溶瘤病毒在腫瘤免疫治療中的機(jī)制研究演講人目錄01.溶瘤病毒在腫瘤免疫治療中的機(jī)制研究02.引言03.溶瘤病毒的直接溶瘤機(jī)制04.溶瘤病毒的免疫調(diào)節(jié)機(jī)制05.溶瘤病毒的聯(lián)合治療機(jī)制06.總結(jié)與展望01溶瘤病毒在腫瘤免疫治療中的機(jī)制研究02引言引言腫瘤免疫治療作為繼手術(shù)、放療、化療、靶向治療后的第五大治療模式，通過(guò)重新激活機(jī)體免疫系統(tǒng)識(shí)別和殺傷腫瘤細(xì)胞，為惡性腫瘤患者帶來(lái)了新的希望。在這一領(lǐng)域，溶瘤病毒（OncolyticVirus,OV）作為一種兼具直接溶瘤和免疫調(diào)節(jié)雙重作用的治療手段，逐漸從實(shí)驗(yàn)室研究走向臨床應(yīng)用，展現(xiàn)出獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)。作為一名長(zhǎng)期從事腫瘤免疫機(jī)制研究的工作者，我親歷了溶瘤病毒從“以毒攻毒”的傳統(tǒng)理念到“免疫激活”現(xiàn)代策略的轉(zhuǎn)變過(guò)程。本文將從溶瘤病毒的直接溶瘤機(jī)制、免疫調(diào)節(jié)機(jī)制及聯(lián)合治療機(jī)制三個(gè)維度，系統(tǒng)闡述其在腫瘤免疫治療中的作用路徑，以期為相關(guān)研究和臨床應(yīng)用提供理論參考。03溶瘤病毒的直接溶瘤機(jī)制溶瘤病毒的直接溶瘤機(jī)制溶瘤病毒是一類天然或基因工程改造后，能選擇性感染并裂解腫瘤細(xì)胞，而對(duì)正常組織細(xì)胞影響較小的病毒。其直接溶瘤作用是發(fā)揮抗腫瘤效應(yīng)的基礎(chǔ)，這一過(guò)程依賴于病毒對(duì)腫瘤細(xì)胞的選擇性識(shí)別、高效復(fù)制及細(xì)胞裂解，具體可細(xì)分為以下三個(gè)關(guān)鍵環(huán)節(jié)。1腫瘤選擇性感染機(jī)制溶瘤病毒的“靶向性”是其安全性的核心保障，這一特性主要通過(guò)腫瘤細(xì)胞與正常細(xì)胞的差異實(shí)現(xiàn)，包括受體依賴性識(shí)別、腫瘤微環(huán)境（TumorMicroenvironment,TME）特異性響應(yīng)及組織穿透與擴(kuò)散能力。1腫瘤選擇性感染機(jī)制1.1受體依賴性識(shí)別病毒感染細(xì)胞的起始步驟是病毒顆粒與細(xì)胞表面受體結(jié)合，不同溶瘤病毒具有不同的受體譜，而腫瘤細(xì)胞常因基因突變或異常表達(dá)，導(dǎo)致特定受體上調(diào)，成為病毒選擇性感染的關(guān)鍵靶點(diǎn)。例如：腺病毒5型（Ad5）通過(guò)柯薩奇病毒受體（CoxsackievirusandAdenovirusReceptor,CAR）進(jìn)入細(xì)胞，而CAR在多種實(shí)體瘤（如肺癌、卵巢癌、膀胱癌）中高表達(dá)，但在正常組織（如肝、腦）中表達(dá)較低；單純皰疹病毒（HSV）通過(guò)HVEM（HerpesvirusEntryMediator）或nectin-1受體進(jìn)入，后者在黑色素瘤、膠質(zhì)母細(xì)胞瘤中顯著上調(diào)；呼腸孤病毒（Reovirus）則通過(guò)腫瘤細(xì)胞中異常激活的RAS通路進(jìn)入細(xì)胞，因?yàn)镽AS通路能促進(jìn)病毒解聚和內(nèi)吞。這些受體差異構(gòu)成了溶瘤病毒腫瘤選擇性的第一道“關(guān)卡”。1腫瘤選擇性感染機(jī)制1.2腫瘤細(xì)胞內(nèi)環(huán)境優(yōu)勢(shì)腫瘤細(xì)胞由于基因組不穩(wěn)定和信號(hào)通路異常，其內(nèi)環(huán)境往往有利于病毒復(fù)制，而抑制正常細(xì)胞的抗病毒反應(yīng)。