2026年生物制藥技術(shù)員資格考試試題及答案1.單項選擇題（每題1分，共30分）1.1在CHO細(xì)胞培養(yǎng)過程中，發(fā)現(xiàn)乳酸脫氫酶（LDH）活性顯著升高，最可能的原因是A.培養(yǎng)基中葡萄糖濃度過高B.細(xì)胞進入對數(shù)生長期C.細(xì)胞膜完整性受損D.谷氨酰胺補充不足答案：C解析：LDH為胞內(nèi)酶，培養(yǎng)液中活性升高提示細(xì)胞膜破損，與凋亡或機械剪切相關(guān)；葡萄糖過高主要導(dǎo)致乳酸堆積而非LDH泄漏；對數(shù)期細(xì)胞活力高，LDH應(yīng)維持在低水平。1.2下列哪項不是單克隆抗體人源化的目的A.降低免疫原性B.提高親和力C.延長血清半衰期D.減少HAMA反應(yīng)答案：B解析：人源化通過置換鼠源框架區(qū)降低抗抗體反應(yīng)，但親和力可能下降，需進一步親和力成熟；延長半衰期依賴Fc工程而非人源化本身。1.3關(guān)于生物反應(yīng)器Scale-down模型，錯誤的是A.用于驗證工藝魯棒性B.需保持體積傳氧系數(shù)kLa一致C.攪拌功率輸入P/V必須與生產(chǎn)規(guī)模相同D.可用于故障調(diào)查答案：C解析：Scale-down強調(diào)關(guān)鍵參數(shù)相似而非全部相同，P/V常因幾何限制無法一致，需通過kLa、混合時間等關(guān)鍵指標(biāo)模擬大罐環(huán)境。1.4在ProteinA層析中，提高洗脫pH至4.0仍出現(xiàn)抗體峰拖尾，優(yōu)先調(diào)整A.降低電導(dǎo)率B.提高流速C.縮短保留時間D.加入0.1M精氨酸答案：D解析：精氨酸為穩(wěn)定劑，可抑制低pH下抗體聚集和與填料次級作用；降低電導(dǎo)反而可能增強靜電吸附導(dǎo)致拖尾加劇。1.5下列哪項不是病毒清除驗證中“縮小模型”需證明的等效性A.LRV≥5B.流速一致C.柱高與線性流速比例一致D.緩沖液pH±0.2答案：B解析：縮小模型允許流速成比例下降，但需保持停留時間、柱高/直徑比、緩沖液組成等關(guān)鍵參數(shù)一致；LRV為結(jié)果指標(biāo)非等效條件。1.6使用CRISPR-Cas9敲除GS-CHO細(xì)胞中谷氨酰胺合成酶（GS）基因，最佳篩選標(biāo)記為A.嘌呤霉素B.甲硫氨酸磺酰亞胺（MSX）C.潮霉素D.G418答案：B解析：GS-CHO已缺失內(nèi)源GS，外源GS表達使細(xì)胞能在無谷氨酰胺培養(yǎng)基生長；MSX抑制GS活性，只有高表達GS細(xì)胞存活，實現(xiàn)基因劑量篩選。1.7關(guān)于高濃度蛋白制劑（>100mg/mL）開發(fā)，最先出現(xiàn)的穩(wěn)定性問題通常是A.氧化B.脫酰胺C.粘度升高D.聚集答案：C解析：高濃度下分子間距離縮短，疏水相互作用增強，導(dǎo)致粘度指數(shù)級上升，給灌裝和注射帶來挑戰(zhàn)；聚集雖重要，但粘度問題更早顯現(xiàn)。1.8在DOE（實驗設(shè)計）中，Plackett-Burman設(shè)計主要用于A.篩選關(guān)鍵工藝參數(shù)B.建立響應(yīng)面模型C.優(yōu)化配方D.評估交互作用答案：A解析：Plackett-Burman為兩水平部分析因，可高效識別主效應(yīng)，適用于早期大量因子篩選；響應(yīng)面需中心復(fù)合或Box-Behnken設(shè)計。1.9關(guān)于生物類似藥“頭對頭”臨床比對研究，錯誤的是A.