2026年生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室常見實(shí)驗(yàn)技術(shù)問題庫(kù)一、選擇題（每題2分，共20題）1.在進(jìn)行PCR實(shí)驗(yàn)時(shí)，若PCR產(chǎn)物電泳結(jié)果顯示只有一條很亮的條帶，而沒有出現(xiàn)預(yù)期大小的條帶，可能的原因是（）。A.引物設(shè)計(jì)不合理B.DNA模板量不足C.循環(huán)數(shù)設(shè)置過高D.Taq酶失活2.在WesternBlot實(shí)驗(yàn)中，若蛋白條帶模糊不清，可能的原因是（）。A.蛋白質(zhì)濃度過高B.轉(zhuǎn)膜不充分C.抗體濃度過低D.電泳條件不合適3.在流式細(xì)胞術(shù)實(shí)驗(yàn)中，若細(xì)胞凋亡率測(cè)定結(jié)果偏高，可能的原因是（）。A.細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間過長(zhǎng)B.細(xì)胞固定不充分C.細(xì)胞裂解過度D.凋亡抗體標(biāo)記不均4.在ELISA實(shí)驗(yàn)中，若標(biāo)準(zhǔn)曲線線性關(guān)系不佳，可能的原因是（）。A.底物濃度過高B.抗體滴度不合適C.洗滌不充分D.樣本干擾5.在細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中，若細(xì)胞生長(zhǎng)不良，可能的原因是（）。A.培養(yǎng)基pH值不合適B.細(xì)胞密度過高C.CO2濃度過低D.細(xì)胞污染6.在基因測(cè)序?qū)嶒?yàn)中，若測(cè)序結(jié)果出現(xiàn)大量雜峰，可能的原因是（）。A.DNA模板質(zhì)量差B.測(cè)序試劑污染C.測(cè)序儀故障D.PCR擴(kuò)增不充分7.在免疫組化實(shí)驗(yàn)中，若染色結(jié)果不均勻，可能的原因是（）。A.抗體濃度過高B.溫度控制不當(dāng)C.蛋白質(zhì)固定不充分D.組織切片厚度不均8.在蛋白質(zhì)組學(xué)實(shí)驗(yàn)中，若蛋白質(zhì)鑒定結(jié)果錯(cuò)誤率高，可能的原因是（）。A.蛋白質(zhì)酶解不充分B.質(zhì)譜儀分辨率低C.數(shù)據(jù)庫(kù)匹配不精確D.樣本前處理不當(dāng)9.在細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)中，若AnnexinV-FITC/PI雙染結(jié)果顯示細(xì)胞凋亡率偏低，可能的原因是（）。A.細(xì)胞裂解過度B.AnnexinV抗體標(biāo)記不均C.PI濃度過高D.細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間過短10.在實(shí)時(shí)熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)中，若Ct值偏大，可能的原因是（）。A.DNA模板量不足B.引物二聚體形成C.實(shí)時(shí)熒光檢測(cè)器故障D.RNA降解二、填空題（每空1分，共10空）1.在進(jìn)行WesternBlot實(shí)驗(yàn)時(shí)，蛋白質(zhì)電泳結(jié)束后，應(yīng)首先進(jìn)行__________，然后再進(jìn)行轉(zhuǎn)膜。2.在流式細(xì)胞術(shù)實(shí)驗(yàn)中，細(xì)胞凋亡檢測(cè)常用的染料是__________和PI。3.在ELISA實(shí)驗(yàn)中，常用的酶標(biāo)記物有__________和HRP。4.在基因測(cè)序?qū)嶒?yàn)中，Sanger測(cè)序法的原理是基于__________的延伸反應(yīng)。5.在免疫組化實(shí)驗(yàn)中，常用的封閉劑是__________。6.在蛋白質(zhì)組學(xué)實(shí)驗(yàn)中，蛋白質(zhì)鑒定常用的數(shù)據(jù)庫(kù)有__________和NCBI。7.