1、特輯2.2動物細胞工程、動物細胞培養(yǎng)、動物細胞融合、單克隆抗體的生產(chǎn)、核移植、動物細胞工程技術、動物細胞工程的基礎、2.2.1動物細胞培養(yǎng)和核移植技術、動物細胞培養(yǎng)、(1)、概念是從動物體內(nèi)提取相關組織，將其分散在單一細胞中，放入適當?shù)呐囵B(yǎng)基，使這些細胞生長(二)、原理、細胞分裂增殖、(三)、過程、剪切幼齡動物、組織，原代細胞培養(yǎng)、細胞懸濁液、細胞壁：培養(yǎng)密合性細胞時，細胞可以貼在基質(zhì)上增殖，細胞接觸抑制，在細胞貼在壁上生長的過程中，隨著細胞分裂，數(shù)量增加，最終變成單層關于概念，原代培養(yǎng)：剛從生物中取出后培養(yǎng)的細胞是原代細胞。 一般培養(yǎng)的第一代細胞和10代以內(nèi)的細胞稱為原代細胞培養(yǎng)。 傳代培養(yǎng)

2、：從培養(yǎng)瓶中取出傳代細胞，調(diào)制細胞懸濁液，分成2個以上的培養(yǎng)瓶繼續(xù)培養(yǎng)，稱為傳代培養(yǎng)。 總結過程，提取的組織、器官、細胞懸濁液、酶、瓶壁上貼著的細胞、單一細胞、加入液、動物胚胎和幼齡動物、胰臟蛋白、培養(yǎng)、接觸抑制、初代培養(yǎng)(分注前)、1-10代細胞、培養(yǎng)、加液、4050代細胞(細胞株)、未、無限繼承代(細胞系)，已繼承細胞株：初代細胞一般在10多歲左右細胞生長停滯，大部分細胞老化死亡，少數(shù)細胞生存到4050多歲的細胞系：細胞株繼承50多歲后出現(xiàn)細胞生長停滯的狀態(tài)，只有一部分細胞因遺傳物質(zhì)的變化而在培養(yǎng)條件下可以無限制地繼承，這種繼承細胞為細胞系。 細胞株和細胞系的差異：細胞系的遺傳物質(zhì)發(fā)生變化

3、，有癌細胞的特征，失去接觸抑制，易繼代培養(yǎng)。 思考問題：1、為什么要把動物胚胎和幼齡個體的器官和組織選為動物細胞培養(yǎng)材料？ 2、為什么培養(yǎng)前需要將組織細胞分散到單一細胞中？ 因為這些組織和器官分裂能力旺盛，容易生長。 成塊的組織將細胞粘在一起，限制細胞的生長和增殖，細胞不能與培養(yǎng)液充分接觸，不利于培養(yǎng)。 胰蛋白酶的作用是什么？細胞間的物質(zhì)是什么樣的成分，可以說明催化蛋白質(zhì)的水解。 細胞間的物質(zhì)主要是蛋白質(zhì)(骨膠原等)。 細胞膜的主要成分是什么？蛋白質(zhì)和磷脂，5，胰蛋白酶能消化細胞嗎？ 是的，6、胰蛋白酶能消化細胞，所以把動物組織分散到一個細胞中有什么問題呢？7、可以用胰蛋白酶代替胰蛋白酶嗎？

4、為什么？注意時間的控制，做不到。 由于兩者的最佳PH不同，正常組織細胞的生存環(huán)境和胰蛋白酶的最佳PH相近，1、無菌、無毒的環(huán)境，保證細胞的順利生長增殖，添加一定量的抗生素，定期交換培養(yǎng)液，添加糖(葡萄糖)、氨基酸、促進生長因子、無機鹽、微量元素、動物血清等。 (四)，動物細胞培養(yǎng)條件，2，營養(yǎng)，3，溫度和PH，培養(yǎng)室控制在36.5 0.5，7.27.4，培養(yǎng)罐控制O2和CO2(95%空氣和5% CO2 )，4，氣體環(huán)境：(五)，動物細胞培養(yǎng)技術的應用，(三)細胞的生理、藥理、病理研究將健康細胞培養(yǎng)于燒傷患者皮膚移植；(2)基因工程受體細胞、植物組織培養(yǎng)和動物細胞培養(yǎng)比較，全能性、增殖、蔗糖、動

