資料內(nèi)容僅供您學(xué)習(xí)參考，如有不當(dāng)或者侵權(quán)，請聯(lián)系改正或者刪除。膠原蛋白酶的研究進(jìn)展三億文庫設(shè)為首頁\o"將本站加入到您的收藏夾"收藏本站首頁\o"考試資料"考試資料\o"幻燈片"幻燈片\o"工程技術(shù)"工程技術(shù)\o"公務(wù)員考試"公務(wù)員考試\o"小學(xué)教學(xué)"小學(xué)教學(xué)\o"中學(xué)教學(xué)"中學(xué)教學(xué)\o"大學(xué)教學(xué)"大學(xué)教學(xué)\o"外語資料"外語資料36膠原蛋白酶的研究進(jìn)展膠原蛋白酶的研究進(jìn)展;摘要:膠原蛋白特有的三股螺旋結(jié)構(gòu)使其難于被人體吸;關(guān)鍵詞:膠原蛋白酶,作用機(jī)理,影響因素;Abstract:Thenutritionala;Keywords:collagenproteas;膠原蛋白是人體內(nèi)含量最多、分布最廣泛的蛋白質(zhì),是;加［4］［1－3］和生物活性等特性,被愈來愈多的;[5-6]抗疲勞等生理調(diào)節(jié)功能的小肽,是極具發(fā)展膠原蛋白酶的研究進(jìn)展摘要:膠原蛋白特有的三股螺旋結(jié)構(gòu)使其難于被人體吸收,將膠原蛋白水解為膠原多肽后,可顯著提高其營養(yǎng)及生理功能,膠原蛋白酶是一種價值很高的蛋白酶種。本文介紹了膠原蛋白酶的定義、選擇、影響因素。作用機(jī)理等,并展望其研究方向。關(guān)鍵詞:膠原蛋白酶,作用機(jī)理,影響因素Abstract:Thenutritionalandphysiologicalfunctionofcollagenproteincanbesignificantlyimprovedviachemicalorenzymatichydrolysis,asthecollagenproteinwasdifficulttobeabsorbedbyhumanbodyduetothetriplehelicalcharacteristicmoleculesstructure.Collagenproteaseisakindofhighvalueofprotease.Inthispaper,introducesthedefinitionofcollagenenzyme,selection,influencefactors,mechanismetc.Thefuturedevelopmentdirectionitwasalsoprospected.Keywords:collagenprotease,mechanism,influencefactors膠原蛋白是人體內(nèi)含量最多、分布最廣泛的蛋白質(zhì),是一種與組織和器官功能密切相關(guān)的功能性蛋白。膠原蛋白的低免疫原性、生物相容性、生物降解性加［4］［1－3］和生物活性等特性,被愈來愈多的消費者所認(rèn)識。膠原蛋白制品已被廣泛應(yīng)用于食品、保健食品、化妝品、醫(yī)藥等領(lǐng)域,市場需求急劇增。天然膠原蛋白經(jīng)蛋白酶水解后,可得到具有抗氧化、降血壓、降血脂、免疫調(diào)節(jié)、激素調(diào)節(jié)、[5-6]抗疲勞等生理調(diào)節(jié)功能的小肽,是極具發(fā)展前景的功能因子,也是當(dāng)前醫(yī)藥、食品界最熱門的研究課題之一。膠原蛋白具有獨特的三股超螺旋結(jié)構(gòu),三條鏈相互平行而且由鏈間氫鍵相連,具有十分穩(wěn)定的性質(zhì),一般的加工溫度及短時間加熱都難使其分解,因此難被人體吸收,食用利用率較低[7]。將膠原蛋白水解為膠原多肽后,其營養(yǎng)及生理功能可顯著提高:蛋白質(zhì)消化吸收率幾乎達(dá)100％,能保護(hù)胃黏膜以及抗?jié)?