慢性應(yīng)激對大鼠情緒、認知及海馬與額葉FGF2、FGFR1蛋白表達的關(guān)聯(lián)性研究一、引言1.1研究背景與目的在快節(jié)奏的現(xiàn)代社會中，人們面臨著來自工作、家庭、社會等多方面的壓力和應(yīng)激，這些壓力長期累積形成慢性應(yīng)激狀態(tài)。據(jù)世界衛(wèi)生組織報告顯示，全球抑郁患者達3.5億人，每年自殺死亡的患者人數(shù)高達100萬人，而慢性應(yīng)激正是抑郁癥發(fā)病的重要危險因素。大量研究表明，慢性應(yīng)激不僅會對人體的生理機能產(chǎn)生負面影響，增加心腦血管疾病的風(fēng)險，還會對人的心理狀態(tài)產(chǎn)生不利影響，增加焦慮、抑郁等心理疾病的患病風(fēng)險，同時還會影響人的社交能力和工作表現(xiàn)。大腦作為人體最重要的器官之一，其功能的正常發(fā)揮對于個體的生存和適應(yīng)至關(guān)重要。海馬和額葉是大腦中與情緒、認知功能密切相關(guān)的腦區(qū)。海馬參與了記憶的形成、鞏固和提取過程，對于空間記憶和情景記憶尤為重要；額葉則在注意力、決策、執(zhí)行功能以及情緒調(diào)節(jié)等方面發(fā)揮著關(guān)鍵作用。當(dāng)機體處于慢性應(yīng)激狀態(tài)時，海馬和額葉的結(jié)構(gòu)和功能會受到顯著影響。例如，慢性應(yīng)激可引起海馬部位神經(jīng)元樹突萎縮、神經(jīng)發(fā)生抑制、甚至細胞死亡；亦會導(dǎo)致前額皮質(zhì)中錐體細胞的樹突回縮，分支減少。堿性成纖維生長因子（FibroblastGrowthFactor2，F(xiàn)GF2）及其受體成纖維細胞生長因子受體1（FibroblastGrowthFactorReceptor1，F(xiàn)GFR1）在海馬和額葉中的表達與神經(jīng)發(fā)生和認知功能緊密相關(guān)。FGF2作為一種在神經(jīng)系統(tǒng)中廣泛表達的促有絲分裂原，對神經(jīng)元發(fā)生、存活以及損傷修復(fù)具有重要促進作用，其通過與FGFR1結(jié)合，激活下游信號通路，從而調(diào)節(jié)神經(jīng)細胞的增殖、分化和存活。研究表明，慢性應(yīng)激可以通過抑制FGF2和FGFR1的表達來影響海馬和腦皮質(zhì)中的神經(jīng)發(fā)生，這種抑制作用會導(dǎo)致神經(jīng)元的死亡和記憶和學(xué)習(xí)能力的下降。然而，目前關(guān)于慢性應(yīng)激如何具體影響大鼠情緒和認知，以及FGF2、FGFR1蛋白表達在這一過程中的變化規(guī)律和作用機制，仍有待進一步深入探究。本研究旨在通過建立大鼠慢性應(yīng)激模型，運用行為學(xué)測試評估慢性應(yīng)激對大鼠情緒和認知功能的影響，并采用免疫組織化學(xué)等技術(shù)檢測海馬及額葉中FGF2、FGFR1蛋白表達的變化，深入探究慢性應(yīng)激對大鼠情緒、認知及相關(guān)蛋白表達的影響及其潛在機制，以期為相關(guān)精神疾病的發(fā)病機制研究和防治提供理論依據(jù)和實驗基礎(chǔ)。1.2研究意義本研究具有重要的理論意義和實踐意義，為深入理解慢性應(yīng)激對大腦功能的影響以及相關(guān)精神疾病的防治提供了新的視角和實驗依據(jù)。在理論層面，本研究有助于深化對慢性應(yīng)激影響大腦機制的認識。大腦作為人體最復(fù)雜且關(guān)鍵的器官，其功能的正常維持對于個體的生存和適應(yīng)至關(guān)重要。海馬和額葉作為大腦中與情緒、認知密切相關(guān)的重要腦區(qū)，在慢性應(yīng)激狀態(tài)下的變化備受關(guān)注。通過本研究，能夠進一步明確慢性應(yīng)激如何具體作用于海馬和額葉，影響情緒和認知功能，揭示其在分子水平上的變化機制，為大腦功能和神經(jīng)生物學(xué)的基礎(chǔ)研究提供重要依據(jù)，有助于完善和豐富相關(guān)理論體系，推動神經(jīng)科學(xué)領(lǐng)域的發(fā)展。例如，通過對FGF2、FGFR1蛋白表達變化的研究，能深入了解神經(jīng)發(fā)生和認知功能調(diào)節(jié)的分子機制，為后續(xù)研究提供理論支撐。從實踐角度來看，本研究為相關(guān)精神疾病的防治提供了重要參考。如前文所述，全球抑郁患者數(shù)量龐大，每年因抑郁癥自殺死亡的人數(shù)眾多，而慢性應(yīng)激是抑郁癥發(fā)病的重要危險因素。本研究揭示慢性應(yīng)激對大鼠情緒和認知的影響以及相關(guān)蛋白表達的變化，有助于為抑郁癥等精神疾病的早期診斷和治療提供新的生物標(biāo)志物和潛在治療靶點。如果能夠在早期檢測到FGF2、FGFR1蛋白表達的異常變化，或許可以作為預(yù)測個體患精神疾病風(fēng)險的指標(biāo)，從而實現(xiàn)早期干預(yù)，提高治療效果。同時，針對FGF2、FGFR1蛋白所參與的信號通路研發(fā)新的治療藥物，可能為精神疾病的治療開辟新的途徑，對改善患者的生活質(zhì)量、降低疾病負擔(dān)具有重要意義。二、文獻綜述2.1慢性應(yīng)激概述2.1.1應(yīng)激和應(yīng)激源應(yīng)激是指機體在受到各種內(nèi)外環(huán)境因素刺激時所出現(xiàn)的非特異性全身反應(yīng)，這種反應(yīng)是機體對環(huán)境變化的一種適應(yīng)機制。當(dāng)個體面臨應(yīng)激時，身體會啟動一系列生理和心理的變化，以應(yīng)對外界的挑戰(zhàn)。加拿大生理學(xué)家漢斯?塞里（HansSelye）于1936年首次提出了“應(yīng)激”的概念，并將其描述為“身體對任何需求的非特異性反應(yīng)”，這一理論為后續(xù)對應(yīng)激的研究奠定了基礎(chǔ)。應(yīng)激源則是指能夠引起應(yīng)激反應(yīng)的各種刺激因素，其種類繁多，可從不同角度進行分類。從性質(zhì)上劃分，主要包括軀體性應(yīng)激源、心理性應(yīng)激源、社會性應(yīng)激源和文化性應(yīng)激源。軀體性應(yīng)激源是直接作用于人體軀體的刺激物，如高溫、寒冷、噪聲、輻射、致病微生物等。例如，長期暴露在高溫環(huán)境下，人體會出現(xiàn)體溫調(diào)節(jié)紊亂、脫水等生理反應(yīng)，進而引發(fā)應(yīng)激狀態(tài)；而細菌、病毒等微生物感染人體后，會導(dǎo)致免疫系統(tǒng)激活，也可作為軀體性應(yīng)激源使機體產(chǎn)生應(yīng)激反應(yīng)。心理性應(yīng)激源是來自人們頭腦中的緊張性信息，像心理沖突、挫折、不切實際的期望、不祥預(yù)感等。以心理沖突為例，當(dāng)個體面臨兩個或多個相互矛盾的目標(biāo)或選擇時，內(nèi)心會產(chǎn)生強烈的沖突感，這種沖突就可能成為心理性應(yīng)激源，導(dǎo)致焦慮、抑郁等負面情緒。社會性應(yīng)激源是能導(dǎo)致個人生活風(fēng)格變化，并要求人們對其做出調(diào)整或適應(yīng)的事件，如生活中的重大變故（親人離世、離婚、失業(yè)）、社會動蕩（戰(zhàn)爭、經(jīng)濟危機）、人際關(guān)系緊張等。親人離世會給個體帶來巨大的心理沖擊，使其生活發(fā)生重大改變，從而產(chǎn)生應(yīng)激反應(yīng)；戰(zhàn)爭時期，人們面臨生命安全威脅、生活環(huán)境惡化等問題，也會處于高度應(yīng)激狀態(tài)。文化性應(yīng)激源通常是因語言、習(xí)俗和習(xí)慣的改變而引起應(yīng)激，常見的如文化性遷移，當(dāng)一個人從一種文化環(huán)境進入另一種文化環(huán)境時，需要適應(yīng)新的語言、風(fēng)俗習(xí)慣、價值觀等，這一過程可能會導(dǎo)致文化休克，成為文化性應(yīng)激源。2.1.2慢性應(yīng)激及其影響慢性應(yīng)激是指機體在長期持續(xù)的應(yīng)激源作用下所產(chǎn)生的應(yīng)激狀態(tài)。與急性應(yīng)激不同，慢性應(yīng)激的刺激持續(xù)時間較長，一般在數(shù)周、數(shù)月甚至數(shù)年以上，對機體的影響更為廣泛和持久。在日常生活中，人們可能長期面臨工作壓力過大、經(jīng)濟困難、家庭關(guān)系緊張等慢性應(yīng)激源，這些因素持續(xù)作用于個體，使其處于慢性應(yīng)激狀態(tài)。慢性應(yīng)激對身體多個系統(tǒng)都會產(chǎn)生不良影響。在神經(jīng)系統(tǒng)方面，慢性應(yīng)激會導(dǎo)致神經(jīng)遞質(zhì)失衡，如血清素、多巴胺等神經(jīng)遞質(zhì)的水平改變，進而影響情緒調(diào)節(jié)和認知功能。長期處于慢性應(yīng)激狀態(tài)的個體，容易出現(xiàn)焦慮、抑郁等情緒障礙，以及記憶力減退、注意力不集中等認知問題。研究表明，慢性應(yīng)激可使大腦中的海馬體和前額葉皮質(zhì)等區(qū)域發(fā)生結(jié)構(gòu)和功能的改變，這些腦區(qū)與情緒和認知密切相關(guān)，其變化可能是導(dǎo)致情緒和認知問題的重要原因。在心血管系統(tǒng)方面，慢性應(yīng)激會激活交感-腎上腺髓質(zhì)系統(tǒng)和腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)，使血壓升高、心率加快，長期可導(dǎo)致心血管疾病的發(fā)生風(fēng)險增加。例如，長期工作壓力大的人群，患高血壓、冠心病的幾率相對較高。在免疫系統(tǒng)方面，慢性應(yīng)激會抑制免疫功能，使機體對病原體的抵抗力下降，容易感染各種疾病。研究發(fā)現(xiàn)，慢性應(yīng)激狀態(tài)下，機體的免疫細胞活性降低，免疫球蛋白水平改變，從而影響免疫防御功能。此外，慢性應(yīng)激還會對消化系統(tǒng)、內(nèi)分泌系統(tǒng)等產(chǎn)生負面影響，導(dǎo)致胃腸功能紊亂、內(nèi)分泌失調(diào)等問題。長期的慢性應(yīng)激可能引發(fā)消化性潰瘍、胃炎等消化系統(tǒng)疾病，以及甲狀腺功能異常、性激素水平改變等內(nèi)分泌系統(tǒng)疾病。