1、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)基本知識(shí) 和操作技術(shù),上海中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心 湯家銘,1,進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)操作前必須注意的事,一、動(dòng)物福利和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)倫理問(wèn)題 什么是動(dòng)物福利？ 動(dòng)物福利是指動(dòng)物在整個(gè)生命過(guò)程中應(yīng)得到人類(lèi)的保護(hù)，其基本原則是要善待動(dòng)物，保證動(dòng)物的健康和快樂(lè)。 動(dòng)物福利的提出是基于這樣一個(gè)觀點(diǎn)，即動(dòng)物與人一樣，有思維、有情感，應(yīng)當(dāng)給予與人一樣的生存權(quán)。 臺(tái)灣學(xué)者夏良宙（1990年）把動(dòng)物福利概括成兩句話： 善待活著的動(dòng)物， 減少動(dòng)物死亡的痛苦。 應(yīng)該再加一句：動(dòng)物死后應(yīng)得到妥善處理。,2,在國(guó)際上被普遍認(rèn)可的動(dòng)物福利包括以下5個(gè)內(nèi)容，即： 應(yīng)提供給動(dòng)物滿足生長(zhǎng)發(fā)育和繁衍后代的營(yíng)養(yǎng)食物和清潔的飲水，使其免受

2、饑渴。（吃好喝好） 應(yīng)提供給動(dòng)物適當(dāng)?shù)臈⒅睾惋曫B(yǎng)場(chǎng)所，使其能休息和睡眠。（休息好） 應(yīng)提供預(yù)防動(dòng)物疾病和患病后及時(shí)診療的措施，使其免受疾病和傷害的痛苦。（健康成長(zhǎng)） 應(yīng)提供給動(dòng)物安靜的飼養(yǎng)環(huán)境，無(wú)刺激動(dòng)物發(fā)生應(yīng)激和恐懼的場(chǎng)面和聲音。（平靜生活） 應(yīng)提供給動(dòng)物同類(lèi)一起自由玩耍、表達(dá)天性的空間和自由。（表達(dá)天性）,3,飼養(yǎng)繁殖實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的目的是用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物作為人類(lèi)的替難者進(jìn)行各種生物醫(yī)學(xué)研究。一方面隨著生物醫(yī)學(xué)的發(fā)展，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的使用量逐年增加，使用種類(lèi)也逐年擴(kuò)大；另一方面從動(dòng)物福利和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)倫理學(xué)考慮，又需要盡量減少一些不必要的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，特別是人類(lèi)的寵物諸如貓、犬、猴等，或者在不得不做的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中

3、盡可能將動(dòng)物的痛苦、壓迫和不適降到最低。,4,動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的倫理判斷標(biāo)準(zhǔn)： 1.必須權(quán)衡實(shí)驗(yàn)的目和得出的結(jié)論與動(dòng)物由此而受到的傷害和死亡。 2.必須清楚而且明確沒(méi)有任何替代方法可達(dá)到所做的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的目的這個(gè)前提。 3.必須將動(dòng)物的痛苦、壓迫和不適減到最低程度。,5,二、 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)是實(shí)踐性非常強(qiáng)的技術(shù)和方法，不能僅靠書(shū)本理論知識(shí)，需要通過(guò)反復(fù)實(shí)踐加以掌握。 目的： 保證實(shí)驗(yàn)的順利進(jìn)行。 減少動(dòng)物承受的痛苦。,6,成為熟練掌握動(dòng)物實(shí)驗(yàn)操作技術(shù)的能手或?qū)＜覒?yīng)該是大學(xué)/研究所每一個(gè)動(dòng)物飼養(yǎng)管理人員所追求的目標(biāo)。,7,動(dòng)物實(shí)驗(yàn)前的準(zhǔn)備,1. 所用動(dòng)物實(shí)驗(yàn)設(shè)施是否符合本實(shí)驗(yàn)要求 普通設(shè)施，清潔級(jí)、SPF設(shè)施，