促進(jìn)皮膚膠原代謝,抑制血壓上升,對關(guān)節(jié)炎等膠原病具有很好的預(yù)防及治療作用,能促進(jìn)鈣吸收和降低血清中膽固醇含量等[8]。尋找一種高效的降解膠原蛋白的酶也成為了當(dāng)今的一個熱門課題。1膠原蛋白酶的定義和選擇1.1定義膠原蛋白酶(Collgaenolytciprotease)定義為在適當(dāng)?shù)膒H和溫度下,只切割活性膠原螺旋區(qū)或明膠而不作用于其它蛋白底物的酶類1.2酶的選擇能使膠原蛋白酶解的酶類較多。按照作用位點能夠分為內(nèi)切酶和外切酶;從來源上可分為植物蛋白酶(如菠蘿蛋白酶、木瓜蛋白酶等)、動物蛋白酶(如胰蛋白酶、胃蛋白酶等)、微生物蛋白酶(如枯草桿菌1.398、放線菌166等);另外,較常見于水解的蛋白酶還有風(fēng)味復(fù)合酶等。在實際應(yīng)用中,酶的選取一般要考慮三個方面:一是酶對膠原蛋白作用的強度;二是酶的價格;三是水解產(chǎn)物的要求。如果酶對膠原的作用太弱,則無法得到高的膠原水解率,而酶的純度直接影響酶的價格,純度較高的酶與工業(yè)用酶的價格往往相差甚遠(yuǎn)。因此開發(fā)的產(chǎn)品如沒有特殊要求,一般能夠考慮選擇用已完全工業(yè)化的酶。除此之外,還必須考慮酶對膠原的作用位點,因為這直接影響最后水解產(chǎn)物分子量的分布,是決定能否得到目標(biāo)產(chǎn)物的一個關(guān)鍵因素[12-13][9-10]。。細(xì)菌膠原酶可分泌到胞外,經(jīng)過發(fā)酵可大量獲得,微[11]生物來源的膠原酶在應(yīng)用方面具有更廣的應(yīng)用范圍。2膠原蛋白酶的水解特性和作用機(jī)理的研究2.1膠原蛋白酶的水解特性對于水解膠原蛋白方面的研究,國外的報道很多。例如RuudA.Bank等采用SDS決策法分別測定α-胰凝乳蛋白酶水解完整的膠原蛋白、熱處理(70℃,30min)過的變性的膠原蛋白、以及用人體膠原酶解旋的膠原蛋白得到的碎片的尺寸,經(jīng)過比較得出胰凝乳蛋白酶不能使完整的三股螺旋的膠原蛋白分子解鏈,但能使變性的膠原蛋白完全降解成小分子產(chǎn)物在37℃經(jīng)過12h能夠水解不能溶解的牛膠原蛋白[15][14]。。S.R.L.Teruel研究發(fā)現(xiàn)美洲比目魚膠原蛋白酶不能水解牛膠原蛋白,魚膠原蛋白酶在pH為7時活性最高。天然的魚膠原蛋白酶。MasatoHiyama等人實驗發(fā)現(xiàn)某種曲霉菌絲氨酸蛋白酶OK-22,在37℃,pH為7.5,經(jīng)過48h,Ⅰ-型膠原蛋白的水解程度達(dá)到12％。曲霉菌絲氨酸蛋白酶水解Ⅰ-型膠原蛋白的上限大約是12％,與水解乳酪的程度一樣,而真菌蛋白酶水解膠原蛋白的程度要比水解乳酪的程度弱的多[16]。SiripornDamrongsakkul等在用木瓜蛋白酶和應(yīng)用Neutrase蛋白酶水解生牛皮時,發(fā)現(xiàn)應(yīng)用Neutrase蛋白酶水解的產(chǎn)物中,膠原蛋白的水解產(chǎn)物的粘度跟水一樣低。Ⅰ-型的人類膠原蛋白是存在于哺乳動物體內(nèi)最豐富的一種分子,天然的膠原對大多數(shù)的膠原蛋白酶都具有抵抗力[17]。J.Friedrich等在研究角蛋白酶對天然膠原的水解能力時發(fā)現(xiàn)羽毛角蛋白和膠原不能被[18]這種從菌類提取的角蛋白酶水酶。曾名勇等采用正交試驗確定了菠蘿蛋白酶和alcalase2.4L堿性蛋白酶這兩種酶單獨水解魚皮膠原蛋白的最佳酶解條件。在此基礎(chǔ)上,進(jìn)行復(fù)合酶水解實驗,表明先采用菠蘿蛋白酶水解,再用alcalase2.4L蛋白酶水解,效果更佳[19]。薛勇等在研究巖藻聚糖硫酸酯寡糖-Ce(Ⅳ)配合物的制備及其對膠原蛋[20]白的水解活性時發(fā)現(xiàn)小分子巖藻聚糖硫酸酯寡糖-Ce(Ⅳ)的配合效果最好,且水解膠原蛋白的活性高,并經(jīng)過實驗確定了配合條件以及配合物對膠原蛋白的最佳水解條件。