1、實驗二,人體x-染色質(zhì)的觀察,一.實驗目的,觀察與區(qū)別X染色質(zhì)：通過實驗初步掌握簡易方法，識別其形態(tài)及所在部位，為進一步研究人體染色質(zhì)的畸變與疾病提供參考條件。,二.實驗原理,1949年Barr等發(fā)現(xiàn)，在雌貓的神經(jīng)細胞核內(nèi)有一個凝縮的深染小體，而在雄性的細胞中沒有。 后來了解，在雌體中的兩條X染色體在間期時有一條(或這條的大部分)處于凝集而不活動狀態(tài)，從而形成了這種X-染色質(zhì)(或稱性染色質(zhì)、Barr小體)。,進一步發(fā)現(xiàn)，所有哺乳類雌體細胞中都有一條這種表現(xiàn)的X染色體； 在個別的雌或雄體中，有多于2條X染色體時，在間期細胞內(nèi)除一條外，其余都將形成X-染色質(zhì)(Barr小體)，以維持劑量補償。,Ly

2、on假說： 1961年由Lyon提出，又稱單個活性X染色體假說。 1正常雌性哺乳動物的體細胞中，兩條X染色體中只有一條有活性(activation X, Xa)，另一條失活(inactivation X, Xi)； 2失活是隨機的； 3失活發(fā)生在胚胎發(fā)育的早期； 4雜合體雌性在伴性基因的作用上是嵌合體(mosaic)。,人類正常的男女體細胞中，分別有XY和XX性染色體，女性的兩條X染色體中，在間期也有一條不表現(xiàn)活性而保持濃縮狀態(tài)，因此易于用適當?shù)娜玖霞右燥@示，成為便于觀察的X-染色質(zhì)（Barr小體）。, X染色質(zhì)的形態(tài)：,1.結構致密的濃染小體，輪廓清楚； 2.大小約1u左右，常附著于核膜邊緣

3、或靠近內(nèi)側； 3.其形狀有微凸形、三角形、卵形、短棒形及雙球形；,三.實驗材料,1.女性口腔頰部黏膜細胞 2.毛發(fā)根部細胞,四.實驗儀器及試劑,儀器:顯微鏡 試劑: 1N鹽酸、蒸餾水、改良苯酚品紅,五.實驗方法和步驟,1.口腔頰部黏膜細胞的觀察： a.刮取口腔黏膜細胞: 漱口，用牙簽從女性口腔兩側頰部刮取上皮黏膜細胞，原位刮2-3次，分別涂抹在干凈載片上，每次可涂1-2片，涂抹范圍約蓋片大小(男性做對照)。 b.染色: 待稍干后，滴加1-2滴改良苯酚品紅，染色10-15分鐘。,c.壓片: 加蓋片，覆以吸水紙，用手指輕度壓片。 d.鏡檢: 鏡下檢測典型的可數(shù)細胞，標準是： 核質(zhì)呈網(wǎng)狀或細顆粒狀分

4、布； 核膜清晰、無缺損； 染色適度； 周圍無雜質(zhì)。,2毛發(fā)根部細胞的觀察： 拔取一根帶有毛根的頭發(fā)，自基部截取2cm左右置載片上，再加一滴1N鹽酸解離5-7分鐘，待毛根后鞘軟化后拔去毛干，蒸餾水清洗3-5次，滴加一滴染液染10-15分鐘，吸取多余的染料，再覆以蓋片，隔一片吸水紙用手指輕度加壓后鏡檢。,六.實驗結果,1.觀察50個女性可數(shù)細胞，同時觀察50個男性者為對照，分別計算顯示X-染色質(zhì)細胞所占的百分比。 2.觀察中選繪4-5個典型細胞，示明X-染色質(zhì)的形態(tài)部位。,Barr小體,Barr小體,七 .實驗分析與討論,1.分析此次實驗成敗的原因。 2. 此次實驗有哪些地方可以改進?,八.思考題,為什么雄性的一條X-染色體不濃縮？它的合