CNAS-CL57能力驗證提供者認可準則在微生物領(lǐng)域的應(yīng)用說明GuidanceontheApplicationofAccreditationCriteriaforProficiencyTestingProvidersintheFieldofMicrobiology中國合格評定國家認可委員會 1 2 3 3 3 4 9 CNAS-CL03:2010中章、節(jié)條款號和名稱，能力驗證提供者認可準則在微生物領(lǐng)域的應(yīng)用說明GB/T28043利用實驗室間比對進行能力驗證的統(tǒng)計方法（ISO13528,(Microbiologyoffoodandanimalguidanceforproficiencytesting3.3標準菌株referencestrain進行定性微生物檢測時，能檢測到但無法給出精確數(shù)值的微生物的最小量CNAS-CL57:2015微生物能力驗證計劃提供者或其分包方，應(yīng)具有相應(yīng)微生物項目的檢測能），開展新能力驗證計劃前通常應(yīng)進行預(yù)試驗，預(yù)試驗應(yīng)f）采用自然樣品還是人工污染樣品，以及樣品的基質(zhì)；——在使用前應(yīng)確認目標微生物的特性,應(yīng)根據(jù)能力驗證的目標采用適當(dāng)?shù)摹芰︱炞C樣品中存在背景菌群尤其是疑似目標微慮背菌群對目標微生物檢測的影響，應(yīng)通過確認試驗保證樣品指定值的準確可j）有防止串通或偽造結(jié)果的措施，如多水平、多樣本設(shè)計，參加者返回b）識別出制備均勻性和穩(wěn)定性應(yīng)建立微生物能力驗證樣品的制備、貯存、處置的程）；——樣品的數(shù)量（要考慮完成結(jié)果評價之后，參加者）；注：在定性計劃中設(shè)定目標微生物方法檢出限時，由于微生物本身的特性和添加的技術(shù)手段的局限性，目標微生物水平通常設(shè)定在略高于常規(guī)方法的檢出限，以有利于準確考察參加者的能力。如果目標微生物水平設(shè)定過高，不利于完整考察實驗室的技術(shù)能力，尤其是在篩選、選擇分離和鑒定階段的能力。對定量和定性能力驗證樣品，應(yīng)建立均勻性和穩(wěn)定性判定原則（附錄微生物能力驗證樣品應(yīng)進行穩(wěn)定性評定。必要時，應(yīng)將穩(wěn)定性量考慮作為能力驗證樣品指定值測量不確定度的補充分量，在能力評定中予以考——貯存穩(wěn)定性評定。穩(wěn)定性期限應(yīng)是從樣注1：開展過多輪次定量微生物能力驗證計劃的提供者，可使用經(jīng)驗值作為能力評定標準差來評價參加者的能力。注2:通常最大可能數(shù)（mostprobablenumber,MPN）計數(shù)方法和平板菌落計數(shù)方法具有不同的重復(fù)性。在同一定量計劃中，如兩種方法的重復(fù)性差異較大影響能力評定，需考慮分開進行統(tǒng)計評價。即使采用同一標準方法，以下因素也會影響計數(shù)結(jié)果：復(fù)蘇方法、平板技術(shù)（如傾倒平板和螺旋加樣）、培養(yǎng)基、培養(yǎng)溫度等。注3:定性微生物能力驗證計劃通常直接將參加者結(jié)果與指定值進行比較，兩者相同能力評價視為滿意，不相同視為不滿意。提供者應(yīng)將確定微生物定性和定量計劃指定值（平均b）給參加者的指導(dǎo)書d)對于病原微生物能力驗證計劃，提供者應(yīng)有文件化的政策，告知參加提供者應(yīng)控制微生物樣品的包裝，確保符合國家——使用前應(yīng)確認目標微生物的特性,應(yīng)根據(jù)能力驗證的目標采用適當(dāng)?shù)臉诉m用時，記錄控制程序應(yīng)包括基于病原微生物安全考慮的質(zhì)量/技術(shù)記微生物水平較高時，可使用單因子方差分析和Ss≤0.3σ準則（Ss為樣品間比如根據(jù)經(jīng)驗值或先期同類能力驗證計劃獲得的σ值，可利用Ss≤0.3σ進行評當(dāng)微生物水平較低時，樣品間微生物計數(shù)差異可能會比較大，可能不滿足Ss≤0.3σ的要求，在后續(xù)評價參加者能力時可考慮在能力評定標準差中加入樣若F＜自由度（n1，n2）及給定顯著性水平α（通常α=0.05）的臨界值892043.103.073.053.033.012.992.972.962.952.943.073.022.982.942.912.892.862.852.832.812.802.792.772.952.902.852.822.792.762.742.722.702.692.672.662.652.852.802.752.722.692.662.642.622.602.582.572.562.542.772.712.672.632.602.582.552.532.512.502.482.472.462.702.652.602.572.532.512.482.462.442.432.412.402.392.642.592.542.512.482.452.422.402.382.372.352.342.332.592.542.492.462.422.402.372.352.332.322.302.292.282.552.492.452.412.382.352.332.312.292.272.212.462.412.372.342.312.292.282.422.382.342.312.282.206202.452.392.352.312.2052.142.12（摘自GB4086.4-1983統(tǒng)計分布數(shù)值表F分布）偏差Ss：若Ss≤0.3σ,則使用的樣品可以認為是均勻的。