4、感染性設(shè)施，有毒有害供試品設(shè)施，放射性設(shè)施 實(shí)驗(yàn)室、手術(shù)室 2. 所用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的品種、品系、性別、數(shù)量等能否得到 所需要的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)技術(shù)是否熟練掌握 所用動(dòng)物實(shí)驗(yàn)器具、試劑是否準(zhǔn)備好 所用的儀器設(shè)備是否處于可運(yùn)行狀態(tài),8,6.預(yù)實(shí)驗(yàn) 正式實(shí)驗(yàn)前的演習(xí) 預(yù)實(shí)驗(yàn)可用少量動(dòng)物進(jìn)行 預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果不能并入正式實(shí)驗(yàn)結(jié)果一起分析。,9,一、動(dòng)物的抓取,動(dòng)物的抓取是順利進(jìn)行各項(xiàng)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)操作最基本的一個(gè)環(huán)節(jié)。 應(yīng)熟練掌握各種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的抓取方法，用輕柔的手法把對(duì)動(dòng)物施加的恐懼和痛苦降到最低。 一般說(shuō)來(lái)動(dòng)物是不會(huì)主動(dòng)攻擊人的。 小鼠抓取的注意點(diǎn) 大鼠抓取的注意點(diǎn) 3. 豚鼠抓取的注意點(diǎn),10,4. 兔抓取的注意點(diǎn) 最好

5、戴人造革圍裙和袖套，以免爪子抓傷。 采用正確地抓取方法。 可采用兔固定器固定進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作，或一人抓取固定，一人實(shí)驗(yàn)操作。,11,豚鼠和兔的抓取,12,5. 犬抓取注意點(diǎn) 實(shí)驗(yàn)用犬有專(zhuān)用的比格犬和農(nóng)村收購(gòu)來(lái)的草犬。 犬是通人性的，草犬購(gòu)入后，飼養(yǎng)人員和實(shí)驗(yàn)人員要經(jīng)常親近它們，使它放松對(duì)你的警惕，容易直接抓取它們。 不要輕易使用長(zhǎng)柄鐵鉗，鉗傷造成的傷害會(huì)使它對(duì)你更加恐懼，影響以后實(shí)驗(yàn)的進(jìn)行。 抓取后用繩子將嘴綁住。,13,二、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)分組設(shè)計(jì),（一）一般動(dòng)物試驗(yàn)分組設(shè)計(jì)的基本原則：隨機(jī)、對(duì)照和重復(fù)。 隨機(jī)：就是按照機(jī)遇均等的原則來(lái)進(jìn)行分組。其目的是盡量減少各種干擾因素造成的實(shí)驗(yàn)誤差，不受實(shí)驗(yàn)者主觀

6、因素或其他偏性誤差的影響。 隨機(jī)化的手段可采用編號(hào)卡片抽簽法，隨機(jī)數(shù)字表或采用計(jì)算器的隨機(jī)數(shù)字鍵。,14,對(duì)照：是要求在實(shí)驗(yàn)中設(shè)立可與實(shí)驗(yàn)組比較，用以消除各種無(wú)關(guān)因素影響的對(duì)照組。 對(duì)照應(yīng)有可比性：同時(shí)同地同條件 對(duì)照設(shè)立有兩種方式： 自體對(duì)照 1.實(shí)驗(yàn)前后對(duì)照 2.身體左右對(duì)照 組間對(duì)照 （以手術(shù)造成兔腹主動(dòng)脈損傷動(dòng)脈粥樣硬化模型為例） 1.正常（空白）對(duì)照組：正常飲食，不做手術(shù) 2.假手術(shù)組：正常飲食，做手術(shù) 3.模型組：手術(shù)+高脂飼料 4.已知療效藥物組：手術(shù)+高脂飼料+已知療效藥物 5.未知療效藥物組：手術(shù)+高脂飼料+未知療效藥物 6.賦型劑對(duì)照：手術(shù)+高脂飼料+賦型劑,15,重復(fù)：是

