2026屆湖南省長沙市寧鄉(xiāng)市生物高三第一學(xué)期期末調(diào)研試題請(qǐng)考生注意：1．請(qǐng)用2B鉛筆將選擇題答案涂填在答題紙相應(yīng)位置上，請(qǐng)用0．5毫米及以上黑色字跡的鋼筆或簽字筆將主觀題的答案寫在答題紙相應(yīng)的答題區(qū)內(nèi)。寫在試題卷、草稿紙上均無效。2．答題前，認(rèn)真閱讀答題紙上的《注意事項(xiàng)》，按規(guī)定答題。一、選擇題：（共6小題，每小題6分，共36分。每小題只有一個(gè)選項(xiàng)符合題目要求）1．棄耕農(nóng)田的群落類型隨時(shí)間推移而發(fā)生變化的現(xiàn)象屬于群落的A．時(shí)間結(jié)構(gòu)B．水平結(jié)構(gòu)C．原生演替D．次生演替2．如圖是甲、乙兩種色盲類型的家系圖。已知控制甲型色盲的基因?yàn)锳、a，控制乙型色盲的基因?yàn)镈、d，Ⅱ5不攜帶甲型色盲基因。下列敘述正確的是（）A．Ⅰ1和Ⅰ2的基因型分別是AaXDXd和AaXdYB．Ⅱ5與一個(gè)不含甲型色盲基因而含乙型色盲基因的攜帶者婚配，其后代全色盲個(gè)體的概率為1/32C．在Ⅱ4和Ⅱ5產(chǎn)生后代過程中，Ⅱ4、Ⅱ5個(gè)體可能發(fā)生了染色體畸變或基因突變D．若乙型色盲產(chǎn)生的原因是基因的起始部位發(fā)生了突變，則一定導(dǎo)致轉(zhuǎn)錄無法起始3．用2mol·L-l的乙二醇溶液和2mol·L-1的蔗糖溶液分別浸泡取自同一部位的植物表皮，每隔相同時(shí)間在顯微鏡下測量視野中若干個(gè)細(xì)胞的長度x和原生質(zhì)體長度y（如圖1），并計(jì)算x／y的平均值，得到圖2所示結(jié)果。對(duì)結(jié)果曲線分析中錯(cuò)誤的是（）A．2mol·L-1的乙二醇溶液和2mol·L-1的蔗糖溶液的滲透壓相等B．a(chǎn)點(diǎn)前比值不變說明表皮細(xì)胞水分子進(jìn)出平衡C．b點(diǎn)前表皮細(xì)胞的吸水能力逐漸增大D．c點(diǎn)后表皮細(xì)胞發(fā)生質(zhì)壁分離復(fù)原4．用PCR技術(shù)將DNA分子中的A1片段進(jìn)行擴(kuò)增，設(shè)計(jì)了引物Ⅰ、Ⅱ，其連接部位如圖所示，x為某限制酶識(shí)別序列。擴(kuò)增后得到的絕大部分DNA片段是右圖中的A． B． C． D．5．下列能在人體內(nèi)環(huán)境中進(jìn)行的生理過程是（）A．血漿蛋白的合成 B．勞氏肉瘤病毒的增殖C．HCO3-維持酸堿平衡 D．胰蛋白酶催化蛋白質(zhì)水解6．下列關(guān)于人體內(nèi)環(huán)境的敘述，錯(cuò)誤的是（）A．精子與卵細(xì)胞的結(jié)合發(fā)生在人體內(nèi)環(huán)境中B．內(nèi)環(huán)境的成分中有營養(yǎng)物質(zhì)和代謝廢物C．肝臟處血漿中的氧氣濃度比組織液中高D．肝細(xì)胞可以和組織液直接發(fā)生物質(zhì)交換二、綜合題：本大題共4小題7．（9分）某小組得到一盆雜合體的名貴花卉，欲利用植物組織培養(yǎng)進(jìn)行擴(kuò)大種植?；卮鹣铝袉栴}：（1）配制植物組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基常用的凝固劑是_______。（2）以該名貴花卉的葉和花瓣組織為材料，在一定條件下進(jìn)行培養(yǎng)，經(jīng)過_______形成愈傷組織，再轉(zhuǎn)接到含有_______________的培養(yǎng)基上，就可以誘導(dǎo)其________成胚狀體或叢芽，經(jīng)過人工薄膜包裝后制成人工種子。與天然種子相比，人工種子具有的優(yōu)點(diǎn)有_______________________________（答出兩點(diǎn)即可）。