生物科學(xué)生物制藥公司研發(fā)助理實(shí)習(xí)報(bào)告一、摘要

2023年6月5日至8月22日，我在一家生物制藥公司擔(dān)任研發(fā)助理，參與三個(gè)項(xiàng)目的分子克隆與細(xì)胞培養(yǎng)工作。核心成果包括：完成重組蛋白表達(dá)質(zhì)粒構(gòu)建12例，轉(zhuǎn)化效率平均達(dá)85%；優(yōu)化CHO細(xì)胞培養(yǎng)工藝，細(xì)胞密度提升至1.2×10^6/mL，較前期提高30%；協(xié)助完成文獻(xiàn)調(diào)研報(bào)告3份，整理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)并錄入數(shù)據(jù)庫(kù)。期間應(yīng)用了基因編輯工具CRISPRCas9進(jìn)行基因敲除，效率達(dá)90%；運(yùn)用流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞周期，準(zhǔn)確率達(dá)92%。提煉了標(biāo)準(zhǔn)化操作流程SOP，包括質(zhì)粒提取純化及WesternBlot檢測(cè)，可降低實(shí)驗(yàn)誤差15%。

二、實(shí)習(xí)內(nèi)容及過(guò)程

1.實(shí)習(xí)目的

希望通過(guò)實(shí)踐了解生物制藥研發(fā)的實(shí)際操作，把學(xué)校學(xué)的分子生物學(xué)知識(shí)用上，看看自己到底喜歡哪個(gè)方向，順便積累點(diǎn)項(xiàng)目經(jīng)驗(yàn)。

2.實(shí)習(xí)單位簡(jiǎn)介

我去的公司是做單克隆抗體藥物研發(fā)的，規(guī)模不大但挺專(zhuān)注。研發(fā)部不大，但每個(gè)人都有活干，實(shí)驗(yàn)室氛圍還行，不會(huì)太死板。

3.實(shí)習(xí)內(nèi)容與過(guò)程

剛開(kāi)始跟著導(dǎo)師做項(xiàng)目A的重組蛋白表達(dá)。6月10號(hào)到15號(hào)，我負(fù)責(zé)構(gòu)建表達(dá)質(zhì)粒，用了pCDNA3.1載體，插入的是客戶(hù)提供的基因片段。轉(zhuǎn)染HEK293F細(xì)胞，第一次做有點(diǎn)手忙腳亂，但導(dǎo)師教了我怎么優(yōu)化電轉(zhuǎn)條件，后面轉(zhuǎn)化效率穩(wěn)定在85%左右，比剛開(kāi)始的60%強(qiáng)多了。6月20號(hào)開(kāi)始做蛋白表達(dá)，誘導(dǎo)后48小時(shí)收獲上清，SDSPAGE檢測(cè)，看條帶大小對(duì)得上不對(duì)。項(xiàng)目B是細(xì)胞工程，我參與了CHO細(xì)胞的優(yōu)化培養(yǎng)。7月5號(hào)左右，主管讓我嘗試提高細(xì)胞密度，我調(diào)整了培養(yǎng)基里的胰島素和轉(zhuǎn)鐵蛋白比例，還加了低濃度的佛波酯，最后細(xì)胞密度從1×10^6/mL提到1.2×10^6/mL，比原來(lái)多了30%，雖然不算驚天動(dòng)地，但挺滿(mǎn)意的。項(xiàng)目C是工藝開(kāi)發(fā)，我協(xié)助整理文獻(xiàn)，做WesternBlot驗(yàn)證抗體特異性。7月25號(hào)左右，有個(gè)抗體條帶總出問(wèn)題，WesternBlot結(jié)果不清晰，跟導(dǎo)師討論后，發(fā)現(xiàn)是抗體稀釋比例不對(duì)，調(diào)整后就好了。

4.實(shí)習(xí)成果與收獲

完成了項(xiàng)目A的質(zhì)粒構(gòu)建和初步表達(dá)驗(yàn)證，拿到可溶性蛋白后，又做了些初步的純化實(shí)驗(yàn)。項(xiàng)目B的CHO細(xì)胞培養(yǎng)密度提升數(shù)據(jù)，寫(xiě)進(jìn)了部門(mén)的小結(jié)報(bào)告里。最大的收獲是學(xué)會(huì)了怎么解決實(shí)際問(wèn)題，比如電轉(zhuǎn)效率低的時(shí)候，不是單純加電轉(zhuǎn)時(shí)間，而是要檢查細(xì)胞狀態(tài)和電轉(zhuǎn)緩沖液pH值。還學(xué)會(huì)了看文獻(xiàn)，怎么快速找到關(guān)鍵信息，比如某個(gè)抗體在哪個(gè)細(xì)胞系上的效果最好。

5.問(wèn)題與建議

遇到的挑戰(zhàn)主要是剛開(kāi)始對(duì)實(shí)驗(yàn)室的SOP不熟悉，比如有些試劑的保存條件記不清，好幾次差點(diǎn)搞錯(cuò)。還有一次做流式細(xì)胞儀分析，因?yàn)檐浖僮鞑皇炀?，?shù)據(jù)丟了重來(lái)，挺浪費(fèi)時(shí)間的。后來(lái)我就自己做了個(gè)操作筆記，把關(guān)鍵步驟和注意事項(xiàng)都寫(xiě)下來(lái)，慢慢就熟練了。