具體表現(xiàn)為：①抑制性通路缺陷：如p53通路缺失的腫瘤細(xì)胞無(wú)法通過(guò)p53誘導(dǎo)細(xì)胞周期停滯，反而為病毒復(fù)制提供充足的細(xì)胞周期環(huán)境（如腺病毒E1A蛋白可結(jié)合p53，解除其對(duì)病毒復(fù)制的抑制）；②干擾素（IFN）信號(hào)通路異常：許多腫瘤細(xì)胞存在IFN-α/β受體或下游STAT1蛋白突變，導(dǎo)致無(wú)法產(chǎn)生有效的抗病毒反應(yīng)，而正常細(xì)胞可通過(guò)IFN系統(tǒng)抑制病毒復(fù)制；③代謝狀態(tài)差異：腫瘤細(xì)胞特有的“Warburg效應(yīng)”（有氧糖酵解）為病毒復(fù)制提供豐富的能量和前體物質(zhì)，如病毒復(fù)制所需的核苷酸依賴糖酵解中間產(chǎn)物。1腫瘤選擇性感染機(jī)制1.3組織穿透與擴(kuò)散能力溶瘤病毒在感染腫瘤細(xì)胞后，需通過(guò)擴(kuò)散感染鄰近腫瘤細(xì)胞以增強(qiáng)局部治療效果。部分溶瘤病毒具有天然的組織穿透能力，如HSV可通過(guò)軸突逆向運(yùn)輸擴(kuò)散至腫瘤周圍組織；而基因工程改造可進(jìn)一步提升其擴(kuò)散效率，如表達(dá)基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）的溶瘤病毒能降解腫瘤細(xì)胞外基質(zhì)（ECM），突破物理屏障；表達(dá)趨化因子（如CXCL10）的病毒可招募免疫細(xì)胞，促進(jìn)病毒在腫瘤內(nèi)的均勻分布。2病毒復(fù)制與裂解機(jī)制溶瘤病毒進(jìn)入腫瘤細(xì)胞后，遵循其固有復(fù)制周期，最終導(dǎo)致細(xì)胞裂解，釋放子代病毒顆粒感染周圍腫瘤細(xì)胞，形成“級(jí)聯(lián)放大效應(yīng)”。2病毒復(fù)制與裂解機(jī)制2.1病毒復(fù)制周期溶瘤病毒的復(fù)制周期可分為吸附、進(jìn)入、脫殼、基因復(fù)制、轉(zhuǎn)錄翻譯、組裝釋放六個(gè)階段。以腺病毒為例：①吸附與進(jìn)入：病毒纖維蛋白與細(xì)胞表面CAR結(jié)合，通過(guò)內(nèi)吞作用進(jìn)入細(xì)胞；②脫殼：在溶酶體作用下，病毒衣殼裂解釋放DNA基因組；③基因復(fù)制：病毒E1區(qū)基因（在工程化腺病毒中常為外源插入）編碼早期蛋白，啟動(dòng)病毒DNA在細(xì)胞核內(nèi)復(fù)制；④轉(zhuǎn)錄翻譯：病毒DNA轉(zhuǎn)錄為mRNA，翻譯為結(jié)構(gòu)蛋白（如衣殼蛋白、纖維蛋白）和非結(jié)構(gòu)蛋白（如DNA聚合酶）；⑤組裝：結(jié)構(gòu)蛋白在細(xì)胞核內(nèi)組裝成新的病毒顆粒；⑥釋放：病毒通過(guò)裂解細(xì)胞膜或出芽方式釋放，同時(shí)破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)。2病毒復(fù)制與裂解機(jī)制2.2腫瘤細(xì)胞裂解機(jī)制溶瘤病毒通過(guò)多種機(jī)制誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞裂解，包括直接裂解和間接誘導(dǎo)凋亡。①直接裂解：病毒復(fù)制大量子代顆粒，導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)滲透壓升高、細(xì)胞器破裂，最終細(xì)胞膜溶解（如腺病毒復(fù)制至晚期，大量病毒顆粒聚集使細(xì)胞腫脹破裂）；②誘導(dǎo)凋亡：病毒編碼的蛋白可激活凋亡通路，如HSV的ICP10蛋白可通過(guò)RAS/MAPK通路誘導(dǎo)凋亡，而腺病毒的E3-11.6K蛋白（也稱為“腺病毒死亡蛋白”）能破壞細(xì)胞膜完整性，促進(jìn)凋亡小體釋放。