiàn)非特異性條帶時，優(yōu)化措施不包括A.提高退火溫度B.減少引物濃度C.增加Taq酶用量D.縮短延伸時間答案：C8.臨床基因擴(kuò)增檢驗報告的基本要素不包括A.檢測方法學(xué)B.參考范圍C.患者飲食情況D.檢驗者簽名答案：C9.實驗室發(fā)生氣溶膠污染后，最有效的處理方法是A.紫外線照射30分鐘B.75%乙醇擦拭臺面C.過氧乙酸熏蒸D.清水沖洗地面答案：C10.關(guān)于陰性質(zhì)控品的選擇，正確的是A.應(yīng)使用與檢測樣本同類型的陰性材料B.可用生理鹽水替代C.需包含所有可能的抑制物D.濃度應(yīng)接近檢測下限答案：A11.數(shù)字PCR（dPCR）與實時熒光PCR的主要區(qū)別是A.不需要標(biāo)準(zhǔn)曲線B.使用不同的熒光染料C.擴(kuò)增效率更高D.可檢測RNA病毒答案：A12.核酸提取儀日常維護(hù)中，重點檢查的項目是A.加樣針的密封性B.實驗室溫濕度C.操作人員資質(zhì)D.擴(kuò)增儀校準(zhǔn)狀態(tài)答案：A13.檢測HBVDNA時，若樣本OD260/OD280比值為1.6，提示可能存在A.蛋白質(zhì)污染B.苯酚殘留C.RNA污染D.鹽離子殘留答案：A14.以下哪種情況不屬于實驗室危急值？A.新冠病毒核酸檢測陽性（Ct=18）B.腫瘤靶向基因檢測出現(xiàn)新發(fā)突變C.瘧原蟲核酸檢測陽性（低拷貝）D.血培養(yǎng)污染導(dǎo)致假陽性答案：D15.引物保存的最佳條件是A.-20℃避光B.4℃短期保存C.室溫干燥D.-80℃反復(fù)凍融答案：A16.擴(kuò)增儀溫度校準(zhǔn)的關(guān)鍵參數(shù)是A.孔間溫度均勻性B.顯示屏顯示溫度C.加熱模塊材質(zhì)D.散熱風(fēng)扇轉(zhuǎn)速答案：A17.核酸提取過程中，磁珠法與柱提法的主要區(qū)別是A.磁珠法無需離心B.柱提法靈敏度更高C.磁珠法成本更低D.柱提法適合大體積樣本答案：A18.檢測結(jié)果出現(xiàn)“NTC（無模板對照）陽性”，最可能的原因是A.引物設(shè)計錯誤B.擴(kuò)增儀溫度失控C.試劑被擴(kuò)增產(chǎn)物污染D.樣本核酸濃度過高答案：C19.關(guān)于實驗室生物安全，錯誤的是A.所有樣本按感染性物質(zhì)處理B.離心時需使用帶蓋離心管C.廢棄擴(kuò)增產(chǎn)物可直接丟棄D.操作完畢需消毒實驗服答案：C20.實時熒光PCR中，SYBRGreenⅠ的作用是A.特異性結(jié)合雙鏈DNAB.標(biāo)記探針C.滅活核酸酶D.穩(wěn)定反應(yīng)體系答案：A二、多項選擇題（每題3分，共30分）1.PCR實驗室必須配備的設(shè)備包括A.生物安全柜B.實時熒光定量PCR儀C.高速冷凍離心機(jī)D.超凈工作臺答案：ABC2.影響PCR擴(kuò)增效率的因素有A.Mg2+濃度B.引物退火溫度C.模板純度D.擴(kuò)增循環(huán)數(shù)答案：ABC3.核酸提取質(zhì)量控制的指標(biāo)包括A.濃度（ng/μL）B.OD260/OD230比值C.片段完整性D.檢測方法學(xué)答案：ABC4.實驗室污染預(yù)防措施包括A.各區(qū)專用移液器B.使用dUTP替代dTTPC.嚴(yán)格遵循單向工作流程D.定期更換實驗服答案：ABCD5.關(guān)于弱陽性樣本的處理，正確的是A.重復(fù)檢測原樣本B.增加PCR循環(huán)數(shù)C.重新提取核酸D.直接報告陰性答案：AC6.實時熒光PCR結(jié)果判讀需考慮的因素有A.擴(kuò)增曲線形態(tài)B.內(nèi)參基因Ct值C.陰陽性對照結(jié)果D.樣本采集時間答案：ABC7.實驗室記錄應(yīng)包含的內(nèi)容有A.試劑批號及有效期B.儀器運行參數(shù)C.操作人員姓名D.患者聯(lián)系方式答案：ABC8.數(shù)字PCR的優(yōu)勢包括A.絕對定量B.抗抑制能力強(qiáng)C.無需標(biāo)準(zhǔn)品D.檢測速度快答案：ABC9.核酸提取過程中，可能導(dǎo)致產(chǎn)量降低的原因有A.裂解時間不足B.洗脫體積過大C.磁珠吸附時間過短D.離心速度過高答案：AC10.實驗室質(zhì)量體系文件包括A.標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP）B.質(zhì)量手冊C.記錄表格D.