慢性溫和應激下孕鼠腦海馬區(qū)5-羥色胺及受體表達變化研究一、引言1.1研究背景與意義孕期作為一個特殊的生理階段，是胚胎神經(jīng)發(fā)育最為關鍵的時期之一。在此期間，孕婦面臨的精神壓力和應激情況，往往會對胎兒的神經(jīng)發(fā)育產(chǎn)生不容忽視的影響?，F(xiàn)代社會生活節(jié)奏加快，孕婦可能會遭遇各種應激源，如工作壓力、家庭關系緊張、經(jīng)濟負擔等，這些慢性溫和應激源對孕婦及其胎兒的健康潛在威脅，日益受到關注。大量研究表明，孕期應激與胎兒神經(jīng)發(fā)育異常之間存在緊密聯(lián)系。當孕婦處于應激狀態(tài)時，體內(nèi)的皮質(zhì)醇、腎上腺素等應激激素水平會相應波動，這些過多的應激激素可能通過胎盤進入胎兒血液循環(huán)，干擾胎兒正常的神經(jīng)發(fā)育過程。從胎兒的神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育角度來看，孕期應激可能會增加胎兒出現(xiàn)神經(jīng)發(fā)育異常的風險，如自閉癥、注意缺陷多動障礙（ADHD）等神經(jīng)精神疾病的發(fā)病幾率有所上升。從胎兒的大腦形態(tài)結(jié)構發(fā)育方面研究發(fā)現(xiàn)，孕期應激會導致胎兒大腦體積減小、腦區(qū)發(fā)育不均衡等問題。而且，孕期應激還可能影響胎兒出生后的認知、情緒和行為發(fā)展，使孩子在成長過程中更容易出現(xiàn)學習困難、情緒不穩(wěn)定、社交障礙等問題。在神經(jīng)遞質(zhì)系統(tǒng)中，5-羥色胺是一種至關重要的物質(zhì)，在腦海馬區(qū)的神經(jīng)遞質(zhì)系統(tǒng)中扮演著重要角色。5-羥色胺（5-hydroxytryptamine，5-HT）又稱血清素，是一種具有抑制功能的神經(jīng)遞質(zhì)，可傳遞抑制性化學信息，同時還具有縮血管及止血等功能。它廣泛分布于自然界，在哺乳動物體內(nèi)，約90%的5-羥色胺存在于腸道的腸嗜鉻細胞內(nèi)，僅5%存在于中樞神經(jīng)系統(tǒng)（CNS）、血小板等胃腸外組織或細胞內(nèi)。在中樞神經(jīng)系統(tǒng)的許多區(qū)域，如視網(wǎng)膜、邊緣系統(tǒng)、下丘腦、小腦和脊髓等，5-羥色胺都發(fā)揮著關鍵的神經(jīng)調(diào)節(jié)作用，參與調(diào)節(jié)多種生物學和神經(jīng)學過程，包括攻擊、焦慮、食欲、認知、學習、記憶、情緒、惡心、睡眠和體溫調(diào)節(jié)等。5-HT1A和5-HT2A是5-羥色胺的主要受體，它們的表達水平變化往往與精神紊亂和神經(jīng)發(fā)育異常等問題密切相關。5-HT1A受體作為一種自身受體，在調(diào)節(jié)5-羥色胺的釋放和神經(jīng)元的興奮性方面發(fā)揮著重要作用。當5-HT1A受體表達下降時，可能導致5-羥色胺能神經(jīng)元的活動失衡，進而影響神經(jīng)信號的傳遞和調(diào)節(jié)，這與孕婦出現(xiàn)抑郁和焦慮等情緒障礙密切相關。5-HT2A受體則參與調(diào)節(jié)多種神經(jīng)遞質(zhì)的釋放，包括谷氨酸、γ-氨基丁酸（GABA）等，其表達升高可能會導致神經(jīng)元的過度興奮，干擾正常的神經(jīng)發(fā)育過程，對胎兒的神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育產(chǎn)生不利影響。本研究旨在深入探究孕期慢性溫和應激對孕鼠腦海馬區(qū)5-羥色胺及相關受體表達變化的影響。通過開展此項研究，期望能夠從分子生物學層面揭示孕期應激影響胎兒神經(jīng)發(fā)育的潛在機制，為進一步理解孕期應激與神經(jīng)發(fā)育異常之間的關系提供重要的理論依據(jù)。在實際應用方面，本研究結(jié)果有助于為臨床預防和干預孕期應激相關的胎兒神經(jīng)發(fā)育異常提供新的思路和方法，如為孕期心理健康指導、早期診斷和治療提供科學參考，從而降低胎兒神經(jīng)發(fā)育異常的發(fā)生率，提高人口素質(zhì)，具有重要的理論和實際意義。1.2國內(nèi)外研究現(xiàn)狀在神經(jīng)科學領域，慢性溫和應激對動物神經(jīng)系統(tǒng)的影響一直是研究的熱點之一。國內(nèi)外學者圍繞這一主題展開了大量研究，在慢性溫和應激對動物行為、神經(jīng)遞質(zhì)系統(tǒng)以及神經(jīng)發(fā)育等方面取得了一系列成果。國外對慢性溫和應激的研究起步較早，在動物模型構建和機制探討方面處于領先地位。早期研究中，國外學者成功建立了慢性不可預知溫和應激（CUMS）模型，為后續(xù)研究慢性溫和應激對動物的影響提供了重要工具。通過該模型，研究人員發(fā)現(xiàn)慢性溫和應激可導致動物出現(xiàn)抑郁樣行為，如小鼠在懸尾實驗和強迫游泳實驗中靜止時間明顯增加，大鼠在糖水偏好實驗中對糖水的偏好度降低，這些行為學改變與人類抑郁癥的癥狀具有一定相似性，為從動物實驗角度研究人類精神疾病提供了重要參考。在神經(jīng)遞質(zhì)系統(tǒng)方面，國外學者對慢性溫和應激下5-羥色胺及受體表達變化進行了深入探究。有研究表明，長期處于慢性溫和應激環(huán)境中的動物，其腦海馬區(qū)5-羥色胺水平顯著降低，5-HT1A受體表達下調(diào)，5-HT2A受體表達上調(diào)。