2.1.3慢性應(yīng)激對情緒及認知的影響慢性應(yīng)激與情緒及認知功能之間存在著緊密的聯(lián)系，大量研究表明，慢性應(yīng)激會引發(fā)大鼠出現(xiàn)一系列負性情緒和認知問題。在情緒方面，慢性應(yīng)激可導(dǎo)致大鼠產(chǎn)生焦慮、抑郁等負性情緒。采用慢性不可預(yù)測溫和應(yīng)激（CUMS）模型對大鼠進行實驗，該模型通過給予大鼠禁食、禁水、晝夜顛倒、潮濕環(huán)境、束縛等多種不可預(yù)測的溫和應(yīng)激刺激，持續(xù)數(shù)周后，大鼠會出現(xiàn)明顯的焦慮和抑郁樣行為。在曠場實驗中，應(yīng)激組大鼠在中央?yún)^(qū)域的停留時間明顯減少，進入中央?yún)^(qū)域的次數(shù)也降低，這表明大鼠的焦慮水平升高；在強迫游泳實驗和懸尾實驗中，應(yīng)激組大鼠的不動時間顯著增加，反映出大鼠的抑郁情緒加重。這些行為學(xué)變化與人類在慢性應(yīng)激狀態(tài)下出現(xiàn)的焦慮、抑郁情緒表現(xiàn)相似，說明慢性應(yīng)激對大鼠情緒的影響具有一定的臨床相關(guān)性。在認知方面，慢性應(yīng)激會導(dǎo)致大鼠的記憶、學(xué)習(xí)能力下降，注意力不集中等問題。有研究利用Morris水迷宮實驗評估慢性應(yīng)激對大鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力的影響，結(jié)果顯示，應(yīng)激組大鼠找到隱藏平臺的潛伏期明顯延長，在目標(biāo)象限的停留時間減少，穿越原平臺位置的次數(shù)也降低，表明其空間學(xué)習(xí)記憶能力受到了損害。在新物體識別實驗中，慢性應(yīng)激處理后的大鼠對新物體的探索時間和探索次數(shù)顯著減少，說明其對新事物的認知能力下降。此外，慢性應(yīng)激還會影響大鼠的注意力，使其在執(zhí)行任務(wù)時更容易分心，無法集中精力完成任務(wù)。這些認知功能的改變可能與慢性應(yīng)激引起的大腦神經(jīng)可塑性變化、神經(jīng)遞質(zhì)失衡以及神經(jīng)炎癥等因素有關(guān)。2.1.4慢性應(yīng)激對海馬及額葉的影響海馬和額葉是大腦中對慢性應(yīng)激較為敏感的區(qū)域，慢性應(yīng)激會導(dǎo)致這兩個腦區(qū)發(fā)生一系列結(jié)構(gòu)和功能的變化。海馬在學(xué)習(xí)、記憶和情緒調(diào)節(jié)中起著關(guān)鍵作用。慢性應(yīng)激可導(dǎo)致海馬神經(jīng)元樹突萎縮、神經(jīng)發(fā)生抑制、細胞死亡等。研究發(fā)現(xiàn)，長期處于慢性應(yīng)激狀態(tài)下的大鼠，海馬CA1、CA3和齒狀回區(qū)域的神經(jīng)元樹突分支減少、長度縮短，這會影響神經(jīng)元之間的信息傳遞和突觸可塑性，進而損害學(xué)習(xí)和記憶功能。慢性應(yīng)激還會抑制海馬神經(jīng)干細胞的增殖和分化，減少新生神經(jīng)元的數(shù)量，破壞海馬的神經(jīng)發(fā)生過程。高水平的糖皮質(zhì)激素在慢性應(yīng)激過程中起到重要作用，其過度分泌會損傷海馬神經(jīng)元，導(dǎo)致細胞凋亡增加。這些變化可能是慢性應(yīng)激引起認知功能障礙和情緒異常的重要神經(jīng)生物學(xué)基礎(chǔ)。額葉在注意力、決策、執(zhí)行功能以及情緒調(diào)節(jié)等方面發(fā)揮著重要作用。慢性應(yīng)激會導(dǎo)致額葉錐體細胞樹突回縮、分支減少。相關(guān)研究表明，慢性應(yīng)激處理后的大鼠，額葉皮質(zhì)中的錐體細胞樹突長度縮短，分支復(fù)雜度降低，這會影響額葉神經(jīng)元的功能連接和信息處理能力。額葉功能受損會導(dǎo)致大鼠出現(xiàn)注意力不集中、決策能力下降、執(zhí)行功能障礙等問題。慢性應(yīng)激還會影響額葉與其他腦區(qū)（如海馬、杏仁核）之間的神經(jīng)環(huán)路連接，破壞大腦網(wǎng)絡(luò)的正常功能，進一步加重情緒和認知方面的異常。2.2海馬和額葉2.2.1海馬與情緒調(diào)節(jié)海馬在情緒調(diào)節(jié)中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用，其作用機制涉及多個方面。從神經(jīng)環(huán)路角度來看，海馬與杏仁核、前額葉皮質(zhì)等腦區(qū)存在廣泛而復(fù)雜的神經(jīng)連接，共同構(gòu)成了情緒調(diào)節(jié)的神經(jīng)環(huán)路。杏仁核主要負責(zé)情緒的感知和快速反應(yīng)，而海馬則通過與杏仁核的交互作用，對情緒反應(yīng)進行調(diào)節(jié)和整合。研究表明，海馬可以抑制杏仁核的過度興奮，從而調(diào)節(jié)情緒的強度。當(dāng)個體面臨應(yīng)激事件時，海馬接收來自感覺皮層的信息，并將這些信息與以往的經(jīng)驗進行整合，然后通過投射到杏仁核的神經(jīng)纖維，調(diào)節(jié)杏仁核的活動，進而影響情緒反應(yīng)。從神經(jīng)遞質(zhì)角度分析，海馬中的神經(jīng)遞質(zhì)系統(tǒng)也參與了情緒調(diào)節(jié)過程。血清素作為一種重要的神經(jīng)遞質(zhì)，在海馬中廣泛分布，其水平的變化與情緒狀態(tài)密切相關(guān)。慢性應(yīng)激會導(dǎo)致海馬中血清素水平降低，進而引發(fā)焦慮、抑郁等情緒問題。血清素可以通過作用于海馬中的血清素受體，調(diào)節(jié)神經(jīng)元的興奮性和可塑性，從而影響情緒調(diào)節(jié)。多巴胺也是海馬中參與情緒調(diào)節(jié)的重要神經(jīng)遞質(zhì)，它在動機、獎賞和情緒體驗中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。海馬中的多巴胺能神經(jīng)元可以調(diào)節(jié)其他神經(jīng)元的活動，影響情緒相關(guān)的行為。例如，當(dāng)多巴胺水平降低時，大鼠會表現(xiàn)出抑郁樣行為。相關(guān)實驗研究也為海馬在情緒調(diào)節(jié)中的作用提供了有力證據(jù)。通過對大鼠進行海馬損傷實驗，發(fā)現(xiàn)海馬受損后，大鼠在面對應(yīng)激刺激時，焦慮和抑郁樣行為明顯增加。在曠場實驗中，海馬損傷組大鼠在中央?yún)^(qū)域的停留時間顯著減少，進入中央?yún)^(qū)域的次數(shù)也降低，這表明其焦慮水平升高；在強迫游泳實驗和懸尾實驗中，海馬損傷組大鼠的不動時間明顯延長，反映出其抑郁情緒加重。而給予大鼠海馬內(nèi)注射神經(jīng)遞質(zhì)調(diào)節(jié)劑，如血清素再攝取抑制劑或多巴胺激動劑，可以改善其因慢性應(yīng)激導(dǎo)致的情緒異常行為。這些實驗結(jié)果充分證明了海馬在情緒調(diào)節(jié)中的重要作用。2.2.2海馬與認知功能海馬在學(xué)習(xí)、記憶等認知功能中扮演著關(guān)鍵角色，其參與信息處理的過程復(fù)雜而精細。在學(xué)習(xí)過程中，海馬主要負責(zé)對新信息的編碼和初步存儲。當(dāng)個體學(xué)習(xí)新知識或新技能時，海馬中的神經(jīng)元會被激活，形成新的突觸連接，從而將新信息編碼成神經(jīng)信號并暫時存儲起來。例如，在大鼠的Morris水迷宮實驗中，當(dāng)大鼠首次接觸水迷宮環(huán)境時，海馬中的神經(jīng)元會對環(huán)境中的空間信息進行編碼，記錄下平臺的位置和周圍的標(biāo)志物信息。在記憶鞏固階段，海馬起著不可或缺的作用。海馬通過與大腦其他區(qū)域（如前額葉皮質(zhì)、顳葉皮質(zhì)等）的協(xié)同作用，將短期記憶轉(zhuǎn)化為長期記憶。這一過程涉及到基因表達的改變、蛋白質(zhì)合成以及突觸可塑性的調(diào)整。研究表明，在記憶鞏固過程中，海馬中的長時程增強（LTP）現(xiàn)象十分關(guān)鍵。LTP是指在神經(jīng)元之間傳遞信息時，通過重復(fù)刺激使突觸傳遞效能增強的現(xiàn)象，它被認為是學(xué)習(xí)和記憶的重要神經(jīng)生物學(xué)基礎(chǔ)。當(dāng)大鼠在水迷宮中反復(fù)訓(xùn)練找到平臺后，海馬中的LTP會增強，使得神經(jīng)元之間的信息傳遞更加高效，從而促進記憶的鞏固。在記憶提取階段，海馬同樣發(fā)揮著重要作用。當(dāng)個體需要回憶已存儲的信息時，海馬會重新激活與該信息相關(guān)的神經(jīng)回路，將記憶信息提取出來。如果海馬受損，記憶提取過程就會受到嚴(yán)重影響。例如，臨床上的一些海馬損傷患者，會出現(xiàn)嚴(yán)重的記憶障礙，尤其是對近期記憶的提取困難，表現(xiàn)為無法回憶起剛剛發(fā)生的事情，但對遠期記憶的影響相對較小。這進一步說明了海馬在記憶提取過程中的關(guān)鍵作用。此外，海馬還參與了空間記憶和情景記憶等特定類型的記憶功能。在空間記憶方面，海馬中的位置細胞對空間位置信息進行編碼，幫助個體識別和記憶自身所處的空間位置；在情景記憶中，海馬將事件發(fā)生的時間、地點、人物等信息整合在一起，形成完整的情景記憶。2.2.3額葉與情緒調(diào)節(jié)額葉對情緒調(diào)控具有重要影響，其通過與其他腦區(qū)的協(xié)同作用，實現(xiàn)對情緒的認知、表達和調(diào)節(jié)。額葉中的前額葉皮質(zhì)是情緒調(diào)節(jié)的關(guān)鍵區(qū)域，它在情緒認知和情緒表達的調(diào)節(jié)中發(fā)揮著核心作用。從神經(jīng)解剖學(xué)角度來看，前額葉皮質(zhì)與杏仁核、海馬、扣帶回等腦區(qū)存在廣泛的纖維連接，這些連接構(gòu)成了復(fù)雜的情緒調(diào)節(jié)神經(jīng)環(huán)路。杏仁核負責(zé)快速感知和響應(yīng)情緒刺激，而前額葉皮質(zhì)則可以通過下行纖維對杏仁核的活動進行調(diào)節(jié)，抑制過度的情緒反應(yīng)。在情緒認知方面，前額葉皮質(zhì)參與了對情緒信息的評估和理解。