1、A,1,植物組織培養(yǎng)技術(shù) 植物組織培養(yǎng)（plant tissue culture）：是指在無菌條件下，將離體的植物器官（如根、莖、葉、莖尖、花、果實等），組織（如形成層、表皮、皮層、髓部細胞、胚乳等），細胞（如大孢子、小孢子、體細胞等）以及原生質(zhì)體，在人工控制的環(huán)境里培養(yǎng)成完整植株的一門生物學技術(shù)。,A,2,植物組織培養(yǎng)的理論依據(jù)：植物細胞全能性。 植物細胞全能性（totipotency）：指植物的每個細胞都包含著該物種的全部遺傳信息，從而具備發(fā)育成完整植株的遺傳能力。在適宜條件下，任何一個細胞都可以發(fā)育成一個新個體。,A,3,一植物組織培養(yǎng)一些的概念 外植體（explant）：在植物組織培養(yǎng)

2、過程中，從植物體上被分離下來的，接種在培養(yǎng)基上，供培養(yǎng)用的原生質(zhì)體、細胞、組織、器官等成為外植體。 愈傷組織（callus）：植物受傷后的傷口處或在植物組織培養(yǎng)中外植體切口處不斷增殖產(chǎn)生的一團不定形的薄壁組織。愈傷組織可使傷口愈合，使表面細胞呈木栓化而起到保護作用；植物扦插時，愈傷組織可形成不定根；植物嫁接時，愈傷組織可使接穗和砧木愈合；在植物組織培養(yǎng)中，愈傷組織?？尚纬刹欢ㄑ俊?A,4,脫分化（dedifferentiation）：指已分化的組織又恢復到無分化的狀態(tài)。在組織培養(yǎng)過程中，將已經(jīng)分化的莖、葉、花等外植體進行培養(yǎng)，令其形成愈傷組織，回到?jīng)]有分化的狀態(tài)，稱為脫分化。 再分化（redi

3、fferentiation）：指在植物組織培養(yǎng)中，對處于脫分化狀態(tài)的愈傷組織進行培養(yǎng)，誘導其形成新的植物體的過程。,A,5,植株再生（plant regeneration）：指通過組織培養(yǎng)技術(shù)將植物的細胞、組織、器官培養(yǎng)成完整植株的過程。 試管苗（test-tube plantlet）：指在無菌條件下的人工培養(yǎng)基上，對植物細胞、組織或器官進行培養(yǎng)所獲得的再生植株。,A,6,初代培養(yǎng)（primary culture）：指在組織培養(yǎng)過程中，最初建立的外植體無菌培養(yǎng)階段。由于首批外植體來源復雜，攜帶較多細菌，要對培養(yǎng)條件進行適應，因此，初代培養(yǎng)一般比較困難。 繼代培養(yǎng)（subculture）：在組織

4、培養(yǎng)過程中，當外植體被接種一段時間后，將已經(jīng)形成愈傷組織或已經(jīng)分化根、莖、葉、花等的培養(yǎng)物重新切割，轉(zhuǎn)接到其它培養(yǎng)基上以進一步擴大培養(yǎng)的過程稱為繼代培養(yǎng)。,A,7,運用組織培養(yǎng)方法可以在比較簡單易觀察的條件下研究細胞、組織或器官的繁殖、生長和分化，以及各種外界因素對它們的影響，從而為解決農(nóng)業(yè)生產(chǎn)和藥物生產(chǎn)中的某些問題開辟了廣闊的前景。目前已有若干重要成果應用于生產(chǎn)實踐中，一為營養(yǎng)繁殖系的快速繁殖，如以甘蔗為例；原來每畝要用蔗種0.51噸，用組織培養(yǎng)快速繁殖的幼苗進行栽培可節(jié)省大量蔗種。又如貝母繁殖率非常低，而用組織培養(yǎng)分化出的三個月左右的鱗莖，其大小就相當于用種子繁殖二年生的鱗莖。,A,8,另