在細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中，常用的細(xì)胞培養(yǎng)基有__________和DMEM。8.在實(shí)時(shí)熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)中，常用的熒光報(bào)告基因是__________和FAM。9.在細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)中，AnnexinV-FITC/PI雙染結(jié)果的判讀依據(jù)是__________。10.在蛋白質(zhì)組學(xué)實(shí)驗(yàn)中，蛋白質(zhì)定量常用的方法是__________和TMT標(biāo)記。三、簡(jiǎn)答題（每題5分，共5題）1.簡(jiǎn)述PCR實(shí)驗(yàn)中引物設(shè)計(jì)的基本原則。2.簡(jiǎn)述WesternBlot實(shí)驗(yàn)的基本步驟。3.簡(jiǎn)述流式細(xì)胞術(shù)實(shí)驗(yàn)中細(xì)胞凋亡檢測(cè)的原理。4.簡(jiǎn)述ELISA實(shí)驗(yàn)中常見的干擾因素及應(yīng)對(duì)措施。5.簡(jiǎn)述基因測(cè)序?qū)嶒?yàn)中Sanger測(cè)序法的原理及優(yōu)缺點(diǎn)。四、論述題（每題10分，共2題）1.論述細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中常見的污染類型及預(yù)防措施。2.論述蛋白質(zhì)組學(xué)實(shí)驗(yàn)中蛋白質(zhì)鑒定的基本流程及注意事項(xiàng)。答案與解析一、選擇題1.A解析：PCR產(chǎn)物電泳結(jié)果顯示只有一條很亮的條帶，而沒有出現(xiàn)預(yù)期大小的條帶，通常是因?yàn)橐镌O(shè)計(jì)不合理，導(dǎo)致非特異性擴(kuò)增或擴(kuò)增效率低下。2.B解析：蛋白條帶模糊不清可能是轉(zhuǎn)膜不充分導(dǎo)致的，轉(zhuǎn)膜不充分會(huì)導(dǎo)致蛋白轉(zhuǎn)移效率低，從而影響后續(xù)檢測(cè)。3.C解析：細(xì)胞凋亡率測(cè)定結(jié)果偏高可能是細(xì)胞裂解過度導(dǎo)致的，過度裂解會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞結(jié)構(gòu)破壞，從而影響凋亡檢測(cè)。4.C解析：ELISA實(shí)驗(yàn)中標(biāo)準(zhǔn)曲線線性關(guān)系不佳可能是洗滌不充分導(dǎo)致的，洗滌不充分會(huì)導(dǎo)致背景干擾，從而影響結(jié)果準(zhǔn)確性。5.A解析：細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中細(xì)胞生長(zhǎng)不良可能是培養(yǎng)基pH值不合適導(dǎo)致的，pH值會(huì)影響細(xì)胞代謝，從而影響細(xì)胞生長(zhǎng)。6.A解析：測(cè)序結(jié)果出現(xiàn)大量雜峰可能是DNA模板質(zhì)量差導(dǎo)致的，DNA模板質(zhì)量差會(huì)導(dǎo)致測(cè)序錯(cuò)誤率增高。7.B解析：免疫組化染色結(jié)果不均勻可能是溫度控制不當(dāng)導(dǎo)致的，溫度會(huì)影響抗體結(jié)合效率，從而影響染色結(jié)果。8.C解析：蛋白質(zhì)鑒定結(jié)果錯(cuò)誤率高可能是數(shù)據(jù)庫(kù)匹配不精確導(dǎo)致的，數(shù)據(jù)庫(kù)匹配不精確會(huì)導(dǎo)致鑒定結(jié)果錯(cuò)誤。9.D解析：AnnexinV-FITC/PI雙染結(jié)果顯示細(xì)胞凋亡率偏低可能是細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間過短導(dǎo)致的，細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間過短會(huì)導(dǎo)致凋亡細(xì)胞數(shù)量不足。