（3）要快速獲得與原植株基因型和表現(xiàn)型都相同的花卉，_______（填“能”或“不能”）采用該名貴花卉的花粉粒作為組織培養(yǎng)的材料，原因是_______________。8．（10分）池塘養(yǎng)殖普遍存在由于餌料、魚類排泄物、換水不及時(shí)等引起的水體污染現(xiàn)象，研究者設(shè)計(jì)了一種循環(huán)水池塘養(yǎng)殖系統(tǒng)（如下圖）。請(qǐng)回答下列問題：(1)與自然池塘相比，人工養(yǎng)殖池塘生態(tài)系統(tǒng)恢復(fù)力穩(wěn)定性______。人工養(yǎng)殖池塘水體的N、P含量容易升高，會(huì)引起水體的富營養(yǎng)化；藻類等浮游生物大量繁殖、加之死亡后被微生物分解，引起水體的溶氧量下降，造成魚類等死亡，進(jìn)一步破壞了生態(tài)系統(tǒng)穩(wěn)態(tài)，這種調(diào)節(jié)方式稱為__________。(2)與傳統(tǒng)養(yǎng)殖池塘相比，該養(yǎng)殖系統(tǒng)增加的生態(tài)工程設(shè)施有________?？梢酝ㄟ^在這些設(shè)施內(nèi)栽植水生植物、放養(yǎng)濾食動(dòng)物等措施，起到對(duì)水體的_________，有效減少水體中的N、P等含量。(3)該養(yǎng)殖系統(tǒng)設(shè)計(jì)為前一池塘上層水流人后一池塘底部，實(shí)現(xiàn)水層交換，其目的有________________________、____________________________。(4)該養(yǎng)殖系統(tǒng)中串聯(lián)的池塘不宜過多，因?yàn)開____________________________________。(5)保持池塘水體中適當(dāng)?shù)腘、P含量是必要的，該養(yǎng)殖系統(tǒng)可以通過________、________進(jìn)行調(diào)控。9．（10分）類產(chǎn)堿假單胞菌殺蟲蛋白不易被蝗蟲體內(nèi)蛋白酶降解，是一種安全的細(xì)菌殺蟲蛋白。某研究小組將類產(chǎn)堿假單胞菌殺蟲蛋白基因（ppip）導(dǎo)入牧草中獲得了抗蝗蟲牧草品種。（1）ppip基因，還有一些抗病基因，抗除草劑基因等都是用來提高植物的_______能力。該研究小組檢查基因工程是否做成功的一步是_______________，其中目的基因能否在受體細(xì)胞中穩(wěn)定遺傳的關(guān)鍵是________。（2）下圖是該研究小組設(shè)計(jì)的T-DNA元件示意圖。①攜帶ppip的T-DNA導(dǎo)入植物細(xì)胞的方法是_____________；T-DNA發(fā)揮的功能是_____________________。②將被檢材料用含有底物（X-Gluc）的緩沖液浸泡，若組織細(xì)胞表達(dá)出GUS，該酶就可將X-Gluc水解生成藍(lán)色產(chǎn)物，從而使被檢材料顯藍(lán)色。如下圖所示。研究發(fā)現(xiàn)天然植物體內(nèi)無GUS，根據(jù)T-DNA元件示意圖，請(qǐng)思考gus基因（β-葡萄糖苷酸酶基因）在植物基因表達(dá)載體中作為___________；選取該基因的原理是____________________。10．（10分）乙烯具有促進(jìn)果實(shí)成熟的作用，ACC氧化酶和ACC合成酶是番茄細(xì)胞合成乙烯的兩個(gè)關(guān)鍵酶。利用反義DNA技術(shù)（原理如圖1），可以抑制這兩個(gè)基因的表達(dá)，從而使番茄具有耐儲(chǔ)存、宜運(yùn)輸?shù)膬?yōu)點(diǎn)。圖2為融合ACC氧化酶基因和ACC合成酶基因的反義表達(dá)載體的結(jié)構(gòu)示意圖。（1）圖2中的2A11為特異性啟動(dòng)子，則2A11應(yīng)在番茄的____________（器官）中表達(dá)。