1、a,1,中藥質(zhì)量控制和評價模式,a,2,要 點,建立多元化中藥質(zhì)量控制和評價模式: 形性檢測化學檢測生物檢測（三位一體） 保證中藥安全性、有效性和質(zhì)量穩(wěn)定性。,a,3,本章主要內(nèi)容提綱,1 中藥質(zhì)控現(xiàn)狀 2 中藥質(zhì)控方向 3 中藥質(zhì)控模式,a,4,1 中藥質(zhì)控現(xiàn)狀,中藥質(zhì)量控制根本目標：保證中藥安全有效。 而中藥質(zhì)控的現(xiàn)行目標：保證中藥材或制劑的一致性和穩(wěn)定性。 目前中藥內(nèi)在質(zhì)量控制模式基本上是“惟成分論”，即通過對個別指標性成分進行定性或/和定量分析來實現(xiàn)質(zhì)量控制和評價。,a,5,中藥與化學藥品質(zhì)量標準的根本區(qū)別: 化學藥品：分子結(jié)構(gòu)清楚，構(gòu)效關(guān)系明確，鑒別、檢查、含量測定可以直接作為療效評

2、價的指標。 中藥：在中醫(yī)理論指導下，尤其是復方制劑，檢測任何一種活性成分均不能體現(xiàn)其整體療效?，F(xiàn)行中藥質(zhì)量控制的基本模式是參照國外植物藥的質(zhì)量控制方法，借鑒化學藥品質(zhì)量控制的模式建立的。,1 中藥質(zhì)控現(xiàn)狀,a,6,1 中藥質(zhì)控現(xiàn)狀,中藥化學指紋圖譜技術(shù)對中藥質(zhì)量控制有一定的促進作用，但中藥化學成分變化因素較為復雜，選擇合理的指紋信息難度較大，其重現(xiàn)性、耐受性及譜效關(guān)系等還有待深入研究。 中藥化學指紋圖譜實質(zhì)上是中藥部分成分的“化學條碼”，與安全性、有效性關(guān)聯(lián)意義不大。,a,7,1 中藥質(zhì)控現(xiàn)狀,如冬蟲夏草測定腺苷含量、板藍根檢測精氨酸, 既不是其主要有效成分,也不是其專屬性成分, 對其中藥質(zhì)量

3、控制幾乎沒有實際意義。 即使是檢測有效成分,往往量效關(guān)系不明顯： 如人參的人參總皂苷：人參(主根) 約含2% , 人參須約含5%, 人參葉可達10%。,a,8,1 中藥質(zhì)控現(xiàn)狀,大部分中藥的有效成分仍未得以闡明。 據(jù)統(tǒng)計，中國藥典2005年版(一部)共收載中藥材(含飲片和提取物)572種，其中只有60%有過化學成分研究報道，約20%進行過較系統(tǒng)的化學成分研究，至今已闡明其有效成分的品種不到5%。,a,9,1 中藥質(zhì)控現(xiàn)狀,中藥個別或部分指標性成分一致性和穩(wěn)定性制劑質(zhì)量一致性和穩(wěn)定性臨床上安全性和有效性！,a,10,2 中藥質(zhì)控方向,目前中藥質(zhì)量控制和評價的主要手段（中國藥典2005年版一部基本

4、上是用這兩種方法）： 形性檢測法化學檢測法 質(zhì)控策略探索：多元化中藥質(zhì)量控制和評價模式 形性檢測化學檢測生物檢測（三位一體）,a,11,2 中藥質(zhì)控方向,中藥質(zhì)量控制和評價的方法可以簡單概括為： 形性檢測法、化學檢測法、生物檢測法。 形性檢測主要指以藥材的形狀、大小、顏色、氣味、表面特征、質(zhì)地、斷面等表觀性狀來判別藥材的種類和真?zhèn)危Σ糠炙幉妮o以簡單的理化試驗。,a,12,2 中藥質(zhì)控方向,化學檢測主要是利用藥材所含化學成分的某些物理性質(zhì)或化學反應(yīng)來對中藥進行定性和定量分析，一般可用于含不同化學成分的性狀相似而又無明顯顯微特征的藥材。 生物檢測是利用生物體包括整體動物、離體組織、器官、細胞和