通常從微生物能力驗證樣品總體中隨機抽取足夠具有代表性的品進行穩(wěn)定 x2—第二次測試數(shù)據(jù)的平均值；注：為了保證平均值和標準偏差的準確度，n1和n2均≥6。（摘自GB4086.3-1983統(tǒng)計分布數(shù)值表t分布） 注：取樣數(shù)≥3，每次單獨取樣。測試方法與均勻性檢驗相同。Z值是參加者結(jié)果和指定值的差值與能力評定標準差σ的比值。該值絕對值z=其中x為參加的結(jié)果，X為指定值,σ能力評定標準差。參加者在重復(fù)條件下n次測試的平均值x與指定值X之差|x-X|小于臨界注：重復(fù)性限r(nóng)=2.8σr，再現(xiàn)性限為R=2.8σR，σr為測試方法的重復(fù)性標準差，σR為測試方法的再現(xiàn)性標準差。根據(jù)ISO4833，常規(guī)30℃需氧培養(yǎng)的固體培養(yǎng)基上的菌落計數(shù)，其方法重復(fù)性限r(nóng)為0.25，再現(xiàn)性限R為0.45，計算CD值約為0.29。會落在指定值±3σ以內(nèi)，σ為標準差。然而，實踐中仍存在實驗室間變異。大MPN計數(shù)結(jié)果的接受限應(yīng)增加到±3σ和±5σ（ISO/TS22117)。MPN對數(shù)值表3MPN對數(shù)值接受限——在指定值±3σ（含邊界）范圍內(nèi)：滿意——在指定值±3σ和指定值±5σ（不含邊界）范圍內(nèi)：有疑問——在指定值±5σ（含邊界）范圍外：不滿意注：隨著參加者對MPN計數(shù)方法的逐漸熟練和參加者總體水平的提高，參加者MPN計數(shù)值之間的變異會逐漸減小，趨近于方法本身的變異，評價參加者結(jié)果的MPN對數(shù)值接受限可根據(jù)實際情況縮小。如英格蘭衛(wèi)生局經(jīng)過兩年多輪次能力驗證計劃運作之后，將參加者MPN對數(shù)值接受限分別縮小至±2.68σ和±4σ。以某次乳粉中菌落總數(shù)測定能力驗證為例。參加者使用的測試方法為ISO表4菌落總數(shù)測試結(jié)果（CFU/g）測試次數(shù)樣品號測試結(jié)果x1測試結(jié)果x2x1對數(shù)轉(zhuǎn)換值x2對數(shù)轉(zhuǎn)換值150000420004.6994.623253000510004.7244.708360000540004.7784.732447000400004.6724.602550000560004.6994.748643000510004.6334.708745000480004.6534.681846000520004.6634.716948000470004.6814.67243000500004.6994.623總平均值4.685表5方差分析結(jié)果方差來源平方和均方F樣品間90.0230.0025樣品內(nèi)0.0150.0015F臨界值F0.05(9,10)=3.02。計算的F值為1.67，該值＜臨界值，這初步表明表6模擬運輸條件放置30天后測試結(jié)果（CFU/g）12345表7t檢驗分析結(jié)果x1x2s1s2tx-yx-y≤0.3σ值的差值x1-x2為0.002。以經(jīng)驗值0.25為能力評定標準差，0表8參加者結(jié)果及能力評定參加實驗室代碼參加實驗室結(jié)果CFU/g對數(shù)轉(zhuǎn)換值利用CD值|x-X|＜0.29對數(shù)中位值±0.5規(guī)則1710004.851滿意滿意2550004.7400.64滿意滿意3420004.623-0.22滿意滿意41800005.2554.39§不滿意不滿意5430004.633-0.15滿意滿意6280004.447-1.50滿意滿意7410004.613-0.29滿意滿意8500004.6990.34滿意滿意9310004.491-1.18滿意滿意520004.7160.46滿意滿意541004.7330.58滿意滿意175004.243-2.99*不滿意滿意475004.6770.18滿意滿意495004.6950.31滿意滿意450004.6530滿意滿意390004.591-0.45滿意滿意330004.519-0.98滿意滿意220004.342-2.27*滿意滿意650004.8