本章主要內(nèi)容

核苷酸

DNA

RNA

核酸性質(zhì)

第1頁認識核酸在生命科學(xué)上主要性搞清堿基、核苷、核苷酸和核酸分子結(jié)構(gòu)上關(guān)系掌握核酸化學(xué)本質(zhì)及DNA和RNA在組分、結(jié)構(gòu)和功效上差異認識核酸結(jié)構(gòu)與其性質(zhì)與功效之間關(guān)系。學(xué)習(xí)要求第2頁1869年F.Miescher首先從傷員繃帶膿細胞中分離得到稱為“核素”核酸1944年O.N.Avery經(jīng)過轉(zhuǎn)化試驗證實DNA是主要遺傳物質(zhì)1953年J.D.Watson和F.H.C.Crick提出DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)模型1958年Crick提出遺傳信息傳遞中心法則1970年,建立DNA重組技術(shù)1980年后,分子生物學(xué)、分子遺傳學(xué)等學(xué)科突飛猛進發(fā)展，提出并完成HGP.核酸化學(xué)發(fā)展過程第3頁

一、概述

概念

核酸(nucleicacid)是由堿基（嘌呤和嘧啶）、戊糖和磷酸組成高分子物質(zhì)，是生物體基本組成。種類：

DNA（脫氧核糖核酸）RNA（核糖核酸）第4頁

“四核苷酸假說”：核酸由四種核苷酸組成單體組成，缺乏結(jié)構(gòu)方面多樣性,不大可能有主要生理功效。1944年，Avery等人肺炎雙球菌轉(zhuǎn)化試驗證實核酸是生命遺傳基礎(chǔ)物質(zhì)。

1952年，Hershey和ChaseT2噬菌體侵染試驗徹底證實遺傳物質(zhì)是核酸，而不是蛋白質(zhì)。第5頁1928年，英國S型肺炎球菌：有莢膜，菌落表面光滑R型肺炎球菌：沒有莢膜，菌落表面粗糙

著名肺炎球菌試驗

結(jié)果說明？第6頁結(jié)果說明：加熱殺死S型肺炎球菌中一定有某種特殊生物分子或遺傳物質(zhì)，能夠使無害R型肺炎球菌轉(zhuǎn)化為有害S型肺炎球菌這種生物分子或遺傳物質(zhì)是什么呢？

著名肺炎球菌試驗

紐約洛克非勒研究所Avery從加熱殺死S型肺炎球菌將蛋白質(zhì)、核酸、多糖、脂類分離出來，分別加入到無害R型肺炎球菌中，結(jié)果發(fā)覺，惟獨只有核酸能夠使無害R型肺炎球菌轉(zhuǎn)化為有害S型肺炎球菌。1944年結(jié)論：DNA是生命遺傳物質(zhì)第7頁侵染DNA注射進細胞蛋白質(zhì)外殼DNA噬菌體大腸桿菌噬菌體侵染試驗第8頁第9頁分布：

DNA：主要在細胞核中，是染色體主要成份。另外在線粒體、葉綠體.

RNA：主要在細胞質(zhì)中，另外在線粒體、細胞核——核仁；第10頁二、核酸組成成份

核酸是一個線形多聚核苷酸(polynucleotide),其基本結(jié)構(gòu)單位是核苷酸(nucleotide)。戊糖

堿基磷酸

核苷核苷酸核酸

第11頁核苷酸基

本結(jié)構(gòu)第12頁（一）核酸中戊糖D-核糖（D-ribose）D-脫氧核糖（D-deoxyribose）核酸據(jù)此分類：脫氧核糖——DNA；核糖——RNA；核酸中戊糖均為β-D-型核苷酸第13頁從兩類核酸水解產(chǎn)物可看到它們組成差異?第14頁（二）堿基尿嘧啶胸腺嘧啶胞嘧啶核酸中堿基分兩類：1、嘧啶堿(pyrimidine)：是嘧啶衍生物。第15頁NNHHHH嘧啶123456NNHHHHNH2OH胞嘧啶Cytosine（C）NNHHHHOOHH尿嘧啶uracil（U）NNHHHHOOHHCH3胸腺嘧啶thymine（T）第16頁2、嘌呤堿(purine)：由嘌呤衍生而來。第17頁NNNNHHHHNNNNHHHH123456789嘌呤NH2腺嘌呤adenine（A）NNNNHHHHOH2N鳥嘌呤guanine（G）第18頁3、稀有堿基：