7、指同一處理要設(shè)置多個(gè)樣本數(shù)。重復(fù)的主要作用是估計(jì)試驗(yàn)誤差、降低試驗(yàn)誤差和增強(qiáng)代表性，提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的精確度，保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果能在不同個(gè)體中穩(wěn)定地重復(fù)出來(lái)。 樣本數(shù)過(guò)少，實(shí)驗(yàn)處理效應(yīng)不能充分顯示；樣本數(shù)過(guò)多，又會(huì)增加實(shí)際工作中的困難。因此在進(jìn)行實(shí)驗(yàn)前必須確定最少的樣本例數(shù)。最少的樣本例數(shù)可按一般估測(cè)方法確定，也可通過(guò)統(tǒng)計(jì)學(xué)方法進(jìn)行測(cè)算確定。,16,（二）動(dòng)物實(shí)驗(yàn)分組設(shè)計(jì)的基本類(lèi)型 1.完全隨機(jī)化設(shè)計(jì) 2.按體重分層隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì) 3.配對(duì)設(shè)計(jì),17,（二）按體重分層隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì) 先確定實(shí)驗(yàn)的組數(shù)，將動(dòng)物稱重，按體重的輕重順序編號(hào)，再用隨機(jī)化工具，如隨機(jī)數(shù)字表等，將動(dòng)物隨機(jī)分配至處理組及對(duì)照組。 隨機(jī)區(qū)組

8、法舉例 以用四氧嘧啶誘發(fā)小鼠糖尿病模型，用藥物進(jìn)行治療觀察療效為例，實(shí)驗(yàn)中可分為5組：正常對(duì)照組、模型組、藥物治療低劑量組、高劑量組和已知可治療糖尿病藥物組，每組10只，5雌5雄。按下列步驟進(jìn)行分組： 1）雌雄分開(kāi)：分組時(shí)雌、雄動(dòng)物分開(kāi)分別進(jìn)行。 2）用記號(hào)筆在小鼠尾巴上隨機(jī)編1-25號(hào)。 3）按編號(hào)稱重，記錄每只小鼠的體重。 4）按動(dòng)物體重順序依次重新編號(hào)。 5）共5個(gè)實(shí)驗(yàn)組分成5個(gè)區(qū)組，每個(gè)區(qū)組都有5只體重相近的動(dòng)物。第一區(qū)組5只動(dòng)物為1、2、3、4、5號(hào)，第二區(qū)組為6、7、8、9、10號(hào)，余類(lèi)推。 6）抄錄隨機(jī)數(shù)表。抄錄數(shù)字的個(gè)數(shù)等于區(qū)組數(shù)減1，如5個(gè)區(qū)組就抄錄4個(gè)數(shù)字。第5個(gè)動(dòng)物無(wú)隨機(jī)

9、數(shù)字，其分組為調(diào)劑。以后的區(qū)組按順序依次抄錄數(shù)字。 7）將小鼠分到各組中。,18,按體重分層隨機(jī)區(qū)組分組,19,三、動(dòng)物編號(hào)常用的標(biāo)記方法,適用需要個(gè)體識(shí)別的實(shí)驗(yàn) 染料標(biāo)記法：適合白色被毛的動(dòng)物，如小鼠、大鼠、豚鼠、兔等。 黃色：常用35%苦味酸溶液 紅色：常用0.5%中性紅溶液 咖啡色: 2%硝酸銀溶液 黑色：煤焦油酒精溶液 優(yōu)點(diǎn)：簡(jiǎn)單、易識(shí)別 缺點(diǎn)：長(zhǎng)期易退色；不能編大號(hào)碼。,20,21,2. 剪耳（打孔）法：嚙齒類(lèi)小動(dòng)物 3. 號(hào)碼鉗法：適用于兔、犬等大動(dòng)物 4. 耳牌法：適用于羊、牛等大家畜 5. 電子芯片植入法：,22,四、動(dòng)物被毛的去除方法,1. 剪毛法：用彎頭剪逆毛方向剪 適用于

10、各種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 2. 拔毛法：常用于兔的耳緣靜脈注射 3. 剃毛法：剃須刀、手術(shù)刀 適用于大動(dòng)物 4. 脫毛法：脫毛劑,23,常用脫毛劑配方 配方1：硫化鈉8g溶于100mL水中。 配方2：硫化鈉：肥皂粉：淀粉的比例為3：1：7，再加水調(diào)成糊狀。 配方3：硫化鈉10g和生石灰15g溶于100mL水中。 配方1和2適用于家兔和嚙齒類(lèi)動(dòng)物的脫毛，配方3適合給犬脫毛。 脫毛后用清水將脫毛區(qū)清洗干凈。,24,五、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的麻醉方法,對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行麻醉的目的是，消除實(shí)驗(yàn)過(guò)程中引起的痛苦和不適，確保實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的安全和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的順利進(jìn)行，是動(dòng)物實(shí)驗(yàn)倫理的一個(gè)重要方面。 麻醉方法有全身麻醉和局部麻醉兩種。在實(shí)驗(yàn)動(dòng)

