1、一、課題目標(biāo),2嘗試制備固定化酵母細(xì)胞，并利用固定化酵母細(xì)胞進(jìn)行酒精發(fā)酵。,1說出固定化酶和固定化細(xì)胞的作用和原理。,基礎(chǔ)知識,（一）固定化酶的應(yīng)用實(shí)例,1.利用固定化酶技術(shù)生產(chǎn)高果糖漿的實(shí)例,（1）高果糖漿的生產(chǎn)需要 酶,葡萄糖異構(gòu),（2）葡萄糖異構(gòu)酶的優(yōu)點(diǎn),穩(wěn)定性好、可以持續(xù)發(fā)揮作用,（3）在生產(chǎn)中直接使用酶有什么缺點(diǎn)？,酶溶解于葡萄糖溶液后，無法回收，造成浪費(fèi),2.固定化酶的反應(yīng)柱示意圖,3.固定化酶在生產(chǎn)實(shí)踐中的優(yōu)點(diǎn),反應(yīng)柱能連續(xù)使用半年，大大降低了生產(chǎn)成本，提高了果糖的產(chǎn)量和質(zhì)量。,（二）固定化細(xì)胞技術(shù),1.將酶或細(xì)胞固定化的方法,將酶（或細(xì)胞）包埋在細(xì)微網(wǎng)格里,將酶（或細(xì)胞）相互連

2、接起來,將酶（或細(xì)胞）吸附在載體表面上,包埋法,化學(xué)結(jié)合法,吸附法,2.固定化酶和固定化細(xì)胞的聯(lián)系與區(qū)別,聯(lián)系：應(yīng)用相同，都能催化某些反應(yīng),區(qū)別,1）固定化細(xì)胞技術(shù)操作容易，成本低，容易回收；,2）固定化細(xì)胞技術(shù)對酶活性影響更小；,3）固定化細(xì)胞固定一系列的酶；,4）由于大分子難以通過細(xì)胞膜，因此固定化細(xì)胞的應(yīng)用有一定的限制；,【比較】酶和細(xì)胞的固定方法和特點(diǎn),3.固定化酶和固定化細(xì)胞常用的載體材料,明膠、瓊脂糖、海藻酸鈉、醋酸纖維素和聚丙烯酰胺等，,其共同的特點(diǎn)是不溶于水的多孔性載體,思考：直接使用酶、固定化酶與固定化細(xì)胞各有什么優(yōu)缺點(diǎn)？,實(shí)驗(yàn)操作,（一）制備固定化酵母細(xì)胞,實(shí)驗(yàn)操作,1、酵

3、母細(xì)胞的活化,（一）制備固定化酵母細(xì)胞,實(shí)驗(yàn)操作,2、配制物質(zhì)的量濃度為0.05mol/L 的CaCl2,無水CaCl2 0.83g+150mL蒸餾水,（一）制備固定化酵母細(xì)胞,實(shí)驗(yàn)操作,3、配制海藻酸鈉的溶液,0.7g海藻酸鈉+10mL蒸餾水酒精燈加熱并攪拌溶化后，蒸餾水定容至10mL,注意：如果海藻酸鈉濃度過高，將很難形成凝膠珠；如果濃度過低，形成的凝膠珠所包埋的酵母細(xì)胞的數(shù)目少，影響實(shí)驗(yàn)效果。,（一）制備固定化酵母細(xì)胞,實(shí)驗(yàn)操作,4、海藻酸鈉溶液與酵母細(xì)胞混合,（一）制備固定化酵母細(xì)胞,實(shí)驗(yàn)操作,5、固定化酵母細(xì)胞,將海藻酸鈉與活化酵母混合液用注射器勻速注入到CaCl2溶液中，浸泡30min左右，形成凝膠珠。,凝膠珠檢測：1.用鑷子夾起一個凝膠珠放在實(shí)驗(yàn)桌上用手?jǐn)D壓，如果凝膠珠不容易破裂，沒有液體流出，就表明凝膠珠的制作成功。2.在實(shí)驗(yàn)桌上用力摔打凝膠珠，如果凝膠珠很容易彈起，也能表明制備的凝膠珠是成功的。,（二）用固定化酵母細(xì)胞發(fā)酵,實(shí)驗(yàn)操作,1、將固定化的酵母細(xì)胞（凝膠珠）用蒸餾水沖洗2到3次。,2、將150m