對(duì)公司來(lái)說(shuō)，我覺(jué)得實(shí)驗(yàn)室的培訓(xùn)可以再完善點(diǎn)，特別是新員工入職，SOP培訓(xùn)有點(diǎn)散，有些細(xì)節(jié)沒(méi)講清楚。另外，有些設(shè)備比如流式細(xì)胞儀，操作培訓(xùn)不夠，建議安排專(zhuān)門(mén)的培訓(xùn)時(shí)間，或者多請(qǐng)個(gè)會(huì)用的師兄師姐帶一帶。我建議可以搞個(gè)內(nèi)部共享平臺(tái)，把操作手冊(cè)、實(shí)驗(yàn)記錄模板都放上去，方便大家查找。

三、總結(jié)與體會(huì)

1.實(shí)習(xí)價(jià)值閉環(huán)

這8周，從6月5號(hào)到8月22號(hào)，感覺(jué)像是從理論到實(shí)踐的完整過(guò)場(chǎng)。之前在學(xué)校，做實(shí)驗(yàn)總擔(dān)心失敗，但在公司，項(xiàng)目A那會(huì)兒，我的質(zhì)粒構(gòu)建第一次成功率不到50%，導(dǎo)師沒(méi)多說(shuō)什么，只是讓我第二天重做，并提醒我檢查轉(zhuǎn)染前后細(xì)胞的形態(tài)。我記著第三次做的時(shí)候，把電擊后的細(xì)胞培養(yǎng)條件稍微改了點(diǎn)，比如CO2濃度從5%提到6%，轉(zhuǎn)化效率一下子到了85%以上。這個(gè)轉(zhuǎn)變讓我明白，失敗是常態(tài)，關(guān)鍵是怎么分析原因，怎么調(diào)整。我整理的項(xiàng)目B數(shù)據(jù)，CHO細(xì)胞密度從1×10^6/mL提到1.2×10^6/mL，雖然不算顛覆性，但對(duì)我來(lái)說(shuō)是實(shí)實(shí)在在的進(jìn)步，也讓我對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)這行有了更具體的認(rèn)識(shí)。

2.職業(yè)規(guī)劃聯(lián)結(jié)

這次實(shí)習(xí)讓我更清楚自己想干嘛。之前挺迷茫的，分子生物學(xué)方向太多，基因編輯、細(xì)胞治療、抗體藥物…去了公司才覺(jué)得，抗體藥物研發(fā)流程挺完整的，從細(xì)胞株構(gòu)建到工藝開(kāi)發(fā)，每一步都挺講究。我發(fā)現(xiàn)自己對(duì)工藝開(kāi)發(fā)有點(diǎn)興趣，特別是怎么優(yōu)化細(xì)胞培養(yǎng)條件，讓它更穩(wěn)定、產(chǎn)量更高。導(dǎo)師跟我說(shuō)，如果真想往這個(gè)方向發(fā)展，后面可以多學(xué)點(diǎn)生物統(tǒng)計(jì)學(xué)和過(guò)程控制方面的知識(shí)。這讓我決定，讀研期間得安排上相關(guān)的課程，看看能不能考個(gè)相關(guān)的證書(shū)，比如GMP培訓(xùn)，提升競(jìng)爭(zhēng)力。

3.行業(yè)趨勢(shì)展望

在公司待著，能明顯感覺(jué)到行業(yè)變化挺快的。比如項(xiàng)目A用到的那種表達(dá)載體，現(xiàn)在很多公司都在往細(xì)胞治療的方向發(fā)展，用到的新型載體、AAV遞送系統(tǒng)…感覺(jué)挺前沿的。我整理項(xiàng)目C文獻(xiàn)的時(shí)候，就看到不少關(guān)于mRNA疫苗和ADC藥物的文章，技術(shù)迭代很快。這讓我覺(jué)得，學(xué)生時(shí)代學(xué)的知識(shí)可能很快過(guò)時(shí)，但基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)技能和解決問(wèn)題的能力是永遠(yuǎn)用得著的。以后得多關(guān)注行業(yè)動(dòng)態(tài)，比如通過(guò)CDE的公告、行業(yè)會(huì)議，了解最新法規(guī)和技術(shù)方向，這樣才能跟上節(jié)奏。

4.心態(tài)轉(zhuǎn)變

最明顯的變化是心態(tài)。以前做實(shí)驗(yàn)，稍微出點(diǎn)問(wèn)題就覺(jué)得完了，現(xiàn)在能冷靜分析。比如流式細(xì)胞儀數(shù)據(jù)第一次不好，雖然有點(diǎn)沮喪，但后來(lái)發(fā)現(xiàn)是抗體稀釋比例問(wèn)題，心態(tài)就好多了。感覺(jué)抗壓能力確實(shí)強(qiáng)了點(diǎn)，也更有責(zé)任感了，畢竟做的每個(gè)實(shí)驗(yàn)、每個(gè)數(shù)據(jù)，都關(guān)系到后面人的工作。這種從學(xué)生到準(zhǔn)職場(chǎng)人的感覺(jué)挺奇妙的，雖然累，但挺充實(shí)。

四、致謝

1.

感謝公司給我這次實(shí)習(xí)機(jī)會(huì)，讓我接觸到了真實(shí)的生物制藥研發(fā)工作。

2.

特別感謝