3旁觀者效應(yīng)旁觀者效應(yīng)是指溶瘤病毒不僅直接裂解被感染的腫瘤細(xì)胞，還能通過(guò)間接途徑殺傷未感染的腫瘤細(xì)胞，這一效應(yīng)對(duì)于消除“異質(zhì)性腫瘤細(xì)胞”至關(guān)重要。3旁觀者效應(yīng)3.1免疫細(xì)胞介導(dǎo)的旁觀者效應(yīng)被病毒感染的腫瘤細(xì)胞釋放的病毒成分（如病毒抗原、dsRNA）和腫瘤相關(guān)抗原（Tumor-AssociatedAntigens,TAAs），可激活樹(shù)突狀細(xì)胞（DC細(xì)胞）、自然殺傷細(xì)胞（NK細(xì)胞）等免疫細(xì)胞，進(jìn)而殺傷鄰近未感染腫瘤細(xì)胞。例如：溶瘤病毒感染的腫瘤細(xì)胞釋放的dsRNA，可通過(guò)TLR3激活DC細(xì)胞，使其成熟并分泌IL-12，激活NK細(xì)胞和CTL細(xì)胞，后者通過(guò)穿孔素/顆粒酶途徑殺傷未感染細(xì)胞；NK細(xì)胞還可通過(guò)識(shí)別腫瘤細(xì)胞表面MHC-I分子下調(diào)（病毒感染常導(dǎo)致MHC-I下調(diào)）而激活，發(fā)揮“免疫監(jiān)視”作用。3旁觀者效應(yīng)3.2病毒蛋白介導(dǎo)的旁觀者效應(yīng)部分溶瘤病毒通過(guò)表達(dá)具有細(xì)胞毒性的蛋白，直接殺傷未感染細(xì)胞。例如：溶瘤痘病毒表達(dá)GM-CSF，可招募并激活巨噬細(xì)胞，巨噬細(xì)胞通過(guò)分泌TNF-α、一氧化氮（NO）等因子殺傷鄰近腫瘤細(xì)胞；溶瘤麻疹病毒表達(dá)融合蛋白（F蛋白），可介導(dǎo)細(xì)胞與細(xì)胞的融合，形成syncytia（多核細(xì)胞），導(dǎo)致未感染腫瘤細(xì)胞死亡。3旁觀者效應(yīng)3.3炎癥因子介導(dǎo)的旁觀者效應(yīng)溶瘤病毒感染誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)可產(chǎn)生大量細(xì)胞因子，如TNF-α、IFN-γ、IL-6等，這些因子可直接作用于腫瘤細(xì)胞，誘導(dǎo)其凋亡或生長(zhǎng)抑制。例如：TNF-α可通過(guò)激活死亡受體通路（如Fas/FasL）誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡；IFN-γ可上調(diào)腫瘤細(xì)胞MHC-I分子表達(dá)，增強(qiáng)CTL細(xì)胞的識(shí)別和殺傷能力，同時(shí)抑制腫瘤細(xì)胞增殖。04溶瘤病毒的免疫調(diào)節(jié)機(jī)制溶瘤病毒的免疫調(diào)節(jié)機(jī)制溶瘤病毒的核心價(jià)值不僅在于直接溶瘤，更在于其“免疫激活”作用——通過(guò)打破腫瘤免疫抑制微環(huán)境，啟動(dòng)天然免疫和適應(yīng)性免疫應(yīng)答，形成“抗腫瘤免疫記憶”。這一機(jī)制是溶瘤病毒區(qū)別于傳統(tǒng)治療手段的關(guān)鍵，也是其與其他免疫治療聯(lián)合應(yīng)用的理論基礎(chǔ)。1激活先天免疫應(yīng)答先天免疫是機(jī)體抗感染的第一道防線，溶瘤病毒作為“病原相關(guān)分子模式”（Pathogen-AssociatedMolecularPatterns,PAMPs），能通過(guò)模式識(shí)別受體（PatternRecognitionReceptors,PRRs）激活先天免疫，為后續(xù)適應(yīng)性免疫應(yīng)答奠定基礎(chǔ)。1激活先天免疫應(yīng)答1.1病毒相關(guān)分子模式（PAMPs）的識(shí)別溶瘤病毒的核酸（如DNA、RNA）和蛋白質(zhì)成分均可作為PAMPs，被PRRs識(shí)別。