病理科細胞涂片診斷診療指南與技術操作規(guī)范一、引言細胞涂片檢查是病理科常用的診斷方法之一，它通過采集細胞并制成涂片，在顯微鏡下觀察細胞形態(tài)，以輔助疾病的診斷、病情監(jiān)測和預后評估。本診療指南與技術操作規(guī)范旨在為病理科醫(yī)生提供標準化的細胞涂片診斷流程和操作方法，提高診斷的準確性和可靠性。二、標本采集（一）采集前準備1.患者信息核對：在采集標本前，必須仔細核對患者的姓名、年齡、性別、住院號、臨床診斷、標本采集部位等信息，確保標本與患者信息的一致性。2.告知患者：向患者或其家屬解釋標本采集的目的、方法、可能的不適和注意事項，以取得患者的配合。3.采集器材準備：根據(jù)不同的標本采集部位和方法，準備合適的采集器材，如吸管、棉拭子、穿刺針、玻片、固定液等。確保器材清潔、無菌，并在有效期內(nèi)使用。（二）常見標本采集方法1.痰液涂片采集方法：囑患者清晨起床后用清水漱口，用力咳出氣管深部的痰液，將痰液直接吐入清潔、干燥的容器中。一般需連續(xù)采集3天的痰液標本。注意事項：避免混入唾液和鼻咽分泌物，痰液量應足夠，以保證有足夠的細胞進行涂片檢查。2.宮頸涂片采集方法：患者取膀胱截石位，用陰道窺器暴露宮頸，先用棉球輕輕擦去宮頸表面的分泌物，然后用宮頸刮板在宮頸外口鱗柱上皮交界處刮取細胞，將刮取物均勻地涂在玻片上。注意事項：采集前24小時內(nèi)應避免性生活、陰道沖洗、陰道上藥等，以免影響細胞形態(tài)。3.胸腹水涂片采集方法：在局部麻醉下，用穿刺針經(jīng)皮穿刺進入胸腔或腹腔，抽取適量的胸腹水，一般抽取量為50100ml。將抽取的胸腹水立即送檢，并用離心機離心，取沉淀物涂片。注意事項：穿刺過程中要嚴格遵守無菌操作原則，避免感染。抽取胸腹水時要注意患者的反應，防止出現(xiàn)不良反應。4.細針穿刺涂片采集方法：在超聲或CT引導下，將細針經(jīng)皮穿刺至病變部位，抽取細胞。穿刺時要注意進針方向和深度，避免損傷周圍重要器官。將抽取的細胞均勻地涂在玻片上。注意事項：穿刺前要評估患者的凝血功能，排除禁忌證。穿刺后要壓迫止血，觀察患者有無不良反應。三、涂片制作（一）涂片制作方法1.直接涂片法：將采集到的標本直接均勻地涂在玻片上，涂片要薄而均勻，避免細胞堆積。一般用推片或另一張玻片的一端將標本涂開。2.離心涂片法：對于液體標本，如胸腹水、腦脊液等，先將標本離心，使細胞沉淀，然后取沉淀物涂片。離心速度和時間要根據(jù)標本的性質(zhì)和細胞的類型進行調(diào)整，一般轉速為10002000r/min，離心時間為510分鐘。3.液基薄層涂片法：將采集到的細胞標本放入含有固定液的特制容器中，通過設備將細胞均勻地轉移到玻片上，形成單層細胞涂片。這種方法可以減少標本中的雜質(zhì)和黏液的干擾，提高細胞的觀察效果。（二）涂片質(zhì)量要求1.細胞數(shù)量足夠：涂片上要有足夠數(shù)量的細胞，以保證能夠觀察到細胞的形態(tài)特征和細胞之間的關系。一般要求每張涂片上有5001000個細胞。2.細胞分布均勻：細胞應均勻分布在玻片上，避免出現(xiàn)細胞堆積或空白區(qū)域。