主要終點需使用敏感性指標(biāo)B.等效界值通常設(shè)為±1.5倍標(biāo)準(zhǔn)差C.樣本量基于檢測差異的把握度D.允許使用歷史數(shù)據(jù)替代對照答案：D解析：生物類似藥必須與原研直接比對，歷史數(shù)據(jù)僅用于支持，不可替代同期對照；等效界值常參考EMA±1.5×SD標(biāo)準(zhǔn)。1.10在病毒樣顆粒（VLP）疫苗生產(chǎn)中，采用桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞系統(tǒng)，最需關(guān)注的宿主蛋白為A.微管蛋白B.卵黃蛋白C.絲氨酸蛋白酶D.保幼激素酯酶答案：C解析：昆蟲細(xì)胞絲氨酸蛋白酶易激活VLP表面蛋白降解，導(dǎo)致效力下降；微管蛋白為常見HCP但免疫風(fēng)險低。1.11關(guān)于連續(xù)制造中周期性放行模式（PAT），正確的是A.每批需全檢B.可基于實時放行檢測（RTRT）C.無需工藝驗證D.僅適用于小分子答案：B解析：PAT結(jié)合多變量統(tǒng)計過程控制（MSPC），實現(xiàn)RTRT，減少終產(chǎn)品檢測；生物藥連續(xù)制造指南已明確其適用性。1.12在細(xì)胞庫建立中，主細(xì)胞庫（MCB）與工作細(xì)胞庫（WCB）的關(guān)系是A.MCB可直接用于生產(chǎn)B.WCB來源于MCBC.兩者需同步檢定D.WCB可替代MCB答案：B解析：WCB由MCB擴增建立，形成兩級系統(tǒng)；生產(chǎn)僅使用WCB，MCB作為原始種子備份。1.13關(guān)于宿主細(xì)胞DNA殘留限度，WHO規(guī)定為A.≤10ng/劑B.≤100pg/劑C.≤1μg/劑D.≤50ng/劑答案：A解析：WHO1987指南設(shè)定DNA殘留≤10ng/劑，長度<200bp；FDA/EMA對DNA長度更嚴(yán)格。1.14在凍干工藝中，塌陷溫度（Tc）通常A.高于共晶溫度TeuB.低于玻璃化轉(zhuǎn)變溫度Tg'C.等于共熔溫度TmD.與pH無關(guān)答案：A解析：Tc為凍干餅機械支撐喪失溫度，通常高于Teu但低于Tm；pH影響無定形相Tg'，進而影響Tc。1.15關(guān)于雙特異性抗體knob-into-hole技術(shù)，正確的是A.在CH3區(qū)引入二硫鍵B.通過電荷互補促進異源二聚C.需共轉(zhuǎn)染兩條重鏈質(zhì)粒D.輕鏈共用降低錯配答案：C解析：KiH在CH3區(qū)分別引入大knob與小hole突變，促進異源二聚；共轉(zhuǎn)染兩條重鏈質(zhì)粒，輕鏈共用減少輕鏈錯配。1.16在下游純化中，使用陰離子交換膜層析（AEX）主要清除A.宿主細(xì)胞蛋白B.病毒C.聚集體D.內(nèi)毒素答案：B解析：AEX膜在高流速下保持高結(jié)合容量，對帶負(fù)電病毒顆粒清除效率高；HCP與內(nèi)毒素清除多依賴多步層析。1.17關(guān)于mRNA疫苗加帽率測定，首選方法為A.RT-qPCRB.毛細(xì)管電泳C.LC-MSD.免疫印跡答案：C解析：LC-MS可區(qū)分Cap0、Cap1及未加帽mRNA，定量準(zhǔn)確；RT-qPCR無法區(qū)分帽結(jié)構(gòu)。1.18在單抗電荷異構(gòu)體分析中，陽離子交換色譜（CEX）峰形展寬最可能由以下哪項引起A.緩沖液pH高于抗體pIB.柱溫升高C.流速降低D.