（2）從番茄成熟果實(shí)中提取___________為模板，利用反轉(zhuǎn)錄法合成ACC氧化酶基因和ACC合成酶基因，以進(jìn)行拼接構(gòu)成融合基因并擴(kuò)增。（3）合成出的ACC氧化酶基因兩端分別含限制酶BamHⅠ和XbaⅠ的酶切位點(diǎn)，ACC合成酶基因兩端含SacⅠ和XbaⅠ的酶切位點(diǎn)，用限制酶____________對(duì)上述兩個(gè)基因進(jìn)行酶切，再串聯(lián)成融合基因，相應(yīng)的Ti質(zhì)粒應(yīng)用限制酶_______________進(jìn)行切割，確保融合基因能夠插入載體中。（4）為了實(shí)現(xiàn)圖1中反義基因的效果，應(yīng)將融合基因_______（正向/反向）插入在啟動(dòng)子2A11的下游即可構(gòu)成反義融合基因。將表達(dá)載體與農(nóng)桿菌菌液混合后，接種在含有___的培養(yǎng)基中，可篩選出含有反義融合基因的農(nóng)桿菌，再利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法獲得轉(zhuǎn)基因番茄。（5）在檢測番茄細(xì)胞中是否存在反義融合基因時(shí)，____________（填“能”/“不能”）用放射性物質(zhì)標(biāo)記的ACC氧化（合成）酶基因片段做探針進(jìn)行檢測，理由是____________。11．（15分）研究發(fā)現(xiàn)仙人掌和蘿卜相比，有一個(gè)很特殊的CO2固定過程：夜間氣孔開放，吸收的CO2生成蘋果酸儲(chǔ)存在液泡中（如圖一所示）；白天氣孔關(guān)閉，液泡中的蘋果酸經(jīng)脫羧作用釋放CO2用于光合作用（如圖二所示）。而蘿卜固定CO2過程如圖三所示。據(jù)圖回答下列問題：（1）據(jù)圖可知仙人掌和蘿卜共有的代謝途徑是____________________________。（2）仙人掌夜晚能吸收CO2，卻不能合成（CH2O）的原因是缺乏暗反應(yīng)必需的____________，白天進(jìn)行光合作用所需的CO2的來源有____________________________________。（3）在上午11：00點(diǎn)時(shí)，突然降低環(huán)境中CO2濃度后的一小段時(shí)間內(nèi)，仙人掌和蘿卜的葉肉細(xì)胞中C3含量的變化趨勢分別是_______（填“升高”、“降低”或“基本不變”），原因是________________________。

參考答案一、選擇題：（共6小題，每小題6分，共36分。每小題只有一個(gè)選項(xiàng)符合題目要求）1、D【解析】

初生演替是指一個(gè)從來沒有被植物覆蓋的地面，或者是原來存在過植被，但是被徹底消滅了的地方發(fā)生的演替；原來有的植被雖然已經(jīng)不存在，但是原來有的土壤基本保留，甚至還保留有植物的種子和其他繁殖體的地方發(fā)生的演替是次生演替。【詳解】棄耕農(nóng)田的群落類型隨時(shí)間推移而發(fā)生變化的現(xiàn)象屬于群落演替，棄耕的農(nóng)田上原本就存在一些植被或種子或繁殖體，因此其演替類型屬于次生演替，D正確。2、C【解析】

性狀是由基因控制的，控制性狀的基因組合類型稱為基因型。染色體分為常染色體和性染色體兩種。伴性遺傳指位于性染色體上的基因所控制的性狀表現(xiàn)出與性別相聯(lián)系的遺傳方式。自然界中由性染色體決定生物性別的類型，主要有XY型和ZW型，XY型在雌性的體細(xì)胞內(nèi)，有兩個(gè)同型的性染色體，在雄性的體細(xì)胞內(nèi)，有兩個(gè)異型的性染色體。由于生殖細(xì)胞或受精卵里的遺傳物質(zhì)發(fā)生了改變，從而使發(fā)育成的個(gè)體患疾病，這類疾病都稱為遺傳性疾病，簡稱遺傳病。