2026年實驗室廢棄物無害化處理與基因合成技能考核試題及答案一、單項選擇題（每題2分，共20題，40分）1.以下哪類實驗室廢棄物需使用黃色醫(yī)療廢物專用袋收集？A.廢棄的化學(xué)試劑瓶（未殘留液體）B.含大腸桿菌（非致病性菌株）的培養(yǎng)皿C.實驗后未使用的金屬器械（無生物污染）D.過期的非放射性固體試劑答案：B解析：黃色醫(yī)療廢物袋主要用于收集生物性廢棄物，包括被微生物污染的培養(yǎng)物、實驗材料等。選項A屬化學(xué)廢棄物應(yīng)使用黑色或特定顏色容器；C為清潔器械可回收；D為化學(xué)固體廢棄物需分類存放。2.高壓蒸汽滅菌處理生物廢棄物時，正確的參數(shù)設(shè)置是？A.105℃，30分鐘B.121℃，15分鐘C.134℃，5分鐘D.115℃，25分鐘答案：B解析：標(biāo)準(zhǔn)高壓滅菌條件為121℃（1.05kg/cm2）維持15-20分鐘，可有效殺滅包括芽孢在內(nèi)的所有微生物。134℃為快速滅菌參數(shù)，適用于耐高溫器械；115℃用于含糖培養(yǎng)基防止成分破壞。3.基因合成中，若目標(biāo)序列GC含量超過70%，最可能出現(xiàn)的問題是？A.引物退火效率降低B.連接反應(yīng)時間縮短C.轉(zhuǎn)化時感受態(tài)細(xì)胞破裂D.測序峰圖信號增強答案：A解析：GC含量過高會導(dǎo)致引物與模板間氫鍵結(jié)合過強，需提高退火溫度；但過高GC易形成二級結(jié)構(gòu)，反而降低引物結(jié)合效率，出現(xiàn)擴增失敗或非特異性條帶。4.實驗室含氰化物廢液預(yù)處理時，應(yīng)優(yōu)先使用的中和試劑是？A.濃硫酸B.次氯酸鈉C.碳酸鈣D.乙酸乙酯答案：B解析：氰化物（CN?）可被次氯酸鈉（NaClO）氧化為無毒的N?和CO?，反應(yīng)式為2CN?+5ClO?+H?O=2CO?↑+N?↑+5Cl?+2OH?。濃硫酸會釋放HCN氣體，碳酸鈣無氧化作用，乙酸乙酯為有機溶劑不反應(yīng)。5.基因合成過程中，若需要將目的基因插入pUC19載體的多克隆位點（MCS），首選的酶切策略是？A.單酶切（EcoRI）B.雙酶切（EcoRI和HindIII）C.同尾酶（BamHI和BglII）D.甲基化敏感酶（HpaII）答案：B解析：雙酶切可避免載體自連，提高目的片段插入效率；單酶切易導(dǎo)致載體自身環(huán)化；同尾酶雖產(chǎn)生相同粘性末端，但連接后會破壞原酶切位點；甲基化敏感酶需考慮宿主菌甲基化修飾情況。6.實驗室廢棄的銳器（如接種環(huán)、玻片）應(yīng)收集于？A.黃色塑料袋B.防刺穿硬質(zhì)容器C.藍(lán)色可回收箱D.紅色危險品罐答案：B解析：銳器需用防刺穿、防滲漏的專用硬質(zhì)容器（如塑料銳器盒）收集，裝滿3/4時密封處理，防止刺傷操作人員。7.基因合成中，密碼子優(yōu)化的主要目的是？A.增加基因長度B.提高目的蛋白在宿主中的表達(dá)量C.減少引物設(shè)計錯誤D.降低PCR擴增溫度答案：B解析：不同物種對密碼子的使用偏好不同，優(yōu)化后可匹配宿主tRNA豐度，減少翻譯延滯，提高蛋白表達(dá)效率。8.處理含重金屬（如鉛離子）的化學(xué)廢液時，最常用的沉淀方法是？A.調(diào)節(jié)pH至酸性，加入硫化鈉B.調(diào)節(jié)pH至堿性，加入硫化鈉C.