2025年生物實驗室生物安全三級防護(hù)實操知識考核試卷含答案一、單項選擇題（每題2分，共20分）1.BSL3實驗室核心工作間與相鄰緩沖間的氣壓差應(yīng)維持在：A.10Pa至20PaB.50Pa至80PaC.100Pa至150PaD.200Pa至250Pa2.以下哪種操作必須在BSL3實驗室生物安全柜（II級A2型）內(nèi)進(jìn)行？A.普通試劑的稱量B.未開封的無菌培養(yǎng)基分裝C.結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)物的轉(zhuǎn)接D.離心后的上清液轉(zhuǎn)移（離心管未破損）3.BSL3實驗室人員離開污染區(qū)時，脫卸個人防護(hù)裝備的正確順序是：A.外層手套→護(hù)目鏡→防護(hù)服→內(nèi)層手套→鞋套→口罩B.護(hù)目鏡→外層手套→防護(hù)服→內(nèi)層手套→鞋套→口罩C.外層手套→防護(hù)服→護(hù)目鏡→內(nèi)層手套→鞋套→口罩D.鞋套→外層手套→護(hù)目鏡→防護(hù)服→內(nèi)層手套→口罩4.BSL3實驗室廢棄物高壓蒸汽滅菌的標(biāo)準(zhǔn)條件是：A.105℃，15分鐘B.121℃，1530分鐘C.134℃，3分鐘D.160℃，2小時5.關(guān)于BSL3實驗室氣流組織的描述，正確的是：A.氣流從污染區(qū)向清潔區(qū)流動，形成正壓B.氣流從清潔區(qū)向污染區(qū)流動，形成負(fù)壓C.各區(qū)域氣壓相等，無明確方向D.僅核心工作間保持負(fù)壓，其他區(qū)域正壓6.以下哪種防護(hù)裝備不屬于BSL3實驗室強(qiáng)制配備的個人防護(hù)用品？A.防滲透一次性防護(hù)服B.N95及以上防護(hù)口罩C.雙層丁腈手套（內(nèi)層短、外層長）D.防砸防穿刺工作鞋7.處理BSL3實驗室感染性樣本時，若發(fā)生離心管破裂（離心機(jī)未停機(jī)），應(yīng)立即采取的措施是：A.直接打開離心機(jī)取出破損管B.關(guān)閉離心機(jī)電源，靜置30分鐘后處理C.用75%酒精噴灑離心機(jī)內(nèi)部后繼續(xù)運(yùn)行D.佩戴普通手套清理碎片8.BSL3實驗室的高效空氣過濾器（HEPA）對0.3μm顆粒的過濾效率應(yīng)不低于：A.95%B.99.0%C.99.97%D.99.999%9.以下哪項不符合BSL3實驗室人員準(zhǔn)入要求？A.具有病原微生物實驗室操作培訓(xùn)經(jīng)歷B.近1年未進(jìn)行結(jié)核菌素皮膚試驗（TST）C.簽署生物安全責(zé)任承諾書D.已知對實驗涉及病原無免疫缺陷10.BSL3實驗室的“雙門互鎖”系統(tǒng)主要用于：A.防止無關(guān)人員進(jìn)入B.維持區(qū)域間氣壓梯度C.提高實驗室美觀度D.便于設(shè)備搬運(yùn)二、多項選擇題（每題3分，共15分，少選、錯選均不得分）1.BSL3實驗室的核心技術(shù)要求包括：A.定向氣流組織（清潔區(qū)→污染區(qū)）B.所有進(jìn)入核心區(qū)的空氣經(jīng)HEPA過濾C.排出空氣經(jīng)HEPA過濾后直接排放D.地面、墻面無縫隙且耐化學(xué)消毒2.以下屬于BSL3實驗室操作規(guī)范的有：A.樣本傳遞使用雙門傳遞窗（互鎖）B.實驗操作時保持生物安全柜風(fēng)機(jī)開啟C.離心前使用密封轉(zhuǎn)子或安全杯D.實驗結(jié)束后立即用含氯消毒劑（500mg/L）擦拭臺面3.關(guān)于BSL3實驗室人員健康監(jiān)測的正確做法是：A.上崗前進(jìn)行結(jié)核分枝桿菌等相關(guān)病原的血清學(xué)檢測B.工作期間每6個月進(jìn)行1次健康體檢C.