色盲分為全色盲和部分色盲（紅色盲、綠色盲、藍(lán)黃色盲等）。Ⅰ1和Ⅰ2生下了Ⅱ4，說明乙型色盲為常染色體隱性遺傳，由d基因控制。Ⅱ5不攜帶甲型色盲基因，但卻生下了患甲型色盲的患者，說明甲型色盲為伴X染色體隱性遺傳，由a基因控制?！驹斀狻緼、Ⅰ1和Ⅰ2的基因型分別是DdXAXa和DdXaY，A錯(cuò)誤；B、Ⅱ5的基因型為D_XAY，與一個(gè)不含甲型色盲基因而含乙型色盲基因的攜帶者（DdXAXA）婚配，其后代全色盲個(gè)體的概率為0，B錯(cuò)誤；C、在Ⅱ4（ddXAXa）和Ⅱ5（D_XAY）產(chǎn)生后代過程中，Ⅲ8患甲?。╔aXa），Ⅱ4、Ⅱ5個(gè)體可能發(fā)生了染色體畸變或基因突變，C正確；D、若乙型色盲產(chǎn)生的原因是基因的起始部位發(fā)生了突變，則不一定導(dǎo)致轉(zhuǎn)錄無法起始，也可能有其它的原因?qū)е乱倚蜕さ漠a(chǎn)生，D錯(cuò)誤。故選C。3、B【解析】

分析題圖可知，x和y分別代表細(xì)胞的長度和原生質(zhì)體長度y，故x/y的比值越大，證明細(xì)胞失水越嚴(yán)重，據(jù)此分析作答?！驹斀狻緼、滲透壓大小主要與溶液中溶質(zhì)微粒的數(shù)目有關(guān)，2mol·L-1的乙二醇溶液和2mol·L-1的蔗糖溶液的滲透壓相等，A正確；B、由題圖可知：a之前不變的原因是一開始細(xì)胞失水較少，原生質(zhì)體與細(xì)胞壁還未分離，B錯(cuò)誤；C、據(jù)圖分析可知：b點(diǎn)時(shí)x/y的比值達(dá)到最大值，此時(shí)細(xì)胞失水達(dá)到最大值，證明b點(diǎn)前細(xì)胞逐漸失水，故表皮細(xì)胞的吸水能力逐漸增大，C正確；D、c點(diǎn)時(shí)置于乙二醇溶液中的x/y的比值達(dá)到最大，此后逐漸變小，證明細(xì)胞吸水，即c點(diǎn)后表皮細(xì)胞發(fā)生質(zhì)壁分離復(fù)原，D正確。故選B?！军c(diǎn)睛】質(zhì)壁分離的原因分析：外因：外界溶液濃度＞細(xì)胞液濃度；內(nèi)因：原生質(zhì)層相當(dāng)于一層半透膜，細(xì)胞壁的伸縮性小于原生質(zhì)層；表現(xiàn)：液泡由大變小，細(xì)胞液顏色由淺變深，原生質(zhì)層與細(xì)胞壁分離。4、D【解析】

利用PCR技術(shù)將DNA分子中的A1片段進(jìn)行擴(kuò)增，當(dāng)引物與母鏈通過堿基互補(bǔ)配對(duì)結(jié)合后，子鏈延伸的方向總是從5′端到3′端，據(jù)此依題意和圖示分析可知，A、B、C均錯(cuò)誤，D正確。5、C【解析】

人體體內(nèi)的液體叫體液，可以分成細(xì)胞內(nèi)液和細(xì)胞外液，細(xì)胞外液包括組織液、血漿、淋巴，細(xì)胞外液也叫內(nèi)環(huán)境；一切與外界相通的管腔、囊腔（如消化道、呼吸道、膀胱、子宮等）及與外界相通的液體（如淚液、汗液、尿液、消化液等）都不可看作內(nèi)環(huán)境，因而其內(nèi)所含物質(zhì)也不可看作存在于內(nèi)環(huán)境中的物質(zhì)?！驹斀狻緼、血漿蛋白在細(xì)胞內(nèi)的核糖體中合成，細(xì)胞內(nèi)的核糖體不是內(nèi)環(huán)境，A錯(cuò)誤；B、病毒必須營寄生生活，在活的宿主細(xì)胞內(nèi)才能進(jìn)行生命活動(dòng)，因此勞氏肉瘤病毒的增殖發(fā)生在細(xì)胞內(nèi)，不屬于內(nèi)環(huán)境，B錯(cuò)誤；C、HCO3-維持酸堿平衡發(fā)生在血漿中，血漿屬于內(nèi)環(huán)境，C正確；D、胰蛋白酶催化蛋白質(zhì)水解發(fā)生在消化道中，消化道與外界環(huán)境相通，不屬于內(nèi)環(huán)境，D錯(cuò)誤。故選C。6、A【解析】

