合成生物抗菌肽研發(fā)工程師崗位招聘考試試卷及答案填空題1.陽(yáng)離子抗菌肽通常帶______電荷，易與細(xì)菌細(xì)胞膜結(jié)合。2.合成抗菌肽的兩種主要方法是化學(xué)合成和______。3.抗菌肽的常見(jiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu)包括α-螺旋和______。4.最低抑菌濃度的英文縮寫(xiě)是______。5.固相合成抗菌肽常用的保護(hù)基策略是______（Fmoc）。6.基因工程表達(dá)抗菌肽常與______蛋白融合以降低毒性。7.天然抗菌肽的重要來(lái)源包括昆蟲(chóng)、植物和______。8.畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)可實(shí)現(xiàn)抗菌肽的______表達(dá)，便于純化。9.抗菌肽破壞細(xì)菌細(xì)胞膜的主要方式是形成______。10.液相合成抗菌肽適合長(zhǎng)度______的肽鏈（填“>50aa”或“<50aa”）。單項(xiàng)選擇題1.以下哪種不是抗菌肽的抗菌機(jī)制？A.破壞細(xì)胞膜B.抑制細(xì)胞壁合成C.抑制核酸復(fù)制D.促進(jìn)細(xì)胞增殖2.固相合成抗菌肽中，脫除Fmoc保護(hù)基的試劑是？A.TFAB.哌啶C.鹽酸D.醋酸3.以下哪種宿主不常用于基因工程表達(dá)抗菌肽？A.大腸桿菌B.畢赤酵母C.哺乳動(dòng)物細(xì)胞D.枯草芽孢桿菌4.抗菌肽與傳統(tǒng)抗生素相比，核心優(yōu)勢(shì)是？A.廣譜抗菌B.低毒性C.不易耐藥D.易降解5.檢測(cè)抗菌肽活性的常用方法是？A.MIC測(cè)定B.ELISAC.WesternblotD.PCR6.富含半胱氨酸的抗菌肽是？A.CecropinB.DefensinC.MagaininD.Thionin（植物來(lái)源）7.液相合成抗菌肽的常用縮合試劑不包括？A.DCCB.HBTUC.TFAD.DIC8.抗菌肽的長(zhǎng)度通常為？A.5-10aaB.10-50aaC.50-100aaD.>100aa9.以下哪種生物是抗菌肽的天然來(lái)源？A.家蠶B.大腸桿菌C.釀酒酵母D.小鼠（僅選項(xiàng)）10.融合表達(dá)抗菌肽的目的不包括？A.提高表達(dá)量B.便于純化C.增強(qiáng)活性D.降低毒性多項(xiàng)選擇題1.抗菌肽的分類(lèi)依據(jù)包括？A.來(lái)源B.結(jié)構(gòu)C.電荷D.抗菌譜2.基因工程表達(dá)抗菌肽的常用宿主有？A.大腸桿菌B.畢赤酵母C.昆蟲(chóng)細(xì)胞D.枯草芽孢桿菌3.抗菌肽的應(yīng)用領(lǐng)域包括？A.醫(yī)藥B.農(nóng)業(yè)C.食品防腐D.化妝品4.影響抗菌肽活性的因素有？A.氨基酸序列B.二級(jí)結(jié)構(gòu)C.電荷D.疏水性5.固相合成抗菌肽的關(guān)鍵步驟包括？A.樹(shù)脂連接B.氨基酸偶聯(lián)C.脫保護(hù)D.裂解純化6.抗菌肽活性檢測(cè)的指標(biāo)有？A.MICB.MBCC.IC50D.EC507.屬于陽(yáng)離子抗菌肽的是？A.CecropinB.DefensinC.MagaininD.陰離子抗菌肽（排除）8.抗菌肽的非膜作用機(jī)制包括？A.抑制蛋白合成B.抑制核酸復(fù)制C.激活自溶酶D.破壞細(xì)胞壁9.畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)的優(yōu)勢(shì)是？A.分泌表達(dá)B.翻譯后修飾C.高表達(dá)量D.成本低10.抗菌肽研發(fā)涉及的生物信息學(xué)方法有？A.序列比對(duì)B.結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)C.分子對(duì)接D.活性位點(diǎn)分析判斷題1.所有抗菌肽都帶正電荷。（×）2.