鹽梯度斜率過大答案：A解析：pH>pI抗體帶負(fù)電，不與CEX填料結(jié)合，出現(xiàn)穿透峰；柱溫升高通常改善傳質(zhì)，峰形變銳。1.19關(guān)于生物制藥清潔驗證，最難清除的殘留物通常是A.培養(yǎng)基成分B.宿主DNAC.產(chǎn)品蛋白D.緩沖液鹽答案：C解析：產(chǎn)品蛋白易吸附不銹鋼表面，形成頑固生物膜；DNA雖頑固但可通過強堿清除，鹽易溶于水。1.20在細(xì)胞培養(yǎng)中，添加膽固醇脂質(zhì)體主要目的為A.提高單抗產(chǎn)量B.增強抗剪切力C.延長半衰期D.抑制凋亡答案：B解析：膽固醇插入細(xì)胞膜，提高膜剛性，抵抗攪拌剪切；對產(chǎn)量影響間接。1.21關(guān)于腺相關(guān)病毒（AAV）空殼率測定，最佳技術(shù)為A.動態(tài)光散射B.分析型超速離心（AUC）C.SEC-MALSD.透射電鏡答案：B解析：AUC可區(qū)分空殼（~60S）與實心（~100S）顆粒，定量準(zhǔn)確；DLS無法分辨，SEC-MALS對相近分子量不敏感。1.22在生物反應(yīng)器放大中，保持P/V恒定常導(dǎo)致A.kLa升高B.剪切力下降C.混合時間延長D.CO2stripping增強答案：C解析：P/V恒定意味著攪拌功率線性放大，但大罐攪拌槳直徑增大，混合時間延長；kLa常下降。1.23關(guān)于抗體偶聯(lián)藥物（ADC）DAR測定，疏水相互作用色譜（HIC）優(yōu)勢為A.高分辨率B.保持天然結(jié)構(gòu)C.可區(qū)分0-8藥物分布D.與質(zhì)譜聯(lián)用方便答案：C解析：HIC按疏水性分離不同DAR物種，0-8峰形清晰；天然結(jié)構(gòu)保持為次要優(yōu)勢，質(zhì)譜聯(lián)用困難。1.24在生物制藥廠房設(shè)計中，B級區(qū)背景下的A級區(qū)氣流模式需驗證A.單向流風(fēng)速0.36–0.54m/sB.粒子≥0.5μm≤3520/m3C.氣流可視化（煙霧試驗）D.溫濕度±2℃/5%RH答案：C解析：A級區(qū)需通過煙霧試驗證明無渦流，風(fēng)速與粒子限度為靜態(tài)指標(biāo)；溫濕度為B級要求。1.25關(guān)于連續(xù)流加細(xì)胞培養(yǎng)（Perfusion），正確的是A.細(xì)胞密度通常<5×10^6cells/mLB.需使用細(xì)胞截留裝置C.產(chǎn)物滯留時間延長D.灌流速與死亡速率無關(guān)答案：B解析：Perfusion依賴切向流過濾或沉降器截留細(xì)胞，維持高密度；密度可達80×10^6cells/mL，產(chǎn)物連續(xù)收獲滯留短。1.26在病毒滅活中，低pH孵育最適條件為A.pH3.0–3.6，15–30℃，≥30minB.pH4.0，4℃，5minC.pH5.0，37℃，1hD.pH6.0，室溫，過夜答案：A解析：指南要求pH≤3.6、室溫、≥30min確?！?LRV；過高pH或低溫滅活效果不足。1.27關(guān)于生物制藥變更管理，屬于重大變更的是A.更換層析填料供應(yīng)商但配基相同B.培養(yǎng)基滅菌過濾器孔徑0.1→0.22μmC.生產(chǎn)規(guī)模從500L放大至2000LD.制劑防腐劑濃度降低10%答案：C解析：規(guī)模放大改變幾何與流體動力學(xué)，屬重大變更需驗證；同配基填料更換為中等變更。1.28在單抗糖型分析中，PNGaseF釋放的N-糖鏈標(biāo)記采用A.2-ABB.4-硝基苯肼C.丹磺酰肼D.