孫愛梅等研究認(rèn)為胰蛋白酶對天然膠原蛋白幾乎沒有作用,但能夠降解變性的膠原蛋白。胰蛋白酶水解膠原的最適條件是pH為8.1～8.2、溫度37℃。在此條件下,采用凝膠過濾色譜分析考察了酶用量時間對膠原蛋白降解過程的影響。一般情況下,在酶促反應(yīng)中底物濃度比酶濃度高得多,增加酶用量對酶促反應(yīng)初始速率影響較大,而且速率增加與酶用量成正比,隨著底物濃度的降低,酶用量對反應(yīng)速率的影響逐漸減小件為,并對膠原水解產(chǎn)物的理化性質(zhì)進(jìn)行了測定2.2膠原蛋白酶的作用機(jī)理對于酶作用機(jī)理的研究也很多。MisookKim等利用從生姜的根莖中提取的半胱氨酸蛋白酶GP2水解從小牛皮中提取的Ⅰ-型膠原蛋白時,發(fā)現(xiàn)這種酶能作用于膠原分子三條螺旋鏈上的相同位點,是當(dāng)前唯一被證明能夠水解天然膠原的植物半胱氨酸蛋白酶[23][22][21]。陳秀金等研究了用堿性蛋白酶水解脫鉻革屑制備膠原水解產(chǎn)物時,影響膠原蛋白水解產(chǎn)物收獲率的各種因素,確定了最佳水解條。。YoshioYamakawa等測定了純出血蛇毒素水解幾種白明膠和膠原蛋白的能力。但在天然膠原中只有Ⅳ-型膠原能夠被水解。出血蛇毒素對Ⅳ-型膠原的水解具有時間依賴性,在開始的2h水解非常迅速;出血蛇毒素作用于Ⅳ-型膠原不同的位點來水解三股螺旋結(jié)構(gòu)[24]。MagdaGioia等檢測了嗜中性粒細(xì)胞膠原蛋白酶,白明膠酶A降解膠原纖維的作用機(jī)制,經(jīng)過研究Ⅰ-型膠原蛋白在37℃時水解,確定了在處理過程中兩種α-鏈膠原蛋白的功能差異。運用熱力學(xué)和動力學(xué)參數(shù)定量的比較,發(fā)現(xiàn)金屬膠原蛋白酶對對膠原蛋白分子鏈的解旋和伸展至少有兩種截然不同的機(jī)理[25]。A.CristinaSarmento等認(rèn)為存在三種溶膠機(jī)理,一種是用裂縫膠原蛋白酶,[26]能夠分裂穩(wěn)定三股螺旋膠原蛋白,第二種是拓寬的精細(xì)蛋白酶,如半胱氨酸蛋白酶,能夠作用于天然膠原蛋白分子的分裂的肽端,第三種是細(xì)菌蛋白酶及組織蛋白酶。EricDufour等研究了膠原酶和組織蛋白酶B水解Ⅲ-型的膠原時流體靜壓力的作用。實驗證明高壓條件下膠原分子表面一些氨基酸側(cè)鏈不宜暴露,也不宜被組織蛋白酶B識別。膠原水解的速率隨著壓力的增大而減小。高壓會導(dǎo)致酶和底物的構(gòu)象發(fā)生變化,壓力還會改變酶的彈性[27]。3影響酶活力的因素酶也是一種蛋白質(zhì),凡是能使蛋白質(zhì)變性的因素,都可能使酶失去活性,如物理因素(溫度、壓力、光、磁場),化學(xué)因素(氧化、還原、溶劑、金屬離子、離子強度、pH)和生物學(xué)因素(酶修飾和酶降解)蛋白酶在加工和貯存期間活力都會降低,在常溫(25℃,濕度25%)下,貯存一個月酶活力降低達(dá)20％～30%,蛋白酶的易失活特性極大地限制了其生產(chǎn)和應(yīng)用。蛋白酶的活性降低主要是由于蛋白酶的巰基易被氧化,與SO2的相互轉(zhuǎn)化,形成了醌-硫醇復(fù)合物,并可自行降解。3.1化學(xué)因素3.1.1有機(jī)溶劑一般情況下,隨著有機(jī)溶劑濃度的增大,蛋白酶活力呈直線下降。試驗證明,當(dāng)甲醇、乙醇、乙二醇濃度分別達(dá)到25.5%、20.5%、24.0%時,酶活力喪失一半,濃度達(dá)到50%時,酶活力完全喪失。在十二烷基硫酸鈉(SDS)變性中,菠蘿蛋白酶活力隨SDS濃度的增大而呈指數(shù)下降,而α-螺旋度開始有所下降,然后出現(xiàn)回升趨勢,SDS達(dá)4mg/ml時,酶完全失活,而α-螺旋度增加24%[28-30]。