2025年大學生物技術（生物技術技巧）試題及答案

（考試時間：90分鐘滿分100分）班級______姓名______第I卷（選擇題共30分）（總共10題，每題3分，每題只有一個選項符合題意，請將正確選項填在題后的括號內(nèi)）1.以下哪種生物技術常用于基因的體外擴增？（）A.細胞融合技術B.聚合酶鏈式反應技術C.蛋白質(zhì)印跡技術D.核酸分子雜交技術2.在蛋白質(zhì)純化過程中，能根據(jù)蛋白質(zhì)電荷差異進行分離的方法是（）A.凝膠過濾層析B.離子交換層析C.親和層析D.疏水層析3.下列關于限制性內(nèi)切酶的說法，正確的是（）A.只能識別一種特定的核苷酸序列B.其作用是將DNA連接起來C.不作用于自身細胞的DNAD.廣泛存在于各種生物中4.用于檢測細胞內(nèi)特定蛋白質(zhì)表達水平的常用技術是（）A.RT-PCRB.WesternblotC.NorthernblotD.Southernblot5.以下哪種生物技術可用于改造生物體的遺傳性狀？（）A.細胞培養(yǎng)技術B.基因編輯技術C.蛋白質(zhì)結晶技術D.酶活性測定技術6.質(zhì)粒作為基因工程載體，其特點不包括（）A.能自我復制B.含有多個限制酶切割位點C.具有抗生素抗性基因D.是染色體外的細胞器7.在細胞融合實驗中，常用的誘導細胞融合的方法是（）A.紫外線照射B.電場誘導C.高溫處理D.酸堿處理8.以下哪種生物技術可用于大規(guī)模生產(chǎn)生物制品？（）A.單克隆抗體制備技術B.植物組織培養(yǎng)技術C.發(fā)酵工程技術D.基因克隆技術9.蛋白質(zhì)的一級結構是指（）A.氨基酸的種類和排列順序B.多肽鏈的折疊方式C.亞基的聚合方式D.蛋白質(zhì)的空間構象10.基因工程中，構建重組DNA分子常用的工具酶是（）A.DNA聚合酶B.DNA連接酶C.限制性內(nèi)切酶D.逆轉錄酶第II卷（非選擇題共70分）11.（10分）簡述PCR技術的基本原理和反應過程。12.（15分）闡述蛋白質(zhì)分離純化的主要方法及其原理。13.（15分）請說明基因工程的基本操作步驟及其關鍵技術。（15分）閱讀以下材料，回答問題材料：在一項生物技術實驗中，研究人員將某種外源基因?qū)胄∈蠹毎?，試圖觀察該基因?qū)π∈笊砉δ艿挠绊憽嶒炦^程中，采用了脂質(zhì)體介導的基因轉染方法。經(jīng)過一段時間的培養(yǎng)和觀察，發(fā)現(xiàn)部分小鼠出現(xiàn)了一些異常生理現(xiàn)象。問題：（1）脂質(zhì)體介導基因轉染的原理是什么？（2）如何檢測導入的外源基因是否成功表達？（3）針對小鼠出現(xiàn)的異常生理現(xiàn)象，可能的原因有哪些？（15分）閱讀以下材料，回答問題材料：某生物制藥公司利用生物技術生產(chǎn)一種新型疫苗。在疫苗生產(chǎn)過程中，采用了細胞培養(yǎng)技術，通過培養(yǎng)特定的細胞系來表達疫苗抗原。為了提高疫苗的產(chǎn)量和質(zhì)量，公司對培養(yǎng)條件進行了優(yōu)化，包括培養(yǎng)基的成分、溫度、pH值等。問題：（1）細胞培養(yǎng)技術在疫苗生產(chǎn)中有哪些優(yōu)勢？（2）簡述優(yōu)化培養(yǎng)條件對提高疫苗產(chǎn)量和質(zhì)量的作用機制。（3）如何確保生產(chǎn)出的疫苗符合質(zhì)量標準？答案：1.B2.B3.A4.B5.B6.D7.B8.C9.A10.B11.PCR技術的基本原理是在體外模擬DNA體內(nèi)復制過程，通過高溫變性、低溫退火和適溫延伸三個步驟的循環(huán)，使特定DNA片段得到大量擴增。反應過程：首先將模板DNA加熱至95℃左右使其變性解鏈；然后降溫至55℃左右，引物與模板DNA單鏈互補結合（退火）；最后在72℃左右，TaqDNA聚合酶以dNTP為原料，從引物的3′端開始合成與模板互補的DNA鏈（延伸）。經(jīng)過多次循環(huán)，目標DNA片段呈指數(shù)增長。12.蛋白質(zhì)分離純化的主要方法及原理：凝膠過濾層析根據(jù)蛋白質(zhì)分子大小不同進行分離，大分子先流出，小分子后流出；離子交換層析利用蛋白質(zhì)所帶電荷差異，在離子交換樹脂上進行吸附和解吸分離；親和層析基于蛋白質(zhì)與特定配體的特異性親和力，如抗原與抗體、酶與底物等，將蛋白質(zhì)分離；疏水層析依據(jù)蛋白質(zhì)表面疏水性差異，在疏水介質(zhì)上進行分離，高鹽濃度下疏水性強的蛋白質(zhì)保留，低鹽濃度下洗脫。13.基因工程基本操作步驟及關鍵技術：獲取目的基因，可通過PCR擴增、從基因組文庫或cDNA文庫中獲取等方法；構建基因表達載體，用限制性內(nèi)切酶切割目的基因和載體，再用DNA連接酶連接形成重組DNA分子，這是關鍵步驟之一；將重組DNA分子導入受體細胞，常用方法有轉化、轉染、顯微注射等；目的基因的檢測與鑒定，檢測是否導入成功可用DNA分子雜交技術，檢測是否轉錄用Northernblot，檢測是否翻譯用Westernblot等。14.（1）脂質(zhì)體是一種人工膜泡，它可以與細胞膜融合，將包裹在其中的外源基因?qū)爰毎Ｖ|(zhì)體的磷脂雙分子層結構與細胞膜相似，能夠在細胞膜表面吸附并與之融合，從而使外源基因進入細胞內(nèi)部。（2）檢測外源基因是否成功表達可采用Westernblot技術，通過檢測細胞內(nèi)特定蛋白質(zhì)的表達情況來判斷；也可用RT-PCR檢測目的基因轉錄形成的mRNA水平。（3）小鼠出現(xiàn)異常生理現(xiàn)象，可能是外源基因插入到小鼠基因組的不當位置，影響了其他基因的表達；也可能是外源基因過量表達，產(chǎn)生的蛋白質(zhì)對小鼠生理功能產(chǎn)生不良影響；還可能是細胞培養(yǎng)過程中受到污染等其他因素導致。15.（1）細胞培養(yǎng)技術在疫苗生產(chǎn)中的優(yōu)勢：可大量培養(yǎng)特定細胞系，保證疫苗抗原的穩(wěn)定供應；能精確控制培養(yǎng)條件，提高疫苗產(chǎn)量和質(zhì)量的可控性；可實現(xiàn)規(guī)模化生產(chǎn)，滿足市場需求。（2）優(yōu)化培養(yǎng)條件對提高疫苗產(chǎn)量和質(zhì)量的作用機制：合適的培養(yǎng)基成分提供細胞生長和表達抗原所需的營養(yǎng)物質(zhì)，促進細胞增殖和抗原表達；適宜的溫度和pH值能維持細