5、微生物等評估藥物生物活性(包括藥效和毒性)的一種方法。,a,13,中藥質(zhì)控方向 2.1形性檢測,從主觀性和模糊性 （趨向）組織形態(tài)特征三維化、可視化、定量化。 突破傳統(tǒng)的二維平面局限，借助計算機圖形學、計算機三維重建、體視學和圖像分析系統(tǒng)等手段，將生藥組織形態(tài)學研究推向三維化、可視化、定量化。,a,14,“數(shù)字可視化中藥”技術(shù)（中藥計算機三維重建與顯示技術(shù)）（中藥計算機三維仿真技術(shù)）,組織連續(xù)切片圖形 量化 得到深度信息 （將物體不同切片上的二維圖像按照切片的空間位置關(guān)系依次疊加排列而組成物體的三維數(shù)據(jù)；再利用計算機圖像處理技術(shù)、圖形生成理論及視覺心理學原理，在二維平面上形成直觀地顯示出具有生

6、動性和立體感的三維圖像。,a,15,“數(shù)字可視化中藥”技術(shù)應(yīng)用,全方位刻畫中藥材形態(tài)結(jié)構(gòu)、甄別道地與非道地藥材等提供三維立體動態(tài)的鑒定技術(shù)和圖像資料； 形象生動地再現(xiàn)中藥和植物的外觀和微觀的立體結(jié)構(gòu)； 形象生動地再現(xiàn)中藥和植物的外觀和微觀的立體結(jié)構(gòu)以及組織細胞的空間關(guān)系，有助于揭示植物和中藥材的生長發(fā)育規(guī)律、次生代謝產(chǎn)物積累分布動態(tài)、中藥材品質(zhì)變化規(guī)律等。,a,16,比如，可以從不同來源、不同產(chǎn)地（道地）、不同規(guī)格（三七多少頭的、人參多少支的）、導管的長度、木質(zhì)化的藥材木質(zhì)化的程度、油細胞的大小多少、淀粉粒的多少等等，分析出藥材的質(zhì)量，使過去經(jīng)驗鑒別的東西變成了形象化的東西。,a,17,2 中

7、藥質(zhì)控方向 2.1形性檢測,不同種類不同產(chǎn)地的姜黃屬植物葉： 供試材料處理:撕取表皮制片。 其中每份材料選取35片葉子,每片葉子撕取上下表皮各510個視野。 一般在葉片中部中脈附近撕取表皮組織。 觀測：上表皮氣孔，下表皮氣孔； 上表皮副衛(wèi)細胞，下表皮副衛(wèi)細胞； 上表皮細胞，下表皮細胞。,a,18,2 中藥質(zhì)控方向 2.1形性檢測,圖像分析操作: 圖像采集,將制片置于配有CCD攝像機的顯微鏡下觀察采樣 圖像預(yù)處理,包括編輯、輪廓修飾、灰度變換、邏輯運算和二值化操作等,以便獲得清晰完整的目標灰度圖像; 參數(shù)測定,包括面數(shù)密度(個/mm2)、截面積(m2)、周長(m)、最大直徑(m)、長寬比、圓形度

8、、圓球度等參數(shù)。 數(shù)據(jù)倍數(shù)轉(zhuǎn)換,求出目標實際大小值和密度值; 采用系統(tǒng)聚類分析和主成分分析進行模式識別處理。,a,19,“大小”表征：細胞直徑、面積、體積、體密度，平均間距等； “質(zhì)地”表征：細胞體積、密度、壁厚，纖維和石細胞密度等； “粉性”表征：淀粉粒和木質(zhì)化細胞的數(shù)密度、體密度、體積等； “油性”表征：油細胞數(shù)密度、體密度、油滴面積、體積等) 。,例如,a,20,2 中藥質(zhì)控方向 2.1形性檢測,大小、密度和形狀因子（3大類參數(shù)） 體視學原理 計算機圖像技術(shù) 組織細胞顯微圖像的形態(tài)特征 數(shù)值分類 歸納出其形態(tài)學特征 建立 分類鑒定譜系圖,a,21,2 中藥質(zhì)控方向 2.2化學檢測,采用H