例如：病毒dsRNA可被TLR3（在內(nèi)體膜上）和RIG-I（在細(xì)胞質(zhì)中）識(shí)別；病毒ssRNA可被TLR7/8識(shí)別；病毒DNA可被cGAS（細(xì)胞質(zhì)中的DNA感受器）識(shí)別，生成第二信使cGAMP，進(jìn)而激活STING（StimulatorofInterferonGenes）通路。此外，病毒衣殼蛋白可被NOD樣受體（NLRs）識(shí)別，如NLRC4可識(shí)別細(xì)菌鞭毛蛋白，某些溶瘤病毒的衣殼蛋白結(jié)構(gòu)類似鞭毛蛋白，也能被NLRC4識(shí)別。1激活先天免疫應(yīng)答1.2模式識(shí)別受體（PRRs）介導(dǎo)的信號(hào)通路PRRs識(shí)別PAMPs后，通過(guò)下游信號(hào)通路激活轉(zhuǎn)錄因子，誘導(dǎo)炎癥因子和I型干擾素的產(chǎn)生。以TLR3-RIG-I-STING通路為例：①TLR3識(shí)別dsRNA后，通過(guò)MyD88依賴或非依賴通路（主要是非依賴通路）激活I(lǐng)RF3和NF-κB，誘導(dǎo)IFN-β和促炎因子（如IL-6、TNF-α）產(chǎn)生；②RIG-I識(shí)別ssRNA后，通過(guò)MAVS（線粒體抗病毒信號(hào)蛋白）激活I(lǐng)RF3和NF-κB，誘導(dǎo)IFN-β產(chǎn)生；③cGAS識(shí)別病毒DNA后，生成cGAMP，激活STING，進(jìn)而通過(guò)TBK1激活I(lǐng)RF3，誘導(dǎo)IFN-β產(chǎn)生。這些通路的激活，形成“炎癥瀑布效應(yīng)”，招募并激活先天免疫細(xì)胞。1激活先天免疫應(yīng)答1.3先天免疫細(xì)胞的活化與招募溶瘤病毒誘導(dǎo)的炎癥因子和趨化因子，可招募并激活多種先天免疫細(xì)胞，包括：①中性粒細(xì)胞：趨化因子（如CXCL1、CXCL2）可快速招募中性粒細(xì)胞至腫瘤部位，中性粒細(xì)胞通過(guò)釋放ROS、中性粒細(xì)胞胞外誘捕網(wǎng)（NETs）殺傷腫瘤細(xì)胞，同時(shí)促進(jìn)DC細(xì)胞成熟；②巨噬細(xì)胞：趨化因子（如CCL2、CCL5）招募單核細(xì)胞，分化為巨噬細(xì)胞，在病毒感染初期（如IFN-γ作用下）分化為M1型巨噬細(xì)胞，分泌IL-12、TNF-α等促炎因子，殺傷腫瘤細(xì)胞；③NK細(xì)胞：IL-12、IFN-α/β等細(xì)胞因子可激活NK細(xì)胞，使其通過(guò)ADCC（抗體依賴細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用）和自然細(xì)胞毒作用殺傷腫瘤細(xì)胞；④DC細(xì)胞：病毒感染誘導(dǎo)的IFN-α/β和TNF-α可促進(jìn)DC細(xì)胞成熟，使其表達(dá)MHC-II類分子、共刺激分子（CD80、CD86）和粘附分子（CD40），為后續(xù)抗原呈遞做準(zhǔn)備。2促進(jìn)腫瘤抗原呈遞腫瘤抗原呈遞是適應(yīng)性免疫應(yīng)答的“啟動(dòng)環(huán)節(jié)”，溶瘤病毒通過(guò)裂解腫瘤細(xì)胞釋放大量TAAs，并促進(jìn)DC細(xì)胞成熟和交叉呈遞，將“免疫沉默”的腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)化為“免疫原性”細(xì)胞。2促進(jìn)腫瘤抗原呈遞2.1抗原釋放與DC細(xì)胞吞噬溶瘤病毒直接裂解腫瘤細(xì)胞后，可釋放大量TAAs（如MAGE-A3、NY-ESO-1等）和損傷相關(guān)分子模式（DAMPs，如HMGB1、ATP、鈣網(wǎng)蛋白）。這些分子被DC細(xì)胞吞噬后，通過(guò)MHC-I類和MHC-II類分子呈遞給T細(xì)胞。