3.細胞形態(tài)完整：涂片制作過程中要避免細胞的損傷和變形，保持細胞的形態(tài)完整。四、涂片固定（一）固定的目的固定的目的是使細胞保持生前的形態(tài)和結構，防止細胞自溶和腐敗，同時使細胞易于染色，提高細胞的觀察效果。（二）固定液的選擇1.95%乙醇：是最常用的固定液之一，適用于大多數(shù)細胞涂片的固定。它可以迅速固定細胞，保持細胞的形態(tài)和結構。2.卡諾固定液：由無水乙醇、氯仿和冰醋酸按一定比例混合而成，固定效果較好，適用于一些需要特殊染色的細胞涂片。3.甲醛固定液：具有較強的固定作用，但會使細胞收縮，影響細胞的形態(tài)。一般不單獨用于細胞涂片的固定，可與其他固定液混合使用。（三）固定方法1.濕固定法：涂片制作后立即將玻片浸入固定液中，固定時間一般為1530分鐘。這種方法適用于大多數(shù)細胞涂片的固定。2.干固定法：涂片自然干燥后，用噴霧固定劑噴灑在涂片上，使細胞固定。這種方法適用于一些不宜濕固定的標本，如痰液涂片。五、染色（一）常用染色方法1.蘇木精伊紅染色（HE染色）原理：蘇木精是一種堿性染料，可將細胞核染成藍色；伊紅是一種酸性染料，可將細胞質(zhì)染成粉紅色。通過HE染色，可以清晰地觀察到細胞的核和質(zhì)的形態(tài)結構。操作步驟：固定后的涂片經(jīng)水洗、梯度酒精脫水、蘇木精染色、水洗、鹽酸酒精分化、水洗、伊紅染色、梯度酒精脫水、透明、封片等步驟。注意事項：染色過程中要注意控制染色時間和溫度，避免染色過深或過淺。2.巴氏染色原理：巴氏染色是一種多色染色方法，可將細胞核和細胞質(zhì)染成不同的顏色，使細胞的形態(tài)特征更加清晰。常用于宮頸涂片的檢查。操作步驟：涂片經(jīng)固定、水洗、蘇木精染色、水洗、鹽酸酒精分化、水洗、藍化、梯度酒精脫水、橙黃G染色、水洗、EA系列染料染色、梯度酒精脫水、透明、封片等步驟。注意事項：巴氏染色的操作步驟較多，要嚴格按照操作規(guī)程進行，以保證染色效果。3.瑞氏染色原理：瑞氏染料是由酸性染料伊紅和堿性染料亞甲藍組成的復合染料，可將細胞核和細胞質(zhì)染成不同的顏色，常用于血液和骨髓涂片的檢查。操作步驟：涂片自然干燥后，滴加瑞氏染液覆蓋涂片，染色12分鐘，然后滴加等量的緩沖液，混合均勻，繼續(xù)染色510分鐘，水洗，干燥后封片。注意事項：染色時間和染液的濃度要根據(jù)涂片的厚度和細胞的類型進行調(diào)整。（二）染色質(zhì)量要求染色后的涂片要色澤鮮艷、對比清晰，細胞核和細胞質(zhì)的染色效果良好，能夠清晰地觀察到細胞的形態(tài)結構和特征。六、顯微鏡觀察（一）低倍鏡觀察1.觀察內(nèi)容：首先用低倍鏡（10×物鏡）全面觀察涂片，了解涂片的整體情況，包括細胞的分布、數(shù)量、背景等。注意觀察有無異常細胞團、細胞簇或特殊的細胞形態(tài)。2.觀察順序：從涂片的一端開始，按一定的順序（如從左到右、從上到下）移動視野，全面觀察涂片。（二）高倍鏡觀察1.觀察內(nèi)容：在低倍鏡觀察的基礎上，選擇可疑的細胞或細胞團，轉換高倍鏡（40×物鏡）進行詳細觀察。