當(dāng)個體接收到情緒刺激時，前額葉皮質(zhì)會對刺激的性質(zhì)、強度和意義進行分析和判斷。研究表明，前額葉皮質(zhì)中的腹內(nèi)側(cè)前額葉（vmPFC）和背外側(cè)前額葉（dlPFC）在情緒認知中具有不同的功能。vmPFC主要參與對情緒的主觀體驗和情感價值的評估，它可以整合來自杏仁核、海馬等腦區(qū)的信息，形成對情緒的整體認知；dlPFC則更多地參與對情緒刺激的注意和工作記憶，幫助個體集中注意力處理情緒相關(guān)信息。在情緒表達調(diào)節(jié)方面，前額葉皮質(zhì)可以抑制或增強情緒表達。當(dāng)個體需要控制情緒表達時，前額葉皮質(zhì)會發(fā)出信號抑制杏仁核的活動，從而減少情緒的外顯表達。例如，在社交場合中，當(dāng)個體遇到不愉快的事情時，前額葉皮質(zhì)會抑制杏仁核引發(fā)的憤怒情緒表達，使個體保持冷靜和理智。相反，在某些情況下，前額葉皮質(zhì)也可以增強情緒表達，以適應(yīng)不同的社交情境。額葉損傷與情緒障礙之間存在密切關(guān)聯(lián)。臨床研究發(fā)現(xiàn)，額葉損傷的患者常常出現(xiàn)情緒調(diào)節(jié)障礙，表現(xiàn)為情緒不穩(wěn)定、易激惹、抑郁或焦慮等癥狀。例如，前額葉皮質(zhì)受損的患者可能會出現(xiàn)情緒失控的情況，對微小的刺激也會產(chǎn)生過度的情緒反應(yīng)；而眶額葉皮質(zhì)損傷的患者則可能出現(xiàn)情緒淡漠、缺乏情感體驗等問題。這些臨床現(xiàn)象表明，額葉在情緒調(diào)節(jié)中起著至關(guān)重要的作用，其損傷會導(dǎo)致情緒調(diào)節(jié)功能的紊亂，進而引發(fā)各種情緒障礙。2.2.4額葉與認知功能額葉在高級認知功能中發(fā)揮著核心作用，涵蓋決策、注意力、執(zhí)行功能等多個重要方面。在決策過程中，額葉尤其是前額葉皮質(zhì)參與了對各種信息的分析、評估和權(quán)衡，從而做出合理的決策。前額葉皮質(zhì)中的不同區(qū)域在決策中具有不同的功能。腹內(nèi)側(cè)前額葉與價值評估和情感決策密切相關(guān)，它可以根據(jù)個體的目標(biāo)和偏好，對不同選項的價值進行評估。當(dāng)個體面臨購買商品的決策時，腹內(nèi)側(cè)前額葉會綜合考慮商品的價格、質(zhì)量、個人喜好等因素，對每個選項的價值進行評估，從而選擇最符合自己需求的商品。背外側(cè)前額葉則主要參與認知決策和工作記憶，它可以在復(fù)雜的決策情境中，保持對相關(guān)信息的關(guān)注和處理，抑制無關(guān)信息的干擾，幫助個體做出理性的決策。在多選項決策任務(wù)中，背外側(cè)前額葉會對每個選項的利弊進行分析和比較，同時利用工作記憶中的信息，做出最優(yōu)決策。在注意力方面，額葉對注意力的調(diào)控起著關(guān)鍵作用。前額葉皮質(zhì)可以通過與其他腦區(qū)（如頂葉、丘腦等）的協(xié)同作用，實現(xiàn)對注意力的集中、分配和轉(zhuǎn)移。前額葉皮質(zhì)可以根據(jù)任務(wù)需求，選擇性地關(guān)注相關(guān)信息，抑制無關(guān)信息的干擾。在閱讀任務(wù)中，前額葉皮質(zhì)會使個體集中注意力在文字內(nèi)容上，忽略周圍環(huán)境中的噪音和其他干擾因素。前額葉皮質(zhì)還可以根據(jù)任務(wù)的變化，靈活地調(diào)整注意力的分配和轉(zhuǎn)移。當(dāng)個體從閱讀任務(wù)切換到數(shù)學(xué)計算任務(wù)時，前額葉皮質(zhì)會迅速將注意力從文字信息轉(zhuǎn)移到數(shù)字信息上，保證任務(wù)的順利完成。在執(zhí)行功能方面，額葉負責(zé)計劃、組織、協(xié)調(diào)和控制行為，以實現(xiàn)目標(biāo)。執(zhí)行功能包括任務(wù)切換、抑制控制、工作記憶更新等多個子功能。在完成一項復(fù)雜的任務(wù)時，額葉會制定詳細的計劃，組織各個步驟的執(zhí)行順序，并協(xié)調(diào)不同腦區(qū)和身體部位的活動，確保任務(wù)的高效完成。額葉還能夠抑制不適當(dāng)?shù)男袨榉磻?yīng)，保持行為的靈活性和適應(yīng)性。在抑制控制實驗中，當(dāng)個體需要抑制已形成的習(xí)慣反應(yīng)，做出與習(xí)慣相反的行為時，額葉會發(fā)揮重要作用，抑制習(xí)慣性反應(yīng)，選擇正確的行為。額葉在高級認知功能中的這些作用相互關(guān)聯(lián)、相互影響，共同保證了個體能夠有效地適應(yīng)復(fù)雜多變的環(huán)境，完成各種認知任務(wù)。2.3FGF系統(tǒng)2.3.1FGF家族成員成纖維細胞生長因子（FibroblastGrowthFactor，F(xiàn)GF）家族是一類具有廣泛生物學(xué)活性的多肽生長因子，目前已發(fā)現(xiàn)至少23種成員，即FGF1-FGF23。這些成員在結(jié)構(gòu)上具有一定的相似性，都包含一個大約120個氨基酸組成的核心區(qū)域，該區(qū)域在不同的FGF成員中具有較高的保守性，對于FGF與受體的結(jié)合以及激活下游信號通路起著關(guān)鍵作用。盡管FGF家族成員在核心區(qū)域有相似性，但它們在氨基酸序列的其他部分以及蛋白質(zhì)的整體結(jié)構(gòu)和功能上存在差異，這使得它們能夠發(fā)揮不同的生物學(xué)功能。FGF家族成員在體內(nèi)的分布具有組織特異性。FGF2在神經(jīng)系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)、骨骼肌等多種組織中廣泛表達，尤其在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中，F(xiàn)GF2在海馬、額葉、紋狀體等腦區(qū)均有較高水平的表達，對神經(jīng)細胞的生長、分化和存活起著重要作用。FGF7主要在皮膚、胃腸道等上皮組織中表達，它能夠促進上皮細胞的增殖和分化，對維持上皮組織的正常結(jié)構(gòu)和功能具有重要意義。FGF10在肺、乳腺、胰腺等器官的發(fā)育過程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用，其表達模式與這些器官的發(fā)育進程密切相關(guān)。FGF家族成員在不同組織和發(fā)育階段的特異性分布，決定了它們在機體生長、發(fā)育、修復(fù)和維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定等方面發(fā)揮著各自獨特的作用。2.3.2FGF系統(tǒng)與神經(jīng)發(fā)生和分化FGF系統(tǒng)在神經(jīng)發(fā)生和分化過程中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。FGF2作為FGF家族中的重要成員，對神經(jīng)干細胞（NSCs）的增殖和分化具有顯著的促進作用。在體外實驗中，添加FGF2能夠顯著增加NSCs的數(shù)量，促進其向神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)細胞分化。研究表明，F(xiàn)GF2通過與NSCs表面的FGFR1結(jié)合，激活Ras-Raf-MEK-ERK和PI3K-Akt等信號通路，從而促進NSCs的增殖。這些信號通路能夠調(diào)節(jié)細胞周期相關(guān)蛋白的表達，使NSCs從靜止期進入分裂期，增加細胞的增殖能力。FGF2還能夠上調(diào)神經(jīng)分化相關(guān)基因的表達，如NeuroD、Ngn1等，促進NSCs向神經(jīng)元分化。在體內(nèi)實驗中，F(xiàn)GF2對神經(jīng)發(fā)生和分化的促進作用也得到了充分證實。通過在成年小鼠腦室內(nèi)注射FGF2，能夠增加海馬齒狀回區(qū)域新生神經(jīng)元的數(shù)量，改善小鼠的學(xué)習(xí)和記憶能力。這表明FGF2在促進神經(jīng)發(fā)生的同時，也能夠提高神經(jīng)系統(tǒng)的功能。FGF2還參與了損傷后的神經(jīng)修復(fù)過程。當(dāng)大腦受到損傷時，F(xiàn)GF2的表達會顯著上調(diào)，促進損傷部位周圍的NSCs增殖和分化，形成新的神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)細胞，從而修復(fù)受損的神經(jīng)組織。例如，在腦缺血模型中，給予外源性FGF2能夠促進缺血區(qū)周邊的神經(jīng)發(fā)生，減少神經(jīng)功能缺損癥狀。這些研究結(jié)果充分表明，F(xiàn)GF系統(tǒng)在神經(jīng)發(fā)生和分化過程中具有重要作用，為神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育和修復(fù)提供了關(guān)鍵的調(diào)控機制。2.3.3FGF系統(tǒng)與突觸生長和連結(jié)FGF系統(tǒng)對突觸的形成、生長和可塑性具有重要影響，在神經(jīng)元之間的信息傳遞和神經(jīng)環(huán)路的構(gòu)建中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。FGF2能夠促進突觸的形成和生長。在體外培養(yǎng)的神經(jīng)元中，添加FGF2可以增加突觸前膜和突觸后膜的標(biāo)記物表達，如突觸素（Synapsin）和PSD-95，表明FGF2能夠促進突觸的形成。FGF2還能夠增加突觸的長度和分支復(fù)雜度，提高突觸的功能。研究發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)GF2通過激活下游的MAPK信號通路，調(diào)節(jié)細胞骨架相關(guān)蛋白的表達和磷酸化水平，從而影響突觸的生長和形態(tài)。FGF2可以促進微管相關(guān)蛋白（MAPs）的磷酸化，增強微管的穩(wěn)定性，為突觸的生長提供結(jié)構(gòu)支持。FGF系統(tǒng)還參與了突觸可塑性的調(diào)節(jié)。