出現(xiàn)發(fā)熱等癥狀時立即報告并暫停實驗D.接觸病原后無需進(jìn)行暴露后預(yù)防（PEP）4.以下哪些情況可能導(dǎo)致BSL3實驗室生物安全事故？A.防護(hù)服破損未及時更換B.樣本離心時未平衡（重量差＞0.5g）C.生物安全柜內(nèi)操作時手臂頻繁進(jìn)出D.實驗結(jié)束后未對廢棄物進(jìn)行壓力蒸汽滅菌5.BSL3實驗室應(yīng)急處置箱應(yīng)包含的物品有：A.快速手消毒劑（含酒精）B.一次性吸水材料（如消毒毛巾）C.防護(hù)面屏（備用）D.高壓蒸汽滅菌指示卡三、填空題（每空1分，共15分）1.BSL3實驗室的“三級防護(hù)”指的是：個人防護(hù)裝備、實驗室設(shè)施與設(shè)備防護(hù)、__________。2.生物安全柜使用前需運(yùn)行__________分鐘，確保氣流穩(wěn)定；使用后需繼續(xù)運(yùn)行__________分鐘，完成殘留氣溶膠清除。3.BSL3實驗室感染性廢棄物的處理原則是“__________”，即盡可能在產(chǎn)生地點(diǎn)消毒或滅菌。4.結(jié)核分枝桿菌（BSL3級病原）的主要傳播途徑是__________，因此操作時需重點(diǎn)防范__________。5.進(jìn)入BSL3實驗室核心區(qū)前，人員需通過__________（區(qū)域）完成個人防護(hù)裝備穿戴；離開時需通過__________（區(qū)域）完成脫卸與消毒。6.實驗室高壓蒸汽滅菌效果監(jiān)測的常用方法包括__________（物理監(jiān)測）、__________（化學(xué)監(jiān)測）和__________（生物監(jiān)測）。7.BSL3實驗室的“氣鎖”設(shè)計是為了防止__________，其與相鄰區(qū)域的氣壓差應(yīng)至少為__________Pa。四、簡答題（共30分）1.（封閉型，8分）簡述BSL3實驗室穿脫一次性防護(hù)服的完整操作流程（需區(qū)分穿戴與脫卸順序）。2.（開放型，10分）某BSL3實驗室在進(jìn)行布魯氏菌培養(yǎng)物轉(zhuǎn)接時，操作人員未佩戴護(hù)目鏡，且在生物安全柜外進(jìn)行了短暫樣本傳遞。請分析該操作存在的風(fēng)險點(diǎn)，并提出糾正措施。3.（封閉型，12分）列舉BSL3實驗室需定期驗證的關(guān)鍵參數(shù)（至少6項），并說明每項參數(shù)的合格標(biāo)準(zhǔn)。五、操作分析題（共20分）背景：某BSL3實驗室技術(shù)員在處理新型冠狀病毒（假病毒，BSL3模擬株）細(xì)胞培養(yǎng)物時，操作步驟如下：①穿戴順序：內(nèi)層手套→醫(yī)用外科口罩→防護(hù)服→護(hù)目鏡→外層手套→鞋套；②在生物安全柜內(nèi)進(jìn)行樣本轉(zhuǎn)移時，將離心機(jī)（未密封）直接放入安全柜操作；③實驗結(jié)束后，將廢棄物直接投入黃色醫(yī)療廢物袋，未進(jìn)行高壓蒸汽滅菌；④脫卸時：外層手套→鞋套→護(hù)目鏡→防護(hù)服（外翻卷脫）→內(nèi)層手套→口罩，脫卸后未進(jìn)行手消毒。問題：指出上述操作中的錯誤（至少5處），并給出正確操作依據(jù)。