生物學生物研究實驗室研究實習報告一、摘要

2023年6月5日至8月22日，我在XX生物研究實驗室擔任助理研究員，參與細胞分化信號通路研究項目。通過8周實踐，完成對30份樣本的RNA提取實驗，平均純度達98.2%，為后續(xù)qPCR驗證提供合格材料；協(xié)助構(gòu)建并優(yōu)化了3種雙熒光素酶報告基因系統(tǒng)，使報告基因活性檢測重復性系數(shù)（RSD）降低至5.3%；運用ImageJ軟件對200張顯微圖像進行定量分析，建立細胞核形態(tài)參數(shù)數(shù)據(jù)庫，相關(guān)系數(shù)（R2）達0.89。掌握RNA提取純化檢測全流程操作規(guī)范，熟悉雙熒光素酶報告系統(tǒng)構(gòu)建方法，驗證了細胞信號通路干預的實驗可行性，形成可復用的樣本標準化處理方法論。

二、實習內(nèi)容及過程

2023年6月5日入職實驗室，我的實習目的主要是了解細胞信號通路研究的實際操作流程，并參與項目執(zhí)行。單位是XX生物研究實驗室，研究方向偏向于腫瘤細胞分化機制，實驗室有十幾個研究員和博士后，設(shè)備挺全乎，流式細胞儀、高通量測序平臺都挺新。

第13周主要熟悉環(huán)境，導師給我安排了RNA提取實驗培訓。6月12日第一次獨立操作TRIzol法提取總RNA，用了15份樣本，純度在97%99%之間，但有兩份得率低到4%，導師說可能是裂解不充分。我重新調(diào)整了試劑比例，加了一步溫和的氯仿抽提，第二次做的時候得率提到8%，純度也穩(wěn)定在98%以上。這個經(jīng)歷讓我記住了樣本均一性對結(jié)果的重要性。

第46周參與雙熒光素酶報告基因?qū)嶒灐?月25日構(gòu)建了第一個報告系統(tǒng)，用野生型JAK2基因檢測EGFR信號通路活性，但報告基因熒光值波動大，RSD達到12%。后來發(fā)現(xiàn)是細胞轉(zhuǎn)染效率問題，實驗室常用PEI轉(zhuǎn)染試劑，但效果不理想。我嘗試優(yōu)化了轉(zhuǎn)染條件，把PEI濃度從3μg/mL降到1.5μg/mL，同時加入20%FBS，重復三次實驗后RSD降到5.3%，熒光信號也跟預期方向變化了。導師說這種優(yōu)化在實驗里很常見，關(guān)鍵要找對變量。

第78周負責顯微圖像定量分析。7月30日拿到一批共200張H&E染色圖片，需要量化細胞核形態(tài)參數(shù)。剛開始用肉眼測量，誤差明顯，后來學了ImageJ軟件的ROI分析功能，通過設(shè)置閾值自動分割細胞核，再用粒度分析方法計算圓形度、面積等參數(shù)，相關(guān)系數(shù)R2提升到0.89。雖然還有小問題，但基本能滿足項目需求。

遇到的最大困難是早期實驗失敗率高。比如有一次做WesternBlot，膜上條帶很彌散，花了兩天才意識到是抗體稀釋比例不對。解決方法就是查閱文獻，并請教師兄師姐，最后把抗體濃度從1:1000降到1:2000，條帶才清晰。這個經(jīng)歷讓我明白文獻和溝通同樣重要。

實習成果具體體現(xiàn)在：完成30份樣本RNA提取，合格率98.2%；建立雙熒光素酶報告系統(tǒng)穩(wěn)定性標準（RSD<5.3%）；生成200張圖像的細胞核參數(shù)數(shù)據(jù)庫。這些數(shù)據(jù)后來直接用于導師的基金申請材料。這段經(jīng)歷讓我對實驗設(shè)計有了更直觀認識，比如意識到對照組設(shè)置要全面，不能只看主效應。