苯甲酰氯答案：A解析：2-AB為熒光標(biāo)記金標(biāo)準(zhǔn)，靈敏度高；其余標(biāo)記效率低或背景高。1.29關(guān)于生物制藥技術(shù)轉(zhuǎn)移，最關(guān)鍵文件為A.批生產(chǎn)記錄B.技術(shù)轉(zhuǎn)移報告C.工藝描述D.風(fēng)險評估答案：C解析：工藝描述為核心知識載體，定義參數(shù)范圍與控制策略；報告為輸出文件。1.30在細(xì)胞培養(yǎng)代謝分析中，谷氨酰胺分解產(chǎn)物為A.乳酸與氨B.丙酮酸與CO2C.α-酮戊二酸與NH3D.乙酰CoA與NADH答案：C解析：谷氨酰胺酶催化生成谷氨酸與NH3，谷氨酸脫氫酶進一步生成α-酮戊二酸；乳酸來自葡萄糖。2.配伍選擇題（每題2分，共20分）A.離子交換層析B.疏水層析C.體積排阻層析D.羥基磷灰石層析E.親和層析2.1清除宿主細(xì)胞DNA殘留首選：A2.2分離抗體聚集體與單體：C2.3基于鈣離子配位差異分離：D2.4利用Fc段結(jié)合：E2.5在高鹽條件下結(jié)合目標(biāo)：B3.判斷題（每題1分，共10分）3.1生物反應(yīng)器放大時，保持kLa恒定即可確保溶氧一致。答案：錯解析：kLa相同但細(xì)胞密度、耗氧速率變化，仍需動態(tài)平衡。3.2凍干保護劑蔗糖在降溫過程中優(yōu)先結(jié)晶。答案：錯解析：蔗糖為無定形保護劑，抑制結(jié)晶，維持蛋白無定形相。3.3宿主蛋白殘留檢測可采用通用ELISA試劑盒。答案：錯解析：需針對特定宿主開發(fā)平臺特異性試劑盒，通用型交叉反應(yīng)高。3.4ADC藥物中，高DAR一定伴隨高毒性。答案：錯解析：高DAR增加清除率與聚集風(fēng)險，體內(nèi)暴露可能反而下降。3.5連續(xù)制造可減少廠房占地面積。答案：對4.簡答題（每題10分，共40分）4.1闡述高濃度蛋白制劑粘度升高的分子機制及解決策略。答案：機制：高濃度下分子間距離縮短，疏水補丁、電荷簇相互作用增強，形成瞬態(tài)網(wǎng)絡(luò)；Fab-Fab、Fc-Fc交疊導(dǎo)致水化層重疊，流動阻力增大。策略：1.氨基酸置換：降低表面疏水性與電荷補??；2.添加小分子賦形劑：精氨酸、脯氨酸破壞蛋白-蛋白作用；3.調(diào)節(jié)pH與離子強度：遠(yuǎn)離pI減少靜電吸引；4.引入剪切稀釋裝置：在線混合降低注射力；5.使用共溶劑：如少量乙醇降低介電常數(shù)，削弱靜電；6.糖基化工程：增加寡糖位點，提高空間位阻。4.2描述病毒清除驗證中“縮小模型”建立步驟。答案：1.工藝表征：確定關(guān)鍵參數(shù)范圍（pH、電導(dǎo)、流速、停留時間）；2.縮小比例：保持柱高/直徑比、膜面積/體積比一致；3.病毒選擇：至少三種不同理化特性病毒（包膜/非包膜、DNA/RNA、大?。?；4.加標(biāo)實驗：在關(guān)鍵步驟前加入高滴度病毒（≥5%v/v），計算LRV；5.等效性證明：對比大規(guī)模與小規(guī)模中間體純度、收率、雜質(zhì)譜；6.統(tǒng)計評估：LRV≥4且95%置信區(qū)間下限≥1；7.報告撰寫：包含偏差與CAPA。4.3比較Perfusion與Fed-batch在單抗生產(chǎn)中的經(jīng)濟差異。答案：Perfusion優(yōu)勢：1.設(shè)備體積小，一次性系統(tǒng)降低CAPEX；2.連續(xù)收獲減少下游儲罐；3.高細(xì)胞密度提高體積產(chǎn)率，降低培養(yǎng)基消耗/克蛋白；4.