例如：HMGB1可與DC細(xì)胞表面的TLR4結(jié)合，促進(jìn)DC細(xì)胞吞噬抗原；鈣網(wǎng)蛋白可暴露在腫瘤細(xì)胞表面，與DC細(xì)胞的CD91受體結(jié)合，增強(qiáng)抗原攝取效率。2促進(jìn)腫瘤抗原呈遞2.2DC細(xì)胞成熟與交叉呈遞DC細(xì)胞是連接先天免疫和適應(yīng)性免疫的“橋梁”，其成熟狀態(tài)直接影響抗原呈遞效率。溶瘤病毒通過(guò)多種途徑促進(jìn)DC細(xì)胞成熟：①病毒PAMPs（如dsRNA）通過(guò)TLR3激活DC細(xì)胞，上調(diào)CD80、CD86、MHC-II等分子表達(dá)；②病毒感染誘導(dǎo)的IFN-α/β可直接作用于DC細(xì)胞，促進(jìn)其成熟；③腫瘤細(xì)胞釋放的DAMPs（如ATP）通過(guò)P2X7受體激活DC細(xì)胞，增強(qiáng)其遷移能力。成熟DC細(xì)胞通過(guò)“交叉呈遞”（Cross-presentation）機(jī)制，將外源性抗原（如吞噬的腫瘤碎片）通過(guò)MHC-I類分子呈遞給CD8+T細(xì)胞，這是激活CTL細(xì)胞的關(guān)鍵步驟。2促進(jìn)腫瘤抗原呈遞2.3抗原呈遞效率的調(diào)控溶瘤病毒可通過(guò)調(diào)控DC細(xì)胞的功能，優(yōu)化抗原呈遞效率。例如：溶瘤病毒表達(dá)粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子（GM-CSF），可促進(jìn)DC細(xì)胞增殖和存活，增加抗原呈遞細(xì)胞的數(shù)量；表達(dá)IL-12，可增強(qiáng)DC細(xì)胞的交叉呈遞能力，促進(jìn)CTL細(xì)胞分化；表達(dá)趨化因子（如CCL21），可招募DC細(xì)胞至腫瘤引流淋巴結(jié)，提高抗原呈遞的效率。3激活適應(yīng)性免疫應(yīng)答適應(yīng)性免疫應(yīng)答是抗腫瘤免疫的“核心效應(yīng)”，包括細(xì)胞免疫和體液免疫，其中細(xì)胞免疫（尤其是CTL細(xì)胞）是清除腫瘤細(xì)胞的主要力量。溶瘤病毒通過(guò)激活DC細(xì)胞、促進(jìn)T細(xì)胞增殖和分化，形成“腫瘤-免疫循環(huán)”。3激活適應(yīng)性免疫應(yīng)答3.1CD8+T細(xì)胞的活化與分化CD8+T細(xì)胞是抗腫瘤的“主力軍”，其活化需要三個(gè)信號(hào)：①信號(hào)1：DC細(xì)胞通過(guò)MHC-I-TCR復(fù)合物呈遞腫瘤抗原；②信號(hào)2：DC細(xì)胞表面的共刺激分子（CD80/86-CD28）提供共刺激信號(hào)；③信號(hào)3：DC細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子（如IL-12、IL-2）提供分化信號(hào)。溶瘤病毒通過(guò)促進(jìn)DC細(xì)胞成熟（提供信號(hào)2和3）和抗原呈遞（提供信號(hào)1），激活CD8+T細(xì)胞，使其分化為細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞（CTL細(xì)胞）。CTL細(xì)胞通過(guò)穿孔素/顆粒酶途徑、Fas/FasL途徑殺傷腫瘤細(xì)胞，同時(shí)分泌IFN-γ抑制腫瘤血管生成和增殖。3激活適應(yīng)性免疫應(yīng)答3.2CD4+T細(xì)胞的輔助作用CD4+T細(xì)胞（輔助性T細(xì)胞）在抗腫瘤免疫中發(fā)揮“指揮官”作用，通過(guò)分泌細(xì)胞因子調(diào)節(jié)CD8+T細(xì)胞、B細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的功能。