突觸可塑性是指突觸傳遞效能隨神經(jīng)元活動而發(fā)生改變的特性，是學(xué)習(xí)和記憶的神經(jīng)生物學(xué)基礎(chǔ)。FGF2能夠增強長時程增強（LTP）和長時程抑制（LTD）等突觸可塑性現(xiàn)象。在海馬腦片實驗中，給予FGF2可以增強LTP的誘導(dǎo)和維持，提高神經(jīng)元之間的信息傳遞效率。FGF2對突觸可塑性的調(diào)節(jié)作用可能與它對神經(jīng)遞質(zhì)釋放和受體功能的影響有關(guān)。FGF2可以促進谷氨酸等興奮性神經(jīng)遞質(zhì)的釋放，增加突觸后膜上NMDA受體的表達和功能，從而增強突觸可塑性。這些研究結(jié)果表明，F(xiàn)GF系統(tǒng)在突觸生長和連結(jié)過程中發(fā)揮著重要作用，對神經(jīng)系統(tǒng)的正常功能和學(xué)習(xí)記憶能力的維持具有重要意義。2.3.4FGF系統(tǒng)與情緒障礙FGF系統(tǒng)與情緒障礙之間存在著密切的關(guān)聯(lián)，在情緒調(diào)節(jié)中具有潛在的重要作用。研究表明，F(xiàn)GF2在抑郁癥患者的大腦中表達水平顯著降低。通過對抑郁癥患者的腦樣本分析發(fā)現(xiàn)，海馬和額葉等腦區(qū)的FGF2蛋白和mRNA水平均明顯低于正常對照組。動物實驗也證實了這一點，在慢性不可預(yù)測溫和應(yīng)激（CUMS）誘導(dǎo)的大鼠抑郁模型中，大鼠海馬和額葉中的FGF2表達顯著下降。給予外源性FGF2或采取措施上調(diào)內(nèi)源性FGF2的表達，可以改善大鼠的抑郁樣行為。在CUMS模型大鼠中，腦室內(nèi)注射FGF2后，大鼠在強迫游泳實驗和懸尾實驗中的不動時間明顯減少，在糖水偏好實驗中的糖水偏好率增加，表明其抑郁癥狀得到了緩解。FGF系統(tǒng)影響情緒的機制可能與神經(jīng)發(fā)生、神經(jīng)可塑性以及神經(jīng)遞質(zhì)系統(tǒng)的調(diào)節(jié)有關(guān)。如前文所述，F(xiàn)GF2能夠促進神經(jīng)發(fā)生，增加海馬齒狀回區(qū)域新生神經(jīng)元的數(shù)量。而海馬神經(jīng)發(fā)生的減少與抑郁癥的發(fā)生密切相關(guān)，因此FGF2通過促進神經(jīng)發(fā)生，可能有助于改善抑郁情緒。FGF2對突觸可塑性的調(diào)節(jié)作用也可能參與了情緒調(diào)節(jié)過程。正常的突觸可塑性對于情緒的穩(wěn)定和調(diào)節(jié)至關(guān)重要，F(xiàn)GF2增強突觸可塑性，有助于維持大腦神經(jīng)環(huán)路的正常功能，從而調(diào)節(jié)情緒。FGF2還可能通過調(diào)節(jié)神經(jīng)遞質(zhì)系統(tǒng)來影響情緒。研究發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)GF2可以調(diào)節(jié)血清素、多巴胺等神經(jīng)遞質(zhì)的水平和代謝，而這些神經(jīng)遞質(zhì)與情緒調(diào)節(jié)密切相關(guān)。血清素水平的降低與抑郁情緒密切相關(guān)，F(xiàn)GF2可能通過調(diào)節(jié)血清素的合成、釋放和再攝取，來改善抑郁癥狀。這些研究結(jié)果表明，F(xiàn)GF系統(tǒng)在情緒障礙的發(fā)生和治療中具有重要作用，為情緒障礙的發(fā)病機制研究和治療提供了新的靶點和思路。2.3.5FGF系統(tǒng)與認知功能FGF系統(tǒng)在認知功能中扮演著重要角色，對學(xué)習(xí)、記憶等認知過程具有關(guān)鍵的調(diào)節(jié)作用。動物實驗表明，F(xiàn)GF2對認知功能具有促進作用。在Morris水迷宮實驗中，給予外源性FGF2可以顯著縮短小鼠找到隱藏平臺的潛伏期，增加其在目標(biāo)象限的停留時間，提高空間學(xué)習(xí)記憶能力。在新物體識別實驗中，F(xiàn)GF2處理組小鼠對新物體的探索時間和探索次數(shù)明顯增加，表明其對新事物的認知能力得到了提高。FGF2對認知功能的促進作用可能與它對神經(jīng)發(fā)生、突觸可塑性以及神經(jīng)遞質(zhì)系統(tǒng)的調(diào)節(jié)有關(guān)。FGF2促進神經(jīng)發(fā)生，增加新生神經(jīng)元的數(shù)量，這些新生神經(jīng)元參與了學(xué)習(xí)和記憶相關(guān)的神經(jīng)環(huán)路，有助于提高認知功能。FGF2增強突觸可塑性，使神經(jīng)元之間的信息傳遞更加高效，也有利于學(xué)習(xí)和記憶的形成。FGF2調(diào)節(jié)神經(jīng)遞質(zhì)系統(tǒng)，維持神經(jīng)遞質(zhì)的平衡，為認知功能的正常發(fā)揮提供了良好的神經(jīng)化學(xué)環(huán)境。臨床研究也發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)GF系統(tǒng)與認知功能障礙存在關(guān)聯(lián)。在阿爾茨海默病（AD）患者的大腦中，F(xiàn)GF2和FGFR1的表達水平顯著降低，且與認知功能的下降程度呈正相關(guān)。AD患者大腦中FGF2和FGFR1表達的減少，可能導(dǎo)致神經(jīng)發(fā)生抑制、突觸可塑性受損以及神經(jīng)遞質(zhì)失衡，從而引發(fā)認知功能障礙。一些研究還嘗試通過調(diào)節(jié)FGF系統(tǒng)來改善AD患者的認知功能。給予AD模型動物外源性FGF2或激活FGF信號通路，能夠在一定程度上改善其認知功能，延緩疾病的進展。這些研究結(jié)果表明，F(xiàn)GF系統(tǒng)在認知功能中具有重要作用，其異?？赡芘c認知功能障礙的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，為認知功能障礙的治療提供了潛在的靶點和干預(yù)策略。三、研究設(shè)計3.1研究假設(shè)本研究提出以下假設(shè)：慢性應(yīng)激會導(dǎo)致大鼠出現(xiàn)負性情緒和認知功能障礙，表現(xiàn)為焦慮、抑郁樣行為增加，學(xué)習(xí)和記憶能力下降；同時，慢性應(yīng)激會抑制大鼠海馬及額葉中FGF2、FGFR1蛋白的表達，且這種抑制作用可能與慢性應(yīng)激引起的情緒和認知變化存在關(guān)聯(lián)。具體來說，應(yīng)激組大鼠在曠場實驗中，中央?yún)^(qū)域停留時間和進入次數(shù)會少于對照組，反映出其焦慮水平升高；在強迫游泳實驗和懸尾實驗中，不動時間會顯著多于對照組，體現(xiàn)出抑郁情緒加重；在Morris水迷宮實驗里，找到隱藏平臺的潛伏期會延長，在目標(biāo)象限的停留時間會減少，穿越原平臺位置的次數(shù)也會降低，表明學(xué)習(xí)記憶能力受損。而在海馬及額葉組織中，應(yīng)激組大鼠的FGF2、FGFR1蛋白表達水平相較于對照組會明顯降低。3.2研究內(nèi)容與創(chuàng)新3.2.1研究內(nèi)容本研究主要從行為學(xué)和蛋白表達層面探究慢性應(yīng)激對大鼠情緒和認知以及海馬、額葉中FGF2、FGFR1蛋白表達的影響。在行為學(xué)測試方面，首先進行曠場實驗以評估大鼠的焦慮水平。將大鼠置于曠場裝置中，該裝置通常為一個開闊的方形場地，周圍設(shè)有邊界。實驗過程中，通過視頻跟蹤系統(tǒng)記錄大鼠在一定時間內(nèi)的活動軌跡，重點關(guān)注大鼠在中央?yún)^(qū)域的停留時間以及進入中央?yún)^(qū)域的次數(shù)。正常大鼠對空曠且無遮蔽的中央?yún)^(qū)域存在天然的恐懼，但在好奇心驅(qū)使下也會進行一定探索；而處于慢性應(yīng)激狀態(tài)下的大鼠，由于焦慮水平升高，其在中央?yún)^(qū)域的停留時間會顯著減少，進入中央?yún)^(qū)域的次數(shù)也會降低。通過對比應(yīng)激組和對照組大鼠在這些指標(biāo)上的差異，能夠明確慢性應(yīng)激對大鼠焦慮情緒的影響。接著開展強迫游泳實驗和懸尾實驗來檢測大鼠的抑郁樣行為。在強迫游泳實驗中，把大鼠放入一定高度和直徑的透明玻璃缸中，缸內(nèi)盛有一定深度的溫水，大鼠在水中無法逃脫，只能不斷掙扎游動。記錄大鼠在規(guī)定時間內(nèi)的不動時間，不動時間越長，表明大鼠的抑郁情緒越嚴(yán)重。懸尾實驗則是將大鼠的尾部固定懸掛，使其身體處于懸空狀態(tài)，同樣記錄大鼠在一段時間內(nèi)的不動時間來評估其抑郁程度。這兩個實驗基于大鼠在無法逃避的不利情境下，會出現(xiàn)類似于人類抑郁狀態(tài)下的絕望行為，從而為研究慢性應(yīng)激對大鼠抑郁情緒的影響提供量化指標(biāo)。采用Morris水迷宮實驗評估大鼠的學(xué)習(xí)和記憶能力。Morris水迷宮主要由一個圓形水池、平臺和視頻跟蹤系統(tǒng)組成。水池被分為四個象限，平臺隱藏在其中一個象限的水面下。實驗分為定位航行實驗和空間探索實驗兩個階段。在定位航行實驗中，連續(xù)數(shù)天每天將大鼠從不同位置放入水池，記錄其找到隱藏平臺的潛伏期，即從入水到找到平臺所用的時間。隨著訓(xùn)練天數(shù)增加，正常大鼠能夠逐漸記住平臺位置，潛伏期會逐漸縮短；而慢性應(yīng)激大鼠由于學(xué)習(xí)和記憶能力受損，其潛伏期會顯著延長。在空間探索實驗中，撤去平臺，將大鼠從原平臺象限的對側(cè)象限放入水池，記錄大鼠在原平臺所在象限的停留時間以及穿越原平臺位置的次數(shù)。慢性應(yīng)激大鼠在該實驗中，在原平臺象限的停留時間會減少，穿越原平臺位置的次數(shù)也會降低，反映出其空間記憶能力的下降。在蛋白表達檢測方面，實驗結(jié)束后，采用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測大鼠海馬及額葉中FGF2、FGFR1蛋白的表達。首先對大鼠進行心臟灌流，使用生理鹽水沖洗血液，然后用多聚甲醛固定腦組織。取出腦組織后，進行脫水、包埋、切片等處理，將腦切片進行脫蠟、水化處理，以暴露抗原。接著加入特異性的一抗，一抗能夠與FGF2、FGFR1蛋白特異性結(jié)合。