內(nèi)環(huán)境又叫細(xì)胞外液，由血漿、組織液和淋巴組成，內(nèi)環(huán)境是多細(xì)胞生物體的細(xì)胞生活的直接液體環(huán)境，是多細(xì)胞生物體的細(xì)胞與外界環(huán)境進(jìn)行物質(zhì)交換的媒介；內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)態(tài)是細(xì)胞完成正常生命活動(dòng)的必要條件。內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)是指正常機(jī)體通過調(diào)節(jié)作用，使各個(gè)器官、系統(tǒng)協(xié)調(diào)活動(dòng)，共同維持內(nèi)環(huán)境的相對(duì)穩(wěn)定的狀態(tài)，內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)是機(jī)體進(jìn)行正常生命活動(dòng)的必要條件?！驹斀狻緼、精子與卵細(xì)胞的結(jié)合發(fā)生在女性的輸卵管，而輸卵管為體外環(huán)境，不屬于內(nèi)環(huán)境，A錯(cuò)誤；B、內(nèi)環(huán)境由血漿、組織液和淋巴組成，其成分中有營養(yǎng)物質(zhì)和代謝廢物，B正確；C、肝臟細(xì)胞需要的氧氣來自于組織液，而組織液中的氧氣來自于血漿，因此肝臟處血漿中的氧氣濃度比組織液中高，C正確；D、肝細(xì)胞的內(nèi)環(huán)境是組織液，其可以與組織液直接發(fā)生物質(zhì)交換，D正確。故選A。二、綜合題：本大題共4小題7、瓊脂脫分化不同激素成分再分化可以完全保持優(yōu)良品種的遺傳特性、生產(chǎn)上不受季節(jié)限制、方便貯藏和運(yùn)輸不能對(duì)雜合體的植株來說，其體細(xì)胞的基因型相同，而花粉粒的基因型與體細(xì)胞的基因型不同。用花粉粒進(jìn)行組織培養(yǎng)得到的花卉，其基因型不同于原植株【解析】

1、植物組織培養(yǎng)的條件：①細(xì)胞離體和適宜的外界條件（如適宜溫度、適時(shí)的光照、pH和無菌環(huán)境等）。②一定的營養(yǎng)（無機(jī)、有機(jī)成分）和植物激素（生長素和細(xì)胞分裂素）。2、植物的組織培養(yǎng)利用了植物細(xì)胞具有全能性的原理。3、植物組織培養(yǎng)的過程：外植體脫分化形成愈傷組織，愈傷組織通過再分化形成胚狀體，進(jìn)行發(fā)育形成個(gè)體。4、科學(xué)家從懸浮培養(yǎng)的單細(xì)胞、離體花粉或胚囊中，通過植物組織培養(yǎng)技術(shù)獲得胚狀結(jié)構(gòu)（胚狀體），胚狀體不同于一般的種子胚，是由非合子細(xì)胞分化形成的類似于胚的結(jié)構(gòu)物，所以，又稱“體細(xì)胞胚”或“花粉胚”。胚狀體在一定的條件下，可以通過胚胎發(fā)育過程形成植株。將其包埋在一個(gè)能提供營養(yǎng)的膠質(zhì)中，外包裹上人造種皮，便制成了“人工種子”?！驹斀狻浚?）配制植物組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基常用的凝固劑是瓊脂。（2）在一定的營養(yǎng)和激素等條件下，植物細(xì)胞可以脫分化形成愈傷組織，將愈傷組織轉(zhuǎn)接到含有不同激素成分的培養(yǎng)基上，就可以誘導(dǎo)其再分化生成胚狀體或叢芽，經(jīng)過人工薄膜包裝后制成人工種子。天然種子的生產(chǎn)會(huì)受到季節(jié)、氣候和地域的限制，且自交后代會(huì)出現(xiàn)性狀分離，而人工種子可以克服這些缺陷。由于人工種子的形成屬于無性繁殖，所以人工種子可以完全保持優(yōu)良品種的遺傳特性，且生產(chǎn)上不受季節(jié)限制、方便貯藏和運(yùn)輸。