5、物血清、細胞株、細胞系、細胞、某些蛋白質(zhì)、前景展望，資料一：培養(yǎng)的動物細胞可用于有毒物質(zhì)的檢測。 許多畸形、致癌物質(zhì)進入培養(yǎng)液后，培養(yǎng)細胞會引起染色體結構和數(shù)量的變異。 從變異細胞在全培養(yǎng)細胞中所占的比例可以判斷某種物質(zhì)的毒性。目前，動物細胞培養(yǎng)已成為迅速靈敏地檢測有毒物質(zhì)的有效手段。 資料2 :人工關節(jié)軟骨再生，1 .從第一次手術：患者關節(jié)軟骨中未受力部分，取出葡萄干大小的健康軟骨組織。 2 .分離軟骨細胞，通過3周的體外培養(yǎng)將細胞數(shù)增加到約1020倍。 3 .第二次手術：清除軟骨損傷的部分，從下面的骨部分取出與傷口同大小的骨膜，縫在傷口上，將軟骨細胞注射到骨膜下。 資料3 :結果：在康復一

6、年后能恢復正常生活。 動物體細胞核移植技術和克隆動物，(一)，動物細胞核移植的概念：動物細胞核移植是將動物的細胞核移植到去除了細胞核的卵母細胞中，制成新的胚胎，該新胚胎最終成為動物個體，克隆動物：通過核移植的方法得到的動物。 動物核移植是將動物細胞的核移植到去除了細胞核的卵母細胞中，轉化成新胚胎，這個新胚胎最終發(fā)育成動物個體。分類：細胞分化的程度低，容易恢復全能性，細胞分化的程度高，難以恢復全能性，克隆動物：是用核移植法得到的動物。 克隆在希臘語中是“小樹的枝葉”的意思，是指無性繁殖物。脫核卵泡、供體細胞、重組細胞，代孕母牛c，無性生殖，(三)，體細胞的核移植過程，(四)，體核移植技術的應用前

7、景，1，在畜牧業(yè)能加速家畜遺傳改良的過程，2，保護瀕危物種，3，生產(chǎn)醫(yī)用蛋白質(zhì)和組織器官的移植供體，(五)，體核移植技術2、克隆技術效率低、畸形率高、死亡率高、容易發(fā)生早衰等問題。 3 .生產(chǎn)克隆動物的費用很高。 2、動物細胞培養(yǎng)過程中遺傳物質(zhì)變化的細胞有() a .不滅性細胞B.10代以內(nèi)的細胞c .獲得第一代細胞d .傳代細胞，1、動物細胞工程技術的基礎有() a .動物細胞融合b .單克隆抗體c .胚胎移植d .動物細胞培養(yǎng)，a，d，教室反饋練習3； 關于動物細胞培養(yǎng)的記述正確的是： () a，動物細胞培養(yǎng)的目的只是為了得到大量的細胞分泌蛋白b，在動物細胞培養(yǎng)前用胰蛋白酶使細胞分散c，細

8、胞的癌變在從原代培養(yǎng)到傳代培養(yǎng)的過程中d、50代培養(yǎng)的傳代細胞遺傳物質(zhì)沒有變化，b、4， 一般來說，動物細胞的體外培養(yǎng)需要滿足以下條件()無毒的環(huán)境無菌環(huán)境培養(yǎng)基中添加血清溫度需要與動物體溫相似o2，不需要CO2CO2可以調(diào)節(jié)培養(yǎng)液的PH，a， 卡卡西蝦仁5 .動物細胞培養(yǎng)的特征細胞壁有絲分裂細胞分化接觸抑制減數(shù)分裂初代培養(yǎng)一般是1-10代a、 B、c、d、a、6，下圖是動物細胞培養(yǎng)的基本過程形象。 據(jù)此，(1)容器a中放置了動物器官和組織。 一般來說，容器a中的動物器官和組織首先用于用酶處理以分散細胞。 使動物的胚胎和幼齡動物、剪切、胰臟蛋白、細胞和培養(yǎng)液充分接觸，使培養(yǎng)變得容易，(3)培養(yǎng)

