水產(chǎn)養(yǎng)殖用非規(guī)范藥品中喹諾酮類、磺胺類酰胺醇類抗生素殘留的測定液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法Determinationofquinolones2025-01-01實(shí)施2025-01-01實(shí)施天津市市場監(jiān)督管理委員會發(fā)布本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件由天津市農(nóng)業(yè)農(nóng)村委提出并歸口。本文件起草單位：天津市農(nóng)業(yè)生態(tài)環(huán)境監(jiān)測與農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量檢測中心、山東省科學(xué)院海洋儀器儀表研本文件主要起草人：陳永平、成振華、王輝、韓現(xiàn)芹、時文博、史艷艷、高麗娜、王愿寧、高麗、李灝、曹建新、易偉、蘇夢寒。工2的測定液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法啉、磺胺異噁唑、氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考共17種抗生僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB/T20195動物飼料試樣的制備5.1.1甲醇(CH?OH,CAS號：67-56-1):色譜純。5.1.2乙腈(CH?CN,CAS號：75-05-8):色譜純。5.1.3甲酸(HCOOH,CAS號：64-18-6):色譜純。35.1.4二氯甲烷(CH?Cl?,CAS號：75-09-2):分析純。5.1.5乙酸乙酯(C4H?O?,CAS號：141-78-6):分析純。5.1.6氯化鈉(NaCl,CAS號：7647-14-5):分析純。5.1.7乙酸銨(CH?COONH,CAS號：631-61-8):分析純。5.2溶液配制5.2.1乙酸銨(2.0mmoL/L)-甲酸溶液(0.1%):稱取0.077g無水乙酸銨，用0.1%甲酸水溶液溶解并稀釋至500mL。5.2.2甲醇-水溶液(15+85,體積比):量取甲醇15mL加入85mL水中，混勻。5.2.3甲酸-乙腈(0.1+99.9,體積比):量取甲酸0.5mL,加乙腈稀釋至500mL,混勻。5.3標(biāo)準(zhǔn)品霉素、甲砜霉素、氟苯尼考各適量(相當(dāng)于各活性成分10mg),精密稱定，于各自容量瓶中，喹諾酮光-18℃以下保存，有效期1年。500μg/mL。取氘代磺胺鄰二甲氧嘧啶、氘代磺胺間二甲氧嘧啶、氘代諾氟沙星、氘代環(huán)丙沙星、氘代恩諾沙星、氘代氯霉素內(nèi)標(biāo)各適量(相當(dāng)于各活性成分5mg),精密稱定，于各自容量瓶中，用甲醇溶解稀釋定容至10mL。配制成濃度為500μg/mL同位素內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)儲備液，避光-18℃以下保存準(zhǔn)確吸取各喹諾酮類和磺胺類標(biāo)準(zhǔn)儲備液(5.4.1)適量，用甲醇稀釋制成1.0μg/mL混合標(biāo)準(zhǔn)工準(zhǔn)確吸取各酰胺醇類標(biāo)準(zhǔn)儲備液(5.4.1)適量，用甲醇稀釋制成氯霉素、氟苯尼考0.1μg/mL,甲砜霉素0.5μg/mL混合標(biāo)準(zhǔn)工作液，避光4℃冷準(zhǔn)確吸取各磺胺類和喹諾酮類內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)儲備液(5.4.2)適量，用甲醇稀釋制成10.0μg/mL混合準(zhǔn)確吸取各酰胺醇類內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)儲備液(5.4.2)適量，用甲醇稀釋制成1.0μg/mL混合內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)工45.5材料通過式固相萃取柱，200mg/6mL,或性能相當(dāng)者。6.1液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀：配有電噴霧(ESI)離子源。6.2分析天平：感量0.01g、0.01mg。6.3高速離心機(jī)：轉(zhuǎn)速大于10000r/min。