固相合成可實(shí)現(xiàn)抗菌肽大規(guī)模生產(chǎn)。（×）3.MIC是最低殺菌濃度。（×）4.大腸桿菌表達(dá)抗菌肽需融合表達(dá)。（√）5.抗菌肽對(duì)真菌無(wú)活性。（×）6.畢赤酵母可分泌抗菌肽。（√）7.液相合成適合長(zhǎng)肽（>50aa）。（√）8.抗菌肽易產(chǎn)生耐藥性。（×）9.天然抗菌肽僅來(lái)源于動(dòng)物。（×）10.環(huán)化可提高抗菌肽穩(wěn)定性。（√）簡(jiǎn)答題1.簡(jiǎn)述化學(xué)固相合成抗菌肽的基本流程。答案：采用Fmoc策略，流程為：①樹(shù)脂活化（如Wang樹(shù)脂）與第一個(gè)氨基酸偶聯(lián)；②哌啶脫除Fmoc保護(hù)基；③依次偶聯(lián)后續(xù)氨基酸（HBTU/DIPEA縮合）；④TFA/苯酚裂解肽鏈并脫除側(cè)鏈保護(hù)基；⑤反相HPLC純化粗肽；⑥MIC測(cè)定驗(yàn)證活性。關(guān)鍵是每步偶聯(lián)效率檢測(cè)（茚三酮法），確保序列正確。2.基因工程表達(dá)抗菌肽為何常融合表達(dá)？答案：①降低毒性：抗菌肽對(duì)宿主（如大腸桿菌）有毒，融合后減弱毒性；②穩(wěn)定肽鏈：小肽易被蛋白酶降解，融合載體蛋白（GST/His-tag）增強(qiáng)穩(wěn)定性；③便于純化：標(biāo)簽可通過(guò)親和層析（鎳柱）分離；④提高表達(dá)量：載體蛋白增強(qiáng)轉(zhuǎn)錄翻譯效率。融合后需用thrombin切除標(biāo)簽獲得活性肽。3.抗菌肽的主要抗菌機(jī)制是什么？答案：①膜作用：陽(yáng)離子肽與細(xì)菌膜（負(fù)電）靜電結(jié)合，插入形成孔道，破壞膜完整性，導(dǎo)致內(nèi)容物泄漏；②非膜作用：進(jìn)入細(xì)胞抑制細(xì)胞壁合成、核酸復(fù)制、蛋白合成，或激活自溶酶。不同肽可能結(jié)合多種機(jī)制，廣譜肽多依賴膜作用。4.抗菌肽相比傳統(tǒng)抗生素的優(yōu)勢(shì)與不足？答案：優(yōu)勢(shì)：①不易耐藥（靶點(diǎn)多）；②低毒性（真核膜電荷差異）；③廣譜（細(xì)菌、真菌、病毒）；④易降解（環(huán)境友好）。不足：①成本高（合成貴/表達(dá)量低）；②穩(wěn)定性差（易被蛋白酶降解）；③體內(nèi)活性低（血清結(jié)合失活）；④規(guī)?；y（發(fā)酵工藝優(yōu)化難）。討論題1.如何優(yōu)化抗菌肽的穩(wěn)定性和體內(nèi)活性？答案：優(yōu)化策略包括：①結(jié)構(gòu)修飾：引入D-氨基酸（抗降解）、環(huán)化（穩(wěn)定結(jié)構(gòu)）、PEG化（延長(zhǎng)半衰期）；②序列改造：平衡疏水性/電荷（增強(qiáng)膜結(jié)合，減少血清結(jié)合）；③表達(dá)系統(tǒng)：選擇畢赤酵母分泌表達(dá)（避免胞內(nèi)降解）；④配方優(yōu)化：脂質(zhì)體/納米粒包裹（靶向遞送）；⑤定向進(jìn)化：篩選高穩(wěn)定/活性突變體。例如，環(huán)化可顯著提高血清穩(wěn)定性和抗菌活性。2.抗菌肽在農(nóng)業(yè)領(lǐng)域的應(yīng)用前景及挑戰(zhàn)？答案：前景：①替代抗生素（畜禽養(yǎng)殖，減少耐藥）；②植物病害防治（真菌/細(xì)菌病害，如小麥赤霉?。?；③飼料添加劑（提高免疫力）。挑戰(zhàn)：①成本高（規(guī)?；a(chǎn)難）；②穩(wěn)定性差（土壤/腸道降解，持效短）；③環(huán)境影響（生態(tài)平衡）；④審批難（安全性評(píng)估不完善）；⑤效果不穩(wěn)定（受pH/微生物影響）。需通過(guò)基因工程降本，或開(kāi)發(fā)緩釋劑型解決穩(wěn)定性問(wèn)題。答案匯總填空題答案1.正2.基因工程表達(dá)3.β-折疊4.MIC5.芴甲氧羰基6.載體7.動(dòng)物8.分泌9.孔道10.>50aa單項(xiàng)選擇題答案1.D2.B3.C4.C5.A6.B7