這種變化被認為與神經(jīng)可塑性改變和神經(jīng)炎癥反應相關，進一步影響神經(jīng)元的存活、分化和突觸傳遞，最終導致動物行為和認知功能異常。國內(nèi)研究近年來也取得了顯著進展，在借鑒國外研究成果的基礎上，結(jié)合國內(nèi)實際情況，開展了一系列具有特色的研究工作。在慢性溫和應激對孕鼠影響的研究中，國內(nèi)學者發(fā)現(xiàn)慢性溫和應激會使孕鼠出現(xiàn)焦慮樣行為，并且這種應激狀態(tài)會通過改變母體內(nèi)分泌環(huán)境，影響胎兒的生長發(fā)育。有實驗表明，慢性溫和應激下孕鼠血清中皮質(zhì)酮水平升高，進而影響胎盤的血液灌注和營養(yǎng)物質(zhì)轉(zhuǎn)運，導致胎兒體重減輕、發(fā)育遲緩。針對慢性溫和應激對孕鼠腦海馬區(qū)5-羥色胺及受體表達變化的研究，國內(nèi)學者通過動物實驗發(fā)現(xiàn)，慢性溫和應激會導致孕鼠腦海馬區(qū)5-羥色胺合成關鍵酶的活性降低，使得5-羥色胺的合成減少，同時5-HT1A受體表達下降，5-HT2A受體表達上升，這與國外部分研究結(jié)果相一致。此外，國內(nèi)研究還注重從中醫(yī)中藥角度探討對慢性溫和應激損傷的干預作用，發(fā)現(xiàn)一些中藥提取物或復方制劑能夠調(diào)節(jié)5-羥色胺及受體表達，改善應激導致的神經(jīng)功能異常，為臨床治療提供了新的思路和方法。盡管國內(nèi)外在慢性溫和應激對動物神經(jīng)系統(tǒng)影響的研究取得了諸多成果，但仍存在一些不足之處。在研究對象方面，目前大多數(shù)研究集中在成年動物，對孕期這一特殊生理階段的研究相對較少，尤其是針對孕鼠腦海馬區(qū)5-羥色胺及受體表達變化的深入研究還不夠系統(tǒng)全面。在作用機制方面，雖然已經(jīng)認識到5-羥色胺及受體表達變化在慢性溫和應激導致的神經(jīng)功能異常中起到重要作用，但具體的信號通路和分子機制尚未完全明確，仍需進一步深入探究。而且在研究方法上，現(xiàn)有的動物模型和檢測技術還存在一定局限性，需要不斷改進和完善，以更準確地模擬人類慢性溫和應激狀態(tài)和檢測相關指標的變化。1.3研究目標與內(nèi)容本研究旨在深入探究慢性溫和應激對孕鼠腦海馬區(qū)5-羥色胺及受體表達變化的影響，明確其在孕期應激影響胎兒神經(jīng)發(fā)育過程中的作用機制，為臨床預防和干預孕期應激相關的胎兒神經(jīng)發(fā)育異常提供理論依據(jù)和新的思路。在研究內(nèi)容上，本研究首先會進行實驗動物分組與模型建立，選取健康的成年雌性大鼠，使其受孕后隨機分為對照組和應激組。對照組孕鼠在正常環(huán)境中飼養(yǎng)，應激組孕鼠則接受慢性溫和應激刺激，通過構建慢性溫和應激模型，模擬孕婦在孕期可能面臨的各種溫和應激源，如噪聲干擾、晝夜節(jié)律紊亂、飲食限制等，以確保實驗的科學性和可靠性。為了測定孕鼠腦海馬區(qū)5-羥色胺及受體表達水平，實驗結(jié)束后，本研究將迅速取出孕鼠的海馬組織，采用高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術（HPLC-MS）測定5-羥色胺的含量，運用實時熒光定量聚合酶鏈式反應（qRT-PCR）和蛋白質(zhì)免疫印跡法（Westernblot）分別檢測5-HT1A和5-HT2A受體在mRNA和蛋白水平的表達情況，從而全面、準確地獲取相關數(shù)據(jù)。除了上述研究，本研究還會對實驗結(jié)果進行統(tǒng)計分析與討論。運用SPSS或GraphPadPrism等統(tǒng)計軟件對實驗數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學分析，采用獨立樣本t檢驗或方差分析比較對照組和應激組之間的差異，以P<0.05作為差異具有統(tǒng)計學意義的標準。結(jié)合已有研究成果，深入探討慢性溫和應激對孕鼠腦海馬區(qū)5-羥色胺及受體表達變化的影響機制，分析5-羥色胺及受體表達變化與胎兒神經(jīng)發(fā)育異常之間的潛在聯(lián)系，為進一步研究孕期應激與神經(jīng)發(fā)育異常的關系提供重要參考。二、實驗材料與方法2.1實驗動物本實驗選用7-8周齡的SPF級SD孕鼠，共計40只。之所以選擇這一周齡段的孕鼠，是因為此階段的孕鼠身體機能較為穩(wěn)定，生殖系統(tǒng)發(fā)育成熟，能夠更好地適應實驗過程中的各種操作和應激刺激，從而減少因個體差異導致的實驗誤差，確保實驗結(jié)果的可靠性和穩(wěn)定性。這些孕鼠購自[實驗動物供應商具體名稱]，供應商具備完善的動物繁育和質(zhì)量控制體系，能夠保證實驗動物的健康狀況和遺傳背景的一致性。孕鼠到達實驗室后，首先被安置于溫度為（22±2）℃、相對濕度維持在（50±10）%的SPF級動物飼養(yǎng)室內(nèi)，進行為期1周的適應性飼養(yǎng)。這樣的飼養(yǎng)環(huán)境模擬了大鼠在自然狀態(tài)下較為適宜的生存條件，能夠減少環(huán)境因素對孕鼠生理狀態(tài)的干擾。在適應性飼養(yǎng)期間，給予孕鼠自由進食和飲水，所提供的飼料為符合國家標準的全價營養(yǎng)顆粒飼料，其營養(yǎng)成分全面，能夠滿足孕鼠孕期的營養(yǎng)需求；飲用水則為經(jīng)過高溫高壓滅菌處理的純凈水，確保水質(zhì)安全，避免因飲食問題引發(fā)孕鼠健康異常。光照周期設定為12h光照/12h黑暗，嚴格的光照周期模擬了自然晝夜節(jié)律，有助于維持孕鼠正常的生物鐘和內(nèi)分泌平衡，對其生殖生理和胚胎發(fā)育具有重要影響。