觀察細胞的大小、形態(tài)、核的大小、形態(tài)、染色質(zhì)的分布、核仁的大小和數(shù)量等特征。2.觀察技巧：高倍鏡下觀察時要注意調(diào)節(jié)焦距，使細胞圖像清晰。同時，要注意觀察細胞之間的關系，如細胞的排列方式、有無巢狀或腺樣結構等。（三）油鏡觀察1.適用情況：對于一些需要更詳細觀察細胞結構的情況，如觀察細胞核的細微結構、核仁的特征等，可以使用油鏡（100×物鏡）進行觀察。2.操作方法：在高倍鏡觀察的基礎上，將玻片移動到需要觀察的部位，滴加一滴香柏油在玻片上，然后將油鏡鏡頭浸入油中，調(diào)節(jié)焦距，進行觀察。觀察完畢后，用擦鏡紙擦去鏡頭上的香柏油。七、診斷報告（一）報告內(nèi)容1.一般信息：包括患者的姓名、年齡、性別、住院號、標本采集部位、標本類型、臨床診斷等。2.顯微鏡描述：描述觀察到的細胞形態(tài)特征，包括細胞的大小、形態(tài)、核的大小、形態(tài)、染色質(zhì)的分布、核仁的大小和數(shù)量等。如果發(fā)現(xiàn)異常細胞，要詳細描述其特征。3.診斷意見：根據(jù)顯微鏡觀察結果，結合患者的臨床病史和其他檢查結果，給出明確的診斷意見。診斷意見可以分為肯定診斷、可疑診斷、建議進一步檢查等。4.報告醫(yī)生簽名：診斷報告要有報告醫(yī)生的簽名，并注明報告日期。（二）診斷分類1.陰性：涂片上未發(fā)現(xiàn)異常細胞，提示正?；蛄夹圆∽?。2.不典型細胞：涂片上發(fā)現(xiàn)一些細胞形態(tài)有輕度異常，但不能確定為惡性細胞。對于不典型細胞，需要結合患者的臨床情況進行隨訪或進一步檢查。3.可疑惡性細胞：涂片上發(fā)現(xiàn)一些細胞形態(tài)具有某些惡性特征，但不足以確診為惡性腫瘤。需要進一步檢查，如重復涂片、進行病理活檢等。4.惡性腫瘤細胞：涂片上發(fā)現(xiàn)典型的惡性腫瘤細胞，可明確診斷為惡性腫瘤，并根據(jù)細胞的形態(tài)特征初步判斷腫瘤的類型，如腺癌、鱗癌、小細胞癌等。八、質(zhì)量控制（一）人員培訓病理科醫(yī)生和技術人員要接受專業(yè)的培訓，掌握細胞涂片診斷的基本理論、操作技能和診斷標準。定期參加學術交流和培訓活動，不斷提高業(yè)務水平。（二）標本采集質(zhì)量控制1.嚴格按照標本采集的操作規(guī)程進行操作，確保采集到的標本具有代表性。2.采集后的標本要及時送檢，避免標本干涸、自溶或腐敗。（三）涂片制作質(zhì)量控制1.涂片制作要嚴格按照操作規(guī)程進行，確保涂片的質(zhì)量符合要求。2.定期對涂片進行質(zhì)量檢查，發(fā)現(xiàn)問題及時整改。（四）染色質(zhì)量控制1.定期對染色液進行質(zhì)量檢測，確保染色液的質(zhì)量穩(wěn)定。2.按照染色操作規(guī)程進行染色，控制染色時間和溫度，保證染色效果。（五）診斷報告質(zhì)量控制1.診斷報告要由具有豐富經(jīng)驗的病理科醫(yī)生審核簽發(fā)，確保診斷的準確性和可靠性。2.定期對診斷報告進行質(zhì)量評估，分析診斷誤差的原因，采取針對性的措施進行改進。九