一些修飾堿基，因含量甚少而稱之。大多為甲基化堿基，多在tRNA中。

第19頁（三）核苷：

(nucleoside)

核苷：戊糖與堿基縮合而成，并以糖苷鍵相連接。糖苷鍵：

二者連接是C-N鍵，稱N-糖苷鍵。第20頁OHOH2COHOHOH1′2′3′4′5′核糖NNNNHHHH9腺嘌呤腺苷第21頁OHOH2COHOHOH1′2′3′4′5′核糖OHOH2COHOH1′2′3′4′5′核糖NNOOHHH尿嘧啶H1尿苷NCOONHHH51OH假尿苷（ψ）第22頁核苷表示：核苷：A、G、C、U脫氧核苷：dA,dG,dC,dT修飾核苷：如5-甲基脫氧胞嘧啶：m5dC。第23頁脫氧核糖核酸和核糖核酸異同對比RNADNA組成戊糖核糖脫氧核糖堿基A,G,CA,G,CUT磷酸Pi(磷酸二酯鍵)Pi(磷酸二酯鍵)結(jié)構(gòu)單鏈，部分堿基互補，局部雙螺旋，三葉草形等雙鏈，堿基互補，雙螺旋形分布細胞核(核仁)，細胞質(zhì)(線粒體、核蛋白體、胞液)細胞核(染色質(zhì))細胞質(zhì)(線粒體)生物功效遺傳信息表示，反轉(zhuǎn)錄，直接參加蛋白質(zhì)生物合成遺傳物質(zhì)基礎(chǔ)，負責(zé)遺傳信息貯存，公布，轉(zhuǎn)錄第24頁（四）核苷酸(nucleotide，nt)1、種類：1）按酯化位點：可在核糖2’-,3’-,5’-；2）按核糖類型：

核苷酸、脫氧核苷酸核苷中戊糖羥基被磷酸酯化，即為核苷酸。第25頁2、結(jié)構(gòu)：第26頁3、表示：與一個磷酸結(jié)合——MP：(d)AMP、(d)GMP、(d)CMP、(d)TMP、UMP與二個磷酸結(jié)合——DP：如：ADP與三個磷酸結(jié)合——TP：如：ATP

核苷酸第27頁4、特殊核苷酸：環(huán)核苷酸：核糖3’-,5’-成環(huán)。

cAMP、cGMP功效：第二信使，激素、一些藥品、神經(jīng)遞質(zhì)經(jīng)過其發(fā)揮生理作用。核苷酸第28頁核苷酸衍生物

環(huán)化磷酸化cAMPcGMP第29頁核苷酸衍生物

5’-IMP

5’-肌苷酸(5’-次黃嘌呤核苷酸)5’-GMP第30頁（五）核苷酸連接方式1、3’-,5’磷酸二酯鍵將核苷酸連接成核酸大分子。一、核苷酸第31頁2、核酸一級結(jié)構(gòu)：

多核苷酸鏈中各核苷酸殘基排列次序。第32頁OHO-OO—CH2TO=P—O-3′5′OHOHO-OO—CH2GO=P—O-3′5′OHOO—CH2OHOHAO=P—OO-3′5′3′5′1′PPPOHATGpGpTpAOHpG-T-ApGTA1）一級結(jié)構(gòu)表示方法如上：第33頁2）讀向：