9、PLC、MS、NMR、IR、UV、GC、CE等及其聯(lián)用技術(shù)進行化學指紋圖譜定性和有效成分或指標成分定量， 結(jié)合化學計量學、人工智能等技術(shù)建立中藥化學質(zhì)量模式識別系統(tǒng)，表征中藥化學組分群特征 優(yōu)勢：a 檢測中藥材及其產(chǎn)品的真?zhèn)危?b 區(qū)分藥材的不同部位； d 追蹤制劑的工藝過程及某些化學成分的變化； c 監(jiān)測原料與成品之間、成品批間質(zhì)量的穩(wěn)定性、一致性。,a,22,2 中藥質(zhì)控方向 2.3 生物檢測,生物檢測 將生物檢測方法引入中藥質(zhì)量控制與評價體系，不 僅可以輔助鑒定真?zhèn)蝺?yōu)劣，又可不同程度地關(guān)聯(lián)安全 性和有效性，尤其在無法對中藥中未知復雜成分用成 分檢控的方法控制其質(zhì)量時，更顯其優(yōu)越性。,a,

10、23,2 中藥質(zhì)控方向 2.3生物檢測,生物效價檢測：是指在嚴格控制的試驗條件下，通過比較標準品和供試品對生物體或離體器官與組織的特定生物效應(yīng)，從而評價和控制供試品的質(zhì)量或活性。 適用于結(jié)構(gòu)復雜或理化方法不能測定其含量、或者理化測定不能反映其臨床生物活性的藥物。,a,24,2 中藥質(zhì)控方向 2.3生物檢測,中國藥典2005 采用了生物效價檢測方法控制水蛭質(zhì)量，本品每1g含抗凝血酶活性應(yīng)不低于16.0 U。 比濁法測定紅霉素生物效價。 基于抗菌效價檢測的板藍根藥材品質(zhì)評價方法的研究。 生物效價檢測研究進展（3000字）（50%外文參考文獻） 中藥質(zhì)量控制中的生物效價檢測的作用與進展,a,25,例

11、：基于神經(jīng)氨酸酶活性檢測的板藍根品質(zhì)的生物評價,采用流感病毒神經(jīng)氨酸酶 (NA) 體外活性熒光檢測法測定板藍根的NA 抑制生物活性, 并建立板藍根抗病毒生物效價檢測方法。研究表明板藍根具有抑制NA的活性, IC50 = (0.90 0.20) mgmL1 (相當于生藥), 其量效曲線形狀與陽性對照藥磷酸奧司他韋相似, 提示二者對NA 的抑制可能具有相同的作用方式。,a,26,采用“質(zhì)反應(yīng)平行線”法設(shè)計和優(yōu)化的板藍根抗病毒生物效價檢測方法, 重復性較好 (RSD = 5.78%), 實際樣品檢測結(jié)果均能通過可靠檢驗 (偏離直線P 0.05、偏離平行P 0.05)。研究結(jié)果表明, 所建立的生物效價

12、檢測方法可以作為板藍根品質(zhì)生物評價的方法之一。,a,27,當前, 板藍根的質(zhì)量控制方法主要是依托常規(guī)性狀 鑒別和精氨酸的定性檢識, 該方法既難以做到客觀定量, 又與板藍根的藥理活性幾無關(guān)聯(lián), 也就難以保證它的臨 床有效性。 生物效價檢測方法與常規(guī)鑒別方法比較不僅在結(jié)果 上具有一致性, 而且具有靈敏度高、重復性好、操作簡 單、客觀、可定量、快捷等優(yōu)點。本方法的建立提高了 板藍根的質(zhì)量控制水平, 并且能夠為抗病毒類中藥質(zhì)量 生物控制的研究提供參考。,a,28,2 中藥質(zhì)控方向 2.3生物檢測,目前生物效價檢測的常用方法有：酶活力、凝集素活性、抗病毒測試、抗菌活性、抗炎活性等。這些方法的專屬性較強，

