1、實驗一 維生素C的測定(2,6-二氯酚靛酚滴定法1、 測定原理2,6-二氯酚靛酚滴定法用于測定還原型抗壞血酸?？箟难岱肿又写嬖谙┐际浇Y(jié)構(gòu)（HOCCOH），因而具有很強的還原性，還原型抗壞血酸能還原2,6-二氯酚靛酚染料。2,6二氯酚靛酚染料在酸性溶液中呈紅色，在中性或堿性溶液中呈藍色。因此，當用2,6二氯酚靛酚染料滴定含有抗壞血酸的酸性溶液時，被還原后紅色消失成為無色的衍生物，可作為維生素C含量測定的滴定劑和指示劑。還原型抗壞血酸還原染料后，本身被氧化為脫氫抗壞血酸。當抗壞血酸全部被氧化時，滴下的2,6二氯酚靛酚溶液則呈紅色。在測定過程中當溶液從無色轉(zhuǎn)變成微紅色時，表示抗壞血酸全部被氧化，此

2、時即為滴定終點。根據(jù)滴定消耗染料標準溶液的體積，可以計算出被測定樣品中抗壞血酸的含量。在沒有雜質(zhì)干擾時，一定量的樣品提取液還原標準染料液的量、與樣品中所含抗壞血酸的量成正比。反應(yīng)式如下：二、實驗儀器與試劑1.儀器組織搗碎機；水果刀； 托盤天平；精密天平；稱量紙；卷紙；臺式離心機；電爐； 吸耳球；玻璃棒；蒸餾水，蒸餾水洗瓶； 記號筆、標簽紙、定性濾紙；20cm鑷子；5ml、10ml移液管、(微量)酸式滴定管、漏斗；漏斗架；50ml、250ml、 500ml 、1000ml燒杯；10ml 、500 ml、1000 ml量筒；100ml具塞量筒(或普通量筒)； 100mL、250mL棕色容量瓶；50

3、ml或100ml三角燒瓶。2.原料及試劑 本實驗材料是，用水均為蒸餾水，試劑純度均為分析純度。 (1)2%草酸溶液：草酸20g溶于700ml蒸餾水中，稀釋至1000ml。(2)1%草酸溶液：取上述2%草酸溶液450ml，稀釋至900ml。(3)抗壞血酸標準溶液：稱取抗壞血酸20mg，用適量1%草酸溶液溶解后，移入100mL棕色容量瓶中，并以1%草酸溶液定容，振搖混勻，備用 。 (4)0.02% 2,6-二氯酚靛酚溶液： 稱取碳酸氫鈉52.2mg，溶解在200mL沸水中。再稱取2,6-二氯酚靛酚49.2mg，溶于上述碳酸氫鈉溶液中。冷后，過濾于250ml棕色容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻備用。臨

4、用前標定：取2mL濃度為0.2mg/ml的抗壞血酸標準溶液于三角瓶中，加1%草酸5mL，搖勻，用配制的2,6-二氯酚靛酚染料溶液滴定至微紅色，15s不褪色即為終點，并計算如下：每1mL染料溶液相當于抗壞血酸的毫克數(shù)=滴定度(T)=CV1/V2。式中：C-抗壞血酸的濃度(mg/ml)= 0.2 V1-抗壞血酸的量(ml)=2 V2-消耗染料溶液的量(ml)=31.84 得出T=0.22/31.84=1.26102三、實驗步驟1. 取200g新鮮橙子(去皮、去核)，置于1000ml燒杯內(nèi)，稱重。 2.將樣品倒入組織搗碎機，加入等量2%草酸（WV），加蓋旋緊，勻漿5min。3. 取出勻漿物質(zhì)。4.稱

5、取30g勻漿物質(zhì)于50ml小燒杯中編號，記錄。5. 用少量1%草酸將稱取的勻漿物質(zhì)倒入100ml容量瓶中，并用1%草酸反復(fù)洗滌燒杯（3次），其洗滌液一并移入，并用1%草酸定容到100ml。6.加塞后將勻漿物質(zhì)與1%草酸充分混合，靜置10min。7.取上述溶液過濾或離心。8. 用移液管吸取10ml濾液置于三角燒瓶內(nèi)，加入10ml 1%草酸（2個平行樣品，編號）；用移液管吸取10ml蒸餾水，加入10ml 1%草酸（空白對照）。9. 加1ml氯仿，將2,6二氯酚靛酚染料滴定至終點（淡粉紅色，15s不褪色或觀察氯仿層呈現(xiàn)淡紅色。），記錄染料消耗量。 10. 計算每100g樣品中維生素C的含量（ml）

6、及平行樣品誤差范圍，公式如下：維生素C含量（ml/100g）=(V1-V2)T/W100式中：V1-滴定樣品時耗去的染料溶液的量(ml) V2-滴定空白時耗去的染料溶液的量(ml) T - 1mL染料溶液相當于抗壞血酸的毫克數(shù)W -滴定時所取的濾液中，含樣品的量(g)四、實驗結(jié)果、數(shù)據(jù)計算與分析組別耗去的染料溶液的量(ml)分析數(shù)據(jù)(ml)空白對照：水1.601.60樣品一43.4244.61樣品二45.80滴定時所取的濾液中，含樣品的量W (g)=30/2/10010=1.50維生素C含量（ml/100g）=(V1-V2)T/W100=36.13食物成分表（全國平均值）中橙子的VC含量約33

7、mg/100g。比測定值略小。五、注意事項及說明(1) 某些水果、蔬菜（如橘子、西紅柿等）漿狀物定容時泡沫太多，可加數(shù)滴丁醇或辛醇消泡。(2)大多數(shù)植物組織內(nèi)含有一種能破壞抗壞血酸的氧化酶，因此，抗壞血酸的測定應(yīng)采用新鮮樣品并盡快用2草酸溶液制成勻漿以保存維生素C。(3) 樣品的提取液制備和滴定過程，要避免陽光照射和與銅、鐵器具接觸，以免抗壞血酸被破壞。(4) 整個操作過程要迅速，防止還原型抗壞血酸被氧化。滴定過程一般不超過2min。滴定所用的染料不應(yīng)小于1ml或多于4ml，如果樣品含維生素C太高或太低時，可酌情增減樣液用量或改變提取液稀釋度。(5) 本實驗必須在酸性條件下進行。在此條件下，干擾物反應(yīng)進行得很慢。2%草酸有抑制抗壞血酸氧化酶的作用。(6) 干擾滴定因素有：樣品中可能有其它雜質(zhì)還原二氯酚靛酚，但反應(yīng)速度均較抗壞血酸慢，因而滴定開始時，染料要迅速加入，而后盡可能一點一點地加入，并要不斷地搖動三角瓶，直至呈粉紅色，于15s內(nèi)不消退為終點。(7) 提取的漿狀物如不易過濾，亦可離心，留