2025年制藥滅菌發(fā)酵工技能比武考核試卷及答案一、理論知識考核（總分100分）（一）單項選擇題（每題2分，共20題，計40分）1.濕熱滅菌過程中，F(xiàn)0值表示的是（）A.100℃下的等效滅菌時間B.121℃下的等效滅菌時間C.134℃下的等效滅菌時間D.115℃下的等效滅菌時間2.發(fā)酵罐空消時，通常要求罐內(nèi)壓力達到（）A.0.05-0.08MPaB.0.10-0.12MPaC.0.15-0.18MPaD.0.20-0.22MPa3.以下哪種微生物常用作濕熱滅菌效果的生物指示劑（）A.枯草芽孢桿菌B.大腸桿菌C.金黃色葡萄球菌D.白色念珠菌4.發(fā)酵過程中溶氧突然下降，最可能的原因是（）A.攪拌轉(zhuǎn)速提高B.補料量增加C.空氣過濾器堵塞D.發(fā)酵液黏度降低5.高壓蒸汽滅菌器的安全閥應(yīng)每（）校驗一次A.3個月B.6個月C.12個月D.24個月6.滅菌過程中，裝載量超過設(shè)備最大允許體積的（）會導(dǎo)致滅菌不徹底A.70%B.80%C.90%D.100%7.種子培養(yǎng)基滅菌時，若采用分批滅菌，溫度升至121℃的時間應(yīng)控制在（）A.10-15分鐘B.20-25分鐘C.30-35分鐘D.40-45分鐘8.發(fā)酵染菌后，對設(shè)備進行堿洗時，常用氫氧化鈉溶液的濃度為（）A.0.5%-1.0%B.1.5%-2.0%C.2.5%-3.0%D.3.5%-4.0%9.滅菌結(jié)束后，需待壓力降至（）以下方可開啟滅菌器門A.0.01MPaB.0.02MPaC.0.03MPaD.0.05MPa10.發(fā)酵過程中控制pH的主要目的是（）A.促進菌體生長B.抑制雜菌污染C.優(yōu)化代謝產(chǎn)物合成D.提高溶氧效率11.以下哪種滅菌方式屬于化學(xué)滅菌（）A.紫外線滅菌B.環(huán)氧乙烷滅菌C.干熱滅菌D.輻射滅菌12.發(fā)酵罐實消時，培養(yǎng)基溫度達到121℃后需保持（）A.5-10分鐘B.15-20分鐘C.25-30分鐘D.35-40分鐘13.生物指示劑的挑戰(zhàn)試驗應(yīng)在滅菌設(shè)備的（）進行A.冷點位置B.中心點C.進氣口附近D.排氣口附近14.發(fā)酵過程中，種齡過老會導(dǎo)致（）A.菌體活力下降B.接種量減少C.溶氧需求降低D.產(chǎn)物合成提前15.滅菌設(shè)備的溫度探頭校準(zhǔn)誤差應(yīng)不超過（）A.±0.5℃B.±1.0℃C.±1.5℃D.±2.0℃16.發(fā)酵液放罐前，需檢測的關(guān)鍵指標(biāo)不包括（）A.殘?zhí)橇緽.菌體濃度C.設(shè)備壓力D.產(chǎn)物含量17.以下哪種情況會導(dǎo)致干熱滅菌效果下降（）A.物品間留有空隙B.滅菌時間延長C.物品表面有油脂D.溫度均勻性提高18.發(fā)酵罐接種時，火焰圈的直徑應(yīng)不小于（）A.5cmB.10cmC.15cmD.20cm19.滅菌過程中，若蒸汽中含有過多冷凝水，會導(dǎo)致（）A.溫度升高B.壓力波動C.穿透性下降D.滅菌時間縮短20.發(fā)酵染菌后，確定污染菌為革蘭氏陰性菌，最可能的污染途徑是（）A.空氣過濾系統(tǒng)B.培養(yǎng)基滅菌C.接種操作D.設(shè)備密封件（二）判斷題（每題1分，共10題，計10分）1.濕熱滅菌的效果優(yōu)于干熱滅菌，因為蒸汽的穿透力更強。（）2.發(fā)酵罐空消時，只需對罐體滅菌，管道無需單獨滅菌。（）3.生物指示劑的D值是指在特定溫度下殺滅90%微生物所需的時間。（）4.發(fā)酵過程中，pH升高可能是因為菌體代謝產(chǎn)生酸性物質(zhì)。（）5.滅菌設(shè)備的BD測試主要用于檢測預(yù)真空滅菌器的空氣排除效果。（）6.種子液的OD值越高，說明菌體活力越好。