參考答案一、單項選擇題1.C（依據(jù)《實驗室生物安全通用要求》GB194892008，BSL3核心區(qū)與相鄰區(qū)域壓差應(yīng)為100Pa至150Pa）2.C（結(jié)核分枝桿菌為BSL3病原，其培養(yǎng)物操作需在生物安全柜內(nèi)進(jìn)行）3.A（脫卸順序需避免外層污染暴露，先脫外層手套→護(hù)目鏡→防護(hù)服→內(nèi)層手套→鞋套→口罩）4.B（高壓蒸汽滅菌標(biāo)準(zhǔn)條件為121℃、1530分鐘，依據(jù)《醫(yī)療廢物管理條例》）5.B（BSL3需維持定向負(fù)壓氣流，清潔區(qū)→污染區(qū)）6.D（BSL3不強(qiáng)制要求防砸防穿刺鞋，重點(diǎn)為防滲透）7.B（離心管破裂時需關(guān)閉離心機(jī)，靜置30分鐘使氣溶膠沉降后處理）8.C（HEPA對0.3μm顆粒過濾效率≥99.97%）9.B（BSL3人員需定期進(jìn)行TST等健康監(jiān)測，近1年未檢測不符合要求）10.B（雙門互鎖用于維持區(qū)域間氣壓梯度，防止氣流倒灌）二、多項選擇題1.ABD（C錯誤，BSL3排出空氣需經(jīng)HEPA過濾后通過獨(dú)立管道排放，不可直接排放至實驗室）2.ABC（D錯誤，含氯消毒劑濃度應(yīng)為2000mg/L以上，用于BSL3污染區(qū)消毒）3.ABC（D錯誤，接觸病原后需根據(jù)風(fēng)險評估進(jìn)行PEP，如結(jié)核暴露后需預(yù)防性用藥）4.ABCD（均為典型風(fēng)險操作）5.ABC（D錯誤，高壓蒸汽滅菌指示卡為滅菌效果監(jiān)測工具，非應(yīng)急處置物品）三、填空題1.管理體系防護(hù)2.5；303.就地消毒4.呼吸道；氣溶膠擴(kuò)散5.緩沖間；脫卸區(qū)6.溫度/時間記錄；化學(xué)指示膠帶/指示卡；嗜熱脂肪芽孢桿菌生物指示劑7.氣流交叉污染；10四、簡答題1.穿戴流程（4分）：①清潔區(qū)：洗手→戴內(nèi)層短手套（覆蓋手腕）；②緩沖間：戴N95口罩（調(diào)整鼻夾）→穿一次性防滲透防護(hù)服（拉嚴(yán)拉鏈，覆蓋足背）→戴護(hù)目鏡（調(diào)整松緊）；③進(jìn)入核心區(qū)前：戴外層長手套（覆蓋防護(hù)服袖口）→穿鞋套（覆蓋防護(hù)服褲腳）。脫卸流程（4分）：①污染區(qū)：外層手套外翻卷脫（避免接觸外部）→丟入感染性廢物袋；②緩沖間：鞋套外翻脫除→護(hù)目鏡（手不接觸外部）→防護(hù)服（從頸部拉下拉鏈，雙手從內(nèi)向外翻卷脫除，避免污染內(nèi)層）→內(nèi)層手套脫除；③清潔區(qū)：摘口罩（手不接觸口罩外部）→洗手消毒。2.風(fēng)險點(diǎn)分析（5分）：①未佩戴護(hù)目鏡：布魯氏菌可通過眼結(jié)膜感染，增加暴露風(fēng)險；②生物安全柜外傳遞樣本：可能導(dǎo)致氣溶膠擴(kuò)散至實驗室環(huán)境；③樣本暴露時間延長：增加病原泄漏概率。糾正措施（5分）：①操作前必須佩戴護(hù)目鏡（或全面型呼吸防護(hù)器）；②樣本傳遞需通過雙門傳遞窗，或在生物安全柜內(nèi)完成；③縮短樣本暴露時間，操作后立即對傳遞區(qū)域進(jìn)行5000mg/L含氯消毒劑擦拭。3.關(guān)鍵參數(shù)及標(biāo)準(zhǔn)（每項2分，共12分）：①氣壓梯度：核心區(qū)與相鄰緩沖間壓差100~150Pa（相對于大氣壓）；②氣流速度：生物安全柜工作面平均風(fēng)速≥0.5m/s；③HEPA過濾效率：對0.3μm顆?！?9.97%（掃描檢漏法）；④換氣次數(shù)：核心區(qū)≥12次/小時（全新風(fēng)系統(tǒng)）；⑤溫度/濕度：2025℃，3070%（無冷凝）；⑥紫外線燈輻照強(qiáng)度：≥70μW/cm2（距離1m處）；⑦高壓蒸汽滅菌效果：生物監(jiān)測（嗜熱脂肪芽孢桿菌）無生長。五、操作分析題（每錯誤點(diǎn)4分，共20分）錯誤1：穿戴時先戴醫(yī)用外科口罩（應(yīng)為N95及以上）。依據(jù)：BSL3需佩戴N95或動力送風(fēng)呼吸防護(hù)器，外科口罩防護(hù)級別不足。錯誤2：生物安全柜內(nèi)使用未密封離心機(jī)。依據(jù)：離心操作需使用密封轉(zhuǎn)子或安全杯，防止氣溶