1、白細胞顯微鏡計數(shù)法（一） 原理 取稀釋酸溶液，將血液稀釋一定倍數(shù)并破壞紅細胞，滴入計數(shù)池，計數(shù)一定范圍內(nèi)白細胞數(shù)，然后換算成每升血中白細胞數(shù)。（二） 試劑 白細胞稀釋液：冰乙酸1.0ml，加蒸餾水至100ml，再加10g/l亞甲藍（或結(jié)晶紫）1滴，可使白細胞略著色，用時便于區(qū)別紅細胞稀釋液。（三） 器材1. 顯微鏡：普通生物顯微鏡。2. 微量吸管：吸管上刻有10和20ul兩個刻度（誤差+-1%）。微量吸管由于生產(chǎn)廠家不同，質(zhì)量也不相同，但不論哪家產(chǎn)品，在使用前均需經(jīng)嚴格校正，且應(yīng)做到每位患者1支。3. 細胞計數(shù)板：計數(shù)板是用優(yōu)質(zhì)厚玻璃制成，每塊計數(shù)板又分兩個計數(shù)池。在計數(shù)池兩側(cè)各有一條支柱，與

2、計數(shù)池高度差是0.1mm。所以將一塊平整的血細胞計數(shù)蓋片放在兩條支柱上時，蓋片底面與計數(shù)池之距離為0.1mm。 目前國內(nèi)通用的是改良Neubauer計數(shù)板。這類計數(shù)板中，每個計數(shù)池的邊線長寬各為3mm，并被精密地刻劃成9個大方格，每個大方格長寬各為1.0mm，其面積為1m。加蓋玻片后的容積為1m0.1mm.其中四角上的大方格用單線劃成16個中方格，作白細胞計數(shù)用；中央1大方格則用雙線劃成25個小中方格，每個小中方格又用單線劃成16個小格，總計為400個小格。大方格每邊長的誤差是+-1%；蓋片與計數(shù)池面之距離誤差為+-2%。4. 白細胞蓋片：這是特制的血細胞計數(shù)用蓋片，要求表面光滑平整，兩面平整

3、度為0.002mm以內(nèi)，有一定重量，不被血細胞懸液浮起。其厚度應(yīng)為0.40.7mm，通常大小為24200.6mm。蓋片是否平整，可用光波干涉現(xiàn)象進行鑒定。其方法是：將蓋片擦凈后，平整放在標準平面平晶上，用日光燈照射，觀察在平面平晶上所見到的干涉條紋，判斷其是否合格。蓋片在使用前應(yīng)當用干凈、柔軟的吸水纖維制品拭凈，特別注意勿讓手接觸使其污染，否則充液時易產(chǎn)生氣泡。（四） 操作1. 取小試管（1275mm）一支，加白細胞稀釋液0.38ml。2. 采指血20ul，吸入稀釋液中，混勻。3. 用小滴管或點眼棒取少量混懸液，滴入計數(shù)池中，靜止23min.4. 用低倍鏡計數(shù)四角大方格的白細胞。計數(shù)時應(yīng)按一定

4、順序，對壓線的白細胞應(yīng)按數(shù)上不數(shù)下，數(shù)左不數(shù)右的原則計數(shù)。（五） 計算白細胞/L=四大方格白細胞數(shù)（N）/41010 620=N5/10010 9=N/2010 9/L式中：1/4標示平均一大方格中白細胞數(shù)。10表示10大方格內(nèi)白細胞數(shù)。10 6表示1升稀釋液中白細胞數(shù)。20為稀釋倍數(shù)。血小板顯微鏡計數(shù)（一） 原理 利用能保護血小板的稀釋液，將血液稀釋一定倍數(shù)，滴入計數(shù)池，計數(shù)一定范圍內(nèi)血小板數(shù)，即可換算成每升血中血小板數(shù)。（二） 稀釋液1. 草酸銨稀釋液草酸銨 1.0gEDTA-Na2 0.012g蒸餾水 加至100.0ml配好后用數(shù)層濾紙過濾，清亮后使用。此液對紅細胞破壞力較強，血小板形態(tài)

5、清楚。但只加草酸銨，不加EDTA鹽，則易產(chǎn)生草酸鈣結(jié)晶。2. 許汝和式稀釋液尿素（AR或GR） 10.0g檸檬酸鈉 0.5g甲醛溶液 0.1ml蒸餾水 加至100.0ml混合后過濾即可備用。此稀釋液破壞紅細胞完全，視野清晰，血小板清楚。但尿素易分解，可因室溫升高和保存過久而失效。一般只能使用10d，4攝氏度冰箱中保存，可稍延長使用期。一次配量不宜過多。歸納血小板稀釋液的成分包括抗凝劑，如檸檬酸鹽、EDTA鹽等；固定防腐劑，如甲醛等；溶血劑，如尿素、草酸銨等，以及等滲劑等。一種好的稀釋液應(yīng)具備：（1）能有效地防止血液凝固；（2）迅速固定血小板，防止其聚集和形態(tài)改變；（3）要求紅細胞破壞完全；（4

6、）組成簡單，易保存，不生長細菌。（三） 操作1. 取稀釋液0.38ml，采末梢血20ul加入稀釋液中，混勻，靜置10min左右。2. 混勻后取出少許滴入計數(shù)池，在溫室中靜置1015min。3. 在顯微鏡下（低倍或高倍）計數(shù)中央大方格中5個小中方格（與紅細胞同）的血小板數(shù)。（四） 5小中方格血小板數(shù)（N）5102010 6=N10 9/L（五） 注意事項1. 如血小板數(shù)過低，可計數(shù)25個中方格中的血小板數(shù)，結(jié)果200.2. 凡影響紅白細胞計數(shù)的技術(shù)因素都應(yīng)注意。3. 全部器材和稀釋液應(yīng)十分清潔。因為血小板形態(tài)不規(guī)則且細小，任何灰塵斑點都可給計數(shù)造成困難，甚至誤認。4. 刺入皮膚深度要適當（23mm）,血液應(yīng)自然流出，避免擠壓。動作要快，以防止血小板聚集。5. 如和血常規(guī)一起做，應(yīng)先采血小板計數(shù)用血。6. 因血小板易聚集，所以滴入計數(shù)池之前應(yīng)充分混勻，但又不能用力過度，以防止破壞血小板。7. 血小板在計數(shù)池中，完全下沉后方可計數(shù)。沉積時間短，結(jié)果偏低。但過長，計數(shù)池中稀釋液容易蒸發(fā)，尤其是夏季。所以最好將計數(shù)板放入溫室中。8. 用尿素稀釋液，一般應(yīng)在1h內(nèi)計數(shù)完畢，放置時間過長，計數(shù)結(jié)果偏低.（六） 質(zhì)量控制 血小板計數(shù)質(zhì)控較難，但應(yīng)按操作規(guī)程，并認真參照注意事項，減少血小