潘江球等研究報道,聚丙烯酰胺(PAAM)可使蛋白酶在30、45、50、60℃下貯存后,酶活力保留率分別提高l3.8%、22.9%、25.2%、28.4%。貯存溫度越高,PAAM提高酶活力保留率的效果越明顯,PAAM在液體酶中同樣能夠顯著地提高酶的穩(wěn)定性。這是因為PAAM是一種高分子親核試劑,經(jīng)過氫鍵固定在酶的表面來穩(wěn)定酶分子構(gòu)象;它對蛋白酶分子還起到一種包埋作用,有效地防止巰基的氧化失活;也由于它從酶相互作用區(qū)域排除水,降低自由能,使酶的貯存穩(wěn)定性得到了顯著的提高3.1.2金屬離子在pH7.0時,草酸鈉對蛋白酶有明顯穩(wěn)定作用,100mmol/L草酸鈉能使酶活半衰期延長6倍,丁二酸鈉、酒石酸甲鈉對酶活也有一定的保護(hù)作用。醋酸鈉、檸檬酸鈉、硼酸鈉對蛋白酶都有一定程度的保護(hù)作用,而且濃度變化對保護(hù)作用的影響不大。研究證明,添加苯甲酸鈉,貯存1個月后酶活力比對照組提高14％。添加焦亞硫酸鈉,在15℃下避光保存2個月酶活力保持不變。Ca2+和Zn2+對蛋白酶有一定程度的保護(hù)作用。KCl和NaCl對蛋白酶熱穩(wěn)定性基本沒有影響[32][31]。;CaCl2和MgCl2在一定濃度下顯現(xiàn)出一定的保護(hù)作用,分別比對照品提高了21%和12.4%。Zn(Ac)2和ZnCl2在低濃度下就可增進(jìn)酶的熱穩(wěn)定性,在合適的濃度下,酶活力分別比對照品提高了32.4%和29.1%。在這些金屬離子中,發(fā)現(xiàn)對蛋白酶有一定作用的都是二價離子,以鋅離子的作用較為明顯,鈣、鎂離子次之。而對于鋅離子,醋酸鋅的功效顯得更大些,它能以極低的濃度(5×10-4mol/L)獲得顯著的穩(wěn)定效果。3.1.3共溶劑糖類、多元醇、氨基酸及其衍生物、無機(jī)鹽、甘油、多聚物如聚乙二醇(PEG)等一般被稱為蛋白質(zhì)的共溶劑。對某一活性酶來說,其酶失活半衰期是常數(shù),因此能夠菠蘿蛋白酶失活半衰期用作衡量酶熱穩(wěn)定性的指標(biāo)。研究證明,40％半乳糖對菠蘿蛋白酶有一定的保護(hù)作用,能使其酶活半衰期提高3倍;50％葡萄糖可將菠蘿蛋白酶的半衰期延長10倍,但有研究指出,葡聚糖和肌醇對該蛋白酶沒有保護(hù)作用。蔗糖、麥芽糖、棉子糖和松三糖等寡糖對菠蘿蛋白酶均有明顯的保護(hù)作用。也有人證明,低濃度的蔗糖、葡萄糖、β-環(huán)糊精、黃原膠對提高酶的熱穩(wěn)定性沒有作用。50％甘油可將菠蘿蛋白酶的半衰期延長8倍,乙二醇和甘露醇對菠蘿蛋白酶有一定的保護(hù)作用甘露醇即使在低濃度下也能促進(jìn)酶溶液的熱穩(wěn)定性。近幾年的研究表明,共溶劑對酶的保護(hù)作用機(jī)制是共溶劑的加入改變了溶液的熱力學(xué)性質(zhì),使酶的穩(wěn)定性得到增強,理論上稱優(yōu)先排阻作用。共溶劑從酶表面的優(yōu)先排阻并不是說共溶劑分子絕對不能滲透到酶表面并與之結(jié)合,而是在酶表面完全水化和共溶劑完全結(jié)合之間建立起一種平衡。糖類是酶蛋白在溶液中和在干燥狀態(tài)下較好的穩(wěn)定劑。甘油和多元醇對酶的非極性表面有很好的穩(wěn)定作用。另外,一些研究者發(fā)現(xiàn),混合使用共溶劑可大大提高酶的穩(wěn)定效果。[33]。試驗還證明,多元醇甘油、3.2物理因素3.2.1溫度和濕度一般動物蛋白酶的最適反應(yīng)溫度介于37～40℃,植物蛋白酶的最適為50～60℃,溫度升高,酶的熱失活增強,反應(yīng)速度下降。在干燥環(huán)境下,蛋白酶活力相對穩(wěn)定,但隨著環(huán)境濕度的增大,酶失活速率加快3.2.2光照光對蛋白酶活性的影響是明顯的。試驗證明,將菠蘿蛋白酶進(jìn)行避光和無避光貯存10d后,無避光下酶活力的保留率比避光下降低了9.8%。