13、而通用性較差，有限的實驗條件難以同時滿足幾百甚至幾千種不同中藥及中藥制劑的質(zhì)量控制和評價。 另：生物熱動力學方法,a,29,2 中藥質(zhì)控方向 2.3生物檢測,生物效價檢測方法選取以下原則： (1) “相關(guān)性”是指所選取的檢測方法應(yīng)與藥物的功能主治或現(xiàn)代藥理作用有關(guān)，從而保證檢測結(jié)果與臨床療效的相關(guān)性； (2) “重復性”是指在嚴格規(guī)定的條件下，檢測結(jié)果應(yīng)有一定的重復性，以保證試驗的延續(xù)性和可重復性； (3) “靈敏性”是指所選取的檢測指標應(yīng)能客觀體現(xiàn)反應(yīng)程度隨劑量的變化而有顯著的改變；,a,30,2 中藥質(zhì)控方向 2.3生物檢測,(4) “適用性”是指選取的檢測方法應(yīng)快速、高效、通用性好、易于

14、推廣； (5) “定性定量”是指所選取的檢測方法最好應(yīng)具有定性鑒別(生物效應(yīng)譜)和定量分析(生物效價值)的雙重特性。,a,31,2 中藥質(zhì)控方向 2.3生物檢測,生物效價檢測方法之一：“熱譜圖”（基于生物熱動力學的微量熱分析方） 測定不同中藥與機體相互作用的能量轉(zhuǎn)移和熱變化， 將中藥內(nèi)在的藥性品質(zhì)表達為特征“指紋”生物熱活性譜線圖(簡稱“熱譜圖”或“生物效應(yīng)譜”) ，可對生物體在生長代謝過程中的相關(guān)信息進行定性、定量分析，有較強的專屬性、靈敏性和重現(xiàn)性，同時亦可按生物統(tǒng)計學進行實驗設(shè)計，屬于生物效價檢定中的量反應(yīng)。,a,32,2 中藥質(zhì)控方向 2.3生物檢測,生物熱動力學方法“熱譜圖”原理：

15、(1)生物體的生長代謝都伴有能量的轉(zhuǎn)移和熱變化， 并在一定的閾值內(nèi)呈規(guī)律性波動； (2)中藥的生物活性實質(zhì)上就是中藥藥效物質(zhì)對生物 體生長代謝的干預(yù)作用，這種干預(yù)作用不可避免 地將影響生物體的能量轉(zhuǎn)移和產(chǎn)熱變化；,a,33,2 中藥質(zhì)控方向 2.3生物檢測,(3)通過測定能量和產(chǎn)熱的變化，可以間接地了解生 物體的生長代謝變化，從而判斷藥物的生物活性 情況； (4)生物熱活性檢測是以體系的狀態(tài)參數(shù)為研究對 象，能實時、在線、快速地刻畫機體的表觀狀態(tài) 及其變化情況。,a,34,2 中藥質(zhì)控方向 2.3生物檢測,“熱譜圖”特點： “普適性好”即是指對不同的研究對象(如微生物、組織、細胞、分子、基因)

16、，均只需用： 一個方法(生物熱活性測定方法)、 一臺儀器(生物熱活性檢測儀)、 一套指標(生物熱譜圖和熱動力學參數(shù)),a,35,2 中藥質(zhì)控方向 2.3生物檢測,“實時在線”是指生物熱活性檢測儀有如多導生理檢測儀，可以在第一時間及時地直觀地反映生命體系的宏觀狀態(tài)變化； “靈敏、準確”是指生物熱活性檢測所需的藥物樣品量少，一般是毫克級，同時由于研究對象和環(huán)境的可控性好、操作步驟簡單、自動化程度高，所以方法的精密度、重現(xiàn)性和穩(wěn)定性較好；,a,36,2 中藥質(zhì)控方向 2.3生物檢測,“高效”是指一臺生物熱活性檢測儀可擁有816個檢測通道，甚至更多，可同時對多個研究對象或目標進行檢測和分析，降低成本。