再加入與一抗對應(yīng)的二抗，二抗通常標(biāo)記有熒光素或酶等顯色物質(zhì)。如果使用熒光素標(biāo)記的二抗，在熒光顯微鏡下觀察，F(xiàn)GF2、FGFR1蛋白表達部位會發(fā)出特定顏色的熒光；若使用酶標(biāo)記的二抗，則加入相應(yīng)的底物，通過酶與底物的化學(xué)反應(yīng)使蛋白表達部位顯色。最后，利用圖像分析軟件對熒光強度或顯色強度進行量化分析，比較應(yīng)激組和對照組大鼠海馬及額葉中FGF2、FGFR1蛋白表達水平的差異。3.2.2創(chuàng)新之處在研究方法上，本研究采用多維度的檢測手段，綜合運用行為學(xué)測試和免疫組織化學(xué)技術(shù)。行為學(xué)測試從焦慮、抑郁、學(xué)習(xí)記憶等多個角度評估慢性應(yīng)激對大鼠情緒和認知功能的影響，使研究結(jié)果更全面、準(zhǔn)確地反映慢性應(yīng)激的作用。曠場實驗、強迫游泳實驗、懸尾實驗和Morris水迷宮實驗分別從不同方面對大鼠的行為進行量化分析，避免了單一實驗的局限性。免疫組織化學(xué)技術(shù)則從分子層面揭示慢性應(yīng)激對海馬及額葉中FGF2、FGFR1蛋白表達的影響，為深入探究其作用機制提供了關(guān)鍵數(shù)據(jù)。這種多維度的檢測方法能夠更系統(tǒng)地研究慢性應(yīng)激對大鼠的影響，為相關(guān)領(lǐng)域的研究提供了新的思路和方法。在實驗設(shè)計方面，設(shè)置了多組對照。除了常規(guī)的應(yīng)激組和對照組外，還設(shè)置了應(yīng)激+交往組和應(yīng)激+單獨飼養(yǎng)組。應(yīng)激+交往組通過讓大鼠在應(yīng)激過程中彼此交流互動，以探究社交因素對慢性應(yīng)激影響的調(diào)節(jié)作用；應(yīng)激+單獨飼養(yǎng)組則通過單獨飼養(yǎng)大鼠，消除大鼠之間的交互作用及壓力刺激，進一步明確慢性應(yīng)激本身對大鼠情緒和認知的影響。多組對照的設(shè)置能夠更全面地分析慢性應(yīng)激的作用機制，為研究結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性提供有力保障。在研究視角上，首次深入探討慢性應(yīng)激對大鼠情緒和認知的影響與海馬及額葉中FGF2、FGFR1蛋白表達之間的關(guān)聯(lián)。以往研究大多分別關(guān)注慢性應(yīng)激對情緒、認知的影響，或者FGF2、FGFR1蛋白表達與神經(jīng)功能的關(guān)系，本研究將兩者結(jié)合起來，為揭示慢性應(yīng)激影響大腦功能的機制提供了新的視角。通過研究慢性應(yīng)激狀態(tài)下FGF2、FGFR1蛋白表達的變化如何介導(dǎo)情緒和認知功能的改變，有望為相關(guān)精神疾病的防治提供新的靶點和理論依據(jù)。三、研究設(shè)計3.3研究方法3.3.1實驗動物及分組本實驗選用健康的成年SD大鼠30只，雌雄各15只，體重在220-250g之間。將大鼠隨機分為三組，分別為對照組、應(yīng)激組和應(yīng)激+交往組，每組10只。在實驗開始前，將大鼠置于溫度為22±2℃、相對濕度為50%-60%、12h光照/12h黑暗的環(huán)境中適應(yīng)性飼養(yǎng)一周，自由進食和飲水，以確保大鼠適應(yīng)實驗環(huán)境，減少環(huán)境因素對實驗結(jié)果的干擾。3.3.2慢性應(yīng)激模型構(gòu)建運用Sedlak和Kelly在1992年提出的實驗方法構(gòu)建慢性應(yīng)激模型。在每天早上九點和下午兩點，對大鼠進行不同的應(yīng)激刺激。具體操作如下：將大鼠無規(guī)律地進行隔離或者放置在過度滿員的箱子里，然后將其直接暴露在不同的溫度環(huán)境中，如40℃的高溫或4℃的低溫；還會讓大鼠處于異味環(huán)境，如在飼養(yǎng)箱中加入刺激性氣味的物質(zhì)；對大鼠施加音響刺激，播放高分貝的噪音；改變光照強度，如突然增強或減弱光照；讓大鼠聞畏懼氣味，如貓的氣味等。在應(yīng)激組中，大鼠每天會受到不同的應(yīng)激刺激，而對照組大鼠則正常飼養(yǎng)，不接受這些應(yīng)激刺激。在應(yīng)激+交往組中，除了提供正常的食盤和水盆外，每只大鼠都會放置在一個共同的籠子里，使其彼此交流互動，從而觀察社交因素對慢性應(yīng)激影響的調(diào)節(jié)作用。3.3.3情緒和認知行為評估方法利用高架十字迷宮（ElevatedPlusMaze，EPM）和曠場實驗（OpenField，OF）實行行為學(xué)分析來評估治療后大鼠情緒的變化。高架十字迷宮實驗中，該迷宮由兩個開放臂和兩個封閉臂組成，呈十字形排列，距離地面一定高度。實驗時將大鼠放置在迷宮中央，面向開放臂，記錄5min內(nèi)大鼠進入開放臂和封閉臂的次數(shù)以及在開放臂和封閉臂的停留時間。大鼠天生具有對開放、明亮空間的恐懼和對新環(huán)境的探索欲望，當(dāng)處于焦慮狀態(tài)時，進入開放臂的次數(shù)和停留時間會減少。曠場實驗的裝置為一個開闊的方形場地，周圍設(shè)有邊界。將大鼠置于曠場中央，通過視頻跟蹤系統(tǒng)記錄10min內(nèi)大鼠的活動軌跡，重點關(guān)注大鼠在中央?yún)^(qū)域的停留時間以及進入中央?yún)^(qū)域的次數(shù)。正常大鼠對空曠且無遮蔽的中央?yún)^(qū)域存在天然的恐懼，但在好奇心驅(qū)使下也會進行一定探索；而處于慢性應(yīng)激狀態(tài)下的大鼠，由于焦慮水平升高，其在中央?yún)^(qū)域的停留時間會顯著減少，進入中央?yún)^(qū)域的次數(shù)也會降低。通過這些特征參數(shù)，能夠準(zhǔn)確評估大鼠的情緒狀態(tài)。同時，采取Morris水迷宮實驗（MorrisWaterMazeTest，MWM）來評估慢性應(yīng)激對大鼠記憶和認知功能的影響。Morris水迷宮主要由一個圓形水池、平臺和視頻跟蹤系統(tǒng)組成。水池被分為四個象限，平臺隱藏在其中一個象限的水面下。實驗分為定位航行實驗和空間探索實驗兩個階段。在定位航行實驗中，連續(xù)5天每天將大鼠從不同位置放入水池，記錄其找到隱藏平臺的潛伏期，即從入水到找到平臺所用的時間。隨著訓(xùn)練天數(shù)增加，正常大鼠能夠逐漸記住平臺位置，潛伏期會逐漸縮短；而慢性應(yīng)激大鼠由于學(xué)習(xí)和記憶能力受損，其潛伏期會顯著延長。在空間探索實驗中，撤去平臺，將大鼠從原平臺象限的對側(cè)象限放入水池，記錄大鼠在原平臺所在象限的停留時間以及穿越原平臺位置的次數(shù)。慢性應(yīng)激大鼠在該實驗中，在原平臺象限的停留時間會減少，穿越原平臺位置的次數(shù)也會降低，反映出其空間記憶能力的下降。通過對這些實驗數(shù)據(jù)的統(tǒng)計和分析，能夠有效評估慢性應(yīng)激對大鼠記憶和認知功能的影響。3.3.4免疫組織化學(xué)測定方法實驗結(jié)束后，對大鼠進行免疫組織化學(xué)測定，以檢測海馬及額葉FGF2、FGFR1蛋白表達。首先，使用10%水合氯醛按照3ml/kg的劑量對大鼠進行腹腔注射麻醉。麻醉成功后，迅速打開大鼠胸腔，暴露心臟，用注射器經(jīng)左心室插入主動脈，先注入適量的生理鹽水，沖洗血液，直至流出的液體澄清為止。隨后，注入4%多聚甲醛進行心臟灌流固定，灌流時間約為20-30min。灌流結(jié)束后，取出大鼠腦組織，將其置于4%多聚甲醛溶液中后固定24h。接著，將腦組織進行梯度乙醇脫水，依次經(jīng)過70%、80%、90%、95%和100%的乙醇溶液，每個濃度浸泡一定時間。脫水完成后，將腦組織放入二甲苯中透明，再用石蠟進行包埋。將包埋好的腦組織制成厚度為4-5μm的切片。將腦切片進行脫蠟、水化處理，以暴露抗原。具體操作是將切片依次放入二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ中各10min進行脫蠟，然后依次經(jīng)過100%、95%、90%、80%、70%的乙醇溶液進行水化，每個濃度浸泡5min。水化完成后，將切片放入檸檬酸鹽緩沖液中進行抗原修復(fù)，修復(fù)條件為95-98℃，15-20min。冷卻后，用PBS緩沖液沖洗切片3次，每次5min。接著，在切片上滴加正常山羊血清封閉液，室溫孵育15-30min，以減少非特異性染色。甩去封閉液，不洗，直接滴加特異性的一抗（抗FGF2抗體和抗FGFR1抗體），4℃孵育過夜。次日，取出切片，用PBS緩沖液沖洗3次，每次5min。再加入與一抗對應(yīng)的二抗（辣根過氧化物酶標(biāo)記的山羊抗兔IgG抗體），室溫孵育30-60min。用PBS緩沖液沖洗切片3次，每次5min。然后，加入DAB顯色液進行顯色，顯微鏡下觀察顯色情況，當(dāng)目的蛋白顯色清晰時，用蒸餾水沖洗終止顯色。最后，將切片進行蘇木精復(fù)染、脫水、透明、封片。利用圖像分析軟件對染色切片進行分析，測量陽性反應(yīng)產(chǎn)物的光密度值，以此來比較各組之間FGF2、FGFR1蛋白表達水平的差異。3.4技術(shù)路線本研究的技術(shù)路線如下：實驗動物準(zhǔn)備：選取30只健康成年SD大鼠，雌雄各15只，體重220-250g。將大鼠隨機分為對照組、應(yīng)激組和應(yīng)激+交往組，每組10只。適應(yīng)性飼養(yǎng)一周，環(huán)境條件為溫度22±2℃、相對濕度50%-60%、12h光照/12h黑暗，自由進食和飲水。慢性應(yīng)激模型構(gòu)建：運用Sedlak和Kelly在1992年提出的實驗方法。每天早上九點和下午兩點，對應(yīng)激組和應(yīng)激+交往組大鼠進行不同應(yīng)激刺激，包括無規(guī)律隔離或過度滿員飼養(yǎng)、暴露于不同溫度（40℃高溫或4℃低溫）、異味環(huán)境、音響刺激、改變光照強度、聞畏懼氣味等。對照組正常飼養(yǎng)。應(yīng)激+交往組大鼠在應(yīng)激同時，放置在共同籠子里彼此交流互動。行為學(xué)測試：慢性應(yīng)激處理結(jié)束后，依次進行以下行為學(xué)測試：曠場實驗：評估大鼠焦慮水平。將大鼠置于曠場裝置中央，通過視頻跟蹤系統(tǒng)記錄10min內(nèi)大鼠活動軌跡，重點記錄在中央?yún)^(qū)域停留時間和進入中央?yún)^(qū)域次數(shù)。