調(diào)節(jié)pH至中性，加入乙醇D.調(diào)節(jié)pH至酸性，加入活性炭答案：B解析：鉛離子（Pb2?）在堿性條件下易與S2?形成PbS沉淀（溶度積Ksp=9.04×10?2?），酸性條件下S2?會生成H2S氣體污染環(huán)境。9.基因合成后進行菌落PCR驗證時，若陰性對照（無模板）出現(xiàn)條帶，最可能的原因是？A.引物濃度過低B.Taq酶失活C.模板DNA污染D.dNTP濃度過高答案：C解析：陰性對照出現(xiàn)條帶說明反應(yīng)體系被外源DNA污染（如環(huán)境中的質(zhì)粒或基因組DNA）。引物濃度低會導(dǎo)致無條帶，Taq酶失活則無擴增，dNTP過高可能非特異性增強但陰性對照不應(yīng)有條帶。10.實驗室生物安全柜使用后，正確的清潔流程是？A.直接關(guān)閉電源，次日清潔B.用75%乙醇擦拭工作區(qū)，關(guān)閉風(fēng)機前運行5分鐘C.用次氯酸鈉溶液沖洗濾網(wǎng)，立即關(guān)閉電源D.用去離子水擦拭，開啟紫外燈30分鐘后關(guān)閉答案：B解析：生物安全柜使用后需用75%乙醇擦拭表面消毒，關(guān)閉風(fēng)機前運行5分鐘確保殘留氣溶膠排出；紫外燈需在清潔后開啟，次氯酸鈉可能腐蝕金屬部件，直接關(guān)閉電源會導(dǎo)致污染物殘留。11.基因合成片段拼接時，若采用重疊延伸PCR（SOE-PCR），相鄰片段的重疊區(qū)域長度建議為？A.1-5bpB.15-20bpC.50-100bpD.200-300bp答案：B解析：重疊區(qū)域過短（<10bp）會導(dǎo)致退火效率低，過長（>30bp）可能形成二級結(jié)構(gòu)。15-20bp是保證特異性和結(jié)合效率的最優(yōu)范圍。12.以下哪種化學(xué)廢棄物需單獨分類儲存，不可與其他廢液混裝？A.含鹽酸（pH=2）的廢液B.含氫氧化鈉（pH=13）的廢液C.含甲醇的有機溶劑廢液D.含過氧化物（如H2O2）的廢液答案：D解析：過氧化物性質(zhì)不穩(wěn)定，與還原性物質(zhì)（如有機溶劑）混合可能引發(fā)爆炸，需單獨存放于陰涼處，避免光照。13.基因合成中，若目標(biāo)基因需在原核宿主（如大腸桿菌）中表達(dá)，應(yīng)避免使用的序列是？A.大腸桿菌偏好的密碼子B.連續(xù)的稀有密碼子C.添加核糖體結(jié)合位點（RBS）D.去除原核生物不識別的內(nèi)含子答案：B解析：連續(xù)稀有密碼子會導(dǎo)致核糖體停滯，降低翻譯效率甚至提前終止；其他選項均為優(yōu)化表達(dá)的常規(guī)操作。14.實驗室放射性廢棄物（如32P標(biāo)記物）的暫存時間不得超過？A.1個半衰期B.2個半衰期C.3個半衰期D.5個半衰期答案：A解析：根據(jù)《放射性廢物安全管理條例》，短壽命放射性廢物暫存時間不超過1個半衰期，確保衰變至安全水平后再處理。15.基因合成后進行測序驗證時，若測序結(jié)果顯示多個雜峰，最可能的原因是？A.模板濃度過高B.引物與模板非特異性結(jié)合C.測序反應(yīng)時間不足D.測序儀光學(xué)系統(tǒng)故障答案：B解析：雜峰通常由引物二聚體或非特異性擴增產(chǎn)物導(dǎo)致，模板濃度過高會使主峰信號過強但不會雜峰；反應(yīng)時間不足會導(dǎo)致信號弱，儀器故障為系統(tǒng)性問題。