11、物的麻醉中絕大多數(shù)采用全身麻醉。 應(yīng)結(jié)合實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、?shí)驗(yàn)動(dòng)物種類(lèi)、日齡及健康狀況等因素進(jìn)行綜合考慮，決定選用的麻醉劑和麻醉方法。,25,全身麻醉簡(jiǎn)稱全麻。全麻是指麻醉藥通過(guò)呼吸道吸入、靜脈和肌肉注射等途徑，進(jìn)入實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體內(nèi)，使其產(chǎn)生短時(shí)間意識(shí)喪失、痛覺(jué)消失、肌肉松弛和反射抑制等中樞神經(jīng)系統(tǒng)抑制現(xiàn)象。當(dāng)麻醉藥從體內(nèi)排出或在體內(nèi)代謝破壞后，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物逐漸清醒，不留后遺癥。 全麻有吸入麻醉法和注射麻醉法兩種途徑，吸入麻醉法用揮發(fā)性麻醉藥，注射麻醉法用非揮發(fā)性麻醉藥。,26,（1）吸入麻醉法 常用藥物為乙醚、氟烷和異氟烷等。吸入麻醉法有開(kāi)放吸入和氣管內(nèi)插管吸入兩種方法。 開(kāi)放吸入：適用于嚙齒類(lèi)小動(dòng)物，可用

12、乙醚、氯仿 小動(dòng)物吸入麻醉機(jī)國(guó)外已有售。 氣管內(nèi)插管：適用于犬、猴、羊等大動(dòng)物，氟烷和異氟烷是最常用的麻醉藥。 吸入麻醉的優(yōu)點(diǎn)： 麻醉平穩(wěn)、安全可靠、 停止吸入后很快蘇醒 缺點(diǎn)： 需要一定的儀器設(shè)備， 注意自身防護(hù)。,27,大小鼠麻醉法,28,（2）注射麻醉法 注射麻醉法是使用非揮發(fā)性麻醉藥進(jìn)行全麻的方法。在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中比較常用。 常用麻醉藥： 戊巴比妥鈉 硫噴妥鈉 氯氨酮 烏拉坦 大動(dòng)物：靜脈注射或肌肉注射 嚙齒類(lèi)動(dòng)物：腹腔注射,29,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物麻醉應(yīng)注意的事項(xiàng) 大動(dòng)物麻醉之前應(yīng)禁食。 麻醉之前應(yīng)準(zhǔn)確稱量動(dòng)物體重，作為計(jì)算麻醉劑用量的依據(jù)。 應(yīng)注意不同麻醉藥對(duì)動(dòng)物的作用是不同的，如戊巴比妥鈉、硫

13、賁妥鈉等能抑制心肌收縮力，使肌肉松弛，而氯胺酮?jiǎng)t相反。 大動(dòng)物犬、猴、羊等麻醉前半小時(shí)應(yīng)注射麻醉前給藥如阿托品和苯巴比妥鈉。 靜脈注射麻醉藥是必須緩慢，邊注射邊觀察動(dòng)物的意識(shí)、角膜反射、肌肉緊張性和對(duì)疼痛的反應(yīng)，達(dá)到麻醉要求時(shí)應(yīng)停止注射。,30,6.大動(dòng)物手術(shù)時(shí)應(yīng)配備麻醉師，在麻醉過(guò)程中密切觀察動(dòng)物的反應(yīng)，如血壓、脈搏、呼吸和體溫，及時(shí)調(diào)節(jié)麻醉藥劑量，保證手術(shù)順利進(jìn)行。 7.動(dòng)物在麻醉期間、手術(shù)后至蘇醒期體溫會(huì)下降，應(yīng)注意手術(shù)室的室溫。 8. 注意術(shù)后護(hù)理。,31,麻醉意外的搶救 原因： 麻醉藥速度過(guò)快、劑量過(guò)大、麻醉過(guò)深 后果： 中樞神經(jīng)系統(tǒng)抑制導(dǎo)致呼吸系統(tǒng)、循環(huán)系統(tǒng)功能障礙，引起呼吸、心跳