實驗室管理上，感覺每周的組會效率不高，經(jīng)常跑題，有時候一個簡單問題討論半天。培訓機制也有待改進，新來的師兄師姐都是靠師兄帶，沒有系統(tǒng)培訓手冊。崗位匹配度方面，我的任務(wù)偏向技術(shù)執(zhí)行，但希望能接觸更多實驗設(shè)計討論。建議可以建立標準化操作流程文檔，并定期組織專題培訓，比如針對常用軟件的使用技巧。另外可以多安排輪崗，這樣能更快了解不同實驗方向需求。

三、總結(jié)與體會

這8周在實驗室的經(jīng)歷，讓我對生物研究有了更實的感受。剛開始6月5日進實驗室時，面對實際操作還是有些懵，特別是RNA提取時，第一次做15個樣本，純度數(shù)據(jù)在97%99%之間，但有兩份低于5%，當時挺焦慮的，因為知道后續(xù)qPCR會受影響。后來跟著師兄師姐學，調(diào)整了TRIzol試劑比例，加了一步氯仿重抽，第二次做時得率提到8%以上，純度也穩(wěn)定在98%以上，這個轉(zhuǎn)變讓我明白嚴謹操作的重要性。

雙熒光素酶報告系統(tǒng)優(yōu)化是另一個收獲。6月25日第一次構(gòu)建時，野生型JAK2檢測EGFR通路，報告基因熒光值RSD高達12%，波動太大了。后來發(fā)現(xiàn)是細胞轉(zhuǎn)染效率問題，實驗室常用PEI轉(zhuǎn)染試劑，但效果不理想。我嘗試把PEI濃度從3μg/mL降到1.5μg/mL，同時加入20%FBS，重復三次實驗后RSD降到5.3%，熒光信號也跟預期方向變化了。這個過程中體會到實驗設(shè)計要考慮多因素，不能只看單一指標。

7月30日拿到200張H&E染色圖片進行定量分析時，一開始用肉眼測量細胞核參數(shù)，誤差很大。后來學了ImageJ軟件的ROI分析功能，通過設(shè)置閾值自動分割細胞核，再用粒度分析方法計算圓形度、面積等參數(shù)，相關(guān)系數(shù)R2提升到0.89。雖然還有小問題，但基本能滿足項目需求，這個經(jīng)歷讓我意識到數(shù)字化工具對科研的巨大幫助。

這次實習最大的價值是讓我完成了從學生到職場人的心態(tài)轉(zhuǎn)變。以前做實驗覺得差不多就行，現(xiàn)在明白每個步驟都要有數(shù)據(jù)支撐。比如有一次WesternBlot膜上條帶很彌散，花了兩天時間排查，最后發(fā)現(xiàn)是抗體稀釋比例不對，從1:1000降到1:2000才解決。這個經(jīng)歷讓我明白實驗失敗是常態(tài)，關(guān)鍵是要有耐心和解決問題的能力。

對職業(yè)規(guī)劃來說，這次經(jīng)歷讓我更清楚自己喜歡什么。我發(fā)現(xiàn)自己對實驗技術(shù)細節(jié)很感興趣，但也很想?yún)⑴c實驗設(shè)計。接下來打算深化分子生物學技能，特別是學習更多生物信息學分析方法，考慮考取相關(guān)證書，比如實驗技術(shù)師資格證。同時也在關(guān)注行業(yè)趨勢，比如單細胞測序和空間轉(zhuǎn)錄組學在腫瘤研究中的應用越來越廣，這些技術(shù)可能成為未來發(fā)展方向。

實習也讓我看到自身不足，比如剛開始寫實驗記錄不規(guī)范，后來才養(yǎng)成及時記錄關(guān)鍵參數(shù)和操作細節(jié)的習慣。實驗室管理上，每周組會經(jīng)常跑題，效率不高，這讓我意識到團隊溝通很重要。未來如果參與項目，希望能更早接觸實驗設(shè)計討論，而不是只做執(zhí)行者?？偟膩碚f，這次實習讓我收獲滿滿，不僅提升了專業(yè)技能，更讓我對科研工作有了更深的理解和敬畏。

四、致謝

感謝XX生物研究實驗室提供這次