16.處理實驗室廢棄的細(xì)胞培養(yǎng)基（含血清）時，正確的預(yù)處理步驟是？A.直接傾倒至化學(xué)廢液桶B.121℃高壓滅菌30分鐘后按一般固廢處理C.加入次氯酸鈉（有效氯5%）浸泡2小時D.冷凍保存待批量處理答案：B解析：含血清的培養(yǎng)基可能含微生物，需高壓滅菌滅活后再處理；次氯酸鈉浸泡適用于液體生物廢物，但培養(yǎng)基含大量有機物會消耗有效氯，效果不如高壓滅菌。17.基因合成中，若需要克隆一個5kb的基因片段，最適合的載體是？A.質(zhì)粒載體（pUC系列，≤10kb）B.噬菌體載體（λ噬菌體，≤23kb）C.人工染色體（BAC，≤300kb）D.黏粒載體（≤45kb）答案：A解析：5kb屬于常規(guī)基因長度，質(zhì)粒載體操作簡便，適合克?。皇删w和黏粒用于大片段，BAC用于基因組文庫構(gòu)建。18.實驗室廢棄的水銀溫度計破碎后，正確的處理方法是？A.用手直接收集汞珠，放入密封瓶B.撒硫磺粉覆蓋，靜置24小時后收集C.用吸塵器清理，避免汞蒸氣擴散D.倒入下水道用水沖洗答案：B解析：硫磺（S）與汞（Hg）反應(yīng)生成穩(wěn)定的硫化汞（HgS），降低揮發(fā)性；手直接接觸會導(dǎo)致汞吸收，吸塵器會擴散汞蒸氣，下水道排放污染水體。19.基因合成過程中，若需要避免宿主菌的限制修飾系統(tǒng)切割，應(yīng)選擇的菌株是？A.DH5α（recA?,endA?）B.BL21（DE3）（蛋白酶缺陷）C.JM109（重組缺陷）D.XL1-Blue（具有甲基化修飾）答案：A解析：DH5α菌株缺失核酸內(nèi)切酶（endA?）和重組酶（recA?），可減少插入片段的降解和重組；BL21用于蛋白表達(dá)，JM109用于常規(guī)克隆，XL1-Blue含甲基化酶可能影響某些酶切。20.實驗室廢棄的化學(xué)試劑標(biāo)簽脫落無法識別時，應(yīng)？A.按強酸廢液處理B.按一般固廢丟棄C.送專業(yè)檢測機構(gòu)鑒定后分類D.與其他廢液混合后處理答案：C解析：未知成分的廢棄物需經(jīng)專業(yè)檢測確定性質(zhì)后再處理，避免混合反應(yīng)或錯誤處理引發(fā)危險。二、多項選擇題（每題3分，共10題，30分）1.以下屬于實驗室生物性廢棄物的有？A.實驗用小鼠尸體B.含HIV病毒（滅活）的離心管C.未使用的一次性手套D.細(xì)胞培養(yǎng)后的無血清培養(yǎng)基答案：ABD解析：生物性廢棄物包括被生物材料污染的物品、實驗動物尸體、培養(yǎng)物等；未使用的手套無生物污染屬一般固廢。2.基因合成質(zhì)量控制的關(guān)鍵環(huán)節(jié)包括？A.引物序列驗證B.片段拼接效率檢測C.轉(zhuǎn)化后菌落PCR篩選D.最終質(zhì)粒的全序列測序答案：ABCD解析：從引物設(shè)計到最終測序，每個環(huán)節(jié)都需質(zhì)控，確保合成基因的準(zhǔn)確性。3.實驗室化學(xué)廢棄物分類的依據(jù)包括？A.物理狀態(tài)（固態(tài)、液態(tài)、氣態(tài)）B.化學(xué)性質(zhì)（酸堿性、氧化性、還原性）C.危險特性（毒性、腐蝕性、易燃性）D.產(chǎn)生部門（分子實驗室、細(xì)胞實驗室）答案：ABC解析：分類依據(jù)為物理化學(xué)性質(zhì)和危險特性，與產(chǎn)生部門無關(guān)。