（）7.發(fā)酵染菌后，若污染菌與生產(chǎn)菌屬同一屬，可繼續(xù)發(fā)酵。（）8.干熱滅菌適用于玻璃器皿、油脂類和粉劑的滅菌。（）9.發(fā)酵罐實消時，應(yīng)先通入蒸汽預(yù)熱，再關(guān)閉排氣閥升壓。（）10.滅菌記錄只需保存1年，超過期限可銷毀。（）（三）簡答題（每題8分，共5題，計40分）1.簡述濕熱滅菌過程中“冷點”的定義及確定方法。2.列舉發(fā)酵過程中溶氧不足的3種可能原因及對應(yīng)的解決措施。3.說明高壓蒸汽滅菌器操作中“排空→升壓→保溫→降壓→干燥”各階段的關(guān)鍵控制要點。4.分析種子培養(yǎng)過程中菌絲自溶的可能原因。5.闡述發(fā)酵染菌后的處理流程（包括環(huán)境、設(shè)備、物料的處理）。（四）案例分析題（每題15分，共2題，計30分）1.某車間使用10噸發(fā)酵罐生產(chǎn)抗生素，滅菌后取樣檢測發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基無菌檢查不合格。經(jīng)核查滅菌記錄：升溫階段30分鐘從25℃升至121℃，保溫階段121℃±0.5℃維持20分鐘，降溫階段25分鐘降至30℃。請分析可能的不合格原因，并提出針對性改進措施。2.某批次發(fā)酵培養(yǎng)12小時后，在線pH儀表顯示pH從6.8持續(xù)下降至5.2，同時溶氧從35%降至15%，鏡檢發(fā)現(xiàn)菌體形態(tài)異常。請判斷可能的故障類型，列出需核查的關(guān)鍵參數(shù)，并提出應(yīng)急處理方案。二、實操技能考核（總分100分）（一）高壓蒸汽滅菌器操作（50分）考核要求：使用立式高壓蒸汽滅菌器對500ml三角瓶裝200ml培養(yǎng)基（含玻璃珠）進行滅菌，完成從裝載到卸載的全流程操作。評分標(biāo)準(zhǔn)：1.預(yù)處理（5分）：檢查設(shè)備狀態(tài)（安全閥、壓力表、排水閥）、清潔滅菌艙、確認(rèn)培養(yǎng)基體積（≤2/3）。2.裝載規(guī)范（10分）：三角瓶放置穩(wěn)固，瓶間留有空隙；包裹松散度適宜；生物指示劑放置位置（冷點）正確。3.參數(shù)設(shè)置（10分）：溫度121℃，時間20分鐘，壓力0.105MPa；正確選擇“液體”程序；啟動前確認(rèn)排氣閥開啟。4.運行監(jiān)控（10分）：觀察升溫速率（≤3℃/分鐘）；記錄達到設(shè)定溫度時間；壓力波動≤±0.01MPa；保溫階段無超溫報警。5.卸載操作（10分）：壓力降至0.02MPa以下開啟艙門；緩慢取出物品，避免液體沸騰；檢查包裝完整性；記錄滅菌時間、溫度、壓力。6.安全規(guī)范（5分）：操作過程佩戴防護手套；設(shè)備使用后清理水漬；填寫設(shè)備使用記錄。（二）發(fā)酵罐種子接種操作（50分）考核要求：將5L種子罐培養(yǎng)的種子液接種至50L發(fā)酵罐（已實消），模擬生產(chǎn)環(huán)境完成接種流程。評分標(biāo)準(zhǔn)：1.準(zhǔn)備工作（10分）：檢查種子液外觀（無渾濁、無異物）；確認(rèn)種子罐與發(fā)酵罐連接管道已滅菌；準(zhǔn)備酒精棉、火焰槍、接種閥扳手。2.無菌連接（15分）：用75%酒精擦拭接種口及周圍區(qū)域（3次，每次1分鐘）；點燃火焰槍形成直徑≥15cm的火焰圈；快速拆卸接種口堵頭并對接管道，過程≤30秒；檢查連接密封性（無漏液、無漏氣）。3.接種操作（15分）：開啟種子罐出口閥和發(fā)酵罐接種閥，利用壓差（種子罐壓力0.03MPa，發(fā)酵罐壓力0.01MPa）緩慢接種；控制流速（5L/5分鐘）；接種完成后關(guān)閉閥門，用酒精棉覆蓋接口。4.現(xiàn)場管理（5分）：操作過程中避免人員走動；使用過的酒精棉、堵頭放入指定廢物桶；清理操作臺面無殘留液體。