堿基序列從左到右表示5’——3’，由3’-,5’磷酸二酯鍵連接。若兩鏈反向平行，則需注明每條鏈走向。如：

5’A-T-G-C-C-T-G-A3’

3’T-A-C-G-G-A-C-T5’核苷酸第34頁三、DNA（一）DNA一級結(jié)構(gòu)：

由數(shù)量龐大4種脫氧核苷酸經(jīng)過3’-,5’磷酸二酯鍵連接成直線形或環(huán)形多聚體。第35頁（二）DNA雙螺旋二級結(jié)構(gòu)1、雙螺旋結(jié)構(gòu)模型建立依據(jù)：1）chargaff對DNA堿基組成定量分析,提出堿基配對標(biāo)準：A=T，G≡C2）依據(jù)對DNA纖維和晶體x-衍射分析。3）電位滴定證實。A=T，G≡C

DNA第36頁雙螺旋中堿基對（basepair,bp)第37頁2.雙螺旋結(jié)構(gòu)特點:(Watson-Crick模型）1）形成：兩條鏈反向平行；DNA一條鏈為另一條鏈互補鏈右手螺旋。DNA第38頁2）結(jié)構(gòu)：

A、核糖-磷酸以3’-,5’磷酸二酯鍵連接成骨架；堿基在內(nèi)；A=T，G≡C

B、大溝、小溝。DNA第39頁3）尺寸：DNAA、直徑：2nm；B、堿基距離：0.34nm；C、一周10個核苷酸；D、螺距：3.4nm。第40頁4）雙螺旋穩(wěn)定性：A、依靠堿基堆積力B、氫鍵C、離子鍵第41頁3、二級結(jié)構(gòu)構(gòu)象類型：DNAB-DNAA-DNAZ-DNA第42頁B-DNA與A-DNA第43頁幾個DNA鈉鹽特點：B-DNA：生理狀態(tài)下多為此種；92%相對濕度A-DNA：右手螺旋；75%相對濕度；生理狀態(tài)

下多見dsRNA、DNA-RNAZ-DNA：人工合成、左手螺旋；嘧啶、嘌呤交

替；有m5dC；與基因表示調(diào)控相關(guān)；另外，還發(fā)覺有C、D、E等型。第44頁(三）DNA三級結(jié)構(gòu)DNA雙螺旋深入扭曲即成三級結(jié)構(gòu)。

天然DNA有雙鏈DNA（dsDNA），

有病毒為單鏈DNA（ssDNA）

在dsDNA中：

線形分子（大多數(shù)）

環(huán)狀分子（dcDNA）：質(zhì)粒、

DNA第45頁1、超螺旋結(jié)構(gòu)特點：可將長鏈壓縮在一較小體內(nèi)；密度大；凝膠電泳中移動速度快。DNA第46頁第47頁回文結(jié)構(gòu)中單鏈可形成發(fā)夾結(jié)構(gòu)特殊DNA結(jié)構(gòu)上頁

下頁

章首

節(jié)首第48頁雙鏈回文結(jié)構(gòu)可形成十字架結(jié)構(gòu)特殊DNA結(jié)構(gòu)上頁

下頁

章首

節(jié)首第49頁DNA其它結(jié)構(gòu)

DNA三股螺旋概念是在1957年提出來，當(dāng)初有些人發(fā)覺，人工合成一條右手螺旋多聚物(A)n與另兩條右手螺旋多聚物(T)n形成三股螺旋結(jié)構(gòu)，這是分子間三股螺旋。今后有些人研究證實，聚dA鏈首先與一條聚dT鏈互補形成雙螺旋，然后，在高鹽條件下，另一條dT鏈再同雙螺旋形成三股螺旋結(jié)構(gòu)。雙螺旋結(jié)構(gòu)經(jīng)過Watson-Crick氫鍵穩(wěn)定而三股螺旋是經(jīng)過Hoogsteen氫鍵穩(wěn)定。