14、停止。 搶救方法： 要針對(duì)具體情況，采取對(duì)癥治療的措施。 1.立即停止供給麻醉劑 2.人工呼吸，吸氧 3.蘇醒劑 4.呼吸中樞興奮劑如可拉明等和心臟和呼吸興奮劑，如0.1%腎上腺素適量作心內(nèi)或靜脈注射，靜脈滴注50%葡萄糖溶液等。,32,六、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的給藥方法,經(jīng)口給藥法 注射法 其它途徑給藥方法 呼吸道給藥 皮膚給藥 脊髓腔內(nèi)給藥 腦內(nèi)給藥 直腸內(nèi)給藥 關(guān)節(jié)腔內(nèi)給藥,33,經(jīng)口給藥 拌入飼料、飲水中自由攝取 優(yōu)點(diǎn)：省人力 缺點(diǎn)：因個(gè)體差異，攝入量不等 灌胃 優(yōu)點(diǎn)：能準(zhǔn)確定量 缺點(diǎn)：給動(dòng)物造成一定的痛苦，需熟練掌握技術(shù),34,大小鼠灌胃注意點(diǎn) 用灌胃針。 從嘴角處插入，到達(dá)咽部后改變灌胃針的方

15、向，使其與食管的走向一致，然后順利插入。 成年大鼠由于體型較大，不易保定。辦法： 1）一人保定，一人灌胃 2）操作者抓取后，將大鼠尾部按在自己的胸部，達(dá)到固定尾部的目的，然后灌胃。 灌胃量：小鼠0.2-0.4ml/10克， 大鼠1.0ml/100克,大小鼠灌胃,35,兔灌胃法 采用用固定器一人操作，或一人保定一人操作法。 操作者用左手拇指和中指擠壓家兔兩頰，將下頜擠開(kāi)使兔被動(dòng)張口，右手將開(kāi)口器從一側(cè)口角插入口腔并固定，用泡在水中的14號(hào)細(xì)導(dǎo)尿管，經(jīng)開(kāi)口器的孔插入，向前推進(jìn)約15cm，可達(dá)胃內(nèi)，確認(rèn)泡在水中的導(dǎo)管另一端沒(méi)有冒氣泡，說(shuō)明沒(méi)有誤入氣管，即可注入藥液。灌胃量為每只每次80-150mL。

16、,兔灌胃法,36,1. 口服給藥 用右手將口服藥片夾在拇指和食指之間，把左手放在犬的圈套上，用拇指和食指壓著犬的上唇，用力使犬的頭向后仰，繼而把右手中指放在犬的下頜向下壓。當(dāng)犬的嘴張大時(shí)，快速把藥片放在舌根隆起的部位，合上犬的嘴，維持頭后仰姿勢(shì)，右手在咽喉部輕輕按摩。借助犬本能的吞咽動(dòng)作服下藥片。,犬的膠囊給藥法,37,2. 灌胃給藥 在給犬灌胃時(shí)，將犬固定于特制的固定架上，實(shí)驗(yàn)時(shí)將木制開(kāi)口器從一側(cè)口角放入犬的口腔，用左手或繩子固定，右手持12號(hào)胃管由開(kāi)口器的小圓孔向咽后壁方向不斷插入，導(dǎo)管另一端置于一杯清水中，若連續(xù)出現(xiàn)氣泡，說(shuō)明插入呼吸道，應(yīng)立即拔出胃管，重新操作。如無(wú)氣泡，說(shuō)明沒(méi)有插入氣

17、管，插至約20cm，即可到達(dá)胃內(nèi)。犬的灌藥量為每只每次200-500mL。,犬的灌胃給藥法,38,各種動(dòng)物一次灌胃能耐受的最大容積,39,注射法 注射法有皮下注射、腹腔注射、靜脈注射、肌肉注射以及皮內(nèi)注射、腦內(nèi)注射等。 藥物吸收速度： 靜脈注射腹腔注射肌肉注射 皮下注射。 皮內(nèi)注射常用于觀察皮膚血管通透性變化或反應(yīng)，如過(guò)敏試驗(yàn) 腦內(nèi)注射常用于病毒學(xué)接種,40,靜脈注射 大小鼠尾靜脈和足背正中靜脈注射,大小鼠尾靜脈注射,41,豚鼠陰莖靜脈注射,豚鼠足背正中靜脈注射,42,兔耳緣靜脈注射,犬前肢頭靜脈和后肢小隱靜脈注射,43,其它途徑給藥方法 呼吸道給藥： 皮膚給藥： 脊髓腔內(nèi)給藥： 4. 腦內(nèi)給