根據(jù)細(xì)胞因子分泌譜，CD4+T細(xì)胞可分為Th1、Th2、Th17、Treg等亞型，其中Th1細(xì)胞是抗腫瘤的關(guān)鍵亞型：①Th1細(xì)胞分泌IFN-γ，增強(qiáng)CTL細(xì)胞的殺傷活性，促進(jìn)M1型巨噬細(xì)胞極化，抑制腫瘤血管生成；②Th1細(xì)胞通過(guò)CD40L與DC細(xì)胞的CD40結(jié)合，促進(jìn)DC細(xì)胞成熟和交叉呈遞，形成“正反饋循環(huán)”。溶瘤病毒可通過(guò)促進(jìn)DC細(xì)胞分泌IL-12，誘導(dǎo)CD4+T細(xì)胞向Th1細(xì)胞分化，增強(qiáng)抗腫瘤免疫。3激活適應(yīng)性免疫應(yīng)答3.3記憶T細(xì)胞的形成與維持記憶T細(xì)胞是長(zhǎng)期免疫監(jiān)視的基礎(chǔ)，可快速清除復(fù)發(fā)的腫瘤細(xì)胞。溶瘤病毒通過(guò)激活CD8+T細(xì)胞和CD4+T細(xì)胞，促進(jìn)記憶T細(xì)胞的形成，包括中央記憶T細(xì)胞（Tcm，主要存在于淋巴結(jié)）和效應(yīng)記憶T細(xì)胞（Tem，主要存在于外周組織）。例如：溶瘤病毒感染誘導(dǎo)的IL-7和IL-15可促進(jìn)Tcm細(xì)胞的形成；而IFN-γ和TNF-α可促進(jìn)Tem細(xì)胞的存活和功能。此外，溶瘤病毒可通過(guò)激活STING通路，促進(jìn)DC細(xì)胞分泌趨化因子（如CXCL9、CXCL10），招募記憶T細(xì)胞至腫瘤部位，形成“免疫記憶屏障”。4調(diào)節(jié)腫瘤免疫抑制微環(huán)境腫瘤免疫抑制微環(huán)境是腫瘤逃避免疫監(jiān)視的關(guān)鍵，包括免疫抑制性細(xì)胞（如Treg細(xì)胞、MDSC細(xì)胞、M2型巨噬細(xì)胞）、免疫抑制性分子（如PD-L1、IL-10、TGF-β）和物理屏障（如腫瘤間質(zhì)纖維化）。溶瘤病毒通過(guò)多種途徑逆轉(zhuǎn)免疫抑制，重塑免疫微環(huán)境。4調(diào)節(jié)腫瘤免疫抑制微環(huán)境4.1重塑巨噬細(xì)胞極化腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞（TAMs）多為M2型巨噬細(xì)胞，分泌IL-10、TGF-β等抑制性分子，促進(jìn)腫瘤血管生成和轉(zhuǎn)移。溶瘤病毒可通過(guò)以下途徑促進(jìn)M2型巨噬細(xì)胞向M1型極化：①病毒感染誘導(dǎo)的IFN-γ可直接作用于巨噬細(xì)胞，通過(guò)STAT1通路激活M1型標(biāo)志物（如iNOS、IL-12）；②病毒表達(dá)的GM-CSF可招募單核細(xì)胞，分化為M1型巨噬細(xì)胞；③腫瘤細(xì)胞裂解釋放的TAAs可被巨噬細(xì)胞吞噬，通過(guò)TLR通路激活M1型極化。M1型巨噬細(xì)胞可通過(guò)分泌TNF-α、NO殺傷腫瘤細(xì)胞，同時(shí)促進(jìn)CTL細(xì)胞浸潤(rùn)。4調(diào)節(jié)腫瘤免疫抑制微環(huán)境4.2抑制髓源抑制細(xì)胞（MDSC）功能MDSC細(xì)胞是免疫抑制性細(xì)胞，通過(guò)精氨酸酶1（ARG1）、誘導(dǎo)型一氧化氮合酶（iNOS）和ROS抑制T細(xì)胞功能。溶瘤病毒可通過(guò)以下途徑抑制MDSC細(xì)胞：①病毒感染誘導(dǎo)的IFN-γ可下調(diào)MDSC細(xì)胞的ARG1和iNOS表達(dá)，恢復(fù)T細(xì)胞功能；②病毒表達(dá)的趨化因子（如CXCL10）可招募MDSC細(xì)胞至腫瘤部位，但溶瘤病毒可通過(guò)激活NK細(xì)胞殺傷MDSC細(xì)胞；③病毒感染誘導(dǎo)的IL-12可促進(jìn)MDSC細(xì)胞向DC細(xì)胞分化，減少免疫抑制細(xì)胞數(shù)量。