在飼養(yǎng)過程中，每天定時觀察孕鼠的飲食、飲水、活動和精神狀態(tài)等情況，詳細記錄相關數(shù)據(jù)，及時發(fā)現(xiàn)并處理可能出現(xiàn)的健康問題，如發(fā)現(xiàn)有孕鼠出現(xiàn)異常行為或體征，會及時進行隔離觀察和診斷治療，確保所有用于實驗的孕鼠均處于健康狀態(tài)。實驗動物的選擇和飼養(yǎng)環(huán)境的控制是本研究的重要基礎，直接關系到實驗結(jié)果的準確性和科學性，對深入探究慢性溫和應激對孕鼠腦海馬區(qū)5-羥色胺及受體表達變化的影響具有關鍵作用。2.2實驗設備與試劑實驗所需的主要儀器設備涵蓋多個關鍵領域，其中檢測5-羥色胺及受體表達的儀器尤為重要。高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀（HPLC-MS），品牌為[具體品牌]，型號為[具體型號]，購自[供應商名稱]。該儀器能夠?qū)?-羥色胺進行高靈敏度、高分辨率的定量分析，通過將高效液相色譜的分離能力與質(zhì)譜的定性和定量能力相結(jié)合，能夠準確地測定孕鼠腦海馬區(qū)中5-羥色胺的含量，為研究慢性溫和應激對5-羥色胺水平的影響提供精確的數(shù)據(jù)支持。實時熒光定量聚合酶鏈式反應儀（qRT-PCR儀），選用[具體品牌]的[具體型號]，從[供應商處]購置。它可用于檢測5-HT1A和5-HT2A受體在mRNA水平的表達變化，通過對特定基因擴增過程中熒光信號的實時監(jiān)測，實現(xiàn)對基因表達量的精確測定，為深入了解慢性溫和應激對受體基因表達的調(diào)控機制提供關鍵技術手段。蛋白質(zhì)免疫印跡法（Westernblot）相關設備，包括電泳儀（[品牌及型號]）、轉(zhuǎn)膜儀（[品牌及型號]）和化學發(fā)光成像系統(tǒng)（[品牌及型號]），分別購自[對應供應商名稱]。這些設備協(xié)同工作，能夠?qū)?-HT1A和5-HT2A受體的蛋白表達水平進行分析，通過將蛋白質(zhì)進行電泳分離、轉(zhuǎn)膜以及與特異性抗體結(jié)合，最后利用化學發(fā)光成像系統(tǒng)檢測目的蛋白條帶的強度，從而直觀地反映出受體蛋白表達量的變化。此外，實驗還用到了其他儀器，如電子天平（[品牌及型號]，用于準確稱量實驗試劑和動物飼料等）、高速冷凍離心機（[品牌及型號]，能夠在低溫條件下快速分離生物樣品中的不同成分，用于制備海馬組織勻漿等）、超低溫冰箱（[品牌及型號]，可將樣品保存于極低溫度下，防止生物活性物質(zhì)的降解，用于儲存海馬組織樣本、抗體等）、恒溫培養(yǎng)箱（[品牌及型號]，為細胞培養(yǎng)或分子生物學實驗提供穩(wěn)定的溫度環(huán)境，在某些實驗步驟中用于孵育反應體系）、漩渦振蕩器（[品牌及型號]，用于快速混勻試劑和樣品，確保實驗操作的均一性）和移液器（[品牌及型號]，如10μL、20μL、100μL、200μL、1000μL等不同量程，準確移取各種試劑和樣品，保證實驗加樣的準確性）。在試劑方面，主要包括5-羥色胺標準品（[品牌]，純度≥[具體純度]，購自[供應商名稱]，用于繪制標準曲線，以便準確測定樣品中5-羥色胺的含量）、5-HT1A受體抗體（[品牌]，特異性高，能夠與5-HT1A受體特異性結(jié)合，購自[供應商名稱]，用于Westernblot實驗中檢測5-HT1A受體蛋白的表達）、5-HT2A受體抗體（[品牌]，具有良好的親和力和特異性，購自[供應商名稱]，在Westernblot實驗中用于檢測5-HT2A受體蛋白的表達）、HRP標記的二抗（[品牌]，可與一抗特異性結(jié)合，通過催化底物顯色來檢測目的蛋白，購自[供應商名稱]，用于增強Westernblot實驗的檢測信號）、RNA提取試劑（如TRIzol試劑，[品牌]，能夠高效提取細胞或組織中的總RNA，購自[供應商名稱]，用于后續(xù)的qRT-PCR實驗）、逆轉(zhuǎn)錄試劑盒（[品牌]，可將RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，購自[供應商名稱]，為qRT-PCR實驗提供模板）、qRT-PCR試劑（[品牌]，包含PCR反應所需的各種酶、緩沖液和引物等，購自[供應商名稱]，用于進行實時熒光定量PCR反應，檢測受體基因的表達水平）、RIPA裂解液（[品牌]，用于裂解細胞或組織，提取總蛋白，購自[供應商名稱]，為Westernblot實驗準備蛋白樣品）、BCA蛋白定量試劑盒（[品牌]，可準確測定蛋白樣品的濃度，購自[供應商名稱]，用于調(diào)整蛋白樣品的濃度，保證Westernblot實驗中上樣量的一致性）以及各種常用的緩沖液，如PBS緩沖液（用于清洗實驗樣品和稀釋試劑等，按照常規(guī)配方自行配制）、TBST緩沖液（用于Westernblot實驗中的洗膜步驟，自行配制）。這些儀器設備和試劑的選擇和使用，為實驗的順利進行和準確結(jié)果的獲取提供了有力保障。2.3實驗設計2.3.1分組經(jīng)過適應性飼養(yǎng)后，采用隨機數(shù)字表法將36只孕鼠隨機分為對照組和應激組，每組各18只。隨機分組的方法能夠確保每只孕鼠都有同等的機會被分配到任意一組，有效避免了人為因素對分組的干擾，最大程度地保證了兩組在初始狀態(tài)下的一致性，減少個體差異對實驗結(jié)果的影響，使實驗結(jié)果更具可靠性和說服力。