人員培訓(xùn)檔案答案：ABCD三、判斷題（每題1分，共10分）1.PCR實驗室可使用普通移液器替代帶濾芯移液器。（×）2.核酸提取時，樣本量越大，提取效果越好。（×）3.擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)可進(jìn)行加樣操作。（×）4.陰性質(zhì)控品出現(xiàn)陽性結(jié)果時，所有檢測結(jié)果需重新驗證。（√）5.實時熒光PCR儀的光學(xué)系統(tǒng)無需定期校準(zhǔn)。（×）6.冷凍保存的核酸樣本可反復(fù)凍融3次。（×）7.實驗室廢棄物應(yīng)分類收集并交由專業(yè)機(jī)構(gòu)處理。（√）8.引物設(shè)計時，GC含量應(yīng)控制在40%-60%。（√）9.檢測RNA病毒時，需先進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。（√）10.實驗室生物安全等級應(yīng)與檢測樣本風(fēng)險等級匹配。（√）四、簡答題（每題6分，共30分）1.簡述PCR實驗室“四區(qū)一室”的功能及氣流方向要求。答案：PCR實驗室通常分為試劑準(zhǔn)備區(qū)、標(biāo)本處理區(qū)、擴(kuò)增區(qū)、產(chǎn)物分析區(qū)，外加緩沖區(qū)（一室）。氣流方向應(yīng)從清潔區(qū)（試劑準(zhǔn)備區(qū)）向污染區(qū)（產(chǎn)物分析區(qū)）遞減，形成負(fù)壓梯度，避免交叉污染。具體為：試劑準(zhǔn)備區(qū)→標(biāo)本處理區(qū)→擴(kuò)增區(qū)→產(chǎn)物分析區(qū)，各區(qū)壓力依次降低。2.列舉5種常見的PCR抑制物及其來源。答案：（1）血紅蛋白（血液樣本）；（2）肝素（抗凝劑）；（3）膽鹽（糞便樣本）；（4）苯酚（核酸提取殘留）；（5）EDTA（過量抗凝劑）。3.實時熒光PCR中，如何通過擴(kuò)增曲線判斷實驗有效性？答案：有效擴(kuò)增曲線應(yīng)呈現(xiàn)典型的“S”型，包括基線期、指數(shù)增長期和平臺期。基線期熒光信號穩(wěn)定（無明顯波動），指數(shù)期斜率陡峭（擴(kuò)增效率正常），平臺期熒光信號不再增長（dNTP或引物耗盡）。同時，陰性質(zhì)控?zé)o擴(kuò)增曲線，陽性質(zhì)控Ct值在預(yù)期范圍內(nèi)。4.簡述核酸提取的基本步驟（以磁珠法為例）。答案：（1）樣本裂解：加入裂解液破壞細(xì)胞膜，釋放核酸并滅活核酸酶；（2）磁珠結(jié)合：加入磁珠，在高鹽低pH條件下核酸吸附于磁珠表面；（3）洗滌：磁吸分離磁珠，用洗滌液去除蛋白質(zhì)、鹽離子等雜質(zhì)；（4）洗脫：在低鹽高pH條件下，核酸從磁珠表面解離，收集洗脫液即為純化的核酸。5.實驗室發(fā)生假陽性結(jié)果時，應(yīng)如何排查原因？答案：（1）檢查擴(kuò)增產(chǎn)物污染：確認(rèn)NTC（無模板對照）是否陽性，若陽性提示試劑或環(huán)境被污染；（2）驗證對照品：檢查陰/陽性質(zhì)控是否符合預(yù)期，排除對照品失效；（3）追溯操作流程：回顧加樣、核酸提取等步驟是否違反單向流程；（4）檢測儀器狀態(tài)：核查擴(kuò)增儀溫度準(zhǔn)確性及光學(xué)系統(tǒng)靈敏度；（5）重復(fù)實驗：使用新試劑、新耗材重新檢測原樣本，確認(rèn)結(jié)果一致性。五、案例分析題（每題10分，共20分）案例1：某實驗室檢測新冠病毒核酸時，出現(xiàn)以下情況：患者樣本Ct值為38（臨界值為40），NTC陰性，陽性質(zhì)控Ct=25（預(yù)期22-26），陰性質(zhì)控?zé)o擴(kuò)增。問題：（1）該結(jié)果是否可直接報告？（2）需進(jìn)一步采取哪些措施？答案：（1）不可直接報告。Ct值38接近臨界值，存在假陽性或低病毒載量可能。（2）措施：①重復(fù)檢測原樣本，使用同一批次試劑；②重新提取核酸后再次擴(kuò)增；③若重復(fù)結(jié)果仍為38-40，結(jié)合患者臨床癥狀、流行病學(xué)史綜合判斷；④記錄異常結(jié)果及處理過程，納入實驗室質(zhì)量分析。案例2：某實驗室進(jìn)行HPV分型檢測時，發(fā)現(xiàn)連續(xù)3天的NTC（無模板對照）均出現(xiàn)Ct=32的擴(kuò)增曲線，其余對照正常。問題：（1）最可能的污染來源是什么？（2）提出3種針對