DNA三股螺旋結(jié)構(gòu)第50頁第51頁2、核小體中

扭曲方式在真核細胞染色質(zhì)中，DNA雙螺旋分子盤繞在組蛋白上形成核小體。許多核小體由DNA連成念珠狀結(jié)構(gòu)，再盤繞壓縮成高層次結(jié)構(gòu)———染色體。DNA第52頁真核生物：DNA和蛋白質(zhì)組裝成染色體，染色體基本單位是核小體。

核小體深入旋轉(zhuǎn)折疊形成棒狀染色體，快要1m長DNA分子容納于直徑只有數(shù)微米細胞核中。第53頁第54頁1、DNA是遺傳信息載體半保留復(fù)制確保了親代性狀傳到子代，確保了親代與子代相同性。DNA（四）DNA功效第55頁2、DNA是變異物質(zhì)基礎(chǔ)變異是生物進化基礎(chǔ)。變異發(fā)生：1）DNA復(fù)制時犯錯；2）理化原因等引發(fā)堿基改變或缺失，使DNA堿基序列改變，從而發(fā)生性狀變異。DNA第56頁四、RNA（一）RNA結(jié)構(gòu)組成：4種核苷酸，有稀有堿基；連接：同DNA形成：普通以DNA為模板合成，有例外。結(jié)構(gòu)：單鏈線形分子，局部區(qū)域有雙螺旋。第57頁（二）RNA類型三種：

信使RNA（messengerRNA,mRNA)

核糖體RNA(ribosomelRNA,rRNA)

轉(zhuǎn)運RNA(transferRNA,tRNA)RNA第58頁三種RNA功效mRNA是遺傳信息攜帶者。在細胞核中轉(zhuǎn)錄DNA上遺傳信息，再進入細胞質(zhì)，蛋白質(zhì)合成模板。tRNA起識別密碼子和攜帶對應(yīng)氨基酸作用。rRNA和蛋白質(zhì)共同組成復(fù)合體就是核糖體，核糖體是蛋白質(zhì)合成場所。第59頁第60頁1、tRNA約占全部RNA15%；由70-90個核苷酸組成許各種類；沉降系數(shù)4S。RNA第61頁1）tRNA結(jié)構(gòu)：一級結(jié)構(gòu)多已清楚，含較多稀有堿基；二級結(jié)構(gòu)為三葉草有：aa臂、二氫嘧啶環(huán)、

反密碼環(huán)、可變環(huán)、TΨ環(huán)RNA第62頁主要特征：1.四臂四環(huán)；2.氨基酸臂3′端有CCAOH共有結(jié)構(gòu)；3.D環(huán)上有二氫尿嘧啶（D）；4.反密碼環(huán)上反密碼子與mRNA相互作用；5.可變環(huán)上核苷酸數(shù)目能夠變動；6.TψC環(huán)含有T和ψ；7.含有修飾堿基和不變核苷酸。第63頁tRNA三級結(jié)構(gòu)為倒L型第64頁A、在pr合成中轉(zhuǎn)運aa；B、在pr合成起始、DNA反轉(zhuǎn)錄合成及其它代謝調(diào)整中起作用。2）tRNA功效：第65頁2、mRNA和hnRNA1）合成：

以DNA為模板(核內(nèi))

合成hnRNA（含內(nèi)含子和外顯子）

加工

成熟mRNA

入細胞質(zhì)