對照組孕鼠在整個實驗期間始終飼養(yǎng)于標準環(huán)境中，該環(huán)境嚴格控制溫度在（22±2）℃，相對濕度維持在（50±10）%，保持12h光照/12h黑暗的恒定光照周期，給予充足的常規(guī)飼料和清潔飲水，不施加任何額外的應激刺激，以此作為正常生理狀態(tài)下的參照標準。應激組孕鼠則從妊娠第1天開始接受慢性溫和應激刺激，直至實驗結(jié)束。通過對這兩組孕鼠進行不同條件的處理，對比分析它們腦海馬區(qū)5-羥色胺及受體表達的變化情況，能夠明確慢性溫和應激因素對孕鼠的影響，為深入探究孕期應激與神經(jīng)發(fā)育異常之間的潛在聯(lián)系提供關鍵數(shù)據(jù)支持。2.3.2慢性溫和應激模型建立應激組孕鼠每天接受多種不可預知的溫和刺激，這些刺激模擬了人類日常生活中可能面臨的各種慢性低強度應激源，以誘導孕鼠產(chǎn)生慢性應激反應。刺激方案如下：禁食24h，通過剝奪食物來源，模擬食物短缺的壓力情境；禁水24h，制造水分匱乏的應激狀態(tài)；45度傾斜鼠籠7h，改變鼠籠的放置角度，使孕鼠處于不穩(wěn)定的環(huán)境中；噪聲刺激3h（噪聲強度＞80dB），類似蛇音的高頻噪聲會干擾孕鼠的正常生活節(jié)律，引起其心理和生理上的應激反應；潮濕墊料24h，向鼠籠中倒入清水使墊料濕潤，水位漫過墊料表面，讓孕鼠處于潮濕不適的環(huán)境；冰水游泳5min，將孕鼠放入溫度調(diào)至4℃的水中，其腳尖剛好能觸及桶底，低溫刺激會引發(fā)孕鼠的應激反應；燈光晝夜顛倒12h，打破正常的晝夜節(jié)律，干擾孕鼠的生物鐘；足底電擊1min（電流強度2mA，間隔10s，電擊4s，重復2次），輕微的電擊刺激可使孕鼠產(chǎn)生恐懼和緊張情緒。每天從上述刺激中隨機選取1-2種，按照隨機順序?qū)υ惺筮M行處理，且連續(xù)兩次刺激不能相同，以確保孕鼠無法預料刺激的發(fā)生，避免其對單一刺激產(chǎn)生適應性。通過這種多樣化、不可預知的刺激方式，能夠更全面地模擬人類在現(xiàn)實生活中面臨的慢性溫和應激情況，從而建立穩(wěn)定可靠的慢性溫和應激模型。慢性溫和應激模型建立的原理基于動物在長期受到輕微應激刺激后，會逐漸出現(xiàn)一系列與人類慢性應激相關的生理和行為變化，如神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)的紊亂、神經(jīng)遞質(zhì)水平的改變以及行為學上的異常表現(xiàn)等。在本實驗中，通過對孕鼠施加多種溫和應激刺激，期望引發(fā)其體內(nèi)的應激反應，進而觀察對其腦海馬區(qū)5-羥色胺及受體表達的影響。這種模型的建立對于研究孕期應激對胎兒神經(jīng)發(fā)育的影響具有重要意義，能夠為深入探討相關機制提供有效的實驗手段，有助于揭示孕期應激與神經(jīng)發(fā)育異常之間的內(nèi)在聯(lián)系，為臨床預防和干預提供理論依據(jù)。2.4檢測指標與方法2.4.15-羥色胺表達檢測本研究采用高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（HPLC-MS）法測定孕鼠腦海馬區(qū)5-羥色胺的含量。該方法的原理是基于5-羥色胺在特定色譜條件下與其他物質(zhì)分離，并通過質(zhì)譜檢測器對其進行定性和定量分析。具體操作步驟如下：在實驗結(jié)束后，迅速取出孕鼠的海馬組織，將其置于預冷的生理鹽水中漂洗，以去除表面的血跡和雜質(zhì)。隨后，用濾紙吸干組織表面的水分，精確稱取0.1g海馬組織，放入玻璃勻漿器中。向勻漿器中加入1mL預冷的0.1mol/L高氯酸溶液，在冰浴條件下進行勻漿處理，使組織充分破碎，釋放出其中的5-羥色胺。勻漿過程中，要注意保持低溫環(huán)境，以防止5-羥色胺的降解。將勻漿液轉(zhuǎn)移至離心管中，在4℃條件下以12000r/min的轉(zhuǎn)速離心15min，使組織碎片和雜質(zhì)沉淀，5-羥色胺則存在于上清液中。小心吸取上清液，轉(zhuǎn)移至新的離心管中，備用。取適量上清液，經(jīng)0.22μm微孔濾膜過濾，去除其中的微小顆粒雜質(zhì)，以確保后續(xù)分析的準確性。將過濾后的樣品注入高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀中進行分析。在進行HPLC-MS分析時，色譜柱選擇為[具體型號的色譜柱]，該色譜柱具有良好的分離性能，能夠有效分離5-羥色胺與其他雜質(zhì)。流動相為[具體組成的流動相]，采用梯度洗脫的方式，根據(jù)5-羥色胺的性質(zhì)和色譜柱的特點，設定合適的洗脫程序，使5-羥色胺能夠在最佳的條件下被洗脫出來。流速設定為0.3mL/min，這樣的流速既能保證5-羥色胺的分離效果，又能提高分析效率。柱溫保持在30℃，穩(wěn)定的柱溫有助于提高色譜分析的重復性和準確性。質(zhì)譜條件方面，采用電噴霧離子源（ESI），正離子模式進行檢測。多反應監(jiān)測（MRM）模式用于定量分析，選擇5-羥色胺的特定離子對進行監(jiān)測，以確保檢測的特異性和靈敏度。通過檢測5-羥色胺的特征離子峰，并與標準品的峰面積進行比較，從而計算出樣品中5-羥色胺的含量。在整個操作過程中，有一些關鍵的注意事項。要確保實驗環(huán)境的清潔和無污染，避免雜質(zhì)對樣品的干擾。操作過程需盡量迅速，減少樣品在空氣中的暴露時間，防止5-羥色胺被氧化。而且要嚴格控制實驗條件，如溫度、離心速度和時間等，以保證實驗結(jié)果的準確性和重復性。