5、一為藥物和生物制品的工業(yè)生產(chǎn)，探索天然藥物生產(chǎn)工業(yè)化的途徑是當前藥物生產(chǎn)的一個新方向，有可能用組織培養(yǎng)法來代替全植物提取有效成分。組織培養(yǎng)應用在藥學方面的工作雖然歷史不長，但發(fā)展很迅速，它具有如下一些優(yōu)點： 1利用組織培養(yǎng)代替原植物的栽培以獲得所需的有效成分，達到產(chǎn)量高，成本低的目的，還可節(jié)約土地。 2除了應用于產(chǎn)生次生物質(zhì)外，還可應用于生物轉(zhuǎn)化。例如煙草組織培養(yǎng)中蒂巴因去甲基后可能生成嗎啡。,A,9,目前中國已成功地將麥角菌、靈芝、猴頭菇等真菌進行工業(yè)化生產(chǎn)，高等植物組織培養(yǎng)在工業(yè)化中的應用也正在研究。 總之，植物組織培養(yǎng)這一新技術(shù)在中草藥方面應用的前途是無限廣闊的，它不僅有利于探討和闡明藥

6、用植物生理、遺傳和成分生物合成等一系列理論問題，而且一旦工業(yè)化生產(chǎn)問題得到解決，將可以為防病治病做出很大的貢獻。,A,10,一、培養(yǎng)基的組成和配制法 1 培養(yǎng)基的成分 （1）無機營養(yǎng)物 （2）有機物質(zhì) （3）植物生長刺激物質(zhì) （4）其它 附加物 （5）其它對生長有益的未知復合成分：如椰子汁、酵母提取液、麥芽浸出液等。 培養(yǎng)基中如加入051的瓊脂即為靜止培養(yǎng)的固體培養(yǎng)基，否則為懸浮培養(yǎng)的液體培養(yǎng)基。不同植物材料常需要改變配方，如維持生長和誘導細胞分裂和分化的培養(yǎng)基配方就不同，因此配方的種類很多，目前以Ms （Murashige and Skoog）培養(yǎng)基配方為最常用的一種基本培養(yǎng)基，它利于一般植

7、物組織和細胞的快速生長。,A,11,2 培養(yǎng)基的種類 MS培養(yǎng)基、B5培養(yǎng)基、White培養(yǎng)基、N6培養(yǎng)基等等。 3 培養(yǎng)基的配制 （1）混和培養(yǎng)基中的各成分 （2）融化瓊脂 （3）調(diào)整pH為5.8 （4）分裝 （5）滅菌 （6）放置備用,A,12,二組織培養(yǎng)操作的一般流程 1 器皿的洗滌 2 培養(yǎng)基的配制和滅菌 3 接種室及用具消毒 4 材料滅菌：70酒精、氯化汞 5 接種 6 無菌培養(yǎng),A,13,三、選材和滅菌方法 從低等的藻類到苔蘚、蕨類、種子植物等高等植物的各類、各部分都可采用作為組織培養(yǎng)的材料，一般裸子植物多采用幼苗、芽、韌皮部細胞，被子植物采用胚、胚乳、子葉、幼苗、莖尖、根、莖、葉

8、、花藥、花粉、子房和胚珠等各個部分。 由于植物在自然條件下，表面常被霉菌和細菌污染，故材料必須進行滅菌處理。一般用漂白粉溶液（110）、次氯酸鈉溶液（0510）、升汞溶液（001）、乙醇（70）或過氧化氫（310）等處理后，再用無菌水反復沖洗至凈，然后在無菌室內(nèi)，將所取的組織迅速培養(yǎng)在固體培養(yǎng)基上。在適宜的條件下，受傷組織切口表面不久即能長出一種脫分化的組織堆塊，稱為愈傷組織（Callus）。,A,14,四、培養(yǎng)條件 （一）溫度： 對大多數(shù)植物組織2028即可滿足生長所需，其中2627最適合。 （二）光： 組織培養(yǎng)通常在散射光線下進行。光的影響可導致不同的結(jié)果。有些植物組織在暗處生長較好，而另一些植物組織在光亮處生長較好，但由愈傷組織分化成器官時，則每日必須要有一定時間的光照才能形成芽和根。有些次生物質(zhì)的形成，光是決定三因素。,A,15,（三）滲透壓： 滲透壓對植物組織的生長和分化很有關(guān)系。在培養(yǎng)基中添加食鹽、蔗糖、甘露醇和乙二醇等物質(zhì)可以調(diào)整滲透壓。通常12個大氣壓可促進植物組織生長，2個大氣壓以上時，出現(xiàn)生長障礙，6個大氣壓時植物組織即無法生存。 （四）酸堿度： 一般植物組織生長的最適宜pH為565。在培養(yǎng)過程中pH可發(fā)生變化，加進磷酸氫鹽或二氫鹽，可起穩(wěn)定作用。 （