10.A解析：實(shí)時(shí)熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)中Ct值偏大可能是DNA模板量不足導(dǎo)致的，DNA模板量不足會(huì)導(dǎo)致擴(kuò)增效率低，從而影響Ct值。二、填空題1.蛋白質(zhì)脫鹽2.AnnexinV3.辣根過氧化物酶（HRP）4.脫氧核糖核酸聚合酶（DNA聚合酶）5.牛血清白蛋白（BSA）6.蛋白質(zhì)組數(shù)據(jù)庫(kù)（ProteinProspector）7.RPMI16408.SYBRGreenI9.AnnexinV陽(yáng)性細(xì)胞比例10.同位素標(biāo)記定量（iTRAQ）三、簡(jiǎn)答題1.簡(jiǎn)述PCR實(shí)驗(yàn)中引物設(shè)計(jì)的基本原則PCR實(shí)驗(yàn)中引物設(shè)計(jì)的基本原則包括：①引物長(zhǎng)度一般為18-22個(gè)堿基；②G+C含量一般在40%-60%；③引物Tm值一般在55-65℃；④引物之間不應(yīng)存在互補(bǔ)序列；⑤引物應(yīng)在模板鏈的3'端具有高GC含量，以提高擴(kuò)增效率；⑥引物不應(yīng)與其他基因或非目標(biāo)序列結(jié)合。2.簡(jiǎn)述WesternBlot實(shí)驗(yàn)的基本步驟WesternBlot實(shí)驗(yàn)的基本步驟包括：①蛋白質(zhì)樣品制備；②SDS電泳分離蛋白質(zhì)；③轉(zhuǎn)膜至PVDF或NC膜；④封閉；⑤一抗孵育；⑥二抗孵育；⑦化學(xué)發(fā)光或熒光檢測(cè)；⑧成像分析。3.簡(jiǎn)述流式細(xì)胞術(shù)實(shí)驗(yàn)中細(xì)胞凋亡檢測(cè)的原理流式細(xì)胞術(shù)實(shí)驗(yàn)中細(xì)胞凋亡檢測(cè)的原理是基于細(xì)胞膜通透性變化和細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)。AnnexinV是一種陽(yáng)離子脂質(zhì)結(jié)合蛋白，能與細(xì)胞膜磷脂酰絲氨酸結(jié)合，而PI是一種核酸染料，能進(jìn)入細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)。通過AnnexinV-FITC/PI雙染，可以區(qū)分活細(xì)胞、早期凋亡細(xì)胞和晚期凋亡細(xì)胞。4.簡(jiǎn)述ELISA實(shí)驗(yàn)中常見的干擾因素及應(yīng)對(duì)措施ELISA實(shí)驗(yàn)中常見的干擾因素包括：①樣本干擾（如高濃度脂質(zhì)、血紅蛋白等）；②抗體交叉反應(yīng)；③底物濃度過高；④洗滌不充分。應(yīng)對(duì)措施包括：①樣本預(yù)處理（如離心、過濾等）；②優(yōu)化抗體濃度；③調(diào)整底物濃度；④確保洗滌充分。5.簡(jiǎn)述基因測(cè)序?qū)嶒?yàn)中Sanger測(cè)序法的原理及優(yōu)缺點(diǎn)Sanger測(cè)序法的原理是基于DNA聚合酶的延伸反應(yīng)，通過摻入的dideoxynucleotides（ddNTPs）終止延伸，從而得到一系列不同長(zhǎng)度的片段，通過電泳分離后，根據(jù)熒光信號(hào)檢測(cè)終止位點(diǎn)，從而確定DNA序列。優(yōu)點(diǎn)是準(zhǔn)確度高、操作簡(jiǎn)單；缺點(diǎn)是通量低、成本高。四、論述題1.論述細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中常見的污染類型及預(yù)防措施細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中常見的污染類型包括：①細(xì)菌污染；②真菌污染；③支原體污染。預(yù)防措施包括：①嚴(yán)格無(wú)菌操作；②定期更換培養(yǎng)基；③使用無(wú)菌濾器過濾空氣；④定期檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)皿；⑤使用支原體檢測(cè)試劑盒。2.論述蛋白質(zhì)組學(xué)實(shí)驗(yàn)中蛋白質(zhì)鑒