酶制劑定向進(jìn)化工程師崗位招聘考試試卷及答案一、填空題（共10題，每題1分）1.易錯(cuò)PCR中常用的誘變劑是______。2.DNAshuffling的核心步驟是______和重組。3.酶定向進(jìn)化的兩大核心策略是隨機(jī)進(jìn)化和______。4.易錯(cuò)PCR的突變率通?？刂圃赺_____個(gè)堿基/基因左右。5.高通量篩選的關(guān)鍵是______和靈敏檢測(cè)方法。6.理性設(shè)計(jì)依賴(lài)酶的______和催化機(jī)制。7.噬菌體展示常用的載體是______噬菌體。8.酶改造策略分為隨機(jī)、理性和______設(shè)計(jì)。9.定向進(jìn)化起始材料通常是______酶基因。10.飽和突變常用方法是______（如重疊延伸PCR）。二、單項(xiàng)選擇題（共10題，每題2分）1.易錯(cuò)PCR中Mn2+的作用是（）A.提高酶保真度B.降低酶保真度C.促進(jìn)引物結(jié)合D.穩(wěn)定模板2.DNAshuffling不需要的酶是（）A.DNaseIB.Taq酶C.連接酶D.限制性?xún)?nèi)切酶3.高通量篩選不常用的方法是（）A.熒光檢測(cè)B.比色檢測(cè)C.質(zhì)譜分析D.菌落顯色4.理性設(shè)計(jì)不包括的步驟是（）A.結(jié)構(gòu)解析B.突變位點(diǎn)預(yù)測(cè)C.隨機(jī)文庫(kù)構(gòu)建D.活性驗(yàn)證5.噬菌體展示的原理是（）A.噬菌體表達(dá)酶B.酶與外殼蛋白融合C.噬菌體感染宿主D.噬菌體擴(kuò)增基因6.定向進(jìn)化循環(huán)順序正確的是（）A.突變→篩選→重組→驗(yàn)證B.突變→重組→篩選→驗(yàn)證C.重組→突變→篩選→驗(yàn)證D.突變→篩選→驗(yàn)證→重組7.飽和突變不包括的方法是（）A.重疊延伸PCRB.易錯(cuò)PCRC.定點(diǎn)飽和突變D.簡(jiǎn)并引物PCR8.易錯(cuò)PCR的模板通常是（）A.基因組DNAB.質(zhì)粒DNAC.cDNAD.任意DNA9.定向進(jìn)化目的不包括（）A.提高活性B.改變底物特異性C.降低穩(wěn)定性D.提高熱穩(wěn)定性10.篩選壓力的作用是（）A.增加突變數(shù)B.富集目標(biāo)突變體C.提高突變率D.促進(jìn)重組三、多項(xiàng)選擇題（共10題，每題2分）1.定向進(jìn)化策略包括（）A.易錯(cuò)PCRB.DNAshufflingC.理性設(shè)計(jì)D.噬菌體展示2.易錯(cuò)PCR影響因素包括（）A.Mn2+濃度B.dNTP比例C.Taq酶用量D.循環(huán)次數(shù)3.DNAshuffling步驟包括（）A.片段化B.無(wú)引物PCRC.有引物PCRD.篩選4.高通量篩選特點(diǎn)包括（）A.快速B.微量C.靈敏D.低通量5.理性設(shè)計(jì)前提是（）A.結(jié)構(gòu)已知B.催化機(jī)制明確C.突變位點(diǎn)可預(yù)測(cè)D.無(wú)需結(jié)構(gòu)6.噬菌體展示應(yīng)用包括（）A.酶進(jìn)化B.抗體篩選C.蛋白相互作用D.基因克隆7.酶改造技術(shù)包括（）A.易錯(cuò)PCRB.定點(diǎn)突變C.噬菌體展示D.基因編輯8.定向進(jìn)化關(guān)鍵環(huán)節(jié)是（）A.文庫(kù)構(gòu)建B.高通量篩選C.活性驗(yàn)證D.理性設(shè)計(jì)9.飽和突變優(yōu)勢(shì)是（）A.覆蓋所有氨基酸突變B.針對(duì)特定位點(diǎn)C.突變率高D.無(wú)需結(jié)構(gòu)10.定向進(jìn)化與理性設(shè)計(jì)區(qū)別是（）A.