生物制藥純化工程師崗位招聘考試試卷及答案一、填空題（每題1分，共10分）1.單抗捕獲常用的親和層析填料是______。2.離子交換層析依賴目標蛋白的______差異結(jié)合。3.除菌過濾的濾膜孔徑為______μm。4.TFF（切向流過濾）屬于______（死端/切向）過濾。5.疏水層析中，目標蛋白在______（高/低）鹽下結(jié)合填料。6.緩沖液酸性調(diào)節(jié)劑常用______。7.活性收率=______×100%。8.去除內(nèi)毒素常用______親和層析。9.層析柱再生常用______溶液清洗。10.病毒滅活常用______（如低pH）方法。二、單項選擇題（每題2分，共20分）1.單抗特異性捕獲首選層析是：A.離子交換B.蛋白A親和C.疏水D.凝膠過濾2.降低緩沖液pH優(yōu)先選：A.HClB.檸檬酸C.NaOHD.醋酸3.除菌過濾屬于：A.絕對過濾B.深層過濾C.預(yù)過濾D.粗過濾4.TFF截留分子量（MWCO）通常比目標蛋白：A.小10-20kDaB.大10-20kDaC.相等D.無關(guān)5.疏水層析洗脫用：A.降鹽B.升鹽C.變pHD.加變性劑6.帶負電蛋白選______離子交換填料：A.陰B.陽C.凝膠D.蛋白A7.單抗低pH滅活典型條件：A.pH3.0-3.5，30minB.pH5.0-6.0，1hC.pH7.0-8.0，2hD.pH2.0-2.5，10min8.有效去內(nèi)毒素的方法：A.0.22μm過濾B.疏水層析C.陰離子交換D.凝膠過濾9.層析柱清洗不包括：A.去殘留蛋白B.滅活微生物C.再生填料D.提高流速10.粗品（100U/mL，100mL）純化后（500U/mL，20mL），活性收率為：A.10%B.20%C.50%D.100%三、多項選擇題（每題2分，共20分）1.單抗純化常用層析：A.蛋白A親和B.陽離子交換C.陰離子交換D.疏水2.緩沖液配制注意事項：A.準確稱量B.超純水配制C.過濾除菌D.調(diào)pH3.TFF操作要點：A.控跨膜壓（TMP）B.穩(wěn)切向流速C.定期清洗D.截留體積越大越好4.內(nèi)毒素控制環(huán)節(jié)：A.原料控制B.設(shè)備滅菌C.緩沖液除菌D.填料選擇5.層析柱再生步驟：A.強堿清洗B.強酸清洗C.有機溶劑沖洗D.平衡液平衡6.病毒清除驗證方法：A.低pH滅活B.納米過濾C.層析去除D.加熱7.蛋白復(fù)性方法：A.透析B.稀釋C.柱上復(fù)性D.變性劑梯度洗脫8.純化CQA（關(guān)鍵質(zhì)量屬性）：A.蛋白純度B.活性回收率C.內(nèi)毒素D.病毒殘留9.除菌過濾驗證項目：A.細菌挑戰(zhàn)B.完整性測試C.流速測試D.蛋白截留10.疏水層析影響因素：A.鹽濃度B.pHC.溫度D.填料疏水強度四、判斷題（每題2分，共20分）1.離子交換基于分子量差異分離。（）2.疏水層析低鹽下結(jié)合蛋白。（）3.TFF是死端過濾。（）4.0.22μm濾膜可去所有微生物。（）5.蛋白A結(jié)合單抗Fc段。（）6.緩沖液pH接近pI提高蛋白溶解度。（）7.疏水層析洗脫需降鹽。（）8.內(nèi)毒素是革蘭氏陽性菌成分。（）9.層析柱用1MNaOH再生。（）10.病毒滅活僅能化學(xué)方法。（）五、簡答題（每題5分，共20分）1.簡述蛋白A親和層析捕獲單抗的原理及步驟。2.簡述TFF操作要點。3.簡述純化工藝內(nèi)毒素控制關(guān)鍵環(huán)節(jié)。4.簡述層析柱清洗再生方法及目的。六、討論題（每題5分，共10分）1.單抗純化中蛋白A柱回收率偏低的原因及解決措施。2.如何確定層析工藝的CPP（關(guān)鍵工藝參數(shù)）及CQA？---答案部分一、填空題答案1.蛋白A填料2.電荷3.0.224.切向5.高6.HCl（鹽酸）7.（純化后總活性/粗品總活性）8.內(nèi)毒素9.NaOH（氫氧化鈉）10.低pH孵育二、單項選擇題答案1.B2.A3.A4.A5.A6.A7.A8.C9.D10.D三、多項選擇題答案1.ABCD2.ABD3.ABC4.ABCD5.ACD6.ABCD7.ABCD8.ABCD9.ABC10.ABCD四、判斷題答案1.×2.×3.×4.√5.√6.×7.√8.×9.√10.×五、簡答題答案1.原理：蛋白A特異性結(jié)合單抗Fc段，雜蛋白不結(jié)合；步驟：①柱平衡（pH7.0-7.4緩沖液）；②上樣（單抗結(jié)合）；③洗雜（去未結(jié)合雜蛋白）；④洗脫（低pH3.0-3.5解離）；⑤再生（NaOH清洗+平衡）。2.①控TMP<1bar，避免膜損傷；②穩(wěn)切向流速（1-5L/min）防濃差極化；③定期排液清洗；④選合適MWCO（比目標蛋白小10-20kDa）；⑤緩沖液pH/鹽濃度兼容蛋白。3.①原料無內(nèi)毒素；②設(shè)備/耗材無熱原；③緩沖液過濾/滅菌；④填料選低內(nèi)毒素結(jié)合型；⑤最終產(chǎn)品內(nèi)毒素過濾；⑥潔凈環(huán)境控制。4.方法：①NaOH清洗（去蛋白、滅活微生物/內(nèi)毒素）；②異丙醇（去疏水雜質(zhì)）；③EDTA（去金屬離子）；目的：恢復(fù)填料結(jié)合力、去雜質(zhì)、滅活污染物、保證重復(fù)性。六、討論題答案1.原因：①填料老化（結(jié)合位點減少）；②上樣過量；③平衡液pH不當(dāng)；④洗雜過度；⑤洗脫不充分；措施：①換填料；②優(yōu)化上樣量；③調(diào)平衡pH；④縮短洗雜時間；⑤延長洗脫時間/降低pH。2.CPP確定：①風(fēng)險評估找影響C