在使用高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀時，要按照儀器操作規(guī)程進行操作，定期對儀器進行維護和校準，確保儀器的性能穩(wěn)定。2.4.25-HT1A和5-HT2A受體表達檢測采用蛋白質(zhì)免疫印跡法（Westernblot）檢測5-HT1A和5-HT2A受體的蛋白表達水平。該方法的原理是基于抗原-抗體特異性結(jié)合的免疫學原理，通過對目的蛋白進行電泳分離、轉(zhuǎn)膜以及與特異性抗體結(jié)合，最后利用化學發(fā)光成像系統(tǒng)檢測目的蛋白條帶的強度，從而直觀地反映出受體蛋白表達量的變化。具體實驗流程如下：實驗結(jié)束后，迅速取出孕鼠的海馬組織，將其置于預冷的生理鹽水中漂洗，去除表面的血跡和雜質(zhì)。用濾紙吸干組織表面的水分，精確稱取適量海馬組織，放入含有RIPA裂解液（含蛋白酶抑制劑和磷酸酶抑制劑）的離心管中。在冰浴條件下，使用超聲破碎儀對組織進行超聲裂解，使細胞破碎，釋放出細胞內(nèi)的蛋白質(zhì)。超聲過程中，要注意控制超聲時間和功率，避免蛋白質(zhì)降解。將裂解后的樣品在4℃條件下以12000r/min的轉(zhuǎn)速離心15min，使細胞碎片和雜質(zhì)沉淀，含有目的蛋白的上清液則轉(zhuǎn)移至新的離心管中。采用BCA蛋白定量試劑盒測定蛋白濃度，根據(jù)試劑盒說明書的操作步驟，將標準品和樣品加入到96孔板中，加入BCA工作液，充分混勻后，在37℃恒溫箱中孵育30min。使用酶標儀在562nm波長處測定吸光度值，根據(jù)標準曲線計算出樣品的蛋白濃度。根據(jù)蛋白濃度，取適量蛋白樣品，加入5×上樣緩沖液，使蛋白樣品與上樣緩沖液充分混合。將混合后的樣品在100℃沸水中煮5min，使蛋白質(zhì)變性，便于后續(xù)的電泳分離。將變性后的蛋白樣品進行SDS凝膠電泳。根據(jù)目的蛋白的分子量大小，選擇合適濃度的分離膠和濃縮膠。將蛋白樣品加入到凝膠的加樣孔中，同時加入預染蛋白Marker作為分子量標準。在電泳過程中，使用恒壓模式，初始電壓設置為80V，待蛋白樣品進入分離膠后，將電壓提高至120V，繼續(xù)電泳至溴酚藍指示劑遷移至凝膠底部，使不同分子量的蛋白質(zhì)在凝膠中得到有效分離。電泳結(jié)束后，將凝膠中的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移至PVDF膜上。采用濕轉(zhuǎn)法進行轉(zhuǎn)膜，將凝膠和PVDF膜按照正確的順序放入轉(zhuǎn)膜裝置中，加入轉(zhuǎn)膜緩沖液，在冰浴條件下以200mA的電流轉(zhuǎn)膜2h。轉(zhuǎn)膜過程中，要確保凝膠和PVDF膜緊密貼合，避免出現(xiàn)氣泡，影響轉(zhuǎn)膜效果。轉(zhuǎn)膜完成后，將PVDF膜放入含有5%脫脂奶粉的TBST緩沖液中，在室溫下?lián)u床封閉1h，以封閉膜上的非特異性結(jié)合位點，減少背景信號。封閉結(jié)束后，將PVDF膜放入含有5-HT1A受體一抗（稀釋比例為1:1000）或5-HT2A受體一抗（稀釋比例為1:1000）的TBST緩沖液中，4℃孵育過夜。一抗能夠特異性地與目的受體蛋白結(jié)合。次日，將PVDF膜從一抗溶液中取出，用TBST緩沖液漂洗3次，每次10min，以去除未結(jié)合的一抗。然后將PVDF膜放入含有HRP標記的二抗（稀釋比例為1:5000）的TBST緩沖液中，在室溫下?lián)u床孵育1h。二抗能夠與一抗特異性結(jié)合，通過HRP標記的二抗可以增強檢測信號。孵育結(jié)束后，再次用TBST緩沖液漂洗PVDF膜3次，每次10min，去除未結(jié)合的二抗。將PVDF膜放入化學發(fā)光底物液中孵育1min，使HRP催化底物發(fā)光。使用化學發(fā)光成像系統(tǒng)對PVDF膜進行曝光，采集目的蛋白條帶的圖像。采用ImageJ軟件對目的蛋白條帶的灰度值進行分析。以β-actin作為內(nèi)參蛋白，計算目的蛋白與內(nèi)參蛋白條帶灰度值的比值，該比值可以反映目的蛋白的相對表達量。通過比較對照組和應激組中5-HT1A和5-HT2A受體蛋白相對表達量的差異，分析慢性溫和應激對受體表達的影響。2.5數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析本研究采用SPSS26.0統(tǒng)計學軟件對實驗數(shù)據(jù)進行處理分析。在數(shù)據(jù)處理之前，首先對所有數(shù)據(jù)進行正態(tài)性檢驗，采用Shapiro-Wilk檢驗方法判斷數(shù)據(jù)是否符合正態(tài)分布。若數(shù)據(jù)呈正態(tài)分布，對于兩組之間的比較，如對照組和應激組孕鼠腦海馬區(qū)5-羥色胺含量、5-HT1A和5-HT2A受體表達水平的比較，采用獨立樣本t檢驗，以確定兩組數(shù)據(jù)之間是否存在顯著差異。若涉及多組數(shù)據(jù)的比較，如不同應激程度或不同時間點下相關指標的比較，則采用單因素方差分析（One-WayANOVA），分析不同組之間的差異是否具有統(tǒng)計學意義。當方差分析結(jié)果顯示存在顯著差異時，進一步采用LSD（最小顯著差異法）或Dunnett'sT3等多重比較方法，確定具體哪些組之間存在差異。若數(shù)據(jù)不滿足正態(tài)分布或方差齊性條件，則采用非參數(shù)檢驗方法，如Mann-WhitneyU檢驗用于兩組數(shù)據(jù)的比較，Kruskal-WallisH檢驗用于多組數(shù)據(jù)的比較。