18、藥： 5. 直腸內(nèi)給藥： 6. 關(guān)節(jié)腔內(nèi)給藥：,44,動(dòng)物間以及動(dòng)物與人之間 給藥等效劑量的換算,在藥理學(xué)毒理學(xué)上常涉及到給動(dòng)物多少劑量的問(wèn)題： 不同種屬動(dòng)物間的劑量換算 動(dòng)物與人之間的劑量換算 人與動(dòng)物間的計(jì)量換算 等效劑量：不同動(dòng)物間或動(dòng)物與人之間可能產(chǎn)生相同藥效的劑量。 等效劑量與單位體重的動(dòng)物體表面積成正比,45,表1.標(biāo)準(zhǔn)體重動(dòng)物由動(dòng)物a到動(dòng)物b的mg/kg換算系數(shù):劑量換算系數(shù),動(dòng)物劑量換算成人劑量： 例1：已知150g大鼠用5mg/kg，換算成成人的用藥劑量：查表大鼠a行，成人b列的換算系數(shù)為0.162，故成人的劑量=50.162=0.81mg/kg。,一種動(dòng)物劑量換算成另一種動(dòng)

19、物劑量： 例2：已知20g小鼠用4mg/kg，換算成8kg比格犬的用藥劑量：查表小鼠a行，比格犬b列的換算系數(shù)為0.15，故比格犬的劑量=40.15=0.60mg/kg,46,非標(biāo)準(zhǔn)動(dòng)物的換算 非標(biāo)準(zhǔn)動(dòng)物換算成標(biāo)準(zhǔn)動(dòng)物：給藥劑量校正系數(shù)Sa 換算系數(shù) 標(biāo)準(zhǔn)動(dòng)物換算成非標(biāo)準(zhǔn)動(dòng)物：給藥劑量換算系數(shù)校正系數(shù)Sb 非標(biāo)準(zhǔn)動(dòng)物換算成非標(biāo)準(zhǔn)動(dòng)物:給藥劑量校正系數(shù)Sa 換算系數(shù)校正系數(shù)Sb 例3：長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)350g大鼠用10mg/kg，換算成8kg比格犬的用藥劑量：查表2，350/150=2.3，校正系數(shù)Sa=1.301。再查表1大鼠a行，比格犬b列的換算系數(shù)為0.30，故8kg比格犬的劑量=101.30

20、10.30=3.90mg/kg,表2. 非標(biāo)準(zhǔn)體重動(dòng)物的校正系數(shù),47,（一）采血法 大小鼠 剪尾 尾靜脈切割 大鼠后肢足中靜脈采血 眼眶后靜脈叢采血 摘眼球采血 腋窩動(dòng)靜脈采血 心臟采血 腹主動(dòng)脈采血,七、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體液的采集方法,48,心 臟 采 血,眼眶后靜脈叢采血,足背正中靜脈采血,腹主動(dòng)脈采血,49,小鼠頜下靜脈采血法,50,大小鼠不同采血方法的比較,51,豚鼠心臟采血,兔耳緣靜脈采血,兔心臟采血,兔頸總動(dòng)脈采血,52,一個(gè)動(dòng)物到底能采多少血，取決于動(dòng)物的體重、定期活體采血還是處死采血。 動(dòng)物的全血量為動(dòng)物體重的8%左右，其中約30%儲(chǔ)藏在全身毛細(xì)血管內(nèi)。全血中約50%是有形成分。據(jù)此

21、可測(cè)算處死后的采血量和血清量。 采血為全血量的10%時(shí)，兩個(gè)星期恢復(fù)； 采血為全血量的30%時(shí)，將危及生命。,53,血清和血漿的區(qū)別 不同的實(shí)驗(yàn)對(duì)血液樣品的要求不同，有的要求全血，有的要求血清或血漿。血清是指血液凝固后析出的淡黃色的液體，血漿是指血液經(jīng)過(guò)抗凝后去除有形成份后的淡黃色液體。血清和血漿的區(qū)別在于血清中不含纖維蛋白，而血漿中含有與凝血有關(guān)的許多酶原和纖維蛋白原。 常用的抗凝劑有肝素、枸櫞酸鈉、乙二胺四乙酸（EDTA）鈉鹽或鉀鹽。,54,各種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物活體安全采血量和致死采血量,55,（二）采尿法 反射排尿法 代謝籠法 導(dǎo)尿法 膀胱穿刺法,兔采糞尿,比格犬采糞尿,大鼠采糞尿,56,八、實(shí)

