2025年獸醫(yī)化驗員專項考核試卷及答案一、單項選擇題（每題2分，共40分）1.獸醫(yī)實驗室進行犬瘟熱病毒RT-PCR檢測時，若樣本RNA提取后A260/A280比值為1.6，最可能的原因是（）A.RNA降解B.蛋白質(zhì)污染C.鹽離子殘留D.多糖污染2.革蘭氏染色過程中，若脫色時間過長，革蘭氏陽性菌會被誤判為（）A.陽性B.陰性C.無染色D.紫色3.牛布魯氏菌血清學(xué)檢測中，虎紅平板凝集試驗的反應(yīng)溫度要求是（）A.4℃B.25℃C.37℃D.56℃4.用于雞新城疫抗體檢測的血凝抑制試驗（HI）中，紅細(xì)胞懸液的常用濃度是（）A.0.5%B.1%C.2%D.5%5.實驗室處理疑似高致病性禽流感病毒樣本時，必須在（）級生物安全柜中操作A.ⅠB.ⅡC.ⅢD.Ⅳ6.犬細(xì)小病毒快速檢測試紙條的檢測原理是（）A.酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）B.膠體金免疫層析技術(shù)C.免疫熒光法D.聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）7.血涂片制作時，推片與載玻片的夾角應(yīng)為（）A.15°-20°B.25°-30°C.35°-40°D.45°-50°8.奶牛隱性乳房炎檢測常用的試劑是（）A.甲苯胺藍B.溴甲酚紫C.酚酞D.亞甲藍9.實驗室高壓蒸汽滅菌的標(biāo)準(zhǔn)參數(shù)是（）A.100℃，15分鐘B.121℃，15-20分鐘C.135℃，5分鐘D.160℃，2小時10.豬偽狂犬病gE抗體檢測的主要目的是（）A.區(qū)分野毒感染與疫苗免疫B.評估疫苗免疫效果C.檢測病毒載量D.診斷急性感染11.犬C反應(yīng)蛋白（CRP）檢測常用于評估（）A.貧血程度B.炎癥反應(yīng)C.腎功能D.肝功能12.細(xì)菌分離培養(yǎng)時，若樣本中雜菌較多，應(yīng)選擇（）培養(yǎng)基A.營養(yǎng)瓊脂B.麥康凱瓊脂C.血瓊脂D.巧克力瓊脂13.馬傳染性貧血瓊脂擴散試驗中，判定陽性的標(biāo)準(zhǔn)是（）A.抗原孔與抗體孔間出現(xiàn)清晰沉淀線B.抗原孔周圍出現(xiàn)云霧狀沉淀C.抗體孔顏色變深D.兩孔間無沉淀線14.實驗室檢測犬瘟熱病毒時，最常用的樣本是（）A.尿液B.糞便C.眼鼻分泌物D.唾液15.雞傳染性法氏囊病病毒（IBDV）檢測中，瓊脂擴散試驗的反應(yīng)時間通常為（）A.2-4小時B.6-8小時C.12-24小時D.48小時以上16.實驗室配制0.9%生理鹽水時，需稱取NaCl的量為（）A.0.9g溶于100mL水B.9g溶于100mL水C.0.9g溶于1000mL水D.9g溶于1000mL水17.犬弓形蟲IgM抗體陽性提示（）A.既往感染B.急性感染C.疫苗免疫D.隱性感染18.牛結(jié)核菌素皮內(nèi)試驗的注射部位是（）A.頸部上1/3處B.尾部皮褶C.耳根部D.肩胛部19.實驗室檢測豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）時，RT-PCR的引物設(shè)計應(yīng)針對（）A.核衣殼蛋白（N蛋白）基因B.囊膜糖蛋白（GP5）基因C.RNA聚合酶基因D.膜蛋白（M蛋白）基因20.血球計數(shù)板計數(shù)白細(xì)胞時，通常計數(shù)（）個大方格A.1B.4C.5D.9二、判斷題（每題1分，共10分）1.