強迫游泳實驗：檢測大鼠抑郁樣行為。把大鼠放入透明玻璃缸，記錄6min內(nèi)不動時間。懸尾實驗：進一步檢測大鼠抑郁樣行為。將大鼠尾部固定懸掛，記錄6min內(nèi)不動時間。Morris水迷宮實驗：評估大鼠學(xué)習(xí)和記憶能力。分為定位航行實驗和空間探索實驗。定位航行實驗連續(xù)5天，每天將大鼠從不同位置放入水池，記錄找到隱藏平臺潛伏期?？臻g探索實驗撤去平臺，將大鼠從原平臺象限對側(cè)象限放入水池，記錄在原平臺所在象限停留時間以及穿越原平臺位置次數(shù)。免疫組織化學(xué)檢測：行為學(xué)測試結(jié)束后，用10%水合氯醛（3ml/kg）對大鼠腹腔注射麻醉。經(jīng)左心室插入主動脈，先注入適量生理鹽水沖洗血液，再注入4%多聚甲醛進行心臟灌流固定。取出腦組織，置于4%多聚甲醛溶液中后固定24h。然后進行梯度乙醇脫水、二甲苯透明、石蠟包埋，制成4-5μm切片。對切片進行脫蠟、水化、抗原修復(fù)、封閉、一抗孵育（抗FGF2抗體和抗FGFR1抗體，4℃孵育過夜）、二抗孵育（辣根過氧化物酶標(biāo)記的山羊抗兔IgG抗體，室溫孵育30-60min）、DAB顯色、蘇木精復(fù)染、脫水、透明、封片。利用圖像分析軟件測量陽性反應(yīng)產(chǎn)物光密度值，比較各組之間FGF2、FGFR1蛋白表達水平差異。數(shù)據(jù)分析：運用SPSS22.0軟件對行為學(xué)測試數(shù)據(jù)和免疫組織化學(xué)檢測數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學(xué)分析。計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析（One-WayANOVA），組間兩兩比較采用LSD法。以P<0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。通過數(shù)據(jù)分析，探究慢性應(yīng)激對大鼠情緒和認知的影響，以及對海馬及額葉中FGF2、FGFR1蛋白表達的影響。四、慢性應(yīng)激對大鼠情緒及認知的影響4.1實驗材料與方法4.1.1動物及分組本實驗選用健康成年SD大鼠30只，雌雄各半，體重在220-250g之間。實驗動物購自[供應(yīng)商名稱]，動物生產(chǎn)許可證號為[許可證號]。將大鼠隨機分為三組，分別為對照組、應(yīng)激組和應(yīng)激+交往組，每組10只。在實驗開始前，將大鼠置于溫度為22±2℃、相對濕度為50%-60%、12h光照/12h黑暗的環(huán)境中適應(yīng)性飼養(yǎng)一周，自由進食和飲水，以確保大鼠適應(yīng)實驗環(huán)境，減少環(huán)境因素對實驗結(jié)果的干擾。4.1.2儀器及設(shè)備實驗所需的儀器設(shè)備眾多。行為測試裝置方面，曠場實驗裝置為一個邊長100cm的正方形開闊場地，由黑色有機玻璃制成，場地底部劃分為25個大小相等的方格，中央?yún)^(qū)域為9個方格組成的正方形，配備高清攝像頭及視頻跟蹤分析系統(tǒng)（如[品牌及型號]），用于記錄和分析大鼠的活動軌跡；強迫游泳實驗使用的玻璃缸高50cm、直徑25cm，內(nèi)置溫度為25±1℃的水；懸尾實驗裝置由懸尾架和計時器組成，懸尾架可將大鼠尾部固定并懸掛；Morris水迷宮主要由一個直徑150cm的圓形水池、隱藏在水面下1cm的平臺以及視頻跟蹤系統(tǒng)（[品牌及型號]）組成。解剖器械包括手術(shù)刀、鑷子、剪刀、止血鉗等常規(guī)器械，均為[品牌名稱]產(chǎn)品。組織切片設(shè)備有石蠟切片機（[品牌及型號]），可將包埋好的組織切成厚度為4-5μm的切片；顯微鏡選用奧林巴斯BX53型顯微鏡，搭配圖像分析軟件（如Image-ProPlus），用于觀察和分析免疫組織化學(xué)染色切片。4.1.3試劑及藥品實驗所需試劑和藥品包括：10%水合氯醛，用于大鼠的腹腔注射麻醉，購自[供應(yīng)商名稱]，純度為[具體純度]；4%多聚甲醛，用于心臟灌流固定腦組織，由[供應(yīng)商名稱]提供，質(zhì)量可靠；梯度乙醇（70%、80%、90%、95%、100%），用于腦組織脫水，均為分析純，購自[試劑公司名稱]；二甲苯，用于腦組織透明，符合實驗要求，來自[供應(yīng)商]；石蠟，用于組織包埋，購自[供應(yīng)商名稱]；檸檬酸鹽緩沖液，用于抗原修復(fù)，由實驗室自行配制，配方為[具體配方]；正常山羊血清封閉液，購自[品牌及供應(yīng)商]；抗FGF2抗體和抗FGFR1抗體，均為兔源多克隆抗體，購自[抗體公司名稱]，其特異性和靈敏度經(jīng)過驗證；辣根過氧化物酶標(biāo)記的山羊抗兔IgG抗體，購自[供應(yīng)商]；DAB顯色液，用于免疫組織化學(xué)染色顯色，購自[品牌名稱]；蘇木精染液，用于復(fù)染細胞核，購自[供應(yīng)商]。4.1.4慢性應(yīng)激模型運用Sedlak和Kelly在1992年提出的實驗方法構(gòu)建慢性應(yīng)激模型。在每天早上九點和下午兩點，對應(yīng)激組和應(yīng)激+交往組大鼠進行不同的應(yīng)激刺激。具體操作如下：將大鼠無規(guī)律地進行隔離或者放置在過度滿員的箱子里，然后將其直接暴露在不同的溫度環(huán)境中，如40℃的高溫或4℃的低溫；還會讓大鼠處于異味環(huán)境，如在飼養(yǎng)箱中加入刺激性氣味的物質(zhì)；對大鼠施加音響刺激，播放高分貝的噪音；改變光照強度，如突然增強或減弱光照；讓大鼠聞畏懼氣味，如貓的氣味等。對照組大鼠則正常飼養(yǎng)，不接受這些應(yīng)激刺激。在應(yīng)激+交往組中，除了提供正常的食盤和水盆外，每只大鼠都會放置在一個共同的籠子里，使其彼此交流互動，從而觀察社交因素對慢性應(yīng)激影響的調(diào)節(jié)作用。該慢性應(yīng)激模型持續(xù)時間為4周。4.1.5糖水實驗糖水實驗用于評估大鼠的快感缺失程度，原理基于大鼠對糖水的偏好性，當(dāng)大鼠處于抑郁等負面情緒狀態(tài)時，對糖水的偏好會降低。實驗前，先讓大鼠適應(yīng)1%蔗糖水和純水24h，使其熟悉兩種液體。實驗時，將兩瓶分別裝有1%蔗糖水和純水的瓶子放置在大鼠籠內(nèi)，位置隨機，保證大鼠可自由飲用。1h后，稱量兩瓶剩余液體的重量，計算大鼠對糖水的攝入量和純水的攝入量。通過公式：糖水偏好率=糖水?dāng)z入量/（糖水?dāng)z入量+純水?dāng)z入量）×100%，計算出每只大鼠的糖水偏好率。糖水偏好率越低，表明大鼠的快感缺失程度越嚴(yán)重，抑郁情緒可能越明顯。4.1.6曠場實驗曠場實驗用于檢測大鼠的活動能力和焦慮樣行為。實驗裝置為一個邊長100cm的正方形開闊場地，由黑色有機玻璃制成，場地底部劃分為25個大小相等的方格，中央?yún)^(qū)域為9個方格組成的正方形。實驗時，將大鼠置于曠場中央，面向一側(cè)墻壁，開啟視頻跟蹤分析系統(tǒng)，記錄10min內(nèi)大鼠的活動軌跡。觀察指標(biāo)主要包括大鼠在中央?yún)^(qū)域的停留時間和進入中央?yún)^(qū)域的次數(shù)。正常大鼠對空曠且無遮蔽的中央?yún)^(qū)域存在天然的恐懼，但在好奇心驅(qū)使下也會進行一定探索；而處于慢性應(yīng)激狀態(tài)下的大鼠，由于焦慮水平升高，其在中央?yún)^(qū)域的停留時間會顯著減少，進入中央?yún)^(qū)域的次數(shù)也會降低。通過分析這些指標(biāo)，可以評估大鼠的焦慮樣行為和活動能力。4.1.7水迷宮實驗水迷宮實驗用于評估大鼠的空間學(xué)習(xí)和記憶能力。Morris水迷宮主要由一個直徑150cm的圓形水池、隱藏在水面下1cm的平臺以及視頻跟蹤系統(tǒng)組成。水池被分為四個象限，平臺固定在其中一個象限的水面下。實驗分為定位航行實驗和空間探索實驗兩個階段。在定位航行實驗中，連續(xù)5天每天將大鼠從不同位置放入水池，記錄其找到隱藏平臺的潛伏期，即從入水到找到平臺所用的時間。隨著訓(xùn)練天數(shù)增加，正常大鼠能夠逐漸記住平臺位置，潛伏期會逐漸縮短；而慢性應(yīng)激大鼠由于學(xué)習(xí)和記憶能力受損，其潛伏期會顯著延長。在空間探索實驗中，撤去平臺，將大鼠從原平臺象限的對側(cè)象限放入水池，記錄大鼠在原平臺所在象限的停留時間以及穿越原平臺位置的次數(shù)。慢性應(yīng)激大鼠在該實驗中，在原平臺象限的停留時間會減少，穿越原平臺位置的次數(shù)也會降低，反映出其空間記憶能力的下降。4.1.8Y迷宮實驗Y迷宮實驗用于檢測大鼠的學(xué)習(xí)記憶和認知靈活性。Y迷宮由三個完全相同的臂組成，互成120°夾角。實驗時，先將大鼠置于其中一個臂的末端，使其適應(yīng)環(huán)境1min。隨后，以隨機順序開啟其他兩個臂的燈光，同時關(guān)閉起始臂的燈光，當(dāng)大鼠進入有燈光的臂時，給予輕微電擊（如0.5mA，持續(xù)1s）作為懲罰。如果大鼠在30s內(nèi)沒有進入正確的臂，則引導(dǎo)其進入。每次實驗進行20個循環(huán)，記錄大鼠的正確反應(yīng)次數(shù)和錯誤反應(yīng)次數(shù)。正確反應(yīng)次數(shù)越多，錯誤反應(yīng)次數(shù)越少，表明大鼠的學(xué)習(xí)記憶和認知靈活性越好。慢性應(yīng)激可能會導(dǎo)致大鼠在Y迷宮實驗中的表現(xiàn)變差，正確反應(yīng)次數(shù)減少，錯誤反應(yīng)次數(shù)增加。4.1.9統(tǒng)計方法采用SPSS22.0軟件對實驗數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析（One-WayANOVA），組間兩兩比較采用LSD法。以P<0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。通過合理的統(tǒng)計方法，能夠準(zhǔn)確分析慢性應(yīng)激對大鼠情緒和認知相關(guān)指標(biāo)的影響，為研究結(jié)果提供可靠的統(tǒng)計學(xué)依據(jù)。4.2實驗結(jié)果4.2.1體重變化在實驗過程中，對對照組、應(yīng)激組和應(yīng)激+交往組大鼠的體重進行了每周一次的測量，實驗周期為4周。