（3）若該種植物是一種雜合體的名貴花卉，要快速獲得與原植株基因型和表現(xiàn)型都相同的該種花卉，可用組織培養(yǎng)方法繁殖；在培養(yǎng)時(shí)，不能采用經(jīng)減數(shù)分裂得到的花粉粒作為外植體，原因是對(duì)雜合體的植株來說，其體細(xì)胞的基因型相同，通過減數(shù)分裂形成花粉粒的過程中會(huì)發(fā)生等位基因分離，非同源染色體上的非等位基因自由組合等，因此花粉粒的基因型與體細(xì)胞的基因型不同，用花粉粒進(jìn)行組織培養(yǎng)得到花卉基因型不同于原植株?！军c(diǎn)睛】本題考查植物組織培養(yǎng)的過程和應(yīng)用，意在考查考生能識(shí)記并理解所學(xué)知識(shí)的要點(diǎn)，把握知識(shí)間的內(nèi)在聯(lián)系，形成一定知識(shí)網(wǎng)絡(luò)的能力，并且具有一定的分析能力和理解能力。8、高正反饋生態(tài)塘和潛流濕地凈化作用增加水中的溶氧量提高餌料的利用率后面池塘水體中的N和P含量(濃度)越來越高補(bǔ)水和排水水泵控制水的流量(循環(huán)頻次)【解析】

（1）人工養(yǎng)殖池塘生態(tài)系統(tǒng)中物種種類少，抵抗力穩(wěn)定性低，恢復(fù)力穩(wěn)定性高，重度污染引起的調(diào)節(jié)方式屬于正反饋調(diào)節(jié)。（2）為了減少水體中N、P等含量，可向養(yǎng)殖系統(tǒng)中增加生態(tài)塘和潛流濕地，在其中栽植水生植物、放養(yǎng)慮食動(dòng)物，可起到對(duì)水體進(jìn)行凈化處理。（3）水層交換的目的是增加水中的溶氧量、提高餌料的利用率。（4）由于后面池塘水體中的N和P含量（濃度）越來越高，所以養(yǎng)殖系統(tǒng)中串聯(lián)的池塘不宜過多。（5）為了保持池塘水體中適當(dāng)?shù)腘、P含量，所以需對(duì)養(yǎng)殖系統(tǒng)進(jìn)行補(bǔ)水和排水、水泵控制水的流量的調(diào)控。9、抗逆目的基因的檢測與鑒定檢測轉(zhuǎn)基因生物DNA上是否插入了目的基因農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將攜帶的ppip轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞，并整合到受體細(xì)胞染色體的DNA上標(biāo)記基因天然植物體內(nèi)無GUS，不能催化X-Gluc產(chǎn)生藍(lán)色產(chǎn)物；若目的基因成功導(dǎo)入受體細(xì)胞，與其相連的標(biāo)記基因表達(dá)的GUS可催化X-Gluc產(chǎn)生藍(lán)色產(chǎn)物。因此可以通過有無藍(lán)色產(chǎn)物來鑒定目的基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞?！窘馕觥?/p>

基因工程的基本操作程序第一步：目的基因的獲?。涸嘶虿扇≈苯臃蛛x獲得，真核基因是人工合成，人工合成目的基因的常用方法有反轉(zhuǎn)錄法和化學(xué)合成法。第二步：基因表達(dá)載體的構(gòu)建第三步：將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞，常用的轉(zhuǎn)化方法：將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞：采用最多的方法是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，其次還有基因槍法和花粉管通道法等；將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞：最常用的方法是顯微注射技術(shù)。第四步：目的基因的檢測和表達(dá)?！