靈活響應(yīng)市場需求，降低庫存。劣勢：1.操作復(fù)雜，需24h監(jiān)控；2.膜堵塞風(fēng)險增加耗材成本；3.工藝驗證與監(jiān)管路徑復(fù)雜；4.高細(xì)胞密度增加CO2與滲透壓管理難度。Fed-batch：1.技術(shù)成熟，監(jiān)管友好；2.批次清晰，質(zhì)量追溯簡單；3.但規(guī)模放大需大罐，CAPEX高；4.下游批處理導(dǎo)致間歇操作，設(shè)備利用率低。綜合：對穩(wěn)定大需求產(chǎn)品，Perfusion可降低30%COGS；對多品種共線，F(xiàn)ed-batch靈活。4.4說明mRNA疫苗加帽率對免疫原性的影響及檢測要點。答案：影響：未加帽mRNA易被核酸酶降解，翻譯效率下降，表達抗原量低，導(dǎo)致抗體滴度不足；同時未加帽RNA激活RIG-I/MDA5，增加IFN-β分泌，引發(fā)過度炎癥反應(yīng)。檢測要點：1.樣品制備：使用抗帽抗體富集，避免RNase污染；2.LC-MS：離子對反相色譜分離Cap0、Cap1、Cap2，高分辨質(zhì)譜定量；3.內(nèi)標(biāo)：合成同位素標(biāo)記帽類似物；4.方法驗證：線性、準(zhǔn)確度、精密度、LOD≤1%；5.放行標(biāo)準(zhǔn)：Cap1≥80%，未加帽≤5%；6.穩(wěn)定性：-80℃儲存6個月加帽率下降≤5%。5.計算題（每題10分，共20分）5.1某Fed-batch培養(yǎng)最終體積2000L，活細(xì)胞密度15×10^6cells/mL，活力90%，單抗產(chǎn)量5g/L。下游純化總收率65%，求理論單抗產(chǎn)量。解：體積=2000L滴度=5g/L總蛋白=2000×5=10000g收率65%理論產(chǎn)量=10000×0.65=6500g=6.5kg5.2病毒清除驗證中，低pH處理前病毒滴度10^8.5TCID50/mL，處理后取樣1mL未檢出（檢測限10^1.5TCID50/mL），求LRV。解：LRV=log10(輸入/輸出)=log10(10^8.5/10^1.5)=7.0因未檢出，按檢測限計算，LRV≥7.0。6.案例分析題（每題20分，共40分）6.1某ADC項目臨床I期出現(xiàn)輸液反應(yīng)，表現(xiàn)為潮紅、低血壓，發(fā)生率30%。分析可能原因與改進策略。答案：原因：1.高DAR（>6）增加疏水性，形成微粒，激活補體；2.制劑中聚山梨酯80降解產(chǎn)生脂肪酸，引發(fā)過敏；3.連接子不穩(wěn)定，提前釋放毒素，導(dǎo)致全身毒性；4.患者預(yù)存抗PEG抗體，對PEG化脂質(zhì)體產(chǎn)生反應(yīng)。策略：1.降低DAR至3-4，采用親水連接子；2.更換穩(wěn)定表面活性劑（如聚山梨酯20→泊洛沙姆188）；3.引入組氨酸緩沖體系，減少氧化；4.臨床前采用補體激活試驗（CH50）篩選處方；5.輸注前給予抗組胺與皮質(zhì)激素預(yù)用藥；6.采用逐步遞增輸注速率。6.2某生物類似藥III期臨床比對試驗，主要終點ACR20等效界值預(yù)設(shè)±15%，結(jié)果原研組65%，類似藥組70%，95%CI差異為[-2%,12%]，監(jiān)管機構(gòu)提出異議，請分析并回復(fù)。答案：分析：1.界值±15%過寬，EMA建議±12%；2.CI上限12%雖未超出15%，但接近邊緣，把握度不足；3.次要終點ACR50/70、藥代動力學(xué)相似性需補充；4.免疫原性AD