9、首先用b瓶進行，瓶的培養(yǎng)基成分在該瓶中培養(yǎng)了一段時間后，很多細胞老化死亡，這是培養(yǎng)到初代的，到現(xiàn)在為止的培養(yǎng)為_。(4)為了將b瓶的細胞分注到c瓶中，處理后配置，分注。 動物血清，10，原代培養(yǎng)，胰蛋白酶，細胞懸濁液，動物細胞融合和單克隆抗體，一，動物細胞融合，受精作用，動物細胞融合，細胞a，細胞b，雜種細胞，滅活病毒，物理法化學法，用滅活病毒誘導動物細胞融合的過程，細胞融合和融合誘導細胞融合物質(zhì)，誘導劑：病毒，聚乙烯思考討論：為什么細胞融合過程中使用的病毒需要滅活？ 什么是抗體，是生物被抗原刺激而產(chǎn)生的，具有與該抗原特異性結合的免疫功能的球蛋白。 b淋巴細胞產(chǎn)生抗體。 單克隆抗體是從單一的b

10、淋巴細胞經(jīng)過無性繁殖(克隆)，形成基因型相同的細胞群，該細胞群產(chǎn)生的化學性質(zhì)單一且特異性強的抗體稱為單克隆抗體。 特征：如何大量生產(chǎn)特異性強、靈敏度高、單克隆抗體的制備過程、細胞融合、篩選、能產(chǎn)生特定抗體的細胞群、單克隆抗體、單克隆抗體？ 利用淋巴細胞產(chǎn)生抗體的功能，利用腫瘤細胞的無限增殖特性，利用細胞融合技術，融合兩細胞獲得具有淋巴細胞和腫瘤細胞特性的雜交瘤細胞，利用動物細胞培養(yǎng)技術大量培養(yǎng)雜交瘤細胞，1、考慮本過程利用什么原理，免疫原理，細胞融合原理如此融合的雜交瘤細胞繼承了父母細胞的遺傳物質(zhì)，不僅具有b細胞分泌抗體的能力，還具有無限增殖的能力，因此可以得到大量的單克隆抗體，單克隆抗體的應

11、用與通?？贵w相比，單克隆抗體的產(chǎn)量高，特異性高應用主要有：1，臨床診斷，2，作為載體攜帶抗癌劑，形成“生物導彈”治療腫瘤，資料：目前世界各國已開發(fā)出數(shù)百人的單克隆抗體。 缺乏良好的診斷手段的感染癥、免疫性疾病、血液疾病、內(nèi)分泌疾病和遺傳病大多以單克隆抗體作為診斷手段是必然的趨勢。 另外，使用單克隆抗體的體內(nèi)診斷，通過體內(nèi)“病灶”的鑒別和定位也備受關注，現(xiàn)在主要用于腫瘤的追蹤和心肌梗塞的診斷。、植物細胞雜交和動物細胞融合的比較、下圖是某同學根據(jù)雜交腫瘤技術的方法設計的生產(chǎn)破傷風桿菌的實驗方案，單克隆抗體、b細胞、抗體、細胞融合、滅活病毒、父母細胞、分泌抗體、無限增殖、初代、繼承、50 1 .動物

12、細胞工程技術的基礎是：() a .動物細胞融合b .胚胎移植c .動物細胞培養(yǎng)d .核移植，c，2 .動物細胞融合和植物體細胞雜交的比較，正確的是() a .結果相同b .雜種細胞的形成過程幾乎相同c .操作過程中酶的作用誘導d .融合的手段相同，b，3 .單克隆抗體的制造過程中骨髓瘤細胞和b淋巴無法在該培養(yǎng)基中增殖的細胞，在()淋巴細胞小鼠骨髓瘤細胞B淋巴細胞自融合細胞小鼠骨髓瘤細胞雜交瘤細胞b .c .d .c (2006年北京卷1題)以下不能說明細胞全能性的實驗， a .胡蘿卜，麻煩你，麻煩你，麻煩你，麻煩你，麻煩你，麻煩你，麻煩你。 a .培養(yǎng)中的人效應t細胞是單克隆抗體b .培養(yǎng)中的人b細胞可以無限增殖c .人的成熟紅血球通過培養(yǎng)可以用細胞株d .胰蛋白酶處理肝組織得到單一肝細胞，動物細胞工程技術的基礎是() a .動物細胞融合b .單克隆抗體c .胚胎移植d .動物細胞培養(yǎng)根據(jù)圖，(1)這是細胞，是分化的。 (2)抗體開始合成到細胞分泌為止，通過的細胞結構的順序是(加標簽)。 抗體的分泌表明細胞的各種生物膜具有結