蛋白質(zhì)合成RNA第66頁合成mRNA第67頁切除內(nèi)含子第68頁2)mRNA結(jié)構(gòu)特點：3‘末端有polyA結(jié)構(gòu)：與mRNA從核入質(zhì)相關(guān)。5‘末端有帽子結(jié)構(gòu)：G被甲基化，此可能與pro合成起始相關(guān)。第69頁3)功效：是蛋白質(zhì)合成模板第70頁3、rRNA1)占RNA總量80%，是組成核糖體骨架。2)核糖體功效：

pr合成部位.3）結(jié)構(gòu)：分大、小亞基一、二級結(jié)構(gòu)多已確定，但功效不清。RNA第71頁原核細胞：70S核糖體；真核細胞：80S核糖體；第72頁核糖體RNA自我剪切1983年在四膜蟲中發(fā)覺RNA有催化功效第73頁4、RNA功效1）在DNA復(fù)制、轉(zhuǎn)錄、翻譯中起主要調(diào)控作用；2）有催化作用；3）可作為遺傳物質(zhì)（如逆轉(zhuǎn)錄病毒）。RNA第74頁第75頁五、核酸性質(zhì)（一）普通理化性質(zhì)為兩性電解質(zhì)，通常表現(xiàn)為酸性。DNA為白色纖維狀固體，RNA為白色粉末，微溶于水，不溶于普通有機溶劑。DNA溶液粘度極高，而RNA溶液要小得多。核酸在離心力作用下，能夠從溶液中沉降下來，其沉降速度與核酸大小和密度相關(guān)。第76頁核酸溶解性質(zhì)DNA和RNA都微溶于水，不溶于乙醇、氯仿等有機溶劑。DNP溶于高濃度鹽溶液中，而RNP溶于低濃度鹽溶液。，利用這一性質(zhì)可分離DNA和RNA。第77頁

0.14摩爾法:分離DNA蛋白(DNP)和RNA(RNP)蛋白(RNP)方法DNA蛋白:在0.14mol/LNaCl溶液中溶解度最低.RNA蛋白:在0.14mol/LNaCl溶液中溶解度較大.水解性：可被酸、堿或酶水解，DNA比RNA對稀堿穩(wěn)定。第78頁核酸分子中磷酸二酯鍵可在酸、堿性和酶條件下水解切斷,結(jié)果是多核苷酸鏈被打斷,核酸被降解.

酸解酸能夠使DNA和RNA降解，酸對核酸作用因酸濃度、溫度和作用時間不一樣而不一樣。第79頁堿解

DNA和RNA對堿耐受程度有很大差異。比如，在0.1mol/LNaOH溶液中，RNA幾乎能夠完全水解，生成2′-或3′-磷酸核苷；DNA在一樣條件下則不受影響。這種水解性能上差異，與RNA核糖基上2′-OH參加作用有很大關(guān)系。在RNA水解時，2′-OH首先進攻磷酸基，在斷開磷酯鍵同時形成環(huán)狀磷酸二酯，再在堿作用形成水解產(chǎn)物。DNA在稀堿作用下，只會發(fā)生變性，不會發(fā)生磷酸二酯鍵水解。第80頁酶水解1、依據(jù)底物分類DNase、RNase；單鏈核酸酶、雙鏈核酸酶、雜合雙鏈核酸酶2、依據(jù)催化部位分類：外切核酸酶和內(nèi)切核酸酶外切酶：5′端→3′端或3′端→5′端核酸外切酶。內(nèi)切酶：限制性核酸內(nèi)切酶和非限制性核酸內(nèi)切酶。限制性核酸內(nèi)切酶(restrictionendonucleases)：能夠識別DNA分子特定核苷酸序列，并在識別位點或其周圍斷開DNA雙鏈一類核酸酶第81頁DNA限制性內(nèi)切酶細菌限制-修飾系統(tǒng)：限制性核酸內(nèi)切酶（限制酶）特異性強，可在DNA特異位點切開；