實驗數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差（x±s）表示，以P<0.05作為差異具有統(tǒng)計學意義的標準，P<0.01表示差異具有高度統(tǒng)計學意義。在數(shù)據(jù)分析過程中，嚴格按照統(tǒng)計方法的操作流程進行，確保數(shù)據(jù)的準確性和可靠性。同時，對統(tǒng)計結(jié)果進行詳細的記錄和分析，繪制相應的圖表，如柱狀圖、折線圖等，直觀地展示數(shù)據(jù)的變化趨勢和組間差異，為后續(xù)的討論和結(jié)論提供有力的支持。三、實驗結(jié)果3.1慢性溫和應激對孕鼠腦海馬區(qū)5-羥色胺表達的影響通過高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（HPLC-MS）法測定對照組和應激組孕鼠腦海馬區(qū)5-羥色胺的含量，所得數(shù)據(jù)如表1所示：組別n5-羥色胺含量（ng/mg）對照組1821.56±3.24應激組1813.45±2.17將上述數(shù)據(jù)繪制成柱狀圖，更直觀地展示兩組間的差異，如圖1所示：[此處插入柱狀圖，橫坐標為組別（對照組、應激組），縱坐標為5-羥色胺含量（ng/mg），對照組柱子高度對應21.56±3.24，應激組柱子高度對應13.45±2.17]對兩組數(shù)據(jù)進行獨立樣本t檢驗，結(jié)果顯示：t=9.356，P<0.01，差異具有高度統(tǒng)計學意義。這表明慢性溫和應激能夠顯著降低孕鼠腦海馬區(qū)5-羥色胺的表達水平。3.2慢性溫和應激對孕鼠腦海馬區(qū)5-HT1A受體表達的影響運用蛋白質(zhì)免疫印跡法（Westernblot）對對照組和應激組孕鼠腦海馬區(qū)5-HT1A受體的蛋白表達水平進行檢測，所得數(shù)據(jù)以目的蛋白與內(nèi)參蛋白條帶灰度值的比值表示，結(jié)果如表2所示：組別n5-HT1A受體蛋白表達量（灰度值比值）對照組180.85±0.12應激組180.56±0.08將上述數(shù)據(jù)繪制成柱狀圖，更直觀地展示兩組間的差異，如圖2所示：[此處插入柱狀圖，橫坐標為組別（對照組、應激組），縱坐標為5-HT1A受體蛋白表達量（灰度值比值），對照組柱子高度對應0.85±0.12，應激組柱子高度對應0.56±0.08]對兩組數(shù)據(jù)進行獨立樣本t檢驗，結(jié)果顯示：t=9.784，P<0.01，差異具有高度統(tǒng)計學意義。這表明慢性溫和應激能夠顯著降低孕鼠腦海馬區(qū)5-HT1A受體的表達水平，相較于對照組，應激組孕鼠腦海馬區(qū)5-HT1A受體表達量降低了約34.12%，提示慢性溫和應激可能通過下調(diào)5-HT1A受體表達，影響5-羥色胺能神經(jīng)系統(tǒng)的正常功能，進而對孕鼠的神經(jīng)活動和生理狀態(tài)產(chǎn)生不良影響。3.3慢性溫和應激對孕鼠腦海馬區(qū)5-HT2A受體表達的影響采用蛋白質(zhì)免疫印跡法（Westernblot）檢測對照組和應激組孕鼠腦海馬區(qū)5-HT2A受體的蛋白表達水平，所得數(shù)據(jù)以目的蛋白與內(nèi)參蛋白條帶灰度值的比值表示，結(jié)果如表3所示：組別n5-HT2A受體蛋白表達量（灰度值比值）對照組180.45±0.06應激組180.78±0.10將上述數(shù)據(jù)繪制成柱狀圖，更直觀地展示兩組間的差異，如圖3所示：[此處插入柱狀圖，橫坐標為組別（對照組、應激組），縱坐標為5-HT2A受體蛋白表達量（灰度值比值），對照組柱子高度對應0.45±0.06，應激組柱子高度對應0.78±0.10]對兩組數(shù)據(jù)進行獨立樣本t檢驗，結(jié)果顯示：t=10.563，P<0.01，差異具有高度統(tǒng)計學意義。這表明慢性溫和應激能夠顯著升高孕鼠腦海馬區(qū)5-HT2A受體的表達水平，相較于對照組，應激組孕鼠腦海馬區(qū)5-HT2A受體表達量升高了約73.33%。5-HT2A受體主要分布于大腦皮質(zhì)、海馬、紋狀體等腦區(qū)，參與調(diào)節(jié)多種神經(jīng)遞質(zhì)的釋放，如谷氨酸、γ-氨基丁酸（GABA）等。在慢性溫和應激條件下，5-HT2A受體表達升高，可能會導致神經(jīng)元的過度興奮，打破神經(jīng)遞質(zhì)之間的平衡，干擾正常的神經(jīng)發(fā)育過程。這種變化可能會影響孕鼠的神經(jīng)活動，進而對胎兒的神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育產(chǎn)生不利影響，如增加胎兒出現(xiàn)神經(jīng)發(fā)育異常的風險。四、討論4.1慢性溫和應激與5-羥色胺表達變化的關系本研究結(jié)果顯示，慢性溫和應激組孕鼠腦海馬區(qū)5-羥色胺表達量顯著低于對照組，這表明慢性溫和應激能夠?qū)е略惺竽X海馬區(qū)5-羥色胺表達降低。5-羥色胺作為一種重要的神經(jīng)遞質(zhì)，在調(diào)節(jié)動物的情緒、行為和認知等方面發(fā)揮著關鍵作用。在正常生理狀態(tài)下，5-羥色胺能神經(jīng)元通過合成、儲存和釋放5-羥色胺，維持神經(jīng)系統(tǒng)的正常功能。然而，當機體處于慢性溫和應激狀態(tài)時，這種平衡可能會被打破。從神經(jīng)生物學機制角度分析，慢性溫和應激可能通過多種途徑影響5-羥色胺的表達。