6.4超聲波震蕩儀。6.5渦旋振蕩器。6.6氮吹儀。6.7粉碎裝置：如杵或研缽。6.8篩：篩孔為1mm金屬網(wǎng)。7試樣制備7.1試樣制備7.1.1固態(tài)非規(guī)范藥品按GB/T20195的規(guī)定制備試樣，至少100g,粉碎使其全部通過1.0mm孔徑的分析篩，裝入密閉容器中備用。7.1.2液態(tài)非規(guī)范藥品將樣液過0.45μm濾膜，收集樣液體積20mL,于密閉容器中保存。7.2試樣保存將試樣于4℃及以下條件下保存。8分析步驟8.1樣品處理稱取非規(guī)范藥品0.1g(準(zhǔn)確至0.01g),用水稀釋至100mL,渦旋1min,超聲波超聲5min,取5mL置于50mL離心管中，加入50μL混合內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)使用液(5.4.5、5.4.6),加入2.0gNaCl,再加入10mL酸化乙腈，渦旋1min,超聲波超聲5min,8000r/min離心3min,取上清液過固相萃取柱于20mL玻璃離心管中，再加入5mL酸化乙腈，重復(fù)上述操作，2mL乙腈淋洗固相萃取柱，合并收集液于40℃條件下，氮?dú)獯抵两桑瑲埩粑锛尤爰状既芤?5.2.2)1mL,充分渦旋混勻，轉(zhuǎn)移至1.5mL離心管中，20000r/min離心5min,取上清液過0.2μm有機(jī)相濾膜后，取100μL濾液，用甲醇溶液(5.2.2)定容至10.0mL,上機(jī)測定。8.2測定8.2.1磺胺類與喹諾酮類58.2.1.1.2柱溫：35℃。8.2.1.1.5流動相：甲醇-(乙酸銨-甲酸溶液，5.2.1);洗脫程序見表1。時間(min)1688.2.1.2.9離子源Gas8.2.1.2.10離子源Gas2:0.目標(biāo)化合物V6恩諾沙星氧氟沙星培氟沙星洛美沙星嘧啶嘧啶分別準(zhǔn)確移取標(biāo)準(zhǔn)工作液適量，甲醇溶液(5.2.1)定容至1mL,喹諾酮類與磺胺類稀釋成質(zhì)量濃8.2.2.1.1色譜柱：Ci色譜柱，1.7μm,100mm×2.1mm(內(nèi)徑),或性能相當(dāng)。8.2.2.1.2柱溫：35℃。8.2.2.1.3流動相：甲醇-水；流動相洗脫程序見表3。7時間(min)1688.2.2.2.2噴霧電壓：8.2.2.2.8駐留時間8.2.2.2.9離子源Gasl:0.6MPa。8.2.2.2.10離子源Gas2:0.2MPa。8.2.2.2.11多反應(yīng)監(jiān)測母離子、子離子、解簇電壓和碰撞能量見表4。目標(biāo)化合物V甲砜霉素分別準(zhǔn)確移取標(biāo)準(zhǔn)工作液適量，甲醇溶液(51.0ng/mL、2.0ng/mL、5.0ng/mL、10.0ng/mL、20.0ng/mL,甲砜霉素稀釋至2.5ng/mL、5.0ng/mL、譜儀測定。8離子豐度比(%)允許相對偏差(%)試樣中各藥物殘留量以質(zhì)量分?jǐn)?shù)w計(jì)，單位為毫克每千克(mgkg),按公式(1)或公式(2)計(jì)9P?——標(biāo)準(zhǔn)工作液中被測物的質(zhì)量濃度數(shù)值，單位為毫克每升(mg/L);A——試樣溶液中被測物的質(zhì)量色譜圖峰面積；m——試樣質(zhì)量數(shù)值，單位為(g).計(jì)算結(jié)果以重復(fù)性條件下獲得的2次獨(dú)立測定結(jié)果的算術(shù)平均值表示，保留2位有效數(shù)字，含量超110正確度和精密度磺胺類、喹諾酮類、酰胺醇類測定回收率為70%～110%。本方法的批內(nèi)相對標(biāo)準(zhǔn)偏差小于15%,批間相對標(biāo)準(zhǔn)偏差小于15%。本實(shí)驗(yàn)條件下非規(guī)范藥品中喹諾酮類、磺胺類定量限為1.0mg/kg;氯霉素、氟苯尼考定量限為0.1(規(guī)范性)17種抗生素中英文對照索引藥物中文名藥物英文名123456789甲砜霉素(資料性)17種抗生素多反應(yīng)監(jiān)測(MRM)質(zhì)量色譜圖Max.1.0e6Max.1.5e6Max.1.2e6pairs):311.001/156.000DaID:linerjiayangMax.1.2e6■XICof+MRM(33pairs):279.000/1 ..Int…Int…MRM(33pairs):365.300/321.300DaID:Enrofloxacin-D5fromSample118(.….MRM(33pairs)340.300/3甲砜霉素