4.基因合成中，提高片段拼接成功率的方法有？A.增加重疊區(qū)域的GC含量B.優(yōu)化PCR退火溫度C.使用高保真DNA聚合酶D.降低模板DNA濃度答案：BC解析：高保真酶減少擴增錯誤，優(yōu)化退火溫度提高特異性；重疊區(qū)域GC過高易形成二級結(jié)構(gòu)，模板濃度過低會導(dǎo)致擴增失敗。5.實驗室廢棄物暫存區(qū)域需滿足的要求有？A.通風(fēng)良好，避免陽光直射B.配備消防器材和泄漏應(yīng)急工具C.不同類廢棄物分區(qū)存放，標(biāo)識清晰D.由專人負(fù)責(zé)管理，定期記錄答案：ABCD解析：暫存區(qū)域需滿足安全、標(biāo)識、管理等多方面要求，防止交叉污染和事故發(fā)生。6.基因合成中，選擇表達(dá)載體時需考慮的因素有？A.宿主菌的啟動子兼容性B.載體的拷貝數(shù)C.融合標(biāo)簽的類型（如His-Tag）D.抗生素抗性標(biāo)記（如氨芐青霉素）答案：ABCD解析：啟動子決定表達(dá)效率，拷貝數(shù)影響基因劑量，標(biāo)簽便于純化，抗性標(biāo)記用于篩選。7.實驗室處理含重金屬廢液的常用方法有？A.化學(xué)沉淀法（加堿或硫化物）B.吸附法（活性炭、樹脂）C.膜分離法（反滲透、超濾）D.直接稀釋排放答案：ABC解析：直接稀釋排放違反環(huán)保法規(guī)，其他為常規(guī)處理技術(shù)。8.基因合成過程中，可能導(dǎo)致目的基因錯誤的原因有？A.引物設(shè)計時堿基錯配B.PCR擴增時聚合酶引入突變C.連接反應(yīng)中酶切位點未完全切割D.感受態(tài)細(xì)胞轉(zhuǎn)化效率低答案：ABC解析：轉(zhuǎn)化效率低影響陽性克隆數(shù)量，不影響基因序列正確性；前三者直接導(dǎo)致序列錯誤。9.實驗室生物安全防護的基本要求包括？A.操作生物材料時佩戴手套、口罩B.生物廢棄物需先滅活再處理C.實驗結(jié)束后用75%乙醇消毒臺面D.高致病性微生物在BSL-3級實驗室操作答案：ABCD解析：涵蓋個人防護、廢棄物處理、環(huán)境消毒和實驗室等級要求。10.基因合成后，驗證目的基因是否正確表達(dá)的方法有？A.WesternBlot（檢測蛋白）B.qPCR（檢測mRNA水平）C.酶活性測定（若為酶類）D.熒光顯微鏡觀察（若帶熒光標(biāo)簽）答案：ABCD解析：從轉(zhuǎn)錄、翻譯到功能水平均可驗證表達(dá)情況。三、判斷題（每題1分，共10題，10分）1.實驗室廢棄的一次性手套（無生物污染）可與普通生活垃圾混放。（）答案：√解析：無生物、化學(xué)污染的一次性手套屬一般固廢，可按生活垃圾處理。2.基因合成中，引物設(shè)計時需在5’端添加保護堿基以提高酶切效率。（）答案：√解析：限制性內(nèi)切酶切割DNA末端時需一定長度的保護堿基（通常2-6bp），否則酶切效率降低。3.含過氧化物的廢液可與有機溶劑廢液混裝，以減少容器使用。（）答案：×解析：過氧化物與有機溶劑（如乙醇）混合可能引發(fā)氧化還原反應(yīng)，導(dǎo)致爆炸。4.基因合成片段的GC含量越高，其熱穩(wěn)定性越強，因此無需優(yōu)化。（）答案：×解析：過高GC會導(dǎo)致擴增困難和二級結(jié)構(gòu)，仍需通過添加DMSO或調(diào)整反應(yīng)條件優(yōu)化。