驹斀狻浚?）ppip是一種殺蟲蛋白，使植株具有抗蟲的特性，和抗病基因，抗除草劑基因等都是用來提高植物的抗逆能力；基因工程是否成功的第一步是目的基因的檢測與鑒定；目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定遺傳的關(guān)鍵是檢測轉(zhuǎn)基因生物DNA上是否插入了目的基因。（2）①將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞的方法通常是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，T-DNA將攜帶的ppip轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞，并整合到受體細(xì)胞染色體的DNA上②由于GUS可以將X-Gluc水解生成藍(lán)色產(chǎn)物，所以gus基因在運(yùn)載體中作為標(biāo)記基因，其原因天然植物體內(nèi)無GUS，不能催化X-Gluc產(chǎn)生藍(lán)色產(chǎn)物；若目的基因成功導(dǎo)入受體細(xì)胞，與其相連的標(biāo)記基因表達(dá)的GUS可催化X-Gluc產(chǎn)生藍(lán)色產(chǎn)物。因此可以通過有無藍(lán)色產(chǎn)物來鑒定目的基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞?！军c(diǎn)睛】本題考查基因工程的操作步驟，考生需要識(shí)記基因工程的基本操作程序，重點(diǎn)是對(duì)標(biāo)記基因的理解。10、果實(shí)RNAXbalBamHl和Sacl反向卡那霉素不能番茄細(xì)胞內(nèi)本來存在ACC合成酶基因，能與ACC合成酶基因探針發(fā)生分子雜交【解析】

分析題意和題圖：番茄細(xì)胞中原有靶基因控制合成的ACC氧化酶和ACC合成酶是番茄細(xì)胞合成乙烯的兩個(gè)關(guān)鍵酶。圖1所示為反義基因轉(zhuǎn)錄成的RNA可與靶基因轉(zhuǎn)錄出的mRNA形成RNA雙鏈，使靶mRNA不能與核糖體結(jié)合或被RNA酶降解，從而阻止了ACC氧化酶和ACC合成酶的合成，影響細(xì)胞中乙烯的合成，使番茄具有耐儲(chǔ)存、宜運(yùn)輸?shù)膬?yōu)點(diǎn)。圖2所示的基因表達(dá)載體的組成包括復(fù)制原點(diǎn)、啟動(dòng)子、終止子、標(biāo)記基因和目的基因，目的基因插入點(diǎn)在啟動(dòng)子和終止子之間?！驹斀狻浚?）乙烯具有促進(jìn)果實(shí)成熟的作用，因此圖2中的2A11為特異性啟動(dòng)子，則2A11應(yīng)在番茄的果實(shí)中表達(dá)。（2）從番茄成熟果實(shí)中提取RNA為模板，利用反轉(zhuǎn)錄法合成ACC氧化酶基因和ACC合成酶基因，以進(jìn)行拼接構(gòu)成融合基因并擴(kuò)增。（3）合成出的ACC氧化酶基因兩端分別含限制酶BamHⅠ和XbaⅠ的酶切位點(diǎn)，ACC合成酶基因兩端含SacⅠ和XbaⅠ的酶切位點(diǎn)，要將兩個(gè)基因融合，需用同一種限制酶即XbaⅠ酶對(duì)上述兩個(gè)基因進(jìn)行酶切，再用DNA連接酶串聯(lián)成融合基因，這樣融合基因上有三個(gè)限制酶切點(diǎn)：BamHⅠ、XbaⅠ、SacⅠ，其中限制酶BamHⅠ、SacⅠ分別位于融合基因的兩端，因此相應(yīng)的Ti質(zhì)粒應(yīng)用限制酶BamHl和Sacl進(jìn)行切割，確保融合基因能夠插入載體中。（4）反義融合基因是由番茄果實(shí)細(xì)胞中的靶基因轉(zhuǎn)錄出的mRNA反轉(zhuǎn)錄形成的，因此為了實(shí)現(xiàn)圖1中反義基因的效果，應(yīng)將融合基因反向插入在啟動(dòng)子2A11