17、,a,37,中藥質(zhì)控模式 基于道地藥材和生物效價檢測的中藥質(zhì)控模式,3.1 道地藥材在中藥生產(chǎn)質(zhì)量控制上的歷史和現(xiàn)實意義 道地藥材來源于特定產(chǎn)地且傳統(tǒng)公認的名優(yōu)正品藥材, 是優(yōu)質(zhì)中藥材的代名詞,也是歷代中醫(yī)評價中藥材品質(zhì)的 一個綜合而物質(zhì)化標準。 以道地藥材為參照物,克服了單一對照品的不足,有利 于體現(xiàn)中藥多成分、多靶點、多環(huán)節(jié)、整合作用的特點和 優(yōu)勢。,a,38,3 中藥質(zhì)控模式 基于道地藥材和生物效價檢測的中藥質(zhì)控模式,3.2 道地優(yōu)級藥材對照品采集和標化的技術(shù)要求 3.2.1 原料的選擇 應(yīng)當選擇道地核心產(chǎn)區(qū)、主流優(yōu)良品 種、優(yōu)等商品規(guī)格的品種，同時還要有嚴格的標準操作規(guī) 程從根本上保證

18、對照品原料的均一性、穩(wěn)定性、代表性和 可延性。,a,39,3.2.2 標化程序 必須保證標化的程序合法、方法科學。 參照世界衛(wèi)生組織的有關(guān)指導原則，應(yīng)該在藥典委 員會指導下，確定牽頭單位，實行多實驗室協(xié)作標化。,a,40,3.2.3 量值的溯源性 新建立的生物效價檢測方法必須 按照藥典要求進行方法學驗證。標化用基準物質(zhì)應(yīng)與被 標物質(zhì)有相同的特性值，必須是WHO、中國藥品生物制品 檢定所等法定部門制備或賦值的相應(yīng)標準物質(zhì)。標定結(jié) 果均應(yīng)照“生物檢定統(tǒng)計法-量反應(yīng)平行線測定法”等經(jīng) 認可的方法進行可靠性測驗及效價計算，并根據(jù)統(tǒng)計學 有效結(jié)果計算對照品的效價及其置信限。,a,41,3.3.4 檢測和

19、標化 道地優(yōu)質(zhì)藥材對照品的檢測和標化 應(yīng)當包括藥典常規(guī)檢測、化學標化和生物效價標化等。 具體檢測和標化項目有：基原鑒定、產(chǎn)地鑒定、性狀鑒 定、顯微鑒定、理化檢測、多指標成分含量檢測、生物 效價檢測、衛(wèi)生學檢測等。,a,42,a,43,3 中藥質(zhì)控模式 基于道地藥材和生物效價檢測的中藥質(zhì)控模式,3.3 生物效價檢測方法的考察和驗證 3.3.1 生物模型的篩選: 三類生物模型,即基本工具菌; 相關(guān)病原微生 物或低等原生動物; 目標組織細胞及細胞器。 3.3.2 檢測方法的篩選: 應(yīng)具有快速、靈敏、客觀、可定量、普適性好等特 點。如抗生素微生物效價檢測法、免疫測定法、生物熱 動力學法等。,a,44,3 中藥質(zhì)控模式 基于道地藥材和生物效價檢測的中藥質(zhì)控模式,3.3.3 檢測指標的篩選: 盡可能與中藥功能主治或生物活性作用有關(guān)聯(lián);可 量化,重現(xiàn)性好。（如可用于生物效價檢測的生物熱動力 學方法的主要參數(shù)有生長速率常數(shù)K、抑制率I和半抑制 率IC50、最大發(fā)熱功率、熱焓變化H等。） 3