第82頁第83頁細菌堿基修飾：概念：在DNA特定短堿基序列上產(chǎn)生某專一性修飾，使得內(nèi)切酶無法識別而不能斷裂。如：修飾甲基化酶。第84頁參加DNA修復(fù)及RNA合成后剪接等主要基因復(fù)制和基因表示過程負責(zé)去除多出、結(jié)構(gòu)和功效異常核酸，同時也能夠去除侵入細胞外源性核酸在消化液中降解食物中核酸以利吸收體外重組DNA技術(shù)中主要工具酶生物體內(nèi)核酸酶負責(zé)細胞內(nèi)外催化核酸降解第85頁顏色反應(yīng)：1）核糖與濃鹽酸和苔黑酚(甲基間苯二酚)共熱呈綠色，在670nm處可測RNA；2）2-脫氧核糖與酸和二苯胺共熱呈藍紫色，在595nm處可測DNA。二種反應(yīng)可作定性試驗，定量試驗靈敏度低、準確性差，但快、簡便。核酸性質(zhì)第86頁1、一個單鏈DNA和一個單鏈RNA分子量相同，試述能夠用幾個方法將它們區(qū)分開？第87頁2.轉(zhuǎn)食品基因安全嗎？第88頁轉(zhuǎn)基因有兩派反對派：反對派道理在于轉(zhuǎn)基因抗病抗蟲功效來自于毒蛋白基因，蟲吃了是要死，人吃了怎么辦？贊成派：昆蟲死亡是因為氣孔閉塞了，但這跟人消化道完全是兩碼事?！敝虚g派：人民不是小白鼠第89頁（二）紫外吸收性質(zhì)

堿基具共軛雙鍵強烈吸收260-290nm波段紫外光，最大吸收峰在260nm附近。應(yīng)用：1、不一樣核苷酸有不一樣吸收特征，可用紫外分光光度計進行定性、定量測定。

1OD相當(dāng)于：50μg/mlDNA40μg/mlRNA

核酸性質(zhì)第90頁2、確定所提取核酸是否純品。

1）DNA：OD260/OD280≈1.8純品

2）RNA：OD260/OD280≈2.0純品

在純化DNA時,通慣用A260/A280=1.8-2.0作為純度標(biāo)準,若大于此值,表示有RNA污染;若小于此值,則有pro或酚污染.核酸性質(zhì)第91頁（三）核酸結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性1、堿基堆積力：雙螺旋內(nèi)部堿基形成疏水區(qū)；2、堿基間氫鍵：3、磷酸基與介質(zhì)中陽離子形成離子鍵核酸性質(zhì)第92頁（四）核酸變性1、變性概念1）現(xiàn)象：雙螺旋DNA和具雙螺旋區(qū)RNA氫鍵斷裂，空間結(jié)構(gòu)被破壞，形成單鏈無規(guī)則線團狀過程。核酸性質(zhì)第93頁2）結(jié)果：A、增色效應(yīng)：260nm紫外吸收增加；B、粘度下降；C、生物學(xué)性能部分或全部喪失。3）引發(fā)變性原因：溫度、pH、尿素、甲醛等。核酸性質(zhì)第94頁增色效應(yīng)DNA變性后，因為雙螺旋解體，藏于螺旋內(nèi)部堿基暴露出來，使DNAA260值升高，這種現(xiàn)象稱為增色效應(yīng)。變性DNA天然DNA第95頁2、熱變性與TmTm：在熱變性中，紫外吸收增加量達最大增量二分之一溫度，稱該DNA熔解溫度（meltingtemperature,Tm);又稱熱解鏈溫度。(G+C)%=(Tm

-69.3)*2.44核酸性質(zhì)第96頁3、影響Tm原因：1）G-C含量：Tm與G-C含量成正比。2）介質(zhì)中離子強度：離子強度低，Tm低，在純水中,DNA在室溫下即可變性。3）溶液pH.4)變性劑核酸性質(zhì)第97頁（五）核酸復(fù)性概念：變性DNA在適當(dāng)條件下（遲緩降溫），可使兩條彼此分開鏈重新締合成雙螺旋結(jié)構(gòu)過程。