4調(diào)節(jié)腫瘤免疫抑制微環(huán)境4.3調(diào)節(jié)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Treg）活性Treg細(xì)胞通過(guò)分泌IL-10、TGF-β和細(xì)胞間接觸（如CTLA-4）抑制免疫應(yīng)答，是腫瘤免疫抑制的重要參與者。溶瘤病毒可通過(guò)以下途徑調(diào)節(jié)Treg細(xì)胞：①病毒感染誘導(dǎo)的IFN-γ可抑制Treg細(xì)胞的增殖和功能，降低其Foxp3表達(dá)；②病毒表達(dá)的IL-2可競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合Treg細(xì)胞的IL-2受體，減少其存活；③病毒感染誘導(dǎo)的DC細(xì)胞可通過(guò)分泌IL-6和IL-12，促進(jìn)Treg細(xì)胞向Th1細(xì)胞分化，減少Treg細(xì)胞數(shù)量。05溶瘤病毒的聯(lián)合治療機(jī)制溶瘤病毒的聯(lián)合治療機(jī)制單一治療手段往往難以克服腫瘤的異質(zhì)性和免疫逃逸，溶瘤病毒與其他治療手段（如免疫檢查點(diǎn)抑制劑、放化療、過(guò)繼細(xì)胞療法）聯(lián)合應(yīng)用，可產(chǎn)生協(xié)同增效作用，進(jìn)一步改善治療效果。1與免疫檢查點(diǎn)抑制劑的協(xié)同免疫檢查點(diǎn)抑制劑（ImmuneCheckpointInhibitors,ICIs）通過(guò)阻斷免疫抑制性通路（如PD-1/PD-L1、CTLA-4）恢復(fù)T細(xì)胞功能，但僅對(duì)“熱腫瘤”（高T細(xì)胞浸潤(rùn)）有效。溶瘤病毒可將“冷腫瘤”（低T細(xì)胞浸潤(rùn)）轉(zhuǎn)化為“熱腫瘤”，與ICIs形成協(xié)同效應(yīng)。1與免疫檢查點(diǎn)抑制劑的協(xié)同1.1上調(diào)免疫檢查點(diǎn)表達(dá)溶瘤病毒感染誘導(dǎo)的IFN-γ可上調(diào)腫瘤細(xì)胞PD-L1表達(dá)，這是因?yàn)镮FN-γ可通過(guò)JAK-STAT通路激活PD-L1基因啟動(dòng)子。同時(shí)，溶瘤病毒可增加腫瘤浸潤(rùn)T細(xì)胞（TILs）數(shù)量，為PD-1/PD-L1抑制劑提供更多作用靶點(diǎn)。例如：T-VEC（一種溶瘤HSV病毒）聯(lián)合PD-1抑制劑治療黑色素瘤的臨床試驗(yàn)顯示，聯(lián)合治療組的有效率（ORR）顯著高于單藥治療組（39%vs18%）。1與免疫檢查點(diǎn)抑制劑的協(xié)同1.2增強(qiáng)T細(xì)胞浸潤(rùn)與功能溶瘤病毒通過(guò)激活DC細(xì)胞和NK細(xì)胞，促進(jìn)CTL細(xì)胞浸潤(rùn)至腫瘤部位，同時(shí)通過(guò)抑制Treg細(xì)胞和MDSC細(xì)胞功能，減少免疫抑制，增強(qiáng)T細(xì)胞功能。例如：溶瘤腺病毒表達(dá)IL-12，可促進(jìn)CTL細(xì)胞浸潤(rùn)和IFN-γ分泌，聯(lián)合CTLA-4抑制劑可進(jìn)一步增強(qiáng)抗腫瘤效果。此外，溶瘤病毒誘導(dǎo)的腫瘤抗原釋放可增加T細(xì)胞的克隆多樣性，減少耐藥性。1與免疫檢查點(diǎn)抑制劑的協(xié)同1.3克服耐藥性ICIs的耐藥性主要與腫瘤抗原丟失、T細(xì)胞耗竭和免疫抑制微環(huán)境有關(guān)。溶瘤病毒可通過(guò)以下途徑克服耐藥性：①增加腫瘤抗原釋放，提高腫瘤免疫原性，減少“抗原丟失”型耐藥；②激活NK細(xì)胞和DC細(xì)胞，促進(jìn)新生抗原呈遞，克服“T細(xì)胞耗竭”型耐藥；③重塑免疫微環(huán)境，抑制Treg細(xì)胞和MDSC細(xì)胞，克服“免疫抑制”型耐藥。