這是因為蛋白酶中的巰基、氨基、色氨酸殘基和唯一的組氨酸殘基是酶活性的必須基團(tuán),日光對這些基團(tuán)的破壞性很強,日光中的紫外線等能夠引起酶構(gòu)象的改變或使酶的氨基酸殘基氧化、引起共價鍵斷裂等反應(yīng)3.3生物因素Lee等報道,用脂質(zhì)膜微膠囊包埋保護(hù)蛋白酶,能有效地提高蛋白酶的穩(wěn)定性[36]。據(jù)黃惠華等報道,以聚乙二醇為分散劑和穩(wěn)定劑,用氧化低價鐵鹽的方法制成具有磁性響應(yīng)性的微球,用1.33%濃度的該磁性微球吸附分離的蛋白酶,回收率達(dá)61.96%,酶活性為3.8萬單位/g,固定化磁性蛋白酶的熱穩(wěn)定性有顯著提高,常溫下的保存半衰期為28d左右[37][35][34]。。。用琥珀酸酐法活化后的聚乙二醇(PEG)修飾蛋白酶,所得到的修飾酶在對溫度和pH值的穩(wěn)定性上均比天然酶有一定程度的提高。這說明PEG分子對酶有一定的保護(hù)作用,推測這種作用應(yīng)來自分子間的作用力。Mg2+和Ca2+對修飾酶有不同程度的激活作用,而Na+對修飾酶無明顯影響[38]。以脫乙酰甲殼質(zhì)為載體,戊二醛為交聯(lián)劑,對蛋白酶進(jìn)行固定化,研究其對啤酒澄清的作用。采用右旋糖醛對蛋白酶進(jìn)行化學(xué)修飾,經(jīng)修飾的酶能較好地保持蛋白酶活性,而且具有更好的穩(wěn)定性。4膠原蛋白酶的提取方法蛋白酶的提取方法有很多種:沉淀法、層析法、膜超濾法,提取膠原蛋白主要用的的是層析法。4.1層析法層析法又稱為色譜法。在層析分離中基于固定相和流動相中各組份阻滯能力的作用不同,又可分為分子篩層析、離子層析、親和層析等。4.1.1分子篩層析分子篩層析(gelchromatography)又稱為凝膠層析或凝膠過濾。分子篩層析是利用有一定孔徑范圍的多孔凝膠作為固定相,對混合物中各組分按分子大小進(jìn)行分離的層析技術(shù),適用于分離和提純蛋白質(zhì)、酶、多肽、激素、多糖、核酸類等物質(zhì)。分子大小彼此相差25%的樣品,只要經(jīng)過單一凝膠床就能夠完全將它們分開。具有分子篩作用的物質(zhì)很多,如浮石、瓊脂、瓊脂糖、聚乙烯醇、聚丙烯酰胺、葡聚糖凝膠等,以葡聚糖凝膠應(yīng)用最廣。分子篩層析具有設(shè)備簡單、操作方便、分離迅速及不影響分子生物學(xué)活性等優(yōu)點,當(dāng)前已被廣泛應(yīng)用于各種生化產(chǎn)品的分離和純化。但同時也存在分辨率不高,分離操作較慢等不足之處。另外,凝膠層析要求樣品黏度不宜太高,凝膠顆粒有時還有非特異吸附現(xiàn)象。4.1.2離子交換層析離子交換層析(IonExchangeChromatography簡稱為IEC)是以離子交換劑為固定相,依據(jù)流動相中的組分離子與交換劑上的平衡離子進(jìn)行可逆交換時的結(jié)合力大小的差別而進(jìn)行分離的一種層析方法。離子交換層析中,基質(zhì)是由帶有電荷的樹脂或纖維素組成。由于蛋白質(zhì)也帶有電荷,當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)處于不同的pH條件下,其帶電狀況也不同。陰離子交換基質(zhì)結(jié)合帶有負(fù)電荷的蛋白質(zhì),反之陽離子交換基質(zhì)結(jié)合帶有正電荷的蛋白質(zhì)。經(jīng)過提高洗脫液中的鹽濃度等措施,將吸附在柱子上的蛋白質(zhì)洗脫下來。結(jié)合較弱的蛋白質(zhì)首先被洗脫下來。與分子篩層析相比,離子交換層析特異性更好,有更多的參數(shù)能夠調(diào)整以獲得最優(yōu)的純化效果,樹脂也比較便宜。值得一提的是,即便是用最精確控制的條件,僅用離子交換單一的方法也得不到純的蛋白質(zhì),還需要其它的純化步驟并需要經(jīng)常進(jìn)行離子再生,耗費大量酸堿,而且對環(huán)境有一定的破壞。