復(fù)性后，許多物化性質(zhì)可得到恢復(fù)，

生物學(xué)活性部分恢復(fù)。影響原因：溫度、DNA片段大小、DNA濃度、堿基重復(fù)序列多少、離子濃度。核酸性質(zhì)第98頁DNA變性與復(fù)性第99頁減色效應(yīng)當(dāng)變性DNA經(jīng)復(fù)性又重新形成雙螺旋結(jié)構(gòu)時，其溶液A260值減小，最多可減小至變性前A260值，這種現(xiàn)象稱為減色效應(yīng)。第100頁六、分子生物學(xué)技術(shù)（一）分子雜交與探針技術(shù)1、概念：

1）分子雜交（hybrization):在退火條件下，不一樣起源DNA互補區(qū)形成氫鍵，或DNA單鏈和RNA鏈互補區(qū)形成DNA-RNA雜合雙鏈過程。DNA-DNA：DNA-RNA:分子生物學(xué)技術(shù)第101頁核酸雜交第102頁2)探針（probe)用放射性同位素或熒光標(biāo)識DNA或RNA片段.

確診病人細胞中提取DNA；病毒DNA；腫瘤組織提取DNA。分子生物學(xué)技術(shù)第103頁3）Southern印跡法分子生物學(xué)技術(shù)用于檢測DNA方法：如圖第104頁Northern印跡法：用于檢測RNANorthern印跡法：將電泳分離后RNA吸印到纖維素膜上再進行分子雜交。第105頁4）聚合酶鏈式反應(yīng)（polymeerasechainreaction,PCR)第106頁

聚合酶鏈式反應(yīng)（PCR）每一輪聚合酶鏈式反應(yīng)可使目標(biāo)基因片段增加一倍30輪循環(huán)可取得——230（1.07×109)個基因片段第107頁應(yīng)用：廣泛用于克隆、測序、產(chǎn)生特異突變、醫(yī)學(xué)診療和法醫(yī).第108頁核酸分子核苷酸序列分析是以純品核酸為材料，經(jīng)水解，測定核苷酸組成及百分比。先以外切酶確定5’-或3’-末端核苷酸，再以內(nèi)切酶將核酸鏈分為若干寡核苷酸段，分段測定核苷酸組成、百分比和序列。最終將核苷酸序列各寡核苷酸重合，確定整個核酸分子核苷酸序列。(五)核酸序列分析第109頁酶底物作用部位作用產(chǎn)物外切酶磷酸二酯酶DNA，RNA5’端，5’連接處3’核苷酸3’端，3’連接處5’核苷酸內(nèi)切酶脫氧核糖核酸酶IDNA3’連接處3’-羥核苷酸為3’末端寡核苷酸及剩下部分脫氧核糖核酸酶II5’連接處3’-核苷酸為3’末端寡核苷酸及剩下部分核糖核酸酶T1RNA5’連接處堿基是G3’-鳥苷酸為3’末端寡核苷酸及剩下部分核糖核酸酶I5’連接處堿基是Pyr3’-嘧啶類核苷酸為3’末端寡核苷酸及剩下部分核苷酸序列分析中斷裂磷酸二酯鍵用酶第110頁DNA酶法測序1977年sanger創(chuàng)造末端終止法測定DNA序列。依據(jù)sanger測序法，現(xiàn)在已經(jīng)有各種DNA自動測序儀，DNA測序速度大大加緊HGP得以提前完成第111頁DNA酶法測序第112頁DNA酶法測序平行進行四組反應(yīng)，每組反應(yīng)均使用相同模板，相同引物以及四種脫氧核苷酸；并在四組反應(yīng)中各加入適量四種之一雙脫氧核苷酸，使其隨機地接入DNA鏈中，使鏈合成終止，產(chǎn)生對應(yīng)四組含有特定長度、不一樣長短DNA鏈。這四組DNA鏈再經(jīng)過聚丙烯酸胺凝膠電泳按鏈長短分離開，經(jīng)過放射自顯影顯示