采集動物血液樣本時，抗凝劑EDTA會影響血小板形態(tài)，因此不適合用于血常規(guī)檢測。（）2.革蘭氏染色中，結(jié)晶紫是復(fù)染劑，沙黃是初染劑。（）3.雞白痢全血平板凝集試驗中，陽性反應(yīng)表現(xiàn)為均勻的藍紫色凝塊。（）4.實驗室廢棄的病原體培養(yǎng)物需先高壓滅菌，再按醫(yī)療廢物處理。（）5.犬瘟熱病毒屬于副黏病毒科，對乙醚敏感。（）6.檢測牛結(jié)核時，皮內(nèi)試驗結(jié)果判定需測量注射部位的皮厚差，而非紅腫面積。（）7.豬瘟熒光抗體檢測中，陽性細(xì)胞會發(fā)出綠色熒光，陰性細(xì)胞無熒光。（）8.血涂片染色時，瑞氏染液與緩沖液的比例應(yīng)為1:1，染色時間5-10分鐘。（）9.布魯氏菌血清學(xué)檢測中，虎紅平板試驗陽性即可確診感染，無需進一步驗證。（）10.實驗室使用的移液槍需定期校準(zhǔn)，校準(zhǔn)周期一般不超過12個月。（）三、簡答題（每題8分，共40分）1.簡述獸醫(yī)實驗室樣本采集的基本原則。2.列舉5種常用的細(xì)菌染色方法，并說明其適用場景。3.簡述ELISA檢測抗體的操作步驟（以間接法為例）。4.牛傳染性胸膜肺炎（牛肺疫）補體結(jié)合試驗中，如何判斷試驗結(jié)果是否有效？5.實驗室檢測犬瘟熱病毒時，若RT-PCR結(jié)果為假陰性，可能的原因有哪些？四、案例分析題（每題15分，共30分）案例1：某寵物醫(yī)院送檢1份犬血液樣本，主訴犬精神沉郁、嘔吐、腹瀉3天。實驗室進行血常規(guī)檢測，結(jié)果顯示：白細(xì)胞計數(shù)2.1×10?/L（參考值6-17×10?/L），淋巴細(xì)胞比例12%（參考值12-30%），中性粒細(xì)胞比例85%（參考值60-77%），血小板計數(shù)50×10?/L（參考值175-500×10?/L）。同時進行犬細(xì)小病毒快速檢測試紙條檢測，結(jié)果顯示C線和T線均顯色。問題：（1）血常規(guī)結(jié)果提示犬可能存在哪些異常？（2）結(jié)合試紙條檢測結(jié)果，初步診斷為何種疾?。浚?）為進一步確認(rèn)，可建議進行哪些檢測？案例2：某豬場送檢5份豬血清樣本，要求檢測豬偽狂犬病（PR）gE抗體。實驗室采用ELISA方法檢測，結(jié)果顯示：樣本1OD值0.12（臨界值0.2），樣本2OD值0.35，樣本3OD值0.08，樣本4OD值0.42，樣本5OD值0.19。問題：（1）ELISA檢測PRgE抗體的原理是什么？（2）根據(jù)檢測結(jié)果，判斷各樣本的陽性/陰性狀態(tài)。（3）若樣本2的OD值為0.35（臨界值0.2），但實驗室質(zhì)控品（陽性對照）OD值為0.15（預(yù)期應(yīng)≥0.3），此時檢測結(jié)果是否可信？為什么？答案一、單項選擇題1.B2.B3.C4.B5.B6.B7.B8.B9.B10.A11.B12.B13.A14.C15.C16.D17.B18.A19.A20.B二、判斷題1.×（EDTA適合血常規(guī)，肝素影響白細(xì)胞形態(tài)）2.×（結(jié)晶紫是初染劑，沙黃是復(fù)染劑）3.×（陽性表現(xiàn)為藍紫色凝塊，陰性為均勻混懸液）4.√5.√6.√7.√8.×（瑞氏染液與緩沖液比例1:2-1:3，染色時間8-15分鐘）9.×（需結(jié)合其他試驗（如試管凝集）確認(rèn)）10.