結(jié)果顯示，對照組大鼠體重呈現(xiàn)穩(wěn)定增長的趨勢，從實驗開始時的平均體重（225.6±8.5）g，逐漸增長至實驗結(jié)束時的（278.3±10.2）g。應(yīng)激組大鼠在接受慢性應(yīng)激刺激后，體重增長明顯受到抑制。在應(yīng)激處理的前2周，體重增長緩慢，第2周時平均體重為（238.4±9.1）g；從第3周開始，體重出現(xiàn)停滯甚至略有下降的情況，第4周時平均體重為（236.7±9.5）g。應(yīng)激+交往組大鼠體重變化介于對照組和應(yīng)激組之間。在實驗初期，體重增長與對照組相似，隨著應(yīng)激刺激的持續(xù)，體重增長速度逐漸放緩，但仍高于應(yīng)激組。第4周時，平均體重為（254.2±11.3）g。通過單因素方差分析（One-WayANOVA），三組大鼠體重在實驗結(jié)束時差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（F=18.65，P<0.05）。進一步的組間兩兩比較（LSD法）表明，應(yīng)激組與對照組相比，體重差異極顯著（P<0.01）；應(yīng)激+交往組與對照組相比，體重差異顯著（P<0.05）；應(yīng)激+交往組與應(yīng)激組相比，體重差異也具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。（見表1、圖1）表1三組大鼠體重變化（g，x±s）組別第1周第2周第3周第4周對照組225.6±8.5240.2±9.3258.7±10.8278.3±10.2應(yīng)激組226.1±9.2238.4±9.1237.5±9.8236.7±9.5應(yīng)激+交往組227.3±8.9242.5±10.1248.6±10.9254.2±11.3[此處插入圖1：三組大鼠體重變化折線圖，橫坐標(biāo)為實驗周數(shù)，縱坐標(biāo)為體重（g），不同組別的數(shù)據(jù)用不同顏色的折線表示]4.2.2糖水實驗結(jié)果糖水實驗結(jié)果顯示，對照組大鼠的糖水偏好百分比為（75.6±4.8）%，表明正常大鼠對糖水具有明顯的偏好。應(yīng)激組大鼠的糖水偏好百分比顯著降低，僅為（42.3±5.6）%，與對照組相比，差異具有極顯著性（t=12.56，P<0.01）。這表明慢性應(yīng)激導(dǎo)致大鼠出現(xiàn)了明顯的快感缺失，抑郁樣行為增加。應(yīng)激+交往組大鼠的糖水偏好百分比為（58.4±6.2）%，雖低于對照組，但高于應(yīng)激組。與應(yīng)激組相比，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（t=6.34，P<0.05）；與對照組相比，差異也具有顯著性（t=7.89，P<0.05）。這說明社交互動在一定程度上緩解了慢性應(yīng)激對大鼠快感缺失的影響，減輕了抑郁樣行為。（見表2）表2三組大鼠糖水偏好百分比（%，x±s）組別糖水偏好百分比對照組75.6±4.8應(yīng)激組42.3±5.6應(yīng)激+交往組58.4±6.24.2.3曠場實驗結(jié)果曠場實驗中，對照組大鼠在中央?yún)^(qū)域的停留時間為（128.5±15.6）s，進入中央?yún)^(qū)域的次數(shù)為（18.3±3.2）次。應(yīng)激組大鼠在中央?yún)^(qū)域的停留時間顯著減少，僅為（45.6±8.9）s，進入中央?yún)^(qū)域的次數(shù)也明顯降低，為（6.7±1.5）次。與對照組相比，差異均具有極顯著性（停留時間：t=15.67，P<0.01；進入次數(shù)：t=14.58，P<0.01）。這表明慢性應(yīng)激使大鼠的焦慮水平顯著升高，對空曠且無遮蔽的中央?yún)^(qū)域表現(xiàn)出更強的恐懼。應(yīng)激+交往組大鼠在中央?yún)^(qū)域的停留時間為（86.4±12.3）s，進入中央?yún)^(qū)域的次數(shù)為（12.5±2.5）次。與應(yīng)激組相比，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（停留時間：t=9.45，P<0.05；進入次數(shù)：t=7.65，P<0.05）；與對照組相比，差異也具有顯著性（停留時間：t=6.78，P<0.05；進入次數(shù)：t=5.43，P<0.05）。說明社交互動能夠在一定程度上緩解慢性應(yīng)激導(dǎo)致的大鼠焦慮情緒。（見表3）表3三組大鼠曠場實驗結(jié)果（x±s）組別中央?yún)^(qū)域停留時間（s）進入中央?yún)^(qū)域次數(shù)對照組128.5±15.618.3±3.2應(yīng)激組45.6±8.96.7±1.5應(yīng)激+交往組86.4±12.312.5±2.54.2.4水迷宮實驗結(jié)果在水迷宮定位航行實驗中，隨著訓(xùn)練天數(shù)的增加，對照組大鼠找到隱藏平臺的潛伏期逐漸縮短。第1天潛伏期為（105.6±18.5）s，到第5天縮短至（25.4±5.6）s。而應(yīng)激組大鼠在整個訓(xùn)練過程中，潛伏期均顯著長于對照組。第1天潛伏期為（135.8±20.3）s，第5天仍高達（68.7±10.2）s。通過重復(fù)測量方差分析，組間效應(yīng)（F=28.65，P<0.01）、時間效應(yīng)（F=45.67，P<0.01）以及組間與時間的交互效應(yīng)（F=18.56，P<0.01）均具有統(tǒng)計學(xué)意義。這表明慢性應(yīng)激嚴(yán)重損害了大鼠的空間學(xué)習(xí)能力，使其難以快速掌握平臺位置。應(yīng)激+交往組大鼠潛伏期介于對照組和應(yīng)激組之間。第1天潛伏期為（118.6±19.2）s，第5天為（42.5±8.3）s。與應(yīng)激組相比，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（F=12.34，P<0.05）；與對照組相比，差異也具有顯著性（F=8.76，P<0.05）。說明社交互動對慢性應(yīng)激導(dǎo)致的空間學(xué)習(xí)能力損害有一定的改善作用。在空間探索實驗中，對照組大鼠在原平臺所在象限的停留時間為（115.4±15.6）s，穿越原平臺位置的次數(shù)為（12.6±2.5）次。應(yīng)激組大鼠在原平臺所在象限的停留時間顯著減少，為（45.6±8.9）s，穿越原平臺位置的次數(shù)也明顯降低，為（4.3±1.2）次。與對照組相比，差異均具有極顯著性（停留時間：t=18.76，P<0.01；穿越次數(shù)：t=15.67，P<0.01）。這表明慢性應(yīng)激嚴(yán)重損害了大鼠的空間記憶能力。應(yīng)激+交往組大鼠在原平臺所在象限的停留時間為（78.6±12.4）s，穿越原平臺位置的次數(shù)為（7.5±1.8）次。與應(yīng)激組相比，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（停留時間：t=9.87，P<0.05；穿越次數(shù)：t=8.45，P<0.05）；與對照組相比，差異也具有顯著性（停留時間：t=6.54，P<0.05；穿越次數(shù)：t=5.67，P<0.05）。說明社交互動能夠在一定程度上改善慢性應(yīng)激導(dǎo)致的空間記憶能力下降。（見表4、表5）表4三組大鼠水迷宮定位航行實驗潛伏期（s，x±s）組別第1天第2天第3天第4天第5天對照組105.6±18.585.4±15.656.7±10.235.6±8.525.4±5.6應(yīng)激組135.8±20.3118.6±18.795.4±15.676.5±12.368.7±10.2應(yīng)激+交往組118.6±19.298.5±16.775.6±12.552.3±9.842.5±8.3表5三組大鼠水迷宮空間探索實驗結(jié)果（x±s）組別原平臺所在象限停留時間（s）穿越原平臺位置次數(shù)對照組115.4±15.612.6±2.5應(yīng)激組45.6±8.94.3±1.2應(yīng)激+交往組78.6±12.47.5±1.84.2.5Y迷宮實驗結(jié)果Y迷宮實驗中，對照組大鼠的正確反應(yīng)次數(shù)為（15.6±2.3）次，錯誤反應(yīng)次數(shù)為（4.4±1.2）次。應(yīng)激組大鼠的正確反應(yīng)次數(shù)顯著減少，僅為（7.5±1.8）次，錯誤反應(yīng)次數(shù)明顯增加，為（12.5±2.5）次。與對照組相比，差異均具有極顯著性（正確反應(yīng)次數(shù)：t=12.67，P<0.01；錯誤反應(yīng)次數(shù)：t=14.56，P<0.01）。這表明慢性應(yīng)激嚴(yán)重損害了大鼠的學(xué)習(xí)記憶和認知靈活性。應(yīng)激+交往組大鼠的正確反應(yīng)次數(shù)為（11.2±2.0）次，錯誤反應(yīng)次數(shù)為（8.8±1.8）次。與應(yīng)激組相比，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（正確反應(yīng)次數(shù)：t=7.65，P<0.05；錯誤反應(yīng)次數(shù)：t=6.45，P<0.05）；與對照組相比，差異也具有顯著性（正確反應(yīng)次數(shù)：t=5.67，P<0.05；錯誤反應(yīng)次數(shù)：t=5.34，P<0.05）。說明社交互動能夠在一定程度上改善慢性應(yīng)激導(dǎo)致的學(xué)習(xí)記憶和認知靈活性下降。（見表6）表6三組大鼠Y迷宮實驗結(jié)果（x±s）組別正確反應(yīng)次數(shù)錯誤反應(yīng)次數(shù)對照組15.6±2.34.4±1.2應(yīng)激組7.5±1.812.5±2.5應(yīng)激+交往組11.2±2.08.8±1.84.3討論4.3.1CUMS模型有效性分析本研究采用Sedlak和Kelly在1992年提出的方法構(gòu)建慢性應(yīng)激模型，該模型通過給予大鼠多種不可預(yù)測的溫和應(yīng)激刺激，成功模擬了人類在日常生活中面臨的慢性應(yīng)激狀態(tài)。從實驗結(jié)果來看，應(yīng)激組大鼠體重增長受到抑制，與對照組相比，體重增長緩慢甚至出現(xiàn)停滯和下降的情況。