蛋白純化層析柱流速調(diào)試技師（初級）考試試卷及答案一、填空題（共10題，每題1分，共10分）1.蛋白純化中，通過電荷相互作用分離的層析類型是______。2.層析柱流速常用單位有mL/min和______。3.填料長期保存用______乙醇溶液（體積分?jǐn)?shù)）。4.離子交換柱上樣量不超柱體積的______。5.平衡緩沖液需通過______倍柱體積。6.流速調(diào)試常用設(shè)備是______或恒流泵。7.蛋白濃度比色法包括Bradford和______法。8.流速______會導(dǎo)致柱壓升高。9.疏水層析中蛋白在______鹽緩沖液中結(jié)合。10.凝膠過濾分辨率與柱長呈______關(guān)系（一定范圍）。二、單項(xiàng)選擇題（共10題，每題2分，共20分）1.流速過快直接導(dǎo)致的問題是（）A.分離度升高B.峰寬變寬C.回收率增加D.壓力降低2.離子交換柱平衡不包括（）A.電導(dǎo)穩(wěn)定B.吸光度穩(wěn)定C.1倍柱體積D.pH穩(wěn)定3.凝膠過濾最大上樣體積不超柱體積（）A.1/3B.1/5C.1/10D.1/204.填料裝填后應(yīng)避免（）A.倒置B.平衡C.沖洗D.保存5.流速調(diào)試初始設(shè)為（）A.最大流速B.中等流速C.低流速D.任意流速6.回收率低的原因不包括（）A.流速過快B.上樣量不足C.結(jié)合不充分D.洗雜過度7.疏水層析常用填料（）A.DEAE-SepharoseB.PhenylSepharoseC.SephadexG-75D.Ni-NTA8.1cm直徑柱，1cm/h流速對應(yīng)流量約（）A.0.013mL/minB.0.13mL/minC.1.3mL/minD.13mL/min9.柱效判斷指標(biāo)（）A.理論塔板數(shù)NB.流速C.壓力D.上樣量10.洗雜目的（）A.洗脫目標(biāo)蛋白B.去未結(jié)合雜質(zhì)C.增流速D.再生填料三、多項(xiàng)選擇題（共10題，每題2分，共20分）1.流速調(diào)試注意事項(xiàng)（）A.壓力不超填料耐受B.平衡充分C.流速穩(wěn)定后記錄D.檢測電導(dǎo)2.影響分離的因素（）A.流速B.柱溫C.緩沖液pHD.上樣量3.常用層析類型（）A.離子交換B.凝膠過濾C.疏水D.親和4.填料保存方法（）A.20%乙醇B.4℃冷藏C.避免冷凍D.定期換乙醇5.流速過快問題（）A.分離度降B.峰拖尾C.回收率降D.壓力升6.親和層析關(guān)鍵（）A.配體特異性結(jié)合B.洗脫溫和C.流速越快越好D.無需再生7.凝膠過濾注意（）A.流速恒定B.無氣泡C.上樣體積大D.柱床穩(wěn)定8.平衡判斷標(biāo)準(zhǔn)（）A.電導(dǎo)一致B.吸光度穩(wěn)定C.3-5倍柱體積D.pH一致9.蛋白濃度檢測方法（）A.BradfordB.BCAC.紫外280nmD.Lowry10.柱壓過高解決（）A.降流速B.換過濾膜C.重裝柱D.增上樣量四、判斷題（共10題，每題2分，共20分）1.流速越快分離越好（）2.填料可倒置存放（）3.平衡只需1倍柱體積（）4.上樣后立即洗脫（）5.疏水層析低鹽上樣、高鹽洗脫（）6.凝膠過濾分辨率與柱長正相關(guān)（）7.離子交換流速不影響結(jié)合（）8.填料用50%乙醇保存（）9.空氣可測柱壓（）10.親和配體無需再生（）五、簡答題（共4題，每題5分，共20分）1.簡述流速調(diào)試基本步驟。2.離子交換流速過快的影響及解決方法。3.凝膠過濾流速調(diào)試注意事項(xiàng)。4.如何判斷柱平衡充分？六、討論題（共2題，每題5分，共20分）1.離子交換柱流速調(diào)試后，回收率低、峰拖尾，分析原因及解決思路。2.凝膠過濾流速調(diào)試后峰寬異常增寬，分析原因及改進(jìn)措施。---答案部分一、填空題答案1.離子交換2.cm/h3.20%4.1/35.3-56.蠕動泵7.Lowry（或BCA）8.過快9.高10.正二、單項(xiàng)選擇題答案1.B2.C3.B4.A5.C6.B7.B8.A9.A10.B三、多項(xiàng)選擇題答案1.ABC2.ABCD3.ABCD4.ABCD5.ABCD6.AB7.ABD8.ABCD9.ABCD10.ABC四、判斷題答案1.×2.×3.×4.×5.√6.√7.×8.×9.×10.×五、簡答題答案1.①檢查柱床（無氣泡、塌陷）；②連恒流泵設(shè)低流速（0.5mL/min）；③用平衡液沖洗，測壓力（不超耐受）；④逐步調(diào)至目標(biāo)流速，觀察電導(dǎo)/吸光度穩(wěn)定；⑤確認(rèn)流速穩(wěn)定后上樣。2.影響：結(jié)合不充分（回收率降）、分離度降、壓力升。解決：①降流速至耐受范圍；②重新平衡至電導(dǎo)穩(wěn)定；③減上樣量（≤1/3柱體積）；④檢查填料堵塞。3.①流速恒定（恒流泵）；②初始低流速（0.3-0.5mL/min）；③無氣泡；④不超填料最大流速；⑤用標(biāo)準(zhǔn)蛋白測柱效。4.①電導(dǎo)與平衡液一致（誤差≤5%）；②吸光度穩(wěn)定（≤0.005AU）；③3-5倍柱體積；④pH一致（離子交換）；⑤柱床穩(wěn)定。六、討論題答案1.原因：①流速過快（結(jié)合不足）；②平衡不充分（電導(dǎo)/pH未匹配）；③上樣量過大；④填料老化。解決：①降流速至0.5-1mL/min；②重新平衡；③減上