√三、簡答題1.基本原則：①無菌操作：避免外源性污染；②適時采集：根據(jù)疾病發(fā)展階段（如急性期采集病原，恢復(fù)期采集抗體）；③正確部位：選擇目標(biāo)病原富集的組織或體液（如呼吸道疾病采鼻拭子，腸道疾病采糞便）；④足夠量：滿足檢測需求；⑤標(biāo)記清晰：記錄動物信息、采集時間、樣本類型；⑥規(guī)范保存：按檢測要求選擇冷藏、冷凍或添加保護劑。2.常用細(xì)菌染色方法及適用場景：①革蘭氏染色：區(qū)分革蘭氏陽性菌（紫色）與陰性菌（紅色），是細(xì)菌分類的基礎(chǔ)；②抗酸染色（齊-尼染色）：檢測分枝桿菌（如結(jié)核桿菌），陽性菌呈紅色，背景藍色；③美藍染色：快速觀察細(xì)菌形態(tài)（如巴氏桿菌）；④特殊結(jié)構(gòu)染色（如莢膜染色、芽胞染色）：觀察細(xì)菌莢膜（如鏈球菌）或芽胞（如炭疽桿菌）；⑤鞭毛染色：觀察細(xì)菌鞭毛（如沙門氏菌），用于運動性判斷。3.間接法ELISA檢測抗體步驟：①包被：將純化的抗原（如病毒蛋白）包被于酶標(biāo)板孔，4℃過夜；②封閉：加入牛血清白蛋白（BSA）或脫脂奶粉，37℃孵育1小時，阻斷非特異性結(jié)合位點；③加樣本：加入待檢血清（1:100稀釋），37℃孵育1小時，洗滌3次；④加二抗：加入酶標(biāo)記的抗宿主IgG抗體（如HRP標(biāo)記的兔抗犬IgG），37℃孵育1小時，洗滌3次；⑤顯色：加入底物（如TMB），37℃避光反應(yīng)15分鐘；⑥終止：加入終止液（2MH2SO4），酶標(biāo)儀讀取OD450nm值；⑦判讀：樣本OD值≥2.1倍陰性對照OD值為陽性。4.牛肺疫補體結(jié)合試驗結(jié)果有效性判斷：①溶血對照（補體+溶血素+紅細(xì)胞）應(yīng)完全溶血（無沉淀）；②抗原對照（抗原+補體+紅細(xì)胞）應(yīng)無溶血（沉淀）；③陽性血清對照（陽性血清+抗原+補體+紅細(xì)胞）應(yīng)無溶血；④陰性血清對照（陰性血清+抗原+補體+紅細(xì)胞）應(yīng)完全溶血；若上述對照均符合預(yù)期，試驗有效；若任一對照不符合，需重新試驗。5.RT-PCR假陰性可能原因：①樣本采集不當(dāng)：未在病毒血癥期采樣（如犬瘟熱后期病毒量低）；②樣本保存不當(dāng)：RNA降解（未及時冷凍或反復(fù)凍融）；③核酸提取失敗：裂解不充分或污染抑制劑（如血紅蛋白、肝素）；④引物/探針設(shè)計不合理：與病毒變異株序列不匹配；⑤反應(yīng)體系問題：Taq酶失活、dNTP濃度不足；⑥擴增條件錯誤：退火溫度過高或循環(huán)次數(shù)不足；⑦操作污染：交叉污染導(dǎo)致目標(biāo)核酸被稀釋。四、案例分析題案例1：（1）血常規(guī)異常：白細(xì)胞總數(shù)顯著降低（中性粒細(xì)胞比例升高，淋巴細(xì)胞比例正常），血小板減少（提示凝血功能異常）。（2）初步診斷：犬細(xì)小病毒感染（試紙條C、T線均顯色為陽性，結(jié)合白細(xì)胞減少、血小板減少符合細(xì)小病毒病特征）。（3）進一步檢測：①RT-PCR檢測病毒核酸（確認(rèn)病毒存在）；②糞便電鏡觀察病毒顆粒（形態(tài)學(xué)驗證）；③生化檢測（評估肝腎功能損傷）；④血氣分析（判斷酸堿平衡）。案例2：（1）原理：包被PRVgE蛋白抗原，待檢血清中的gE抗體與抗原結(jié)合，加入酶標(biāo)二抗（抗宿主IgG）后，