5.實驗室放射性廢棄物可與普通化學(xué)廢棄物共同處理，只要總量不超過限值。（）答案：×解析：放射性廢棄物需單獨存放，按放射性廢物管理規(guī)范處理，不可與其他廢物混裝。6.基因合成中，使用T4DNA連接酶時，載體與目的片段的摩爾比建議為1:3-1:10。（）答案：√解析：目的片段過量可提高連接效率，通常載體:片段=1:3-1:10。7.實驗室廢棄的瓊脂糖凝膠（含EB）可直接倒入垃圾桶，因為EB已被凝膠固定。（）答案：×解析：EB（溴化乙錠）是強誘變劑，含EB的凝膠需用專用容器收集，經(jīng)化學(xué)滅活（如次氯酸鈉處理）后再丟棄。8.基因合成中，若目標(biāo)基因需分泌表達(dá)，應(yīng)在序列中添加信號肽編碼序列。（）答案：√解析：信號肽引導(dǎo)蛋白進入分泌路徑，是分泌表達(dá)的必要元件。9.實驗室化學(xué)廢液的pH值調(diào)節(jié)應(yīng)在通風(fēng)櫥內(nèi)進行，避免酸霧或堿霧擴散。（）答案：√解析：強酸強堿調(diào)節(jié)pH時會釋放氣體，需在通風(fēng)櫥內(nèi)操作確保安全。10.基因合成后，若測序結(jié)果與預(yù)期有1個堿基差異，可直接用于后續(xù)實驗，因為誤差在允許范圍內(nèi)。（）答案：×解析：基因合成要求序列100%正確，單個堿基差異可能導(dǎo)致蛋白功能改變，需重新合成或定點突變修正。四、簡答題（每題5分，共6題，30分）1.簡述實驗室化學(xué)廢液預(yù)處理的主要步驟及目的。答案：預(yù)處理步驟及目的：（1）分類收集：按酸、堿、有機、無機等分類，避免混合反應(yīng)（如酸堿中和放熱、氧化還原反應(yīng)）。（2）pH調(diào)節(jié)：通過加酸或堿將廢液pH調(diào)至6-9（中性范圍），減少對后續(xù)處理設(shè)施的腐蝕。（3）沉淀/絮凝：對含重金屬離子的廢液，加入沉淀劑（如硫化鈉、氫氧化物）形成沉淀，降低溶解性。（4）吸附：使用活性炭、樹脂等吸附劑去除溶解性有機物或重金屬離子，減少污染物濃度。（5）過濾：分離沉淀后的固液混合物，固體按危險廢物處理，液體進入后續(xù)處理流程。2.基因合成中，引物設(shè)計需遵循的基本原則有哪些？答案：（1）長度：18-25bp，過短特異性低，過長易形成二級結(jié)構(gòu)。（2）GC含量：40%-60%，避免連續(xù)GC或AT重復(fù)（>4個）。（3）退火溫度（Tm）：上下游引物Tm值差異≤5℃，通常55-65℃。（4）避免二聚體和發(fā)夾結(jié)構(gòu)：引物自身或引物間互補序列≤3bp，防止形成引物二聚體或自身折疊。（5）特異性：通過BLAST比對確保引物與非目標(biāo)序列無同源性。（6）保護堿基：若引物含酶切位點，需在5’端添加2-6個保護堿基（如G/C）以提高酶切效率。3.實驗室生物性廢棄物的無害化處理方法有哪些？分別適用于哪些場景？答案：（1）高壓蒸汽滅菌：適用于耐高溫高濕的生物廢棄物（如培養(yǎng)基、試管、移液器吸頭），121℃15-30分鐘可殺滅所有微生物。（2）化學(xué)消毒：適用于不耐高溫的物品（如塑料離心管、生物安全柜表面），使用75%乙醇、次氯酸鈉（有效氯≥5000mg/L）或戊二醛浸泡/擦拭。（3）焚燒：適用于實驗動物尸體、污染的墊料等，需在專用焚燒爐中進行，溫度≥800℃以徹底分解有機物。