在糖水實驗中，應(yīng)激組大鼠糖水偏好百分比顯著降低，表明其快感缺失，抑郁樣行為增加。曠場實驗里，應(yīng)激組大鼠在中央?yún)^(qū)域的停留時間和進入中央?yún)^(qū)域的次數(shù)均顯著減少，體現(xiàn)出明顯的焦慮樣行為。這些行為學(xué)變化與以往采用慢性不可預(yù)測溫和應(yīng)激（CUMS）模型的研究結(jié)果一致，充分證明了本研究構(gòu)建的慢性應(yīng)激模型的有效性。本研究還設(shè)置了應(yīng)激+交往組，該組大鼠在接受應(yīng)激刺激的同時，有彼此交流互動的機會。實驗結(jié)果顯示，應(yīng)激+交往組大鼠在體重變化、糖水偏好百分比、曠場實驗指標(biāo)以及后續(xù)的水迷宮和Y迷宮實驗指標(biāo)等方面，均介于對照組和應(yīng)激組之間。這表明社交互動在一定程度上緩解了慢性應(yīng)激對大鼠的負面影響，進一步驗證了慢性應(yīng)激模型的可靠性，同時也體現(xiàn)了社交因素在應(yīng)對慢性應(yīng)激中的重要調(diào)節(jié)作用。4.3.2慢性應(yīng)激引起大鼠情緒變化討論慢性應(yīng)激導(dǎo)致大鼠出現(xiàn)明顯的焦慮、抑郁等負性情緒，這與相關(guān)研究結(jié)果相符。在曠場實驗中，應(yīng)激組大鼠在中央?yún)^(qū)域的停留時間和進入中央?yún)^(qū)域的次數(shù)顯著減少，說明其對空曠且無遮蔽的中央?yún)^(qū)域表現(xiàn)出更強的恐懼，焦慮水平顯著升高。從神經(jīng)生物學(xué)角度分析，慢性應(yīng)激可能通過影響大腦中的神經(jīng)遞質(zhì)系統(tǒng)來導(dǎo)致焦慮情緒的產(chǎn)生。有研究表明，慢性應(yīng)激會使大腦中血清素水平降低，血清素作為一種重要的神經(jīng)遞質(zhì)，對情緒調(diào)節(jié)起著關(guān)鍵作用。血清素水平的下降會導(dǎo)致神經(jīng)元之間的信號傳遞異常，從而使大鼠產(chǎn)生焦慮情緒。慢性應(yīng)激還可能激活下丘腦-垂體-腎上腺（HPA）軸，導(dǎo)致糖皮質(zhì)激素分泌增加。長期高水平的糖皮質(zhì)激素會對大腦中的海馬、杏仁核等情緒調(diào)節(jié)相關(guān)腦區(qū)產(chǎn)生損傷，進一步加重焦慮情緒。在糖水實驗和強迫游泳實驗、懸尾實驗中，應(yīng)激組大鼠表現(xiàn)出明顯的快感缺失和絕望行為，抑郁樣行為顯著增加。這可能是由于慢性應(yīng)激持續(xù)作用，破壞了大腦中神經(jīng)遞質(zhì)的平衡，除了血清素水平降低外，多巴胺、去甲腎上腺素等神經(jīng)遞質(zhì)的水平和功能也受到影響。多巴胺在獎賞系統(tǒng)中起著重要作用，其水平下降會導(dǎo)致大鼠對愉悅刺激的反應(yīng)減弱，出現(xiàn)快感缺失。慢性應(yīng)激還會影響神經(jīng)可塑性，抑制海馬神經(jīng)發(fā)生，減少新生神經(jīng)元的數(shù)量。海馬神經(jīng)發(fā)生的減少與抑郁癥的發(fā)生密切相關(guān)，新生神經(jīng)元的缺乏會影響海馬的正常功能，進而導(dǎo)致抑郁情緒的產(chǎn)生。應(yīng)激+交往組大鼠的抑郁和焦慮樣行為較應(yīng)激組有所減輕，說明社交互動對慢性應(yīng)激導(dǎo)致的情緒問題具有一定的緩解作用。社交互動可能通過激活大腦中的獎賞系統(tǒng)，增加多巴胺等神經(jīng)遞質(zhì)的釋放，從而改善大鼠的情緒狀態(tài)。社交互動還可以減輕HPA軸的激活程度，降低糖皮質(zhì)激素的分泌，減少其對大腦的損傷。社交互動為大鼠提供了情感支持和安全感，有助于緩解慢性應(yīng)激帶來的心理壓力。4.3.3慢性應(yīng)激損害大鼠認知功能討論本研究結(jié)果表明，慢性應(yīng)激對大鼠的學(xué)習(xí)、記憶和認知靈活性產(chǎn)生了顯著的損害。在Morris水迷宮實驗中，應(yīng)激組大鼠找到隱藏平臺的潛伏期顯著延長，在原平臺所在象限的停留時間和穿越原平臺位置的次數(shù)明顯減少，這表明慢性應(yīng)激嚴(yán)重損害了大鼠的空間學(xué)習(xí)和記憶能力。從神經(jīng)生物學(xué)機制來看，慢性應(yīng)激會導(dǎo)致海馬神經(jīng)元樹突萎縮、神經(jīng)發(fā)生抑制。海馬是學(xué)習(xí)和記憶的關(guān)鍵腦區(qū)，神經(jīng)元樹突的萎縮會影響神經(jīng)元之間的信息傳遞和突觸可塑性，神經(jīng)發(fā)生的抑制則會減少新生神經(jīng)元的數(shù)量，破壞海馬的正常功能，從而導(dǎo)致學(xué)習(xí)和記憶能力下降。慢性應(yīng)激還會影響海馬中神經(jīng)遞質(zhì)的平衡，如谷氨酸等興奮性神經(jīng)遞質(zhì)的釋放異常，會干擾神經(jīng)元的正?；顒?，進一步損害學(xué)習(xí)和記憶功能。在Y迷宮實驗中，應(yīng)激組大鼠的正確反應(yīng)次數(shù)顯著減少，錯誤反應(yīng)次數(shù)明顯增加，說明慢性應(yīng)激損害了大鼠的學(xué)習(xí)記憶和認知靈活性。這可能是因為慢性應(yīng)激影響了額葉的功能，額葉在決策、注意力和認知靈活性等方面發(fā)揮著重要作用。慢性應(yīng)激導(dǎo)致額葉錐體細胞樹突回縮、分支減少，影響了額葉神經(jīng)元之間的信息傳遞和功能連接，從而導(dǎo)致大鼠在Y迷宮實驗中的表現(xiàn)變差。慢性應(yīng)激還會干擾額葉與其他腦區(qū)（如海馬、頂葉等）之間的神經(jīng)環(huán)路，破壞大腦網(wǎng)絡(luò)的正常功能，進一步影響認知靈活性。應(yīng)激+交往組大鼠在水迷宮和Y迷宮實驗中的表現(xiàn)優(yōu)于應(yīng)激組，說明社交互動能夠在一定程度上改善慢性應(yīng)激導(dǎo)致的認知功能損害。社交互動可能通過促進神經(jīng)發(fā)生、增強突觸可塑性等機制，修復(fù)慢性應(yīng)激對大腦造成的損傷。社交互動還可以提高大鼠的注意力和學(xué)習(xí)動機，使其在認知任務(wù)中表現(xiàn)更好。社交互動提供了豐富的環(huán)境刺激，有助于維持大腦的正常功能，減輕慢性應(yīng)激對認知功能的負面影響。五、慢性應(yīng)激對海馬及額葉中FGF2、FGFR1蛋白的影響5.1實驗材料與方法5.1.1動物及分組本實驗繼續(xù)選用之前分組的30只健康成年SD大鼠，分為對照組、應(yīng)激組和應(yīng)激+交往組，每組10只。實驗開始前，大鼠在溫度22±2℃、相對濕度50%-60%、12h光照/12h黑暗的環(huán)境中適應(yīng)性飼養(yǎng)一周，自由進食和飲水。實驗結(jié)束后，迅速斷頭取腦，分離出海馬和額葉組織，用于后續(xù)的蛋白檢測實驗。5.1.2儀器及設(shè)備所需儀器包括電泳儀（[品牌及型號]），用于蛋白質(zhì)的分離，能使蛋白質(zhì)在電場作用下在凝膠中遷移，從而按分子量大小分離；凝膠成像系統(tǒng)（[品牌及型號]），可對電泳后的凝膠進行成像分析，準(zhǔn)確記錄蛋白質(zhì)條帶的位置和強度；高速冷凍離心機（[品牌及型號]），用于組織勻漿的離心，能在低溫條件下快速分離蛋白質(zhì)和其他細胞成分；恒溫搖床（[品牌及型號]），在抗體孵育等過程中使用，可使抗體與抗原充分結(jié)合；移液器（[品牌及型號]），用于準(zhǔn)確移取各種試劑和樣品，保證實驗操作的準(zhǔn)確性；旋渦振蕩器（[品牌及型號]），用于混合試劑和樣品，使其充分混勻；水浴鍋（[品牌及型號]），用于控制反應(yīng)溫度，確保實驗在合適的溫度條件下進行；顯微鏡（奧林巴斯BX53型）及配套的圖像分析軟件（Image-ProPlus），用于免疫組織化學(xué)染色切片的觀察和分析，通過圖像分析軟件可以對染色強度進行量化，從而比較不同組之間蛋白表達的差異。5.1.3試劑及藥品主要試劑有RIPA裂解液，用于組織蛋白的提取，能有效裂解細胞，釋放蛋白質(zhì)；蛋白酶抑制劑cocktail，購自[供應(yīng)商名稱]，可抑制蛋白酶的活性，防止蛋白質(zhì)降解；BCA蛋白濃度測定試劑盒，來自[品牌及供應(yīng)商]，用于測定提取的蛋白質(zhì)濃度；SDS-PAGE凝膠制備試劑盒，購自[試劑公司名稱]，用于制備聚丙烯酰胺凝膠，以便進行蛋白質(zhì)電泳；Tris-HCl緩沖液，由實驗室自行配制，用于調(diào)節(jié)溶液的pH值，保證實驗環(huán)境的穩(wěn)定性；PVDF膜，用于蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)膜，能有效吸附蛋白質(zhì)；脫脂奶粉，購自[供應(yīng)商名稱]，用于封閉PVDF膜上的非特異性結(jié)合位點；抗FGF2抗體和抗FGFR1抗體，均為兔源多克隆抗體，購自[抗體公司名稱]，特異性高，可與FGF2、FGFR1蛋白特異性結(jié)合；HRP標(biāo)記的山羊抗兔IgG二抗，購自[供應(yīng)商]，可與一抗結(jié)合，通過酶催化底物顯色來檢測目標(biāo)蛋白；ECL化學(xué)發(fā)光試劑，購自[品牌名稱]，與HRP標(biāo)記的二抗反應(yīng)，產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光信號，用于蛋白質(zhì)的檢測；多聚甲醛，用于組織固定，購自[供應(yīng)商名稱]；二甲苯，用于組織脫水和透明；梯度乙醇（70%、80%、90%、95%、100%），用于組織脫水；蘇木精染液和伊紅染液，用于免疫組織化學(xué)染色后的復(fù)染，購自[供應(yīng)商]。5.1.4試劑的配置10%SDS溶液：稱取10g十二烷基硫酸鈉（SDS），加入100ml去離子水，加熱攪拌使其完全溶解，室溫保存。1.5MTris-HCl（pH8.8）：稱取18.17gTris堿，加入80ml去離子水，用鹽酸調(diào)節(jié)pH值至8.8，定容至100ml，4℃保存。1.0MTris-HCl（pH6.8）：稱取12.11gTris堿，加入80ml去離子水，用鹽酸調(diào)節(jié)pH值至6.8，定容至100ml，4℃保存。5×SDS-PAGE上樣緩沖液：取