22、驗(yàn)動(dòng)物常用處死方法,安死術(shù)的概念 “安死術(shù)”是指以人道的方法處死動(dòng)物的過(guò)程。在處死動(dòng)物過(guò)程中減少動(dòng)物的驚恐或焦慮，安靜地、無(wú)痛苦地死亡。,57,采用安死術(shù)必須符合的標(biāo)準(zhǔn) 死亡時(shí)沒(méi)有驚恐、疼痛的表現(xiàn) 使其在最短時(shí)間內(nèi)失去意識(shí)，迅速死亡 方法可靠且可重復(fù) 對(duì)操作人員安全 采用的方法要與研究要求和目的一致 對(duì)觀察者和操作者的情緒影響最小 對(duì)環(huán)境污染的影響最小 設(shè)備簡(jiǎn)單、價(jià)廉、易操作 處死動(dòng)物地點(diǎn)應(yīng)遠(yuǎn)離，并與動(dòng)物室隔開(kāi),58,大鼠小鼠 1.頸椎脫臼法 2.急性失血法 3.麻醉致死法 4.氣體窒息致死法,59,貓、犬、兔 1.空氣栓塞法 優(yōu)點(diǎn)： 方法簡(jiǎn)單、迅速， 缺點(diǎn)：由于動(dòng)物死于急性循環(huán)衰竭，各臟器凝

23、血十分明顯。 2.急性失血法 先行麻醉，再分離頸動(dòng)脈或股動(dòng)脈，將一根較粗的塑料管插入動(dòng)脈內(nèi)放血。動(dòng)物在35min內(nèi)即可死亡。 優(yōu)點(diǎn)： 動(dòng)物十分安靜，對(duì)臟器無(wú)損傷，對(duì)活殺采集病理切片標(biāo)本是一種比較好的方法。 3.化學(xué)藥物致死法 通過(guò)注射一定量的化學(xué)藥物而使動(dòng)物迅速致死。常用的化學(xué)藥物有： 10氯化鉀溶液：靜脈注射，用量為犬2030ml/只，兔510ml只。 10福爾馬林：靜脈注射，用量為犬20ml只。,60,大小鼠安樂(lè)死法,豚鼠二氧化碳窒息法,61,九、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)后的護(hù)理,1. 麻醉蘇醒前 注意保溫 保持呼吸道通暢 定時(shí)觀察記錄動(dòng)物的生命體征 2. 創(chuàng)口處理 徹底清創(chuàng)處理，必要時(shí)放置引流條 可以不

24、用敷料覆蓋創(chuàng)口 3. 抗菌素治療 4. 飲食和輸液 大手術(shù)后適當(dāng)輸液能加快恢復(fù) 犬、猴手術(shù)后給與高蛋白、高能量飲食,62,十、動(dòng)物活體解剖、臟器稱重 及病理取材方法,動(dòng)物實(shí)驗(yàn)后進(jìn)行活體解剖是動(dòng)物實(shí)驗(yàn)最后一個(gè)重要步驟，通過(guò)活體解剖和病理學(xué)觀察，可以分析藥物的作用、各器官病變特點(diǎn)，觀察實(shí)驗(yàn)效果，為分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果提供大體病理和組織病理學(xué)依據(jù)。,63,活體解剖程序,64,腹腔檢查 胃、十二指腸、空腸、回腸、盲腸、結(jié)腸、直腸 肝、脾、胰腺、腎、腎上腺、腸系膜淋巴結(jié) 睪丸、副睪、輸精管、前列腺、精囊腺 卵巢、輸卵管、子宮、,65,胸腔檢查 心臟、肺、氣管、支氣管、胸腺 顱腦檢查 大腦、小腦、腦干、脊髓,66,臟器秤重 由于動(dòng)物的各組織器官在腫瘤、增生、炎癥、萎縮等病變時(shí)