5發(fā)展前景中國是工業(yè)生產(chǎn)大國之一,每年產(chǎn)生30萬噸以上的鞣革廢渣,利用這些工業(yè)廢棄物的酶解來制備膠原多肽,使其變廢為寶,不但減少環(huán)境污染,還能帶來良好的社會效益和經(jīng)濟(jì)效益?？墒怯捎诿缸陨淼娜秉c,如高度的底物專一性,易變敏感性,水解率偏低等,導(dǎo)致工業(yè)化生產(chǎn)的成本較高,產(chǎn)品價格昂貴。因此尋找穩(wěn)定性,產(chǎn)量高好的膠原蛋白酶,改進(jìn)各種水解工藝條件,提高膠原蛋白酶解為膠原多肽的酶解效率,將成為水解膠原蛋白領(lǐng)域的研究重點。三億文庫3包含各類專業(yè)文獻(xiàn)、外語學(xué)習(xí)資料、行業(yè)資料、專業(yè)論文、中學(xué)教育、幼兒教育、小學(xué)教育、文學(xué)作品欣賞、36膠原蛋白酶的研究進(jìn)展等內(nèi)容。12參考文獻(xiàn):[1]石崗.生物活性肽進(jìn)展［J］.北京農(nóng)業(yè)科學(xué),;[2]陳國梁,賀翠蓮.膠原蛋白的研究進(jìn)展［J］.;[3]焦駝文,孔繁東,等.酶解蛋白制備抗氧化多肽;[4]馮成利,黨蕊葉,李校坤,等.豬皮膠原蛋白肽;[5]曹榮安,李浩,李良玉,等.膠原蛋白的生理功;[6]傅燕鳳,沈月新.淺談魚皮膠原蛋白的利用［J;[7]S.R.Fahnestock,A.Stei參考文獻(xiàn):[1]石崗.生物活性肽進(jìn)展［J］.北京農(nóng)業(yè)科學(xué),(3):9－13.[2]陳國梁,賀翠蓮.膠原蛋白的研究進(jìn)展［J］.延安大學(xué)學(xué)報:自然科學(xué)版,,19(2):78－81.[3]焦駝文,孔繁東,等.酶解蛋白制備抗氧化多肽的研究現(xiàn)狀與展望［J］.中國釀造,(3):5－7.[4]馮成利,黨蕊葉,李校坤,等.豬皮膠原蛋白肽的提取及理化分析［J］.陜西師范大學(xué)學(xué)報:自然科學(xué)版,,35:20－23.[5]曹榮安,李浩,李良玉,等.膠原蛋白的生理功能特性及其應(yīng)用［J］.肉制品加工與設(shè)備,(1):7－9.[6]傅燕鳳,沈月新.淺談魚皮膠原蛋白的利用［J］.食品研究與開發(fā),,25(2):16－18.[7]S.R.Fahnestock,A.Steinbüchel.Biopolymers(8):PolyamidesandComplexProteinaceousMaterials[M],.[8]PiezKA,EignerEA,LewisMS.Thechromatographicseparationandaminoacidcompositionofthesubunitsofseveralcollagens[J].Biochemistry.1963,(2):58-66.[9]WatanabeK.Collagenolyticproteasesfrombacteria.ApplMicrobiolBiotechnol,,63:520–526.[10]PParkPJ,LeeSH,ByunGH,etal.Purificationandcharacterizationofacollagenasemackerel,Scomberjaponicus.JBiochemMolBiol,,35(6):5765–5782.[11]KumarCG,TakagiH.Microbialalkalineproteases:fromabioindustrialviewpoint.BiotechnolAdv,1999,17(7):561–594.[12]KanthSV,VenbaR,MadhanB,etal.Studiesontheinfluence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