（4）紫外線照射：適用于空氣和物體表面的輔助消毒，需近距離（<1m）照射30分鐘以上，但無法穿透固體，不能替代高壓滅菌。4.基因合成過程中，如何解決片段拼接失敗的問題？答案：（1）檢查重疊區(qū)域：確認(rèn)相鄰片段重疊長度（15-20bp）和GC含量（避免過高或過低），必要時調(diào)整重疊序列。（2）優(yōu)化PCR條件：提高退火溫度（減少非特異性結(jié)合）、延長延伸時間（針對長片段）、使用高保真聚合酶（減少錯誤）。（3）分段合成：將過長片段（>2kb）拆分為更小的亞片段，分別拼接后再連接。（4）增加模板濃度：確保初始模板量充足（10-100ng），避免因模板不足導(dǎo)致擴增失敗。（5）檢測引物質(zhì)量：通過PAGE或HPLC純化引物，去除短片段和雜質(zhì)，提高引物有效性。5.實驗室放射性廢棄物的管理需遵守哪些規(guī)范？答案：（1）分類存放：按核素種類（如32P、3H）、半衰期（長壽命/短壽命）分開存放，使用專用防輻射容器（鉛罐）。（2）標(biāo)識管理：容器外標(biāo)注核素名稱、活度、日期、責(zé)任人，設(shè)置電離輻射警示標(biāo)志。（3）暫存限制：短壽命廢物（半衰期≤100天）暫存時間不超過10個半衰期，長壽命廢物需送專業(yè)處理機構(gòu)。（4）記錄追蹤：建立廢棄物產(chǎn)生、暫存、轉(zhuǎn)移臺賬，記錄活度衰減情況，轉(zhuǎn)移時需提供放射性廢物轉(zhuǎn)移聯(lián)單。（5）個人防護：操作時佩戴個人劑量計、鉛手套、護目鏡，避免直接接觸，工作結(jié)束后檢測表面污染。6.基因合成中，如何通過菌落PCR快速篩選陽性克隆？答案：（1）引物設(shè)計：選擇載體通用引物（如M13F/R）或基因特異性引物，確保擴增產(chǎn)物大小與預(yù)期一致（500-2000bp最佳）。（2）菌落處理：用無菌牙簽挑取單菌落，在含對應(yīng)抗生素的平板上劃線（保留菌種），然后將牙簽浸入PCR體系中（無需裂解，Taq酶可裂解細(xì)菌釋放DNA）。（3）PCR程序：預(yù)變性95℃5分鐘（裂解細(xì)菌），然后30個循環(huán)（95℃30s，退火溫度30s，72℃延伸時間根據(jù)片段長度），最后72℃延伸5分鐘。（4）結(jié)果分析：電泳檢測擴增產(chǎn)物，與預(yù)期大小一致的克隆為陽性候選，進一步通過測序驗證。五、綜合應(yīng)用題（每題10分，共2題，20分）1.某實驗室在基因合成實驗中，計劃構(gòu)建一個表達(dá)綠色熒光蛋白（GFP）的大腸桿菌工程菌株。已知GFP基因序列（717bp）已通過化學(xué)合成獲得，載體為pET-28a（含T7啟動子、Kan抗性、His-Tag），請設(shè)計從基因克隆到工程菌驗證的完整實驗流程，并說明關(guān)鍵注意事項。答案：實驗流程及注意事項：（1）載體與目的基因酶切：選擇pET-28a的多克隆位點（如NdeI和XhoI），設(shè)計GFP基因引物時在5’端添加對應(yīng)酶切位點及保護堿基（如NdeI：CATATG前加2個G，XhoI：CTCGAG前加2個C）。酶切體系：載體（1μg）、目的基因（3μg）、10×Buffer（2μL）、限制性內(nèi)切酶（各1μL），37℃反應(yīng)2小時（需驗證酶切完全，電泳檢測條帶）。