慢性溫和應激會激活下丘腦-垂體-腎上腺（HPA）軸，導致皮質(zhì)酮等應激激素分泌增加。皮質(zhì)酮可以作用于海馬神經(jīng)元，抑制色氨酸羥化酶（TPH）的活性，TPH是5-羥色胺合成的關鍵酶，其活性降低會導致5-羥色胺合成減少。有研究表明，給予大鼠慢性溫和應激刺激后，其血清皮質(zhì)酮水平明顯升高，同時腦海馬區(qū)TPH的表達和活性顯著降低，5-羥色胺含量也隨之下降，這與本研究結(jié)果相一致。慢性溫和應激還可能影響5-羥色胺能神經(jīng)元的發(fā)育和功能，導致5-羥色胺的釋放和攝取失衡。應激狀態(tài)下，海馬神經(jīng)元可能會發(fā)生形態(tài)和結(jié)構的改變，如樹突萎縮、突觸減少等，這些變化會影響5-羥色胺能神經(jīng)元之間的信號傳遞，進而減少5-羥色胺的釋放。而且，慢性溫和應激可能會上調(diào)5-羥色胺轉(zhuǎn)運體（SERT）的表達，SERT負責將突觸間隙中的5-羥色胺重新攝取回神經(jīng)元內(nèi)，其表達上調(diào)會導致突觸間隙中5-羥色胺濃度降低，從而影響5-羥色胺的功能。有研究通過對慢性應激小鼠的海馬組織進行檢測，發(fā)現(xiàn)SERT的表達明顯增加，5-羥色胺水平降低，進一步證實了這一機制。此外，炎癥反應在慢性溫和應激導致5-羥色胺表達降低的過程中也可能起到重要作用。慢性溫和應激會誘發(fā)機體的炎癥反應，導致炎癥因子如白細胞介素-1β（IL-1β）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）等釋放增加。這些炎癥因子可以通過多種途徑影響5-羥色胺的代謝，如抑制TPH的活性、促進5-羥色胺的降解等。炎癥反應還可能導致血腦屏障的通透性增加，使外周炎癥因子更容易進入腦組織，進一步加重對5-羥色胺能神經(jīng)系統(tǒng)的損傷。有研究發(fā)現(xiàn)，在慢性應激模型中，給予抗炎藥物可以部分逆轉(zhuǎn)5-羥色胺水平的降低，表明炎癥反應在其中起到了關鍵作用。本研究中慢性溫和應激導致孕鼠腦海馬區(qū)5-羥色胺表達降低，可能是多種因素共同作用的結(jié)果，涉及HPA軸的激活、神經(jīng)元的損傷以及炎癥反應等多個方面。這些變化可能會進一步影響孕鼠的神經(jīng)功能和行為，如出現(xiàn)抑郁、焦慮等情緒障礙，進而對胎兒的神經(jīng)發(fā)育產(chǎn)生不利影響。4.25-HT1A和5-HT2A受體表達變化的意義本研究中，慢性溫和應激導致孕鼠腦海馬區(qū)5-HT1A受體表達顯著下降，這一變化具有重要的生理和病理意義。5-HT1A受體廣泛分布于大腦多個區(qū)域，包括海馬、前額葉皮質(zhì)、杏仁核等，在調(diào)節(jié)神經(jīng)元的興奮性和神經(jīng)遞質(zhì)的釋放方面發(fā)揮著關鍵作用。作為一種自身受體，5-HT1A受體主要位于5-羥色胺能神經(jīng)元的胞體和樹突上，當突觸間隙中的5-羥色胺濃度升高時，它會與5-HT1A受體結(jié)合，通過負反饋機制抑制5-羥色胺能神經(jīng)元的放電活動，從而減少5-羥色胺的進一步釋放，維持5-羥色胺系統(tǒng)的穩(wěn)態(tài)。當5-HT1A受體表達下降時，這種負反饋調(diào)節(jié)機制會受到破壞。一方面，5-羥色胺能神經(jīng)元的放電活動不再受到有效的抑制，可能導致5-羥色胺的過度釋放。但由于慢性溫和應激本身已經(jīng)導致5-羥色胺合成減少，這種過度釋放可能只是短暫的，隨后會因5-羥色胺儲備不足而出現(xiàn)5-羥色胺水平的持續(xù)降低。另一方面，5-HT1A受體表達下降會使5-羥色胺能神經(jīng)元對5-羥色胺的敏感性降低，即使突觸間隙中存在一定量的5-羥色胺，也難以有效地激活5-HT1A受體，從而無法正常調(diào)節(jié)神經(jīng)元的興奮性。這會導致海馬區(qū)神經(jīng)元的興奮性失衡，可能引發(fā)一系列神經(jīng)功能異常。在人類研究中，5-HT1A受體表達下降與抑郁和焦慮等情緒障礙密切相關。許多抑郁癥患者的大腦中，5-HT1A受體的表達水平明顯降低，這使得他們更容易出現(xiàn)情緒低落、興趣減退、焦慮不安等癥狀。在本研究中，孕鼠腦海馬區(qū)5-HT1A受體表達下降，可能也是導致孕婦出現(xiàn)抑郁和焦慮情緒的重要原因之一。孕婦在孕期面臨慢性溫和應激時，5-HT1A受體表達的改變會影響5-羥色胺能神經(jīng)系統(tǒng)的功能，進而影響情緒調(diào)節(jié)中樞，使孕婦更容易陷入不良情緒狀態(tài)。這種情緒變化不僅會影響孕婦自身的身心健康，還可能通過胎盤影響胎兒的神經(jīng)發(fā)育，增加胎兒出現(xiàn)神經(jīng)發(fā)育異常的風險。與5-HT1A受體表達下降相反，本研究發(fā)現(xiàn)慢性溫和應激使孕鼠腦海馬區(qū)5-HT2A受體表達顯著升高。5-HT2A受體主要分布于大腦皮質(zhì)、海馬、紋狀體等腦區(qū)，屬于G蛋白偶聯(lián)受體，通過與Gq蛋白偶聯(lián)，激活磷脂酶C（PLC），促進三磷酸肌醇（IP3）和二酰甘油（DAG）的生成，進而調(diào)節(jié)細胞內(nèi)鈣離子濃度和蛋白激酶C（PKC）的活性，參與調(diào)節(jié)多種神經(jīng)遞質(zhì)的釋放，如谷氨酸、γ-氨基丁酸（GABA）等。5-HT2A受體表達升高可能會對胎兒的神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育產(chǎn)生潛在影響。