2與放化療的協(xié)同放療和化療是腫瘤治療的基石，其通過(guò)直接殺傷腫瘤細(xì)胞和誘導(dǎo)免疫原性細(xì)胞死亡（ImmunogenicCellDeath,ICD）增強(qiáng)免疫應(yīng)答，但也會(huì)損傷正常組織。溶瘤病毒與放化療聯(lián)合，可增強(qiáng)其免疫激活作用，同時(shí)減少正常組織損傷。2與放化療的協(xié)同2.1免疫原性細(xì)胞死亡（ICD）的誘導(dǎo)放療和化療（如蒽環(huán)類藥物、奧沙利鉑）可通過(guò)誘導(dǎo)ICD，釋放DAMPs（如HMGB1、ATP、鈣網(wǎng)蛋白），增強(qiáng)DC細(xì)胞的抗原攝取和呈遞能力。溶瘤病毒與放化療聯(lián)合，可產(chǎn)生“協(xié)同ICD”效應(yīng)：例如，放療可增加腫瘤細(xì)胞表面MHC-I分子表達(dá)，促進(jìn)病毒感染；溶瘤病毒感染可增加腫瘤細(xì)胞對(duì)放療的敏感性（如腺病毒E1A蛋白可抑制DNA修復(fù)），形成“放療-病毒-免疫”正循環(huán)。2與放化療的協(xié)同2.2增強(qiáng)抗原釋放與呈遞放化療直接殺傷腫瘤細(xì)胞，釋放大量TAAs和DAMPs，而溶瘤病毒可促進(jìn)DC細(xì)胞成熟和交叉呈遞，增強(qiáng)抗原呈遞效率。例如：溶瘤病毒表達(dá)GM-CSF，可促進(jìn)DC細(xì)胞增殖，增加抗原呈遞細(xì)胞數(shù)量；放化療釋放的HMGB1可與DC細(xì)胞TLR4結(jié)合，促進(jìn)其成熟，兩者聯(lián)合可顯著增強(qiáng)CTL細(xì)胞活化。2與放化療的協(xié)同2.3放化療增敏與免疫激活放化療可通過(guò)抑制腫瘤細(xì)胞抗病毒反應(yīng)，增強(qiáng)溶瘤病毒的復(fù)制效率；而溶瘤病毒可通過(guò)激活免疫細(xì)胞，增強(qiáng)放化療的敏感性。例如：放療可抑制腫瘤細(xì)胞的IFN信號(hào)通路，增強(qiáng)溶瘤病毒的復(fù)制；溶瘤病毒誘導(dǎo)的IFN-γ可抑制腫瘤細(xì)胞增殖，增強(qiáng)化療藥物的殺傷作用。此外，放化療可減少腫瘤負(fù)荷，降低溶瘤病毒治療的免疫壓力，提高治療效果。3與其他免疫治療的聯(lián)合除了ICIs和放化療，溶瘤病毒還可與其他免疫治療手段（如過(guò)繼細(xì)胞療法、細(xì)胞因子）聯(lián)合，產(chǎn)生協(xié)同效應(yīng)。3與其他免疫治療的聯(lián)合3.1與過(guò)繼細(xì)胞療法的協(xié)同過(guò)繼細(xì)胞療法（AdoptiveCellTherapy,ACT）如CAR-T細(xì)胞療法，通過(guò)輸注體外擴(kuò)增的腫瘤特異性T細(xì)胞殺傷腫瘤細(xì)胞，但面臨腫瘤微環(huán)境抑制和T細(xì)胞耗竭等問(wèn)題。溶瘤病毒可通過(guò)以下途徑增強(qiáng)ACT效果：①溶瘤病毒可重塑免疫微環(huán)境，抑制Treg細(xì)胞和MDSC細(xì)胞，減少CAR-T細(xì)胞的抑制；②溶瘤病毒可增加腫瘤抗原釋放，增強(qiáng)CAR-T細(xì)胞的識(shí)別和殺傷能力；③溶瘤病毒表達(dá)的趨化因子（如CXCL10）可招募CAR-T細(xì)胞至腫瘤部位，提高局部藥物濃度。例如：溶瘤腺病毒表達(dá)CXCL10，聯(lián)合CAR-T細(xì)胞治療膠質(zhì)母細(xì)胞瘤，可顯著提高CAR-T細(xì)胞的浸潤(rùn)率和抗腫瘤效果。3與其他免疫治療的聯(lián)合3.2與細(xì)胞因子的聯(lián)合細(xì)胞因子（如IL-2、IL-12、IFN-α）可增強(qiáng)免疫細(xì)胞功能，但全身給藥會(huì)產(chǎn)生嚴(yán)重毒性（如IL-2引起的毛細(xì)血管滲漏綜合征）。溶瘤病毒可作為“局部遞送系統(tǒng)”，將細(xì)胞因子基因?qū)肽[瘤細(xì)胞，實(shí)現(xiàn)局部高濃度分泌，減少全身毒性。例如