是否依賴(lài)結(jié)構(gòu)B.是否隨機(jī)突變C.篩選必要性D.靶點(diǎn)數(shù)量四、判斷題（共10題，每題2分）1.易錯(cuò)PCR只能引入隨機(jī)突變，不能定向改造。（）2.DNAshuffling是非隨機(jī)重組策略。（）3.高通量篩選無(wú)需預(yù)篩選，直接篩所有突變體。（）4.理性設(shè)計(jì)依賴(lài)酶結(jié)構(gòu)和催化機(jī)制。（）5.噬菌體展示可進(jìn)化酶的親和力和活性。（）6.定向進(jìn)化每輪需篩選和驗(yàn)證。（）7.飽和突變可覆蓋目標(biāo)位點(diǎn)20種氨基酸突變。（）8.易錯(cuò)PCR突變率越高，效率越高。（）9.DNAshuffling可重組不同來(lái)源基因。（）10.定向進(jìn)化只能改酶活性，不能改其他性質(zhì)。（）五、簡(jiǎn)答題（共4題，每題5分）1.簡(jiǎn)述易錯(cuò)PCR的原理及應(yīng)用。2.定向進(jìn)化與理性設(shè)計(jì)的主要區(qū)別是什么？3.高通量篩選在酶定向進(jìn)化中的作用及關(guān)鍵要求？4.簡(jiǎn)述DNAshuffling的基本流程。六、討論題（共2題，每題5分）1.如何從策略、文庫(kù)構(gòu)建、篩選三方面提高定向進(jìn)化效率？2.結(jié)合工業(yè)酶應(yīng)用（如洗滌劑酶、生物燃料酶），談?wù)劧ㄏ蜻M(jìn)化的價(jià)值。---答案部分一、填空題答案1.Mn2+（錳離子）2.片段化3.理性設(shè)計(jì)4.1-55.微型化（自動(dòng)化操作）6.三維結(jié)構(gòu)7.M13（絲狀）8.半理性9.野生型10.重疊延伸PCR（簡(jiǎn)并引物PCR）二、單項(xiàng)選擇題答案1.B2.D3.C4.C5.B6.B7.B8.B9.C10.B三、多項(xiàng)選擇題答案1.ABD2.ABCD3.ABCD4.ABC5.ABC6.ABC7.ABCD8.ABC9.AB10.ABC四、判斷題答案1.×2.×3.×4.√5.√6.√7.√8.×9.√10.×五、簡(jiǎn)答題答案1.原理：通過(guò)調(diào)整PCR條件（加Mn2+、改變dNTP比例）降低Taq酶保真度，使基因引入隨機(jī)點(diǎn)突變；應(yīng)用：構(gòu)建酶突變文庫(kù)，篩選高活性、熱穩(wěn)定等優(yōu)良性質(zhì)的酶。2.①依賴(lài)結(jié)構(gòu)：理性設(shè)計(jì)需酶三維結(jié)構(gòu)，定向進(jìn)化無(wú)需；②突變方式：理性設(shè)計(jì)定點(diǎn)突變，定向進(jìn)化隨機(jī)突變；③篩選：定向進(jìn)化依賴(lài)高通量篩選，理性設(shè)計(jì)篩選量少；④靶點(diǎn)：理性設(shè)計(jì)針對(duì)關(guān)鍵位點(diǎn)，定向進(jìn)化覆蓋全基因。3.作用：快速篩選大量突變體，富集目標(biāo)突變；關(guān)鍵要求：微型化（μL級(jí)反應(yīng)）、靈敏（低濃度檢測(cè)）、自動(dòng)化（減少誤差）、特異（排除干擾）、高通量（日篩萬(wàn)級(jí)以上）。4.①DNaseI片段化基因（10-50bp）；②無(wú)引物PCR隨機(jī)重組片段；③有引物PCR擴(kuò)增重組基因；④構(gòu)建文庫(kù)；⑤篩選目標(biāo)突變體。六、討論題答案1.策略：結(jié)合半理性設(shè)計(jì)（定點(diǎn)飽和突變關(guān)鍵位點(diǎn)），減少文庫(kù)冗余；文庫(kù)構(gòu)建：優(yōu)化易錯(cuò)PCR條件（突變率1-5個(gè)堿基/基因），用DNAshuffling重組基因；篩選：建立熒光/比色自動(dòng)化高通量