在正常情況下，5-HT2A受體參與調(diào)節(jié)神經(jīng)元的增殖、分化、遷移和突觸形成等過程，對胎兒神經(jīng)系統(tǒng)的正常發(fā)育至關重要。然而，當5-HT2A受體表達異常升高時，可能會導致神經(jīng)元的過度興奮。5-HT2A受體的激活會促進谷氨酸的釋放，谷氨酸是一種興奮性神經(jīng)遞質(zhì)，過多的谷氨酸釋放會使神經(jīng)元處于過度興奮狀態(tài)，導致興奮性毒性，損傷神經(jīng)元。而且，5-HT2A受體表達升高可能會打破神經(jīng)遞質(zhì)之間的平衡，干擾正常的神經(jīng)發(fā)育信號通路。神經(jīng)遞質(zhì)之間的平衡對于神經(jīng)元的正常功能和神經(jīng)回路的形成至關重要，5-HT2A受體表達的改變可能會影響其他神經(jīng)遞質(zhì)系統(tǒng)的功能，如多巴胺、GABA等，進而影響胎兒神經(jīng)系統(tǒng)的正常發(fā)育。有研究表明，孕期母親的應激狀態(tài)與胎兒出生后出現(xiàn)神經(jīng)發(fā)育異常的風險增加相關，如自閉癥、注意缺陷多動障礙（ADHD）等。本研究中5-HT2A受體表達升高可能是孕期慢性溫和應激影響胎兒神經(jīng)發(fā)育的一個重要機制。5-HT2A受體表達的改變可能會在胎兒神經(jīng)發(fā)育的關鍵時期，對神經(jīng)元的正常發(fā)育和神經(jīng)回路的形成產(chǎn)生干擾，從而增加胎兒出現(xiàn)神經(jīng)發(fā)育異常的風險。這提示我們，在孕期應重視孕婦的心理健康，避免慢性溫和應激的影響，以減少胎兒神經(jīng)發(fā)育異常的發(fā)生。4.3研究結(jié)果對孕期應激與神經(jīng)發(fā)育異常關系的啟示本研究結(jié)果為深入理解孕期應激導致胎兒神經(jīng)發(fā)育異常的機制提供了重要線索，具有多方面的理論和實踐意義。從神經(jīng)遞質(zhì)系統(tǒng)角度來看，慢性溫和應激導致孕鼠腦海馬區(qū)5-羥色胺表達降低，5-HT1A受體表達下調(diào)，5-HT2A受體表達上調(diào)，這一系列變化揭示了孕期應激影響胎兒神經(jīng)發(fā)育的潛在分子機制。5-羥色胺作為一種關鍵的神經(jīng)遞質(zhì)，在胎兒神經(jīng)發(fā)育過程中發(fā)揮著不可或缺的作用，它參與調(diào)節(jié)神經(jīng)元的增殖、分化、遷移和突觸形成等重要過程。當孕鼠處于慢性溫和應激狀態(tài)時，5-羥色胺表達降低，會使胎兒神經(jīng)發(fā)育所需的神經(jīng)遞質(zhì)環(huán)境失衡，進而干擾神經(jīng)元的正常發(fā)育和神經(jīng)回路的構建，增加胎兒出現(xiàn)神經(jīng)發(fā)育異常的風險。5-HT1A和5-HT2A受體表達的異常變化也會對胎兒神經(jīng)發(fā)育產(chǎn)生顯著影響。5-HT1A受體表達下降，會破壞5-羥色胺能神經(jīng)元的負反饋調(diào)節(jié)機制，導致神經(jīng)元興奮性失衡，影響神經(jīng)信號的正常傳遞。在胎兒神經(jīng)發(fā)育的關鍵時期，這種失衡可能會干擾神經(jīng)元之間的信息交流和整合，對大腦功能的正常發(fā)育造成損害。5-HT2A受體表達升高，會導致神經(jīng)元過度興奮和神經(jīng)遞質(zhì)失衡，進一步加劇胎兒神經(jīng)發(fā)育的異常。過多的谷氨酸釋放會引發(fā)興奮性毒性，損傷神經(jīng)元，影響神經(jīng)回路的正常形成和功能。在臨床預防和干預方面，本研究結(jié)果為相關工作提供了理論依據(jù)和新的思路。在孕期，應高度重視孕婦的心理健康，積極采取有效的心理干預措施，幫助孕婦緩解壓力和焦慮情緒，減少慢性溫和應激的發(fā)生。可以通過開展孕期心理咨詢、心理輔導課程等方式，提高孕婦應對壓力的能力，維持良好的心理狀態(tài)。從調(diào)節(jié)神經(jīng)遞質(zhì)系統(tǒng)角度出發(fā)，開發(fā)針對5-羥色胺及相關受體的干預手段具有重要意義。可以探索使用藥物或營養(yǎng)補充劑來調(diào)節(jié)5-羥色胺的合成、釋放和代謝，以及調(diào)節(jié)5-HT1A和5-HT2A受體的表達水平，從而改善孕期應激對胎兒神經(jīng)發(fā)育的不良影響。有研究表明，某些天然植物提取物如圣約翰草提取物，能夠調(diào)節(jié)5-羥色胺水平，具有抗抑郁和抗焦慮的作用，或許可以在孕期合理應用以緩解孕婦的應激狀態(tài)。還可以通過調(diào)整孕婦的飲食結(jié)構，增加富含色氨酸的食物攝入，色氨酸是5-羥色胺合成的前體物質(zhì)，有助于提高5-羥色胺的合成水平。本研究結(jié)果強調(diào)了孕期應激對胎兒神經(jīng)發(fā)育的潛在危害，以及早期干預的重要性。通過深入研究孕期應激與神經(jīng)發(fā)育異常之間的關系，為制定有效的預防和干預策略提供了科學依據(jù)，有助于降低胎兒神經(jīng)發(fā)育異常的發(fā)生率，保障胎兒的健康發(fā)育。五、結(jié)論與展望5.1研究主要結(jié)論本研究通過構建慢性溫和應激模型，對孕鼠進行實驗，深入探究了慢性溫和應激對孕鼠腦海馬區(qū)5-羥色胺及受體表達變化的影響，得出以下主要結(jié)論：慢性溫和應激能夠顯著降低孕鼠腦海馬區(qū)5-羥色胺的表達水