（2）膠回收純化：使用瓊脂糖凝膠電泳分離酶切產(chǎn)物（載體線性化條帶約5.3kb，GFP片段約717bp），用膠回收試劑盒純化，測定濃度（OD260/280應(yīng)在1.8-2.0）。（3）連接反應(yīng)：載體與目的片段摩爾比1:3（計算：載體濃度×717/目的片段濃度×5300=1:3），加入T4DNA連接酶，16℃反應(yīng)過夜（或22℃2小時）。（4）轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞：使用BL21(DE3)感受態(tài)細(xì)胞（含T7RNA聚合酶），取10μL連接產(chǎn)物與50μL感受態(tài)混合，冰浴30分鐘，42℃熱激90秒，冰浴2分鐘，加入200μLLB培養(yǎng)基，37℃振蕩培養(yǎng)1小時。涂板：取100μL菌液涂于含卡那霉素（50μg/mL）的LB平板，37℃倒置培養(yǎng)12-16小時。（5）陽性克隆篩選：菌落PCR：挑取單菌落，用T7啟動子引物（TAATACGACTCACTATAGGG）和T7終止子引物（GCTAGTTATTGCTCAGCGG）擴增，預(yù)期產(chǎn)物約717+載體部分（約800bp）。測序驗證：選取PCR陽性克隆，提取質(zhì)粒送測序，比對GFP基因序列（確保無突變）。（6）工程菌誘導(dǎo)表達(dá)驗證：挑取測序正確的克隆，接種至5mL含Kan的LB培養(yǎng)基，37℃振蕩培養(yǎng)至OD600=0.6-0.8，加入IPTG（終濃度0.5mM），28℃誘導(dǎo)4小時（低溫減少包涵體）。離心收集菌體，超聲破碎后離心，取上清和沉淀進行SDS電泳，觀察約27kDa（GFP分子量26.9kDa+His-Tag）的條帶是否存在（上清中出現(xiàn)為可溶性表達(dá)，沉淀中為包涵體）。熒光檢測：取誘導(dǎo)后的菌液，用熒光顯微鏡觀察綠色熒光（激發(fā)波長488nm，發(fā)射波長509nm），確認(rèn)GFP表達(dá)。關(guān)鍵注意事項：酶切時需使用高純度DNA（避免蛋白或RNA污染抑制酶活性），雙酶切若Buffer不兼容，可先切一個酶，純化后再切另一個。連接反應(yīng)需避免鹽離子濃度過高（影響連接酶活性），可用去離子水調(diào)整體系。轉(zhuǎn)化時感受態(tài)細(xì)胞需保持低溫（冰浴），熱激時間嚴(yán)格控制（過長導(dǎo)致細(xì)胞死亡）。誘導(dǎo)表達(dá)時需優(yōu)化IPTG濃度和溫度（如0.1-1mM，16-37℃），避免過高溫度導(dǎo)致蛋白變性。2.某高校分子生物學(xué)實驗室產(chǎn)生以下廢棄物：①含10%甲醛的組織固定液（500mL）；②使用過的PCR管（含擴增產(chǎn)物，未滅活）；③廢棄的放射性標(biāo)記探針（32P，活度0.5mCi）；④過期的無水乙醇（200mL）；⑤實驗小鼠尸體（3只，無傳染性疾?。Ｕ埛謩e設(shè)計每類廢棄物的無害化處理方案，并說明依據(jù)。答案：①含10%甲醛的組織固定液：處理方案：分類收集：倒入專用“含醛類有機廢液”容器，標(biāo)注“甲醛廢液，500mL，日期”?；瘜W(xué)處理：加入過量的亞硫酸氫鈉（NaHSO3），反應(yīng)式：HCHO+NaHSO3→HOCH2SO3Na（無毒性），攪拌反應(yīng)24小時。檢測：用甲醛快速