5.記錄與確認(rèn)（5分）：記錄接種時間、種子體積、種子液OD值（0.8-1.2）；確認(rèn)發(fā)酵罐壓力恢復(fù)至0.05MPa；簽字確認(rèn)接種記錄。答案一、理論知識考核答案（一）單項選擇題1.B2.B3.A4.C5.B6.B7.A8.B9.D10.C11.B12.B13.A14.A15.A16.C17.C18.B19.C20.A（二）判斷題1.√2.×3.√4.×5.√6.×7.×8.√9.×10.×（三）簡答題1.冷點定義：滅菌過程中，被滅菌物品或設(shè)備內(nèi)溫度最低、最難達到滅菌要求的位置。確定方法：①空載熱分布測試（在設(shè)備內(nèi)不同位置放置溫度探頭，運行滅菌程序，記錄各點溫度，溫度最低處為冷點）；②負(fù)載熱穿透測試（裝載實際生產(chǎn)物品，重復(fù)測試確認(rèn)冷點）；③生物指示劑挑戰(zhàn)試驗（在疑似冷點放置生物指示劑，滅菌后培養(yǎng)，未殺滅處即為冷點）。2.可能原因及措施：①攪拌轉(zhuǎn)速不足（提高攪拌頻率至設(shè)定值）；②空氣流量過低（檢查空氣壓縮機壓力，增大進氣閥開度）；③發(fā)酵液黏度升高（補加去離子水降低黏度，或調(diào)整培養(yǎng)基配方）；④菌體密度過高（提前補料稀釋，或調(diào)整接種量）。（任選3項）3.各階段控制要點：排空階段（開啟排氣閥，確保蒸汽置換冷空氣，至排出蒸汽呈連續(xù)直線無冷凝水）；升壓階段（控制升溫速率≤3℃/分鐘，避免培養(yǎng)基暴沸）；保溫階段（溫度±0.5℃，壓力±0.01MPa，計時從達到設(shè)定溫度開始）；降壓階段（緩慢開啟排氣閥，壓力下降速率≤0.02MPa/分鐘，防止液體沸騰）；干燥階段（對玻璃器皿等需干燥物品，開啟干燥程序，溫度降至60℃以下再取出）。4.菌絲自溶可能原因：①種齡過長（對數(shù)生長期后期接種，避免穩(wěn)定期后期）；②培養(yǎng)基營養(yǎng)不足（碳源/氮源耗盡，需調(diào)整種子培養(yǎng)基配方）；③pH異常（酸性或堿性過強，檢查緩沖體系）；④溶氧過高（氧化應(yīng)激損傷，降低攪拌或通氣量）；⑤有害代謝產(chǎn)物積累（提前換液或調(diào)整培養(yǎng)條件）。5.處理流程：①環(huán)境處理：立即停止發(fā)酵，關(guān)閉相關(guān)區(qū)域空調(diào)系統(tǒng)，用3%過氧乙酸熏蒸30分鐘；②設(shè)備處理：排空發(fā)酵液，用2%氫氧化鈉溶液循環(huán)清洗2小時，再用純化水沖洗至pH中性；拆卸可能泄漏的閥門、密封圈，更換后進行空消驗證；③物料處理：污染批次物料按危險廢物處理，需高壓滅菌后再丟棄；④調(diào)查分析：追溯滅菌記錄、空氣過濾膜完整性、接種操作視頻，確定污染根源并制定糾正措施。（四）案例分析題1.可能原因：①升溫時間過長（30分鐘升溫可能導(dǎo)致培養(yǎng)基中熱敏性成分破壞，產(chǎn)生保護物質(zhì)，影響滅菌效果）；②冷點未覆蓋（滅菌過程中培養(yǎng)基內(nèi)部存在未被蒸汽穿透的區(qū)域，如三角瓶底部或堆積處）；③生物指示劑放置位置錯誤（未在冷點放置，導(dǎo)致假陽性結(jié)果）；④蒸汽質(zhì)量不合格（含過多冷凝水，降低穿透力）。改進措施：①優(yōu)化升溫速率（控制在15-20分鐘升至121℃）；②增加熱分布測試（確認(rèn)冷點位置并重點監(jiān)測）；③使用飽和蒸汽（安裝汽水分離器，確保蒸汽干度≥0.9）；④滅菌后增加培養(yǎng)基靈敏度測試（驗證培養(yǎng)基無菌檢查方法有效性）。2.故障類型：疑似染菌或代謝異常。需核查參數(